一种不结球白菜抗根肿病的鉴定方法
【专利摘要】本发明公开了一种不结球白菜抗根肿病的鉴定方法。该方法为：配制浓度为1×107～2×108个/mL的根肿病菌悬浮液；在不结球白菜的幼苗长到三叶一心时期，将前述配制的根肿病悬浮液在幼苗根部进行均匀灌溉，使幼苗根部在根肿病悬浮液中浸渍3～4天；将前述幼苗从根肿病悬浮液中取出，对幼苗进行常规方法培养，培养40～50天后，鉴定并筛选未感染根肿病的不结球白菜。利用本发明，在不结球白菜幼苗长到三叶一心时期，利用蘸根法对幼苗接种根肿病菌，通过调查植株的发病情况，鉴定抗病或感病的不结球白菜。
【专利说明】一种不结球白菜抗根肿病的鉴定方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于十字花科作物抗病性鉴定【技术领域】，具体涉及一种不结球白菜抗根肿 病的鉴定方法。
【背景技术】
[0002] 十字花科作物根肿病是由芸苔根肿菌（plasmodiophora brassicae Woron)浸染 引致的十字花科作物根部病害，此病菌是一种专性寄生菌，专门浸染十字花科作物。该病原 菌侵入植物根毛、皮层、形成层，产生含有植物生长激素的病菌分泌物，刺激薄壁细胞的异 常分裂增大，在增生部位膨大形成瘤状的肿根。肿根的出现一方面降低了根系吸收和供给 水份及养份的能力，造成地上部分失水、枯黄和死亡；另一方面使植物根系失去了外层的保 护作用，易被其它杂菌入侵而引起腐烂。
[0003] 根肿病可危害白菜、青菜、花椰菜、甘蓝、油菜等多种十字花科栽培及野生植物，一 旦发生，将造成严重的危害。在我国，该病主要发生在华东和华南的一些十字花科作物的主 要产区。十字花科作物根肿病传染性极强，能随种子、肥料、雨水、灌溉水、虫害、鼠害、农事 操作等多种途径传播，病原菌在土壤或种子上越冬，可在土壤中存活6年以上，病菌在9? 23°C均可发育,土壤含水量70%?90%最易发病，该病传播速度快，发病面积在短短的几 年间呈几十倍，甚至上百倍增加，危害十分严重。
[0004] 不结球白菜（Brassic campestris ssp. chinensis Makino)又名小白菜、青菜，属 十字花科芸薹属，因其品质柔嫩、风味独特、营养丰富等特点，在人民生活中占有重要的地 位，特别在上海、长江中下游及以南地区，不结球白菜是人们每日必食的、不可缺少的大众 化蔬菜。然而近年来，上海郊区，如青浦、松江、金山和浦东等地不结球白菜根肿病发病逐年 加重，严重的区域产量急剧下降，甚至回产，影响不结球白菜市场的正常供应，造成极大损 失。通常，不结球白菜发病后根组织异常的大量增生，在增生部位膨大形成瘤状的肿根，肿 根的出现损害了根系的生长和吸收能力，受侵染的植物生长发育迟缓，使植株萎蔫、黄化和 落叶，甚至整株死亡。青菜感病后将造成产量下降，品质降低，严重时软腐细菌和其他病原 菌乘虚而入，侵染受害部位，最终使植株枯萎死亡颗粒无收，给菜农造成极大的损失。
[0005]目前国内外对十字花科根肿病的研究比较多，但主要集于大白菜、甘蓝、油菜和萝 卜等，对于大白菜、甘蓝和油菜的根肿病抗性鉴定方法研究的比较多，对于不结球白菜感染 根肿病后的抗性鉴定方法研究较少，而不结球白菜根种病发病日趋严重，因此急需要一个 能够快速、准确的鉴定抗根肿病的鉴定方法，为不结球白菜抗根肿病原材料的筛选提供技 术支撑。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是，提供一种不结球白菜抗根肿病的鉴定方法，解决现有技术中缺 少关于不结球白菜抗根肿病的快速准确的鉴定方法。
[0007] 本发明为解决上述技术问题所采用的技术方案如下：
[0008] -种不结球白菜抗根肿病的鉴定方法，包括如下步骤：
[0009] 步骤1，配制根肿病菌悬浮液；
[0010] 步骤2,在不结球白菜的幼苗长到三叶一心时期，将前述配制的根肿病悬浮液对幼 苗根部进行均匀灌溉；
[0011] 步骤3，将前述浸渍后的幼苗进行常规培养，收集未感染根肿病的不结球白菜。
[0012] 进一步地，所述步骤1中配制的根肿病菌悬浮液的浓度为IXlO7?2X10 8个/mL。
[0013] 进一步地，所述步骤1中根肿病悬浮液的配制方法为：收集发病的不结球白菜的 新鲜肿根，洗净后在植物组织粉碎机内粉碎、过滤、4000r/min离心lOmin，用蒸馏水调制 成根肿病菌悬浮液。所述收集的不结球白菜的新鲜肿根以及配制好的根肿病悬浮液需要 在-20°C条件下保存。
[0014] 进一步地，所述步骤2中根肿病悬浮液对幼苗根部进行灌溉后，使幼苗根部在根 肿病悬浮液中浸渍3?4天。
[0015] 进一步地，所述不结球白菜的培育方式为：选择可盛水的带凹凸底的塑料盘，在塑 料盘中放置具有多个孔的泡沫穴盘，将所述不结球白菜播种在泡沫穴盘中进行生长发育。 具体地，所述塑料盘的尺寸为45cm X 30cm X 9cm，所述泡沫穴盘为77孔。
[0016] 进一步地，当穴盘中的不结球白菜长到三叶一心时，在每个穴盘的幼苗根部浇灌 200ml根肿病悬浮液；根肿病悬浮液通过幼苗流入塑料盘中，并在塑料盘中保存3天。
[0017] 进一步地，所述步骤3中幼苗常规培养的条件为：白天28°C条件下培养10小时， 晚上18°C条件下培养14小时。所述幼苗常规培养的时间为35?45天。
[0018] 与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
[0019] 1，本发明通过灌根接种法，将配制的根肿病悬浮液对不结球白菜幼苗进行灌根处 理后，抗病的植株根部正常，而感病的植株根部组织异常增生、膨大形成瘤状的肿根，从而 将抗病和感病植株区分开来，达到获得抗根肿病植株材料的目的。
[0020] 2,本发明发现不结球白菜幼苗在三叶一心时期对根肿病病菌敏感性更强，更容易 感染该病。因此，选择不结球白菜在三叶一心时期，对不结球白菜幼苗进行灌根接种，使得 筛选出的抗病植株具有更强的抗感染性。
[0021] 3,本发明不仅区分了不结球白菜种质资源对十字花科根肿病的抗感能力，而且通 过灌根鉴定方法能够提高某一不结球白菜材料群体的抗根肿病性，为不结球白菜抗根肿病 新品种的选育提供更多的抗病材料，对于不结球白菜抗病育种实践及其理论研究上都很有 价值。
【专利附图】
【附图说明】
[0022] 图1是本发明实施例中放置有77孔泡沫穴盘的带凹凸底的塑料盘；
[0023] 图2是本发明实施例中感染根肿病的不结球白菜植株；
[0024] 图3是本发明实施例中未感染根肿病的不结球白菜植株。
【具体实施方式】
[0025] 以下通过具体实施例对本发明的技术方案进行详细阐述。
[0026] 实施例1，不结球白菜在不同时期感染根肿病的鉴定分析
[0027] 对上海主栽的不结球白菜的常规品种新矮青和耐热品种新夏青在不同的生长期 (子叶期和三叶一心期）以相同时间、相同浓度进行根肿病悬浮液灌根处理。
[0028] 试验方法：试验在上海市农业科学院园艺研究所试验基地温室中进行。首先，在 上海市青浦区弘阳农场采集不结球白菜根肿病的鲜病组织（即不结球白菜的根肿瘤），洗 净后分装于塑料袋中，在_20°C冰箱中保藏。试验时取出根肿瘤，用植物组织粉碎机打成匀 楽，四层纱布过滤，冷冻离心机4000r/min离心IOmin,弃上清，用蒸馈水悬浮，重复3次，最 后悬浮至根肿病菌浓度为2 X IO8个/ml，制得根肿病悬浮液，于4°C保存备用。
[0029] 将无菌土和基质（该基质的主要成分为蛭石、泥炭和珍珠岩，购于上海孙桥现代 农业科技有限公司）以体积比为1 :3的比例混合拌匀，选择可盛水的带凹凸底的塑料盘，中 间放置77孔的泡沫穴盘，在穴盘内播种不结球白菜种子。参见图1，该图展示了放置77孔 泡沫穴盘的带凹凸底的塑料盘。
[0030] 分别在不结球白菜幼苗长到子叶期和三叶一心时期进行灌根接种处理。灌根处理 的具体方法为：用量筒量取200ml根肿病悬浮液，均匀浇灌在每个穴盘的幼苗根部，根肿病 悬浮液通过幼苗流入塑料盘中，根肿病悬浮液在塑料盘中保存3d。3d后不结球白菜幼苗进 行常规培养，白天28°C、10小时，晚上18°C、14小时，常规培养45d后，将不结球白菜植株挖 出，洗净根部，调查植株的发病情况，根据不结球白菜的根部是否具有根肿瘤判断是否感染 了根肿病。参见图2,该图展示了感染根肿病的不结球白菜。参见图3,该图展示了未感染根 肿病的不结球白菜。统计发病植株数，计算发病率。发病率=发病株数/总株数X100%。 参见表1，为两个品种的不结球白菜在不同生长期感染根肿病的结果。
[0031] 表1，不结球白菜在不同生长期感染根肿病的结果
[0032]
【权利要求】
1. 一种不结球白菜抗根肿病的鉴定方法，该方法包括如下步骤： 步骤1，配制根肿病菌悬浮液； 步骤2,在不结球白菜的幼苗长到三叶一心时期，将前述配制的根肿病悬浮液对幼苗根 部进行均匀灌溉； 步骤3,将前述浸渍后的幼苗进行常规培养，收集未感染根肿病的不结球白菜。
2. 如权利要求1所述的一种不结球白菜抗根肿病的鉴定方法，其特征在于：所述步骤1 中配制的根肿病菌悬浮液的浓度为IX 107?2X 108个/mL。
3. 如权利要求1所述的一种不结球白菜抗根肿病的鉴定方法，其特征在于，所述步骤1 中根肿病悬浮液的配制方法为：收集发病的不结球白菜的新鲜肿根，洗净后在植物组织粉 碎机内粉碎、过滤、离心，用蒸馏水调制成根肿病菌悬浮液。
4. 如权利要求1所述的一种不结球白菜抗根肿病的鉴定方法，其特征在于：所述步骤2 中根肿病悬浮液对幼苗根部进行灌溉后，使幼苗根部在根肿病悬浮液中浸渍3?4天。
5. 如权利要求1所述的一种不结球白菜抗根肿病的鉴定方法，其特征在于，所述不结 球白菜的培育方式为：选择可盛水的带凹凸底的塑料盘，在塑料盘中放置具有多个孔的泡 沫穴盘，将所述不结球白菜播种在泡沫穴盘中进行生长发育。
6. 如权利要求5所述的一种不结球白菜抗根肿病的鉴定方法，其特征在于，所述不结 球白菜接种根肿病的方式为：当穴盘中的不结球白菜长到三叶一心时，在每个穴盘的幼苗 根部浇灌200ml根肿病悬浮液。
7. 如权利要求1所述的一种不结球白菜抗根肿病的鉴定方法，其特征在于，所述步骤3 中幼苗常规培养的条件为：白天28°C条件下培养10小时，晚上18°C条件下培养14小时。
8. 如权利要求1所述的一种不结球白菜抗根肿病的鉴定方法，其特征在于：所述步骤3 中幼苗常规培养的时间为35?45天。
【文档编号】C12Q1/18GK104404124SQ201410668162
【公开日】2015年3月11日 申请日期:2014年11月20日 优先权日:2014年11月20日
【发明者】朱红芳, 朱玉英, 李晓锋 申请人:上海市农业科学院, 上海科园种子有限公司