一种南酸枣原花青素及其制备方法和应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种南酸枣原花青素及其制备方法和应用。所述的南酸枣原花青素是以南酸枣树皮作为有效部位进行提取、纯化而得到的。本发明揭示了南酸枣树皮中含有极高含量的原花青素类物质。利用南酸枣树皮，经提取物纯化，制备的植物提取物，在低浓度下的抗氧化活性强于同质量浓度的碧萝芷$，化学成分分析表明该提取物中黄酮类成分、酚类成分以及标志性的黄烷-3-醇类抗氧化成分含量均高于碧萝芷?。该提取物的原料易于获得、提取工艺简单、成本低廉，具有十分广阔的市场前景与经济价值。
【专利说明】一种南酸枣原花青素及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于植物提取【技术领域】，涉及一种南酸枣原花青素及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 原花青素，即儿茶素（catechin)或者表儿茶素（印icatechin)等黄烷-3-醇类物 质的聚合物，聚合度通常在2?10之间，二?五聚体通常被称为低聚原花青素（0PC)、五聚 体以上则称作高聚原花青素（PPC)。原花青素具有广泛的生物学活性，在医学界和营养学 界，原花青素被普遍认为是清除自由基最强的天然抗氧化物质，其清除自由基活性约为同 质量的维生素 E的50倍。目前已知的富含原花青素的植物提取物主要有松树皮提取物一 碧萝芷?、葡萄籽提取物、黑果枸杞提取物、欧洲越橘提取物以及莲房提取物等。
[0003] 南酸麥树皮（Cortex Choerospondias)，又名五眼果树皮，为漆树科南酸麥 属植物南酸麥（Choerospondias axilaris(Roxb.)Burtt et Hill.)或毛脉南酸麥 (Choerospondias axilaris(Roxb. )Burtt et Hill var. pubinervis(Rehd. et ffils.) Burtt et Hill.)的干燥树皮。《中华本草》及《南宁市药物志》中载其"味酸、涩，性凉"，具 有清热解毒，祛湿，杀虫之功效，主治疮疡，烫火伤，阴囊湿疹、痢疾、白带、疥癣。民间用于治 疗烧烫伤，有特效。有关南酸枣树皮的现代研究报道得不多，现有的文献主要集中在化学成 分研究和抗菌、抗心肌缺血、抗缺氧等方面的报道。对南酸枣树皮化学成分的研究表明其含 有谷留醇、谷留醇-3-0-葡萄糖苷，脂肪酸、槲皮素、芸香苷、木犀草素-3-0-β-D-批喃葡萄 糖苷、（+) _儿茶素、（+)_儿茶素 Κ-β-D-批喃匍萄糖苷、（+)-儿茶素-4-〇-β-?-批喃 葡萄糖苷等。但是，关于南酸枣树皮中上述化合物的含量以及南酸枣树皮的其他生物学活 性却未见文献报道。
【发明内容】
[0004] 本发明解决的问题在于提供一种南酸枣原花青素及其制备方法和应用，开发利用 南酸枣树皮中丰富的原花青素资源，该提取物的原料易于获得、提取工艺简单、成本低廉， 具有十分广阔的市场前景与经济价值。
[0005] 本发明是通过以下技术方案来实现：
[0006] -种南酸枣原花青素，是以南酸枣树皮作为有效部位进行提取、纯化而得到的；所 述的提取是以酸化的醇或酮为溶剂、超声条件下进行提取，得到提取液；所述的纯化是将提 取液吸附于大孔树脂柱中，经过水洗脱、静置、水洗脱、体积浓度70%以上的醇或酮洗脱的 洗脱程序，收集包含南酸枣原花青素的洗脱液；洗脱液减压回收溶剂，并经浓缩、冻干后得 到南酸枣原花青素。
[0007] 所述的南酸枣原花青素，其含有的黄酮类成分以芦丁的当量值表示，每g南酸枣 原花青素中的含量不少于lOOOrng ;其含有的酚类成分和以没食子酸的当量值表示，每g南 酸枣原花青素中的含量不少于500mg ;其含有的黄烷-3-醇类成分以儿茶素水合物的当量 值表示，每g南酸枣原花青素中的含量不少于l〇〇mg。
[0008] 所述的南酸枣原花青素，其具有抗氧化活性，其对DPPH ·的半数清除浓度不超过 4 μ g/ml，对ABTS ·的清除活性的TEAC值不低于6000 μ molTrolox/lg，对铜离子还原能力 的 TEAC 值不低于 7000 μ molTrolox/lg。
[0009] -种南酸枣原花青素的制备方法，包括以下操作：
[0010] 1)以南酸枣树皮作为有效部位，将其粉碎后用酸化的醇或酮的溶液，在超声条件 下提取，得到提取液；
[0011] 2)将提取液上样于活化后的大孔树脂柱中，用水洗脱至流出液刚好变浑浊时，停 止洗脱并静置5?10h;静置后再用水洗脱至流出液澄清为止，然后以体积浓度70%以上的 醇或酮进行洗脱，并收集包含南酸枣原花青素的洗脱液；
[0012] 3)将洗脱液减压回收溶剂，并经浓缩、冻干后得到南酸枣原花青素。
[0013] 所述的南酸枣原花青素的制备方法，其特征在于，所述的南酸枣树皮为南酸枣 (Choerospondias axillaris (Roxb. )Burtt et Hill.)或毛脉南酸麥（Choerospondias axillaris (Roxb.) Burtt et Hill var. pubinervis (Rehd. et ffils.) Burtt et Hill.)的树 皮。
[0014] 所述的南酸枣原花青素的制备方法，其特征在于，所述的提取液的提取为：
[0015] 将南酸枣属植物的果序轴粉碎后，用0. 01?10%乙酸或盐酸酸化的体积浓度 50?90 %的乙醇溶液浸泡，静置过夜后，在30?50KHz超声条件下提取20?60min，过滤， 滤渣再次提取，合并滤液得到提取液。
[0016] 所述的提取液浓缩后上样于活化后的大孔树脂柱中；
[0017] 所述的大孔树脂的活化为：将大孔树脂装柱后以体积浓度95 %的乙醇浸泡24h， 以去离子水以2BV/h的流速洗涤，洗至流出液澄清为止；然后以体积浓度5 %的盐酸溶液 浸泡12h，以去离子水以2BV/h的流速洗涤，洗至流出液为中性；再以4%的NaOH溶液浸泡 12h，以去离子水以2BV/h的流速洗涤，洗至流出液为中性；
[0018] 提取液上样后的洗脱为：
[0019] 将浓缩液上柱，用去离子水以0. 5BV/h速度洗脱，待流出液刚好变浑浊时停止洗 脱，静置6h后，先用去离子水以2BV/h速度洗脱，直至流出液澄清为止，然后以4BV的体积 浓度80 %的乙醇，以lBV/h速度洗脱、收集洗脱液；
[0020] 洗脱液中原花青素的存在与否和含量可以用对-二甲氨基肉桂醛 (p-Dimethylaminocinnamaldehyde)显色法进行分析。
[0021] 所述的南酸枣原花青素的制备方法，其特征在于，所述的大孔树脂为D10UX-5、 AB-8、XDA-7中的任何一种。
[0022] 所述的南酸枣原花青素作为抗氧化剂在制备药物、保健品、化妆品、护肤品、饮料、 食品、宠物粮或者饲料中的应用。
[0023] 所述的南酸枣原花青素在制备自由基清除剂中的应用。
[0024] 与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：
[0025] 本发明提供的南酸枣原花青素及其制备方法，提供了原花青素新的提取来源，而 且是活性更好、成本更为低廉的提取来源。本发明揭示了南酸枣树皮中含有丰富的原花青 素类成分，从南酸枣树皮中制备的原花青素无论是清除自由基活性、抗氧化活性，还是抗氧 化活性物质含量均高于当今最成功的天然抗氧化植物提取物一碧萝￡?，显示出了广阔的 应用价值和极大地开发前景。但是，从南酸枣树皮中制备原花青素的方法尚未见报道，亦未 见基于南酸枣原花青素的应用案例。
[0026] 本发明采用南酸枣树皮为原料经提取、纯化制备南酸枣原花青素，具有原料易于 获得、制备方法简单、成本低廉等优点。所制备的原花青素在低浓度下抗氧化活性强于同质 量浓度的碧萝芷?，各类抗氧化活性成分含量均高于碧萝芷?，具有极大地现实意义和推 广价值。
【专利附图】
【附图说明】
[0027] 图1为清除DPPH ·抗氧化活性测试中南酸枣原花青素和碧萝芷?的浓度-清除率 曲线对比图；
[0028] 图2为清除ABTS ·抗氧化活性测试中南酸枣原花青素和碧萝芷?的浓度-清除率 曲线对比图；
[0029] 图3为CUPRAC抗氧化活性测试中南酸枣原花青素和碧萝芷?的浓度-吸光度值 曲线对比图；
【具体实施方式】
[0030] 下面对本发明的较佳实施例进行详细阐述，以使本发明的优点和特征能更易于被 本领域的技术人员理解，从而对本发明的保护范围做出更为清楚明确的界定。
[0031] 实施例1 一种南酸枣原花青素的制备方法
[0032] 称取25g干燥的南酸枣树皮粗粉，置于1000mL锥形瓶中，加入800mL经0. 5% (V/ V)乙酸酸化的50 %乙醇，静置过夜，次日于超声波发生器中，40KHz下超声提取30min，布氏 漏斗滤过，滤渣加入600mL经0. 5%乙酸酸化的50%乙醇，40KHz下超声提取30min，布氏漏 斗滤过，滤渣加入600mL经0. 5%乙酸酸化的50%乙醇，40KHz下超声提取30min，布氏漏斗 滤过，合并三次滤液，滤液于旋转蒸发器中45°C下减压浓缩，得到提取物浓缩液，用于大孔 树脂纯化。
[0033] 取新的0101大孔树脂20(^，装入层析柱中，以95%乙醇浸泡2411，以去离子水以 2BV/h的流速洗涤，洗至流出液澄清为止，然后以5% HC1浸泡12h，以去离子水以2BV/h的 流速洗涤，洗至流出液为中性，然后以4% NaOH浸泡12h，以去离子水以2BV/h的流速洗涤， 洗至流出液为中性。将浓缩液上柱，用去离子水以0. 5BV/h速度缓慢洗脱，待流出液刚好变 浑浊时关闭层析柱活塞，静置6h后，打开层析柱活塞，先用去离子水以2BV/h速度洗脱，直 至流出液澄清为止，然后以4BV的以0. 5%乙酸酸化的无水乙醇，以lBV/h速度洗脱、收集洗 脱液，与旋转蒸发器中减压回收乙醇，浓缩，冻干即得。
[0034] 为评价通过此法制备的南酸枣原花青素的优劣，以碧萝芷?为对照，分别以 NaN02-AlCl3_Na0H比色法、福林酚法和对-二甲氨基肉桂醛显色法对南酸枣干燥树皮和南 酸枣原花青素中的黄酮类成分、酚类成分和黄烷-3-醇类成分进行定量分析，结果以每克 受试样品中芦丁、没食子酸和儿茶素水合物的当量值表示，测定结果见表1。
[0035] 表1植物粗粉及提取物和碧萝中三大类抗氧化活性成分对比
[0036]
【权利要求】
1. 一种南酸枣原花青素，其特征在于，是以南酸枣树皮作为有效部位进行提取、纯化 而得到的；所述的提取是以酸化的醇或酮为溶剂、超声条件下进行提取，得到提取液；所述 的纯化是将提取液吸附于大孔树脂柱中，经过水洗脱、静置、水洗脱、体积浓度70%以上的 醇或酮洗脱的洗脱程序，收集包含南酸枣原花青素的洗脱液；洗脱液减压回收溶剂，并经浓 缩、冻干后得到南酸枣原花青素。
2. 如权利要求1所述的南酸枣原花青素，其特征在于，其含有的黄酮类成分以芦丁的 当量值表示，每g南酸枣原花青素中的含量不少于l〇〇〇mg ;其含有的酚类成分和以没食子 酸的当量值表示，每g南酸枣原花青素中的含量不少于500mg ;其含有的黄烷-3-醇类成分 以儿茶素水合物的当量值表示，每g南酸枣原花青素中的含量不少于l〇〇mg。
3. 如权利要求1所述的南酸枣原花青素，其特征在于，其具有抗氧化活性，其 对DPPH·的半数清除浓度不超过41^/1111，对ABTS·的清除活性的TEAC值不低于 6000 μ molTrolox/lg，对铜离子还原能力的 TEAC 值不低于 7000 μ molTrolox/lg。
4. 一种南酸枣原花青素的制备方法，其特征在于，包括以下操作： 1) 以南酸枣树皮作为有效部位，将其粉碎后用酸化的醇或酮的溶液，在超声条件下提 取，得到提取液； 2) 将提取液上样于活化后的大孔树脂柱中，用水洗脱至流出液刚好变浑浊时，停止洗 脱并静置5?10h;静置后再用水洗脱至流出液澄清为止，然后以体积浓度70%以上的醇或 酮进行洗脱，并收集包含南酸枣原花青素的洗脱液； 3) 将洗脱液减压回收溶剂，并经浓缩、冻干后得到南酸枣原花青素。
5. 如权利要求4所述的南酸枣原花青素的制备方法，其特征在于，所述的南酸枣 树皮为南酸麥（Choerospondias axillaris (Roxb.)Burtt et Hill.)或毛脉南酸麥 (Choerospondias axillaris(Roxb. )Burtt et Hill var. pubinervis(Rehd. et ffils.) Burtt et Hill.)的树皮。
6. 如权利要求4所述的南酸枣原花青素的制备方法，其特征在于，所述的提取液的提 取为： 将南酸枣属植物的果序轴粉碎后，用〇. 01?10%乙酸或盐酸酸化的体积浓度50? 90%的乙醇溶液浸泡，静置过夜后，在30?50KHz超声条件下提取20?60min，过滤，滤渣 再次提取，合并滤液得到提取液。
7. 如权利要求4所述的南酸枣原花青素的制备方法，其特征在于，所述的提取液浓缩 后上样于活化后的大孔树脂柱中； 所述的大孔树脂的活化为：将大孔树脂装柱后以体积浓度95%的乙醇浸泡24h，以去 离子水以2BV/h的流速洗涤，洗至流出液澄清为止；然后以体积浓度5%的盐酸溶液浸泡 12h，以去离子水以2BV/h的流速洗涤，洗至流出液为中性；再以4%的NaOH溶液浸泡12h， 以去离子水以2BV/h的流速洗涤，洗至流出液为中性； 提取液上样后的洗脱为： 将浓缩液上柱，用去离子水以〇. 5BV/h速度洗脱，待流出液刚好变浑浊时停止洗脱，静 置6h后，先用去离子水以2BV/h速度洗脱，直至流出液澄清为止，然后以4BV的体积浓度 80 %的乙醇，以lBV/h速度洗脱、收集洗脱液； 洗脱液中原花青素的存在与否和含量可以用对-二甲氨基肉桂醛 (p-Dimethylaminocinnamaldehyde)显色法进行分析。
8. 如权利要求5或7所述的南酸枣原花青素的制备方法，其特征在于，所述的大孔树脂 为 D101、X-5、AB-8、XDA-7 中的任何一种。
9. 权利要求1所述的南酸枣原花青素作为抗氧化剂在制备药物、保健品、化妆品、护肤 品、饮料、食品、宠物粮或者饲料中的应用。
10. 权利要求1所述的南酸枣原花青素在制备自由基清除剂中的应用。
【文档编号】A23L1/30GK104208202SQ201410389300
【公开日】2014年12月17日 申请日期:2014年8月8日 优先权日:2014年8月8日
【发明者】李鑫, 梁宗锁, 刘景玲, 毛仁俊, 杨星科 申请人:西北农林科技大学