本发明涉及食品加工领域，尤其是一种从食用菌中提取的核苷酸混合物及其制备方法。
背景技术：
核苷酸类物质对甜味有增效作用，对咸、酸、苦味及腥味、焦味有掩盖和消除作用，对肉味则有增效作用，特别是核苷酸对氨基酸类鲜味物质有强烈的助鲜作用，氨基酸类鲜味物质含量在阈值以下时其鲜味是潜在性的，只要添加少量5’- 核苷酸，就能使其提到阈值以上，发挥其增鲜效果。核苷酸对谷氨酸(MSG，味精) 的鲜味有强大助鲜作用，12％鸟苷酸(GMP) ：88％ MSG，相当于MSG9.9 倍的鲜度；
在现有提取核苷酸的技术中，例如一种从食用菌中提取的核苷酸混合物及其制备方法和应用，CN101914599A该发明属于食品加工领域，公开了一种从食用菌中提取的核苷酸混合物及其制备方法和应用。该核苷酸混合物是通过将食用菌或食用菌下脚料加水磨成匀浆，调节pH，微波提取，过滤，提取液经离心分离、中空纤维超滤膜富集分离、浓缩，浓缩液调节pH，在蛋白等电点静置过夜，离心，上清液调节pH，在核酸等电点静置过夜，离心，取沉淀物，洗涤，干燥，得核酸；核酸加水溶解，加入5’-磷酸二酯酶进行酶解成5’- 核苷酸；利用阴离子交换树脂分离富集核苷酸，得核苷酸混合物。该核苷酸混合物可用于制备调味品。该发明扩展了食用菌及其下脚料的利用途径，提高了食用菌下脚料的利用价值。
该发明的制备中提取的核苷酸混合物还可提升浓度，提高制备效率。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题在于提供一种提高提取高纯度，提取率高的一种从食用菌中提取的核苷酸混合物及其制备方法。
为解决上述现有的技术问题，本发明采用如下方案：一种从食用菌中提取的核苷酸混合物，所述核苷酸混合物包括以下成分5'-胞苷酸、5'-环腺苷酸、5'-环鸟苷酸、5'-尿苷酸、5'-肌苷酸。
一种从食用菌中提取的核苷酸混合物的制备方法，包括以下步骤：
1）选取食用菌，用清水洗净，频率为1000-1300MHz的微波干燥16-21min后，粉碎至200-250目，加入食用菌质量1.3-1.6倍的水浸泡4-8h，采用超声波助溶后在回流状态下浸提2-4次，得浸提液；
2）将浸提液超滤后离心得上清液，加入硫酸含量2-3%的硫酸水溶液调节pH值至3.8-4.3后静置20-27h，离心得沉淀物，用84-93%乙醇洗涤后得核酸沉淀物；
3）在核酸沉淀物中加入核酸沉淀物1.5-1.8倍的蒸馏水和0.02-0.05倍的助溶剂，搅拌，加入5'-磷酸二酯酶，酶解3.5-4.8h后高温灭酶，得核苷酸混合物溶液；
4）在核苷酸混合物溶液中加入2-4%浓度的氢氧化钠水溶液调节pH值至9-11，采用阴离子树脂进行纯化，得洗脱液；
5）将洗脱液通过透析袋透析，浓缩，干燥，得核苷酸混合物。
作为优选，步骤1中食用菌为香菇、猴头菇、平菇、草菇、杏鲍菇中的一种或多种。
作为优选，步骤1中浸提时每隔20-25min搅拌一次，每次搅拌4-7min，提高溶解度，提高浸提效率和浸提液的浓度。
作为优选，步骤2中超滤采用膜孔为500-700A°中空纤维超滤膜分离，控制压力为0.3-0.5mPa，温度为20-24℃，膜通量为60～120ml/min，采用超滤更好的去除浸提液中的杂质，使浸提液中核酸的浓度提高。
作为优选，步骤3中加入5'-磷酸二酯酶的质量百分比为0.7-0.9%，高温灭菌得方式为加温至120-150℃，灭菌时间为14-20min，用5'-磷酸二酯酶能更好的使核酸发生酶解，酶解后采用高温灭酶在抑制酶活性的同时起到一定的杀菌效果。
作为优选，步骤4中阴离子树脂进行纯化时先用92-96%的乙醇以1.4-3BV/h的流速洗脱，再用0.2~0.6mol/LHCl以1.4~3BV/h的流速洗脱，最后用0.5~0.8mol/LHCl+1~3％NaCl以1.7~4BV/h的流速洗脱，进行梯度洗脱，洗脱后得到所需物资，提高洗脱液的浓度。
作为优选，步骤3中助溶剂的成分及其重量份为：水杨酸钠4-8份、苯甲酸钠5-10份、乙酰胺1-3份、聚乙烯吡咯烷酮碘0.01-0.03份、二甲基氨基乙醇0.02-0.05份，使核酸沉淀物充分溶于蒸馏水中，在酶解时提高酶解效果。
作为优选，步骤5中浓缩至洗脱液体积的5-8%。
有益效果：本发明提供的这种从食用菌中提取的核苷酸混合物及其制备方法，制备简单，有效的提高了核苷酸混合物的提取纯度。本发明采用了上述技术方案提供一种从食用菌中提取的核苷酸混合物及其制备方法，弥补了现有技术的不足，设计合理，操作方便。
具体实施方式
以下实施例作进一步详细描述：
实施例1：
一种从食用菌中提取的核苷酸混合物，所述核苷酸混合物包括以下成分5'-胞苷酸、5'-环腺苷酸、5'-环鸟苷酸、5'-尿苷酸、5'-肌苷酸。
一种从食用菌中提取的核苷酸混合物的制备方法，包括以下步骤：
1）选取食用菌，用清水洗净，频率为1300MHz的微波干燥20min后，粉碎至250目，加入食用菌质量1.6倍的水浸泡6h，采用超声波助溶后在回流状态下浸提3次，得浸提液；
2）将浸提液超滤后离心得上清液，加入硫酸含量3%的硫酸水溶液调节pH值至4.0后静置25h，离心得沉淀物，用93%乙醇洗涤后得核酸沉淀物；
3）在核酸沉淀物中加入核酸沉淀物1.7倍的蒸馏水和0.02倍的助溶剂，搅拌，加入5'-磷酸二酯酶，酶解4.8h后高温灭酶，得核苷酸混合物溶液；
4）在核苷酸混合物溶液中加入4%浓度的氢氧化钠水溶液调节pH值至9，采用阴离子树脂进行纯化，得洗脱液；
5）将洗脱液通过透析袋透析，浓缩，干燥，得核苷酸混合物。
步骤1中食用菌为香菇、猴头菇、平菇、草菇、杏鲍菇中的一种或多种。
步骤1中浸提时每隔23min搅拌一次，每次搅拌7min，提高溶解度，提高浸提效率和浸提液的浓度。
步骤2中超滤采用膜孔为500A°中空纤维超滤膜分离，控制压力为0.3mPa，温度为24℃，膜通量为120ml/min，采用超滤更好的去除浸提液中的杂质，使浸提液中核酸的浓度提高。
步骤3中加入5'-磷酸二酯酶的质量百分比为0.7%，高温灭菌得方式为加温至120℃，灭菌时间为14min，用5'-磷酸二酯酶能更好的使核酸发生酶解，酶解后采用高温灭酶在抑制酶活性的同时起到一定的杀菌效果。
步骤4中阴离子树脂进行纯化时先用96%的乙醇以1.4BV/h的流速洗脱，再用0.5mol/LHCl以2.4BV/h的流速洗脱，最后用0.8mol/LHCl+2.4％NaCl以3.2BV/h的流速洗脱，进行梯度洗脱，洗脱后得到所需物资，提高洗脱液的浓度。
步骤3中助溶剂的成分及其重量份为：水杨酸钠8份、苯甲酸钠5份、乙酰胺1份、聚乙烯吡咯烷酮碘0.01份、二甲基氨基乙醇0.02份，聚乙烯吡咯烷酮碘和二甲基氨基乙醇通过上述其余成分起到促进溶解的作用，使核酸沉淀物充分溶于蒸馏水中，在酶解时提高酶解效率，从而提高核苷酸混合物的提取率。
步骤5中浓缩至洗脱液体积的7%。
实施例2：
选取食用菌为平菇，将平菇按照本发明的制备方法从平菇中制备出核苷酸混合物：
1）选取平菇，用清水洗净，频率为1300MHz的微波干燥16min后，粉碎至210目，加入食用菌质量1.46倍的水浸泡8h，采用超声波助溶后在回流状态下浸提4次，得浸提液；
2）将浸提液超滤后离心得上清液，加入硫酸含量2-3%的硫酸水溶液调节pH值至4.3后静置27h，离心得沉淀物，用93%乙醇洗涤后得核酸沉淀物；
3）在核酸沉淀物中加入核酸沉淀物1.5倍的蒸馏水和0.05倍的助溶剂，搅拌，加入5'-磷酸二酯酶，酶解3.5h后加热至120℃高温灭酶15min，得核苷酸混合物溶液；
4）在核苷酸混合物溶液中加入2%浓度的氢氧化钠水溶液调节pH值至10，采用阴离子树脂进行纯化，得洗脱液；
5）将洗脱液通过透析袋透析，浓缩，干燥，得核苷酸混合物；
将制备的核苷酸混合物进行相色谱检测，色谱条件为：色谱柱：Eclipse XDB-C18 色谱柱(5μm，150×4.6mm)；流动相：蒸馏水∶甲醇∶冰乙酸∶四丁基氢氧化铵＝ 894.5∶100∶5∶0.5 ；( 体积比)；检测波长：260nm ；进样量：16μL ；柱温：23℃ ；流速：1.50mL/min；根据上述方法制备的核苷酸混合物，应用高效液相色谱法进行检测分析，核苷酸混合物主要是由5'-胞苷酸、5'-环腺苷酸、5'-环鸟苷酸、5'-尿苷酸、5'-肌苷酸组成。
本文中所描述的具体实施例仅仅是对本发明作举例说明。本发明所属技术领域的技术人员可以对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，但并不会偏离本发明的或者超越所附权利要求书所定义的范围。