专利名称：具有食欲抑制剂活性的药物组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及甾类糖苷，涉及包含这种甾类糖苷的组合物，涉及这些甾类糖苷及包含它们的组合物的新用途。进而，本发明涉及从植物原料中提取和分离这些甾类糖苷的方法，涉及合成这些甾类糖苷的方法，涉及所述提取方法和合成方法的产品。
具体而言，本发明涉及一种食欲抑制剂，涉及合成所述食欲抑制剂的方法，涉及从植物原料中提取食欲抑制剂的方法，涉及包含食欲抑制剂的食欲抑制剂组合物，涉及抑制食欲的方法。
本发明提供了一种制备Trichocaulon属或火地亚属植物提取物的方法，该提取物包含食欲抑制剂，该方法包括以下步骤用溶剂处理收集的植物原料以提取具有食欲抑制剂活性的成分，将提取液与材料原料的其它部分分离，从提取液中除去溶剂，回收提取物。所回收的提取物可进一步进行提纯，如通过适宜的溶剂萃取步骤。
本发明也提供了一种由包含Trichocaulon属或火地亚属植物并具有食欲抑制剂活性的植物制得的植物提取物。
所述提取物可由植物原料如所述Trichocaulon属或火地亚属植物的茎和根制得。Trichocaulon属或火地亚属植物包括生长在干燥地区的多汁植物，如在南部非洲发现的所述植物。在本发明中，活性食欲抑制剂提取物可由Trichocaulon piliferum种获得。Trichocaulon officinale种也可用来提供活性食欲抑制剂提取物。在本发明中，活性食欲抑制剂提取物还可从火地亚currorii、火地亚gordonii和火地亚lugardii种获得。本申请人在对大鼠进行的生物试验表明，一些提取物具有食欲抑制剂活性。
采用诸如Waring混合机的装置，植物原料可在适宜的溶剂存在下进行均化，所述溶剂例如为甲醇/二氯甲烷。然后，用适宜的分离步骤如过滤或离心，可将提取液与残余的植物原料分离。再通过旋转蒸发器除去溶剂，优选在60℃的水浴中进行。分离出的粗提取物可进一步用二氯甲烷和水进行提取，分离成二氯甲烷提取液和水提取液。优选通过旋转蒸发器可使二氯甲烷提取液中除去溶剂，形成的提取液可再通过甲醇/己烷萃取而提纯。甲醇/己烷提取产物可进一步分离成甲醇提取物和己烷提取物。将甲醇提取物进行蒸发以除去溶剂，得到部分提纯的活性提取物。
将部分提纯的活性提取物溶解于甲醇中，再通过柱色谱进行色谱分离，硅胶用作吸附介质，氯仿/30％甲醇混合物用作洗脱剂。可获得多种不同的馏分，采用适宜的生物试验步骤可评价每一种馏分，确定其食欲抑制剂活性。
具有食欲抑制剂活性的馏分优选可进一步通过柱色谱进行色谱分离，硅胶用作吸附介质，9∶1的氯仿∶甲醇溶剂用作洗脱剂，对形成的亚馏分进行生物试验，以确定其食欲抑制剂活性。如果需要的话，显示出食欲抑制剂活性的亚馏分可进一步进行色谱分离和提纯，常规采用柱色谱过程，硅胶用作吸附介质，9∶1的氯仿∶甲醇溶剂用作溶剂。形成的经提纯的馏分可再通过适宜的生物试验过程评价其食欲抑制剂活性。
本申请人还发现，至少一种所述提纯的馏分具有优良的食欲抑制剂活性，并且，在馏分中的有效成分可通过包括核磁共振在内的常规化学技术确认，并发现是具有以下结构式的化合物
按照S.I.命名法，这种有效成分(1)是化合物3-O-[-β-D-吡喃黄夹竹桃糖基-(1→4)-β-D-吡喃磁麻糖基-(1→4)-β-D-吡喃磁麻糖基]-12β-O-甲基巴豆酰氧基-14-羟基-14β-孕-50-烯-20-酮(C47H74O15M+878)。
按照本发明的另一个方面，提供了Trichocaulon属或火地亚属植物提取物的制备方法，所述提取物包含食欲抑制剂，该方法包括下述步骤压榨收集到的植物原料以从固体植物原料中分离出汁液，回收不含固体植物原料的汁液以形成提取物。
提取物可干燥而除去水分以形成自由流动的粉末，例如可采用喷雾干燥法、冷冻干燥法或真空干燥法。
本发明还提供具有食欲抑制剂活性的组合物，其包含如上所述的提取物。
所述组合物可含有可药用赋形剂、稀释剂或载体，并选择性地可制备成单位剂量形式。
本发明还提供了上述提取物在生产具有食欲抑制剂活性的药物中的用途，提供了用作具有食欲抑制剂活性药物的提取物，提供了通过向人或动物给药有效剂量的上述组合物来抑制食欲的方法。
化合物(1)是一种新化合物，本发明提供了具有食欲抑制剂性质的化合物(1)和该甾族三糖一些类似物或衍生物。所选作为类似物或衍生物的分子应借助于增加活性成分的活性而影响甾族三糖的性质。当选择所述类似物时，应考虑下述作用(i)疏水相互作用和亲油性活性分子的官能团修饰会改变分子的疏水性和亲油性。亲油性增加会导致生物活性增加、水溶性下降、去肟性/细胞溶解性增强、组织中的贮藏性增强、更为迅速地进行代谢和排除、血浆蛋白结合性增强以及活性开始速度加快。
(ii)电性质和电离常数分子的官能团修饰也会改变酸性和碱性，酸碱性在控制化合物向其作用位点转移并在该靶位处结合起主要作用。
(iii)氢键在活性分子中的羧基和羰基的官能团修饰会改变生物系统中蛋白质与化学修饰的官能团间的相互作用。
(iv)空间参数改变分子的空间特征的目的是增加与受体的结合性，从而增加其生物活性。
以下对分子的化学修饰会对分子的疏水性和亲油性，电子性能，氢键和空间参数产生影响(a)C-12基团的化学修饰和酯官能度；(b)5，6-双键的化学修饰，如氢化和迁移；(c)C-20羰基和C-17乙酰基的化学修饰；(d)甾族的“D”环或糖苷配基环的化学修饰；(e)三糖的糖的化学修饰。
因而，本发明提供了一种具有以下结构式的化合物
其中，R为烷基；R1为氢、烷基、甲基巴豆酰基、苯甲酰基或任一种其它的有机酯基团；R2为氢，或6-脱氧糖中的一种或多种，或2，6-二脱氧糖中的一种或多种，或葡萄糖分子，或其组合；其中，虚线代表在C4-C5或C5-C6间可选择性地存在另一个键。
本发明也提供了一种如上所述的化合物，其中，在C5-C6间存在另一个键，R为甲基，R1为甲基巴豆酰基，R2为3-O-[-β-D-吡喃黄夹竹桃糖基-(1→4)-β-D-吡喃磁麻糖基-(1→4)-β-D-吡喃磁麻糖基]，化合物具有下述结构式
本发明食欲抑制剂化合物(1)的活性类似物或衍生物为具有下述结构式的化合物
其中，R为烷基；R1为氢、苯甲酰基、甲基巴豆酰基或任一种其它的有机酯基团；
其中，R为烷基；R1为氢、甲基巴豆酰基、苯甲酰基或任一种其它的有机酯基团；
其中，R为烷基；R1为氢、甲基巴豆酰基、苯甲酰基或任一种其它的有机酯基团；
其中，R为烷基；R1为氢、甲基巴豆酰基、苯甲酰基或任一种其它的有机酯基团；
其中，R为烷基；R1为氢、甲基巴豆酰基、苯甲酰基或任一种其它的有机酯基团；
其中，R为烷基；R1为氢、烷基、甲基巴豆酰基、苯甲酰基或任一种其它的有机酯基团；R2为氢，或6-脱氧糖中的一种或多种，或2，6-二脱氧糖中的一种或多种，或葡萄糖分子，或其组合；其中，虚线代表在C4-C5或C5-C6间可选择性地存在另一个键；
其中，R为烷基；R1为氢、烷基、甲基巴豆酰基、苯甲酰基或任一种其它的有机酯基团；R2为氢，或6-脱氧糖中的一种或多种，或2，6-二脱氧糖中的一种或多种，或葡萄糖分子，或其组合；其中，虚线代表在C4-C5或C5-C6间存在另一个键；
其中，R为烷基；R1为氢、烷基、甲基巴豆酰基、苯甲酰基或任一种其它的有机酯基团；R2为氢，或6-脱氧糖中的一种或多种，或2，6-二脱氧糖中的一种或多种，或葡萄糖分子，或其组合；其中，虚线代表在C4-C5或C5-C6间可选择性地存在另一个键；
其中，R为烷基；R1为氢、烷基、甲基巴豆酰基、苯甲酰基或任一种其它的有机酯基团；R2为氢，或6-脱氧糖中的一种或多种，或2，6-二脱氧糖中的一种或多种，或葡萄糖分子，或其组合；其中，虚线代表在C4-C5、C5-C6或C14-C15间可选择性地存在另一个键；
其中，R为烷基；R1为氢、烷基、甲基巴豆酰基、苯甲酰基或任一种其它的有机酯基团；R2为氢，或6-脱氧糖中的一种或多种，或2，6-二脱氧糖中的一种或多种，或葡萄糖分子，或其组合；其中，虚线代表在C4-C5、C5-C6或C14-C15间可选择性地存在另一个键；
其中，R为烷基；R1为氢、烷基、甲基巴豆酰基、苯甲酰基或任一种其它的有机酯基团；R2为氢，或6-脱氧糖中的一种或多种，或2，6-二脱氧糖中的一种或多种，或葡萄糖分子，或其组合；其中，虚线代表在C4-C5、C5-C6或C14-C15间可选择性地存在另一个键；R3为氢、烷基、芳基、酰基或葡糖氧基(glucoxy)。
其中，R为氢、烷基、芳基或在C14位上具有β羟基，或在C12位上具有β羟基官能团，或C17位具有酰基，或C5-C6位具有烯键或它们的组合的甾族基团。
本发明还提供了具有食欲抑制剂活性的化合物的合成方法。
该方法采用甾族化合物为原料(或作为中间体或前体)，所述甾族化合物具有以下的化学式
甾族化合物(15)可由式(22)的化合物由下述方法制备，该方法包括下述步骤(i)用微生物德可拉丽赤壳(Calonectria decora)处理具有下式的孕酮
产生下式的化合物12β，15α-二羟基孕酮
(ii)用甲苯磺酰氯和吡啶处理化合物(17)，产生下式的化合物12β-羟基-15α-(对甲苯磺酰基)-孕酮
(iii)在150℃下用可力丁处理化合物(18)，产生下式的化合物12β-羟基-Δ14-孕酮
(iv)在120℃下，用乙酰氯和乙酸酐处理化合物(19)，产生下式的化合物3，12β-二乙酰氧基孕-3，5，14-三烯-20-酮
(v)用乙二醇和催化量的对甲苯磺酸处理化合物(20)，产生下式的化合物3，12β-二乙酰氧基-20，20-亚乙二氧基孕-3，5，14-三烯
(vi)用NaBH4处理化合物(21)，产生下式的化合物3β，12β-二羟基-20，20-亚乙二氧基孕-5，14-二烯-12-乙酸酯
在第一种供选择的过程中，本发明制备甾族化合物(15)的方法包括下述步骤(a)用还原剂如氢化铝锂处理化合物(22)，产生下式的化合物3β，12β-二羟基-20，20-亚乙二氧基孕-5，14-二烯
(b)用N-溴乙酰胺(NBA)和碱如吡啶处理化合物(23)，产生下式的化合物3β，12β-二羟基-14，15-环氧-20，20-亚乙二氧基孕-5-烯
(c)在回流下，用还原剂如氢化铝锂处理化合物(24)，产生下式的化合物3β，12β，14β-三羟基-20，20-亚乙二氧基孕-5-烯
(d)用酸如乙酸与水处理化合物(25)，产生甾族中间体化合物3β，12β，14β-三羟基-孕-5-烯(15)。
反应路线A说明按照本发明的“第一种可供选择的过程”，由化合物(22)制备甾族中间体(15)的过程，为说明起见，包括由化合物(16)制备化合物(22)。反应路线A
在第二种可供选择的过程中，本发明制备甾族化合物(15)的方法包括下述步骤(a)用对甲苯磺酰氯和碱如吡啶处理化合物(22)(3β，12β-二羟基-20，20-亚乙二氧基孕-5，14-二烯-12-乙酸酯)，产生下式的化合物3β，12β-二羟基-20，20-亚乙二氧基孕-5，14-二烯-3-甲苯磺酰基-12-乙酸酯
(b)用溶剂如丙酮中的乙酸钾处理化合物(26)，产生下式的化合物6β，12β-二羟基-20，20-亚乙二氧基-3，5α-环孕-14-烯-12-乙酸酯
(c)用还原剂如氢化铝锂和例如四氢呋喃处理化合物(27)，产生下式的化合物6β，12β-二羟基-20，20-亚乙二氧基-3，5α-环孕-14-烯
(d)用N-溴乙酰胺、选择性采用的乙酸以及碱如吡啶处理化合物(28)，产生下式的化合物6β，12β-二羟基-14，15-环氧-3，5α-环孕烷
(e)用还原剂如氢化铝锂和如四氢呋喃处理化合物(29)，产生下式的化合物6β，12β，14β-三羟基-20，20-亚乙二氧基-3，5α-环孕烷
(f)用酸如盐酸和溶剂如丙酮处理化合物(30)，产生化合物(15)。
反应路线B显示了按照本发明的“第二种可供选择的过程”，由化合物(22)制备甾族中间体(15)的过程。反应路线B
化合物(1)可由第一种糖中间体以活化单糖磁麻糖形式合成，所述活化单糖磁麻糖可由式(36)的化合物制备。化合物(36)可由包括下述步骤的方法制备(i)用苯甲醛和氯化锌处理下式的甲基-α-D-葡萄糖
产生下式的化合物甲基-4，6-O-亚苄基-α-D-吡喃葡糖苷
(ii)在0℃下，用甲苯磺酰氯和吡啶处理化合物(32)，产生下式的化合物甲基-4，6-O-亚苄基-2-O-甲苯磺酰基-α-D-吡喃葡糖苷
(iii)在100℃下，用甲醇钠处理化合物(33)，产生下式的化合物甲基-4，6-O-亚苄基-3-O-甲基-α-D-吡喃阿卓糖苷
(iv)用N-溴琥珀酰亚胺(NBS)处理化合物(34)，产生下式的化合物6-溴-4-O-苯甲酰基-3-O-甲基-6-脱氧-α-D-吡喃阿卓糖苷
(v)用硼氢化钠和二氯化镍处理化合物(35)，产生下式的化合物甲基4-O-苯甲酰基-3-O-甲基-6-脱氧-α-D-吡喃阿卓糖苷
本发明还提供了单糖磁麻糖形式的糖中间体的制备方法，该方法包含下述步骤(i)用PhSSiMe3、ZnI2和Bu4+I-处理化合物(36)，产生下式的化合物4-O-苯甲酰基-3-O-甲基-6-脱氧-αβ-D-苯硫基阿卓糖苷
(ii)选择性地，如在0℃下，用二乙氨基三氟化硫(DAST)处理化合物(37)，产生下式的化合物4-O-苯甲酰基-3-O-甲基-2-苯硫基-2，6-二脱氧-αβ-D-氟代吡喃磁麻糖苷
或(iii)选择性地，用溶剂如吡啶中的叔丁基二甲基甲硅烷基氯和咪唑处理化合物(37)，产生下式的化合物4-O-苯甲酰基-3-O-甲基-2-O-叔丁基二甲基甲硅烷基-αβ-D-苯硫基阿卓糖苷
其中，Z＝TBDMS＝叔丁基二甲基甲硅烷基；(iv)用碱如甲醇钠处理化合物(39)，产生下式的化合物3-O-甲基-2-O-叔丁基二甲基甲硅烷基-αβ-D-苯硫基阿卓糖苷
其中，Z＝TBDMS＝叔丁基二甲基甲硅烷基。
反应路线C显示了按照本发明由化合物(36)合成活化的单糖磁麻糖(40)的过程(为说明起见，包括由化合物(31)制备化合物(36)的过程)。反应路线C
化合物(1)的合成也可采用活化单糖黄夹竹桃糖形式的第二种糖中间体，所述单糖黄夹竹桃糖可由式(47)的化合物制备。化合物(47)可通过下述方法制备，该方法包括下述步骤(i)用丙酮和磺酸处理下式的α-D-葡萄糖
产生下式的化合物1，25，6-二-O-亚异丙基-α-D-呋喃葡萄糖
(ii)用氢化钠和甲基碘处理化合物(42)，产生下式的化合物1，25，6-二-O-亚异丙基-3-O-甲基-α-D-呋喃葡萄糖
(iii)用乙酸处理化合物(43)，产生下式的化合物3-O-甲基-αβ-D-吡喃葡萄糖
(iv)用甲醇和盐酸处理化合物(44)，产生下式的化合物甲基3-O-甲基-αβ-D-吡喃葡糖苷
(v)用苯甲醛和氯化锌处理化合物(45)，产生下式的化合物甲基4，6-O-亚苄基-3-O-甲基-αβ-吡喃葡糖苷
(vi)用N-溴琥珀酰亚胺、氯化镍和硼氢化钠处理化合物(46)，产生下式的化合物甲基4-O-苯甲酰基-3-O-甲基-6-脱氧-αβ-吡喃葡糖苷
本发明提供了活化的单糖黄夹竹桃糖的制备方法，该方法包含下述步骤(i)用苯硫基三甲基硅烷和三甲基甲硅烷基三氟甲磺酸酯处理化合物(47)，产生下式的化合物4-O-苯甲酰基-3-O-甲基-1-苯硫基-6-脱氧-αβ-吡喃葡糖苷
(ii)用新戊酰氯和一种溶剂如吡啶处理化合物(48)，产生下式的化合物4-O-苯甲酰基-3-O-甲基-2-O-新戊酰基-1-苯硫基-6-脱氧-αβ-吡喃葡糖苷
(iii)用溴化剂如N-溴琥珀酰亚胺和二乙氨基三氟化硫处理化合物(49)，产生下式的化合物4-O-苯甲酰基-3-O-甲基-2-O-新戊酰基-1-氟-6-脱氧-β-吡喃葡糖苷，其为立体异构体
反应路线D显示了按照本发明由化合物(48)合成活化的单糖磁麻糖((50A)和50(B))的过程(为说明起见，包括由化合物(41)制备化合物(47)的过程)。反应路线D
按照本发明的另一个方面，提供了一种合成式(1)化合物和其类似物和衍生物的方法，该方法包括以下步骤合成适宜的甾族中间体或前体，将所需数量的单糖与甾族中间体进行偶联。
本发明也提供了单糖磁麻糖与甾族中间体的偶联方法，该方法包括下述步骤(i)在氯化锡存在下，在溶剂如乙醚中，例如在-15℃下，使式(38)的磁麻糖与式(15)的甾族中间体进行反应，产生下式的化合物3-O-[4-O-苯甲酰基-2-苯硫基-β-D-吡喃磁麻糖基]-12，14-β-二羟基孕-5-烯-20-酮
和(ii)用吡啶中的甲基巴豆酰氯然后用碱如甲醇钠处理化合物(51)，产生下式的化合物3-O-[2-苯硫基-β-D-吡喃磁麻糖基]-12β-甲基巴豆酰基-14β-羟基孕-5-烯-20-酮
本发明提供了一种下述方法，该方法包括下述步骤使单糖磁麻糖与单糖黄夹竹桃糖偶联，将形成的二糖与结合的甾族产物(52)偶联形成化合物(1)。
使单糖磁麻糖与单糖黄夹竹挑糖偶联，并使形成的二糖与结合的甾族产物(52)进行偶联的方法可包括下述步骤(i)采用氯化锡和三氟甲磺酸银，如在-15℃下，使选择性保护的磁麻糖(40)与选择性保护的黄夹竹桃糖(50A)偶联，产生下式的化合物
其中，Z＝TBDMS＝叔丁基二甲基甲硅烷基；(ii)用四丁基氟化铵处理化合物(53)，产生下式的化合物
(iii)例如在0℃下，用二乙氨基三氟化硫处理化合物(54)，产生下式的化合物
(iv)使化合物(55)与化合物(52)反应，产生下式的化合物
和(v)在阮内镍反应中处理化合物(56)，再用碱如甲醇钠处理，产生如上所述的化合物(1)。
反应路线E显示了用于合成中间体(52)和(55)并将它们偶联形成化合物(56)的过程。反应路线E
按照本发明，提供了另一种偶联磁麻糖和黄夹竹桃糖以形成三糖，并使三糖偶联到甾族衍生物上形成式(1)化合物的方法。
偶联磁麻糖和黄夹竹桃糖以形成三糖，并使三糖偶联到甾族衍生物上形成式(1)化合物的方法包括下述步骤(i)采用氯化锡、AgOTf、Cp2ZrCl2使选择性保护的磁麻糖(40)与化合物(45)偶联，产生下式的化合物
其中，Z＝TBDMS＝叔丁基二甲基甲硅烷基；(ii)用四丁基氟化铵和二乙氨基三氟化硫处理化合物(57)，产生下式的三糖化合物
(iii)采用氯化锡、AgOTf、Cp2ZrCl2使式(58)的三糖与下式的甾族中间体偶联
产生化合物(1)。
反应路线F显示了合成三糖(58)的过程和通过偶联三糖(58)与甾族中间体(59)合成化合物(1)的过程。反应路线F
如上所述的中间体(23)、(24)、(25)、(27)、(28)、(29)、(30)、(37)、(38)、(39)、(40)、(48)、(49)、(50)、(51)、(53)、(54)、(55)、(56)、(57)和(58)为新化合物，本发明提供了这些化合物。
现已发现化合物(1)3-O-[-β-D-吡喃黄夹竹桃糖基-(1→4)-β-D-吡喃磁麻糖基-(1→4)-β-D-吡喃磁麻糖基]-12β-O-甲基巴豆酰基-14-羟基-14β-孕-5-烯-20-酮和其各种类似物和衍生物具有食欲抑制活性。
本发明也提供了具有食欲抑制剂活性的组合物或制剂，其中，活性成分为由Trichocaulon属或火地亚属植物获得的提取物。
活性成分可为由Trichocaulon属或火地亚属植物提取的式(1)的化合物或其衍生物。所述植物可为Trichocaulon piliferum和Trichocaulon officinale种，或火地亚currorii、火地亚gordonii和火地亚lugardii种。
本发明也提供了具有食欲抑制剂活性的组合物或制剂，其中，活性成分为合成的式(1)化合物或其衍生物或类似物，如前述化合物(2)-(14)。
按照本发明的另一个方面，提供了抑制食欲的方法，包括向人或动物给药适宜剂量的含有Trichocaulon属或火地亚属植物提取物的食欲抑制剂。所述提取物可掺入组合物或制剂中，组合物或制剂也可含有可药用的其它成分。
食欲抑制剂为如上所述具有下式的经分离的天然化合物或合成的
食欲抑制剂组合物或制剂可由食欲抑制剂与可药用赋形剂、稀释剂或载体组成。根据需要，也可加入包括稳定剂在内的其它适宜的添加剂。
本发明还提供了化合物(1)或其衍生物或类似物在生产具有食欲抑制剂活性的药物中的用途。
本发明还提供了用作具有食欲抑制剂活性药物的如前所述化合物(1)或其衍生物或类似物。
本发明还提供了抑制食欲的方法，包括向人或动物给药有效剂量的如前所述组合物。
本发明描述了用于从由Trichocaulon属或火地亚属植物获得的植物原料中提取具有食欲抑制剂活性的甾族糖苷的方法。因此，本发明提供了由Trichocaulon属或火地亚属植物原料获得的提取物，其包含大量的纯的式(1)甾族糖苷。
本发明也提供了食品或饮料，其包含在摄取时具有食欲抑制剂作用有效量的如前所述式(1)的甾族糖苷或其衍生物或类似物。
分子遗传学研究已导致对食欲、安全性和体重的调节的认识有显著的增加。这些研究已披露了很多种由神经肽介导的中枢调节途径。通过能量摄取、食物消耗和能量支出间复杂的平衡，可实现保持正常的体积。能量的体内平衡受各种因素影响，并最终受大脑的控制。不同的信号包括诸如气味和味觉及胃肠信号如胃肠道膨胀，对胃粘膜和血生成代谢物如脂肪酸和葡萄糖的化学信号。
总体说来，通过菜普亭(leptin)负向调节的神经肽“Y”(NPY)已被看作是进食行为的正向调节器。黑皮质素(melanocortin)受体的内源性拮抗剂的表达也显示出是特定模型(ob/ob鼠)肥胖的基础。在MC4黑皮质素受体中的明显不足完全与肥胖症吻合。其它显示出在能量平衡方面具有作用的传递质介体包括盘舌蟾素、galonin、高血糖素样肽-1。
尽管不受理论的限制，但本申请人相信，如前所述的化合物可其类似物可用作黑皮质素4受体的激动剂。这种作用可调节NPY但也会增加缩胆囊素。其中，缩胆囊肽的作用是抑制胃排空。
因而，本发明提供了具有食欲抑制剂活性的组合物，其包含黑皮质素4受体激动剂。
所述激动剂可为如前所述的提取物或化合物，特别是式(1)的化合物。该组合物可包含可药用赋形剂、稀释剂或载体，并选择性地制备成单位剂量形式。
本发明还提供了黑质皮素4受体激动剂在生产具有食欲抑制剂活性的药物中的用途，提供了用作具有食欲抑制剂活性的药物的黑质皮素4受体激动剂，提供了抑制食欲的方法，包括向人或动物给予有效剂量的如前所述含有黑皮质素4激动剂的组合物，提供了黑质皮素4受体激动剂在人或动物中抑制食欲和/或减肥的用途。
以下，参考下述实施例和附图，将对本发明和其效力进行进一步的描述，但它们并不构成对本发明的限定。
在附图中，
图1显示了从Trichocaulon属或火地亚属植物原料中提取第一种粗食欲抑制剂提取物和提纯的食欲抑制剂提取物的一般方法的流程图；图2显示了生物试验的图示说明，所述生物试验采用部分提纯的Trichocaulon piliferum的甲醇提取物在大鼠上进行的；图3和图4均显示了本发明优选实施方案用于从Trichocaulon属或火地亚属的植物原料生产提取物的方法的图解的说明；图5和图6显示了在重复剂量研究中分别在-7至7天和0-7天对不同组别的大鼠体重变化百分数的图示说明，实验中采用了由火地亚gordonii种植物原料的汁液提取物和喷雾干燥的汁液提取物。
实施例1
从Trichocaulon属或火地亚属植物原料中提取第一种粗食欲抑制剂提取物和提纯的食欲抑制剂提取物的一般方法由图1的流程图说明。
实施例2采用在实施例1中所述方法获得的部分提纯的甲醇提取物对大鼠进行生物试验，结果表明，所述提取物确实显示出食欲抑制剂活性。活性提取物的食欲抑制剂活性可借助于图2，由Trichocaulonpiliferum的甲醇提取物对大鼠的作用的典型实例来说明。
从图2证实，受试组的服用提取物的大鼠在第5天时显示出比以后2天实际减少了食物摄取，而对照组并未显示出可比较的食物摄取减少。从第8天起，受试组的食物摄取正常，事实上增加了。
实施例3本发明用于生产具有食欲抑制剂活性的方法的优选实施方案由图3和图4进行图示说明，这两个附图一起说明复杂的过程。但是，可以采用各种其它过程，如本领域技术人员公知的那样。
参看图3，通过进料管1，将Trichocaulon属或火地亚属植物原料加至混合器3如Waring混合器中，经进料管2加入二氯甲烷/甲醇溶液形式的溶剂。均化的产品经管路4加入分离装置5如过滤器或离心器中，将残余物的植物原料经管路27除去。
经管路6将溶剂/提取物混合物加至蒸发装置7中，在此，除去溶剂，例如采用旋转蒸发器。干燥后的粗提取物经管路8加入另一个提取装置9中，再经管路29加入二氯甲烷/水溶液进行进一步提取，然后，经管路11加至分离装置13中，其中，含水馏分经管路31除去。溶解后的提取物馏分经管路15加至干燥装置17中，在此，通过例如旋转蒸发器使溶剂蒸发。
参看图4，干燥后的提取物经管线10加至提取装置12中。经管路14向提取装置12中加入甲醇/己烷溶液，以对干燥后的提取物进行进一步提纯。经管路16将提取物/甲醇/己烷混合物加至分离装置18中，己烷馏分经管路20除去，然后，甲醇/提取物混合物经管路22加至干燥装置24中。在干燥装置24中，通过蒸发过程如旋转蒸发器将溶剂除去。
干燥并部分提纯的活性提取物经管路26与经管路28的其余甲醇一起加至溶解装置30中，溶解的馏分经管线36加至色谱柱38中。
在色谱柱38中，甲醇可溶解的馏分进一步进行色谱分离，采用硅胶和氯仿/30％甲醇溶剂，分成不同的馏分，如馏分I至V所示意说明。按照本申请人进行的实际色谱分离过程，色谱分离过程产生了下述馏分重量I(3.9g)；II(2.6g)；III(2.1g)；IV(1.1g)和V(2.0g)。这些馏分通过适宜的生物试验过程(在未示出的步骤中)逐个进行评价，这些馏分确定为馏分I和II，显示出突出的食欲抑制剂活性，将馏分I和II分别通过进料管40和42加至柱44和46中，在柱中它们进一步通过柱色谱进行色谱分离和提纯，再次采用硅胶和9∶1的氯仿∶甲醇体系。
测定时，从柱44获得的亚馏分II(A)-(C)显示出显著的食欲抑制剂活性，并且，可将其再循环以进行色谱处理。
同时对从柱46获得的亚馏分I(A)-(L)进行评价(通过未示出的步骤)，亚馏分I(C)显示出具有突出的食欲抑制剂活性。
经管路48将亚馏分I(C)加至柱50中进行色谱分离和纯化，采用硅胶和9∶1乙酸乙酯∶己烷洗脱液。在形成的提纯的馏分中，测定后发现，馏分I(C)(ii)具有突出的食欲抑制剂活性。
提纯后的产物通过核磁共振光谱进行鉴别(如下表1和表2)后为化合物(1)。表1化合物(1)的CDCl3数据1H(300.13MHzz)n.m.r.
化合物(1)氢原子J(HH)/Hz δH/p.p.m.糖苷配基-3- 3.522 m6 - 5.381 m1211.5，4.1 4.607 dd179.3，9.33.157 dd18- 1.029 s19- 0.951 s21- 2.164 s3*7.1，1.56.888 qq4*7.1，1.21.806 dq5*1.6，1.21.853 dqCym-1′ 9.4，2.14.816 dd2′ 13.8，3.7，2.1 2.055 ddd2′aq13.8，9.4，2.6 1.552 ddd3′ax3.7，2.9，2.6 3.776 ddd4′ 9.4，2.93.179 dd5′ 6.3，9.43.821 dd6′ 6.3 1.279 da3′-OMe - 3.408 sd1″ 9.4，2.14.730 dd2″ 13.8，3.7，2.1 2.108 ddd2″aq13.8，9.4，2.6 1.601 ddd3″ax3.7.2.9，2.63.755 ddd4″ 9.4，2.93.239 dd5″ 6.3，9.43.898 dd6″ 6.3 1.243 db3″-OMe - 3.392 seThev-1 7.7 4.273 d2 7.7，8.03.469 dd3 8.0.2.9 3.099 dd4 9.3，2.93.179 dd5 6.3，9.33.351 dd6 6.3 1.183 d′c3-OMe - 3.622 s在每一栏中a，b，c可互换.在每一栏中d，e可互换*指甲基巴豆酸酯基团原子表2在CDCl3中化合物(1)的相对13C(75.25MHzz)n.m.r.数据糖苷配基部分 糖部分碳δC/p.p.m. 碳δC/p.p.m.1 37.04 T cym-1′ 95.84 D2 29.44 T 2′ 35.57 T3 77.24 D 3′ 77.05 D4 38.62 T 4′ 82.57 D5 138.95 S 5′ 68.48 D6 131.90 D 6′ 18.14 Q7 27.30 T 3′-OMe57.93 Q8 35.30 D 1″ 99.54 D9 43.04 D 2″ 35.17 T1037.22 S 3″ 76.99 D1126.04 T 4″ 82.52 D1275.88 D 5″ 68.30 D1353.71 S 6″ 18.36 Q1485.69 S 3″-OMe57.09 Q1534.36 T Thev-1 104.28 D1624.31 T 2 74.62 D1757.18 D 3 85.30 D189.85 Q 4 74.62 D1919.27 Q 5 71.62 D20216.85 S 6 17.75 Q2133.01 Q 3-OMe60.60 Q1*167.60 S2*128.69 D3*137.66 D4*14.41 Q5*12.08 Q*指甲基巴豆酸酯基团原子化合物(1)IR数据3440cm-1(OH)，2910cm-1(CH)，1700cm-1(C＝0)[αD]20589＝12,67°(C＝3，CHCl3)m.p.147℃-152℃
实施例4-13说明合成过程，从而中间体化合物和甾族化合物(15)可按照“第一种供选择的过程”制备。
实施例412β，15α-二羟基孕酮(17)将包含蔗糖(900g)、碳酸氢二钾(30g)、蔡氏培养基浓缩液(300mL)、玉米浸泡液(300mL)和蒸馏水(30L)的培养介质进行接种制得德可拉丽赤壳(ATCC 14767)的培养物(150×500mL烧瓶)。在26℃下振摇5天后，将孕酮(16)(150g)在吐温80中的悬浮液(0.1％溶液，1.5L)加至烧瓶中。将培养物进一步培养5天，然后进行离心、滗析及用氯仿萃取，蒸发，得到二羟基孕酮(17)(75g，45％)。
1H NMR(CDCl3)5,71(1H，s，H-4)；4,12-4,22(1H，m，H-15)4,43(1H，br，s，OH)；3,46-3,53(1H，dd，J＝4,6Hz，H-12)；2,16Hz(3H，s，H-21)；1,18(3H，s，H-19)；0,74(3H，s，H-18)实施例512β-羟基-15α-(对甲苯磺酰基)-孕酮(18)将二羟基孕酮(17)(75g，0.22mol)溶解于无水吡啶(300mL)中，并冷却至0℃。在0℃下，将无水吡啶(200mL)中的对甲苯磺酰氯(46g，0.24mol)滴加至反应混合物中。在0℃下过夜搅拌反应混合物，加入水(500mL)使反应停止。水层用乙酸乙酯(1L)萃取，有机层用盐酸(6M，3×1L)、碳酸氢钠饱和水溶液(500mL)、氯化钠饱和水溶液(500mL)和水(500mL)洗涤。有机层用硫酸镁干燥，过滤，蒸发，得到对甲苯磺酰化孕酮(18)(98g，92％)，为粘性暗黄色油。1H NMR(CDCl3)7,7(2H，d，J＝14Hz，H-2,6)；7,34(2H，d，J＝8,4Hz，H-3,5)；5,67(1H，s，H-4)；4,86-4,93(1H，m，H-15)；3,45-3,50(1H，dd，J＝4,6Hz，H-12)；2,44(3H，s，H-4Me)；2,15(3H，s，H-21)1,13(3H，s，H-19)；0,74(3H，s，H-18).
实施例612β-羟基-Δ14-孕酮(19)将甲苯磺酸化的孕酮(18)(98g，0.19mol)的2，4，6-三甲基吡啶(500mL)溶液在150℃下回流3小时。将反应混合物冷却，并倒入水(500mL)中。水层用乙酸乙酯(1L)萃取，此后，有机层用盐酸(6M，3×1L)、碳酸氢钠饱和水溶液(500mL)、氯化钠饱和水溶液(500mL)和水(500mL)洗涤。在用硫酸镁干燥和过滤后，蒸发出乙酸乙酯，粗混合物用硅胶色谱提纯，用丙酮∶氯仿(1∶10)洗脱，得到Δ14-孕酮(19)(50g，78％)，为暗红色油。1H NMR(CDCl3)5,73(1H，s，H-4)，5,28(1H，dd，J＝2,2Hz，H-15)，4,41(1H，br，s，OH)，3,49-3,52(1H，dd，J＝4,3Hz，H-12)，2,80-2,84(1H，dd，J＝9,2Hz，H-17)，2,14(3H，s，H-21)，1,19(3H，s，H-19)，0.89(3H，s，H-18).
实施例73，12β-二乙酰氧基-孕-3，5，14-三烯-20-酮(20)将Δ14-孕酮(19)(50g，0.15mol)在乙酰氯(1.5L)和乙酸酐(750mL)中的溶液回流2小时。将反应混合物倒入冷的乙酸乙酯(1L)中，搅拌下加入饱和碳酸氢钠水溶液，直至停止冒泡。从碳酸氢钠层中分离出乙酸乙酯层，用部分碳酸氢钠水溶液(3×700mL)、再用饱和氯化钠水溶液(700mL)、最后用水(700mL)洗涤。有机层用硫酸镁干燥，过滤，蒸发，得到3，12β-二乙酰氧基-孕-3，5，14-三烯-20-酮(20)(60g，93％)，为橙色油。1H NMR(CDCl3)5,68(1H，s，H-4)，5,44(1H，m，H-6)，5,31(1H，dd，J＝2,2Hz，H-15)，4,82-4,86(1H，dd，J＝4,5Hz，H-12)，3,10-3,18(1H，t，J＝9,5Hz，H-17)，2,18(3H，s，3-Ac)，2,11(3H，s，12-Ac)，2,08(3H，s，H-21)，1,02(3H，s，H-19)，1,01(3H，s，H-18)
实施例83，12β-二乙酰氧基-20，20-亚乙二氧基孕-3，5，14-三烯(21)将二乙酰氧基化合物(20)(60g，0.14mol)溶解于苯(1L)中，加入乙二醇(60mL)和对甲苯磺酸(1g)。(苯预先用Dean-Stark捕集器进行过回流)。混合物在搅拌下进行回流，经恒沸除去水16小时。向冷却后的溶液中加入饱和碳酸氢钠水溶液(500mL)。然后，将其用盐水(500mL)和水(500mL)洗涤，用硫酸镁干燥。蒸出溶剂，粗混合物用硅胶柱色谱提纯，用乙酸乙酯∶己烷(2∶8)洗脱，得到亚乙二氧基孕-3，5，14-三烯(21)(35g，53％)。
1H NMR(CDCl3)5,68(1H，s，H-4)，5,45(1H，m，H-6)，5,31(1H，dd，J＝2,2Hz，H-15)，4,73-4,85(1H，dd，J＝4,4Hz，H-12)，3,78-3,98(4H，m，亚乙二氧基)，2,16(3H，s，3-Ac)，2,04(3H，s，12-Ac)，1,29(3H，s，H-21)，1,12(3H，s，H-19)，1,02(3H，s，H-18).
实施例93β，12β-二羟基-20，20-亚乙二氧基孕-5，14-二烯-12-乙酸酯(22)将二烯醇乙酸酯(21)(35g，0.077mol)悬浮于乙醇(500mL)中，在0℃下加入硼氢化钠(2.8g，0.074mol)。将混合物升温至室温，搅拌过夜。大多数的溶剂经真空除去，将混合物用水(500mL)稀释，用乙酸乙酯(500mL)萃取，再用硅胶进行色谱处理，用丙酮/氯仿(1∶10)洗脱，得到3β-醇(22)(25g，80％)。
1H NMR(CDCl3)5,41(1H，m，H-6)，5,28(1H，dd，J＝2,2Hz，H-15)，4,72-4,81(1H，dd，J＝4,4Hz，H-12)，3,82-4,02(4H，m，亚乙二氧基)，3,45-3,59(1H，m，H-3)，2,03(3H，s，12-Ac)，1,28(3H，s，H-21)，1,10(3H，s，H-19)，1,01(3H，s，H-18).
实施例103β，12β-二羟基-20，20-亚乙二氧基孕-5，14-二烯(23)将无水四氢呋喃(300mL)中的3β-醇(22)(25g，60.2mmol)滴加至氢化铝锂(2.7g，72.2mmol)的无水四氢呋喃(500mL)悬浮液中。将反应混合物在室温下搅拌24小时，此后，小心地加入水(2.7mL)，继续搅拌10分钟。再中入氢氧化钠(15％溶液，2.7mL)，搅拌悬浮液。10分钟后，加入水(8.1mL)，再搅拌悬浮液10分钟，过滤，用干燥(硫酸镁)，蒸出溶剂，得到3β，12β-二羟基-孕-二烯(23)(20g，90％)。
1H NMR(CDCl3)5,36(1H，m，H-6)，5,23(1H，dd，J＝2,2Hz，H-15)，3,94-4,06(4H，m，亚乙二氧基)，3,41-3,52(1H，m，H-3)，3,32-3,36(1H，dd，J＝4,3Hz，H-12)，1,31(3H，s，H)1,01(3H，s，H-19)，0,96(3H，s，H-18).13C NMR(CDCl3)152,4(C-14)，140,2(C-5)，121,1(C-15)119,7(C-6)，111,1(C-20)，79,8(C-12)，71,6(C-3)，63,7 and 63,6(亚乙二氧基)，58,8(C-17)，19,0(C-19)，11,9(C-18).3β，12β-二羟基-14，15-环氧-20，20-亚乙二氧基孕-5-烯和3β，12β-二羟基-5，6-环氧-20，20-亚乙二氧基孕-14-烯在0℃下，将N-溴乙酰亚胺(211mg，1.5mmol)加至搅拌中的5，14-二烯(23)(500mg，1.34mol)在丙酮(100mL)、乙酸(2.5mL)和水(5mL)中的溶液中。15分钟后，向反应混合物中加入亚硫酸钠(5％溶液，50mL)。蒸出丙酮，水层用二氯甲烷(3×50mL)萃取。有机层用硫酸镁干燥，过滤，蒸发。向产物中加入吡啶(1mL)，搅拌0.5小时。然后，向反应混合物中加入二氯甲烷(100mL)，二氯甲烷相用柠檬酸(5％溶液，3×100mL)、饱和碳酸氢钠(50mL)和水(50mL)洗涤。有机层用硫酸镁干燥，过滤，蒸发，得到14，15-和5，6-环氧化物的混合物(360mg，69％)，为白色泡沫物。通过硅胶柱色谱不能将环氧化物的混合物分开。
实施例113β，12β-二羟基-14，15-环氧-20，20-亚乙二氧基孕-5-烯(24)将在无水四氢呋喃(200mL)中的14，15-和5，6-环氧化物的混合物(14.4g，37.0mmol)加至氢化铝锂(1.69g，44.4mmol)的无水四氢呋喃(300mL)悬浮液中。将反应混合物在室温下搅拌24小时，此后，通过加入水(1.69mL)和氢氧化钠(15％溶液，1.69mL)，按照前述进行处理。过滤后，蒸除溶剂，粗产物用硅胶柱色谱提纯，采用甲醇/氯仿(1∶9)作为溶剂，得到未反应的14，15-环氧-20，20-亚乙二氧基孕-5-烯(24)(300mg，2.1％)。
1H NMR(CDCl3)5,31(1H，m，H-6)，3,82-3,98(4H，m，亚乙二氧基)，3,43-3,52(1H，m，H-3)，3,41(1H，s，H-15)，3,31-3,35(1H，dd，J＝4,3Hz，H-12)，1,29(3H，s，H-21)，1,17(3H，s，H-19)，1,02(3H，s，H-18).
13C NMR(CDCl3)139,8(C-5)，120,8(C-6)，112,1(C-20)，77,2(C-12)，75,4(C-14)，61,0(C-15)，22,3(C-21)，19,2(C-19)，9,5(C-18).
实施例123β，12β，14β-三羟基-20，20-亚乙二氧基孕-5-烯(25)将无水四氢呋喃(10mL)中的14，15-环氧化物(300mg，0.77mmol)加至氢化铝锂(300mg，7.89mmol)的四氢呋喃悬浮液中，将反应混合物回流48小时。在加入水(0.3mL)、氢氧化钠(15％溶液，0.3mL)后，如前所述进行过滤，将混合物用硅胶柱色谱纯化，采用甲醇∶氯仿(1∶9)作为溶剂，得到三羟基孕烯(25)(250mg，83％)。
1H NMR(CDCl3)5,38(1H，m，H-6)，3,98(4H，m，亚乙二氧基)，3,43-3,53(1H，m，H-3)，3,25-3,32(1H，dd，J＝4,1Hz，H-12)，1,32(3H，s，H-21)，1,01(3H，s，H-19)，0,98(3H，s，H-18)13C NMR CDCl3)139,1(C-5)，122,1(C-6)，112,2(C-20)，85,1(C-14)，75,1(C-12)，71,6(C-3)，23,4(C-21)，19,4(C-19)，8,9(C-18)实施例133β，12β，14β-三羟基-孕-5-烯(15)将亚乙二氧基孕烯(25)(250mg，0.64mmol)溶解于乙酸(13.4mL)和水中，冷冻干燥后，得到三羟基甾族化合物(15)(200mg，89％)，m.p.228-235℃(lit 225-235℃)，M+348，[αD]20+35°(lit[αD]20+39°)。
1H NMR(CDCl3)5,39(1H，m，H-6)，3,56-3,62(1H，t，J＝8,1Hz，H-17)，3,42-3,51(1H，m，H-3)，3,28-3,39(1H，dd，J＝4,3Hz，H-12)，2,23(3H，s，H-21)，1,01(3H，s，H-19)，0,90(3H，s，H-18)13C NMR(CDCl3)217,7(C-20)，138,9(C-5)，122,2(C-6)，85,5(C-14)，73,6(C-12)，71,6(C-3)，57,0(C-17)，55,1(C-13)，43,6(C-9)，42,1(C-4)，37,3(C-1)，36,8(C-10)，35,9(C-8)，34,5(C-15)，32,9(C-21)，31,5(C-16)，30,1(C-2)，27,4(C-7)，24,4(C-11)，19,4(C-19)，8,3(C-18).
实施例14-19说明了合成过程，从而中间体化合物和甾族化合物(15)可按照“第二种供选择的过程”制备。
实施例1420，20-亚乙二氧基-3β-甲苯-对-磺酰氧基孕-5，14-二烯-12β-醇乙酸酯(26)在0℃下，将对甲苯磺酰氯(650mg，3.4mmol)的吡啶(10mL)溶液滴加至20，20-亚乙二氧基孕-5，14-二烯-3β，12β-二醇12-乙酸酯(22)(1.3g，3.1mmol)在吡啶(15mL)中的混合物中。将反应混合物在室温下搅拌24小时，此后，向反应混合物中加入水。溶液用乙酸乙酯萃取(2×50mL)，乙酸乙酯层用柠檬酸(5×50mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(100mL)、饱和氯化钠水溶液(100mL)和水(100mL)洗涤。乙酸乙酯层用硫酸镁干燥，过滤，蒸发，用快速柱色谱提纯，采用己烷-乙酸乙酯(8∶2v/v)作为洗脱剂，得到β-O-甲苯磺酰基甾族化合物(26)(1.5g，84％)，为黄色油(C32H42O7S的M实测值570.271，计算值570.273)。
δH1.021(3H，s，19-H)，1.131(3H，s，18-H)，1.282(3H，s，21-H)，2.021(乙酸酯基OCH3)，2.431(3H，s，Ar-CH3)，3.883(4H，m，OCH2CH2O)，4.750(1H，dd，3J 10.8Hz，5.2Hz，12-H)，4.890(1H，m，30H)，5.281(1H，dd，3 J4.2Hz，2.1Hz，15-H)，5.388(1H，m，6-H)，7.341(2H，d，3J 8.2Hz，ArH)，7.746(2H，d，3J 8.2Hz，ArH).
δC13.493Q(C-18)，19.002Q(C-19)，21.612Q(Ar-甲基)*，21.671Q(C-21)*，24.175Q(乙酸酯甲基)，63.401T(亚乙二氧基)，63.498T(亚乙二氧基)，71.531S(C-13)，80.912D(C-12)，82.531D(C-3)，111.363S(C-20)，120.881D(C-15)，121.461D(C-6)，123.715-133.917(芳基)，139,903S(C-14)，151,722S(C-5)，170.819S(酯羰基)。
*可互换实施例1520，20-亚乙二氧基-3α，5-环-5α-孕-14-烯-6β，12β-二醇-12-乙酸酯(27)将3β-甲苯-对-磺酰氧基孕-5，14-二烯(26)(1.2g，2.1mmol)和乙酸钾(2.2g，22.4mmol)在水(250mL)和丙酮(500mL)中的溶液在60℃下回流16小时。蒸出丙酮，水层用乙酸乙酯萃取(200mL)。乙酸乙酯层用硫酸镁干燥，过滤，蒸发。对混合物进行快速色谱分离，用氯仿-丙酮(9∶1v/v)作为洗脱剂，得到3α，5-环衍生物(27)(530mg，61％)，为黄色油(C25H36O5的M实测值416.262，计算值416.263)。
δH0.288(1H，dd，3J 8.1Hz，4.9Hz，4-Ha)，0.477(1H，dd，3J 4.4Hz，4.4Hz，4-Hb)，1.025(3H，s，19-H)，1.121(3H，s，18-H)，1.256(3H，s，21-H)，1.989(3H，s，乙酸酯基-CH3)，3.302(1H，dd，3J 2.8Hz 2.8Hz，6-H)，3.784-3.947(4H，m，OCH2CH2O)，4.721(1H，dd，3J8.5Hz，5.6Hz，12-H)，5.232(1H，dd，3J 3.9Hz，1.9Hz，15-H).
δC11.678T(C-4)，12.298Q(C-18)，19.971Q(C-19)，
23.623Q(C-21)，24.153Q(乙酸酯甲基)，63.100T(亚乙二氧基)，63.788T(亚乙二氧基)，73.591D(C-6)，80.551D(C-12)，111.126S(C-20)，118.778D(C-15)，152.959S(C-14)，170.991S(酯羰基)。
实施例1620，20-亚乙二氧基-3α，5-环-5α-孕-14-烯-6β，12β-二醇(28)将3α，5-环衍生物(27)(500mg，1.2mmol)的四氢呋喃(20mL)溶液滴加至氢化铝锂(50mg，1.3mmol)的四氢呋喃(10mL)悬浮液中。将反应混合物搅拌4小时，加入水(50μL)使反应停止。30分钟后，加入氢氧化钠(15％溶液，50μL)，继续搅拌30分钟。加入水(150μL)，将反应混合物过滤。四氢呋喃用硫酸镁干燥，过滤，蒸发和快速色谱提纯，采用氯仿-丙酮(8∶2v/v)作洗脱剂，得到二醇(28)(370mg，83％)，为一种油(C23H34O4的M实测值374.250，计算值374.252)。
δH0.298(1H，dd，3J 8.1Hz，4.9Hz，4-H2)，0.510(1H，dd，3J 4.4Hz，4.4Hz，4-Hb)，0.985(3H，s，19-H)，1.055(3H，s，18-H)，1.325(3H，s，21-H)，3.318(1H，dd，3J 3.0Hz，3.0Hz，6-H)，)，3.363(1H，dd，3J 11.4Hz，4.2Hz，12-H)，4.019(4H，m，OCH2Ch2O)4.622(1H，s，OH)，5.255(1H，dd，3J 3.9Hz，1.9Hz，15-H).
δC11.681T(C-4)，12.243Q(C-18)，19.844Q(C-19)，23.604Q(C-21)，63.620T(亚乙二氧基)，63.733T(亚乙二氧基)，73.569D(C-6)，77.478D(C-12)，111.125S(C-20)，118.702D(C-15)，152.912S(C-14).
实施例1720，20-亚乙二氧基-14，15β-环氧-3α，5-环-5α，14β-孕烷-6β，12β-二醇(29)在0℃下，将N-溴乙酰亚胺(150mg，1.1mmol)加至20，20-亚乙二氧基-3α，5-环-5α-孕-14-烯-6β，12β-二醇(28)(340mg，0.91mmol)的丙酮(20mL)、水(0.25mL)和乙酸(0.25mL)溶液中。15分钟后，向反应混合物中加入亚硫酸钠(5％溶液，20mL)。减压蒸出丙酮，残余的溶液用二氯甲烷(3×30mL)萃取。二氯甲烷层用硫酸镁干燥，过滤，蒸发至浓缩体积(50mL)。向混合物中加入吡啶(0.5mL)，继续搅拌1小时，此后，二氯甲烷层用柠檬酸溶液(5％，3×30mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(30mL)和水(30mL)洗涤。二氯甲烷层用硫酸镁干燥，过滤，蒸发，用快速柱色谱提纯，用氯仿-甲醇(9.5∶0.5v/v)作为洗脱剂，得到环氧化物(29)(180mg，51％)为一种泡沫物(C23H34O2的M实测值390.245，计算值390.247)。
δH0.287(1H，dd，3J 8.1Hz，4.9Hz，4-Ha)，0.501(1H，dd，3J 4.4Hz，4.4Hz，4-Hb)，0.978(3H，s，19-H)，1.048(3H，s，18-H)，1.321(3H，s，21-H)，3.318(1H，dd，3J 3.1Hz，3.1Hz，6-H)，)，3.355(1H，dd，3J11.2Hz，4.1Hz，12-H)，3.491(1H，s，15-H)，4.001(4H，m，OCH2Ch2O)，4.901(1H，s，OH).
δC11.668T(C-4)，11.973Q(C-18)，19.515Q(C-19)，23.519Q(C-21)，59.910D(C-15)，63.601T(亚乙二氧基)，63.713T(亚乙二氧基)，72.501S(C-14)，73.571D(C-6)，77.471D(C-12)，111.085S(C-20).
实施例1820，20-亚乙二氧基-6β，12β，14-三羟基-3α，5-环-5α，14β-孕烷(29)将环氧化物(29)(170mg，0.44mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液加至氢化铝锂(20mg，0.53mmol)的四氢呋喃(5mL)悬浮液中。将反应混合物回流2小时，此后，加入水(20μL)，继续搅拌0.5小时。加入氢氧化钠(15％，20μL)，再搅拌0.5小时。再加入水(60μL)，将悬浮液搅拌1小时。过滤后，悬浮液用硫酸镁干燥，过滤，蒸出四氢呋喃。对形成的混合物进行快速色谱分离，用氯仿-甲醇(9∶1v/v)洗脱，得到所需的三醇(30)(90mg，53％)，为一种澄清油(C23H38O5的M实测值392.261，计算值392.263)。
δH0.287(1H，dd，3J 8.1Hz，4.9Hz，4-H2)，0.510(1H，dd，3J 4.4Hz，4.4Hz，4-Hb)，0.971(3H，s，19-H)，1.042(3H，s，18-H)，1.319(3H，s，21-H)，3.321(1H，dd，3J 3.0Hz，3.0Hz，6-H)，3.321(1H，dd，3J 11.1Hz，3.9Hz，12-H)，3.561(1H，s，OH)，4.084(4h，m，OCH2Ch2O)4.671(1H，s，OH).
δC11.668T(C-4)，11.971Q(C-18)，19.511Q(C-19)，23.520Q(C-21)，63.612T(亚乙二氧基)，63.711T(亚乙二氧基)，73.483D(C-6)，76.051D(C-12)，84.307S(C-14)，111.099S(C-20).
实施例193β，12β，14-三羟基-14β-孕-5-烯-20-酮(15)将三醇(30)(80mg，0.20mmo1)在丙酮(20mL)和盐酸(1M，10mL)中的混合物在60℃下回流2小时。将反应混合物冷却，加入饱和碳酸氢钠溶液(20mL)。蒸出丙酮，水层用氯仿(3×20mL)萃取，氯仿层用硫酸镁干燥，过滤，蒸发，得到差向异构体三羟基甾族化合物(15a，15b)(42mg，61％)。通过快速色谱分离(采用氯仿∶甲醇9∶1(v/v)作洗脱剂)，将差向异构体混合物(15a，15b)(15mg)分离开，得到纯的17β-差向异构体(15a)(10mg)，m.p.224-229℃(丙酮)，(lit 226-223℃)(C21H32O4的实测值M 348.234；C 72.32；H 9.21％；计算值C 72.38；H 9.26％；M 348.236)；还得到17α-差向异构体(15b)(10mg)，m.p.183-191℃(丙酮)，(lit 184-196℃)。
3β，12β，14-三羟基-14β-孕-5-烯-20-酮(15a)δH0.963(1H，s，19-H)，1.192(3H，s，18-H)，2.236(3H，s 21-H)，3.325(1H，dd，3J 11.2Hz，3.9Hz，12-H)，3.464(1H，s，OH)，3.5140(1H，m，3-H)，3.598(1H，dd，3J 9.6Hz，9.6Hz，17-H)，4.255(1H，s，OH)，5.383(1H，m，5-H).
δC8.275Q(C-18)，19.414Q(C-19)，24.400T(C-11)24.581T(C-16)，27.443T(C-7)，30.062T(C-2)，32.972Q(C-21)，34.543T(C-15)，35.864D(C-8)，36.975S(C-10)，37.337T(C-1)，42.144T(C-4)，43.565D(C-9)，55.101S(C-13)，57.038D(C-17)，71.597D(C-3)，73.558D(C-12)，85.566S(C-14)，122.223D(C-6)，138.932S(C-5)，217.011S(C-20).
3β，12β，14-三羟基-14β-孕-5-烯-20-酮(15b)δH0.996(1H，s，19-H)，1.144(3H，s，18-H)，2.221(3H，s 21-H)，3.339(1H，dd，3J 9.4Hz，9.4Hz，17-H)，3.492(1H，m，3-H)，3.629(1H，dd，3J 11.1Hz，3.9Hz，12-H)，3.712(1H，s，OH)，4.325(1H，s，OH)，5.383(1H，m，5-H).
实施例20-28说明可制备中间体化合物以形成第一种单糖(40)的过程。
实施例20甲基-4，6-O-亚苄基-α-D-吡喃葡糖苷(32)将甲基-α-D-吡喃葡糖苷(30g，0.15mol)、苯甲醛(70mL)和氯化锌(20g)的混合物在室温下搅拌24小时。将反应产物倒入冰水中，继续搅拌15分钟。滤出白色沉淀，用乙醚洗涤。将固体物质与偏亚硫酸氢钠(10％溶液)一起搅拌15分钟，过滤，用水洗涤。固体物质用氯仿和乙醚进行结晶，得到亚苄基产物(32)(31g，72％)。
实施例21甲基-4，6-O-亚苄基-2-O-甲苯磺酰基-α-D-吡喃葡糖苷(33)0℃下，将吡啶(100mL)中的对甲苯磺酰氯(25g，1.2当量)滴加至亚苄基葡萄糖(32)(31g，0.12mol)的吡啶(100mL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌48小时。向反应混合物中加入冰。形成的白色固体物质用水洗涤，用热乙醇进行重结晶，得到甲苯磺酰化的葡萄糖(33)(28g，60％)。
实施例22甲基-4，6-O-亚苄基-3-O-甲基-α-D-吡喃阿卓糖苷(34)在高压釜中，将在钠(7g)的甲醇(150mL)溶液中的甲苯磺酰化物(33)(28g，64mmol)在110℃下加热48小时。将反应容器冷却，向反应混合物中加入固体二氧化碳。过滤后，蒸出甲醇，然后使固体物质吸收入水中。水层用氯仿萃取三次。氯仿层用硫酸镁干燥，过滤，蒸发。粗混合物用硅胶柱色谱提纯，用氯仿∶丙酮(9∶1)洗脱，得到可卓糖苷(34)(10g，52％)。
实施例23甲基-6-溴-4-O-苯甲酰基-3-O-甲基-6-脱氧-α-D-吡喃阿卓糖苷(35)将亚苄基阿卓糖苷(34)(10g，33mmol)加至N-溴琥珀酰亚胺(7.6g)和碳酸钡(20g)在四氯化碳溶液中，将反应混合物在75℃下回流3小时。将反应混合物过滤，四氯化碳层用水洗涤。有机层用硫酸镁干燥，过滤，蒸发，得到6-溴-阿卓糖苷(35)(9g，69％)。
实施例24甲基-4-O-苯甲酰基-3-O-甲基-6-脱氧-α-D-吡喃阿卓糖苷(36)在0℃下，将水(30mL)中的硼氢化钠(18g)滴加至溴代阿卓糖苷(35)(9g，23mmol)和氯化镍(18g)的乙醇(300mL)溶液中。将反应混合物在75℃下回流1小时，然后，将其过滤。蒸出乙醇，残余的水层用氯仿萃取三次，氯仿层用硫酸镁干燥，过滤，蒸发，得到6-脱氧-阿卓糖苷(36)(5g，72％)。
实施例254-O-苯甲酰基-3-O-甲基-6-脱氧-αβ-D-苯硫基吡喃阿卓糖苷(37)在0℃下，将苯硫基三甲基硅烷(5mL)和三甲基甲硅烷基三氟甲烷磺酸酯(2mL)加至6-脱氧-阿卓糖苷(36)(5g，17mmol)的二氯甲烷(200mL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌6小时。向反应混合物中加入饱和碳酸氢钠溶液。二氯甲烷层用硫酸镁干燥，过滤，蒸发。粗混合物用硅胶柱色谱提纯，用氯仿∶丙酮(9∶1)洗脱，得到αβ-D-苯硫基阿卓糖苷(37)(4g，63％)。
实施例264-O-苯甲酰基-3-O-甲基-2-苯硫基-2，6-二脱氧-αβ-D-氟代吡喃磁麻糖苷(38)在0℃下，将二乙氨基三氟化硫(0.65g)加至αβ-D-苯硫基阿卓糖苷(37)(0.5g，1.33mmol)的二氯甲烷溶液中。将反应混合物在0℃下搅拌0.5小时，然后加入饱和碳酸氢钠溶液。从水层中分离出二氯甲烷层，用硫酸镁干燥，过滤，蒸发，得到αβ-氟代磁麻糖(38)(450mg，90％)。
实施例274-O-苯甲酰基-3-O-甲基-2-O-叔丁基二甲基甲硅烷基-αβ-D-苯硫基阿卓糖苷(39)采用吡啶(50mL)中的叔丁基二甲基甲硅烷基氯(3g)和咪唑(3g)使6-脱氧阿卓糖苷(5g)甲硅烷基化。通过用乙酸乙酯进行萃取而处理反应混合物，用盐酸(6N)洗涤乙酸乙酯层，然后用碳酸氢钠溶液洗涤，再用水洗涤。乙酸乙酯层用硫酸镁干燥，过滤，蒸发，得到甲硅烷基化的苯甲酰基苯硫基阿卓糖苷(39)(80％)。
实施例283-O-甲基-2-O-叔丁基二甲基甲硅烷基-αβ-D-苯硫基阿卓糖苷(40)用甲醇钠(100mL)处理甲硅烷氧基化苯甲酰基苯硫基阿卓糖苷(39)(6g)4小时。蒸出甲醇，向反应混合物中加入水。将水层酸化(pH5，ACOH)，用乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯层用水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，蒸发，得到甲硅烷基化的甲基苯硫基阿卓糖苷(40)(75％)。
实施例29-37说明可制备中间体化合物以形成第二种单糖(50)的合成过程。
实施例291，25，6-二-O-亚异丙基-α-D-呋喃葡萄糖(42)在0℃下，将硫酸(40mL)滴加至α-D-葡萄糖(41)(50g，0.28mol)的丙酮(1L)溶液中。将反应混合物搅拌24小时，然后用氢氧化钠(6M)中和。蒸出丙酮，水层用氯仿萃取两次。氯仿层用硫酸镁干燥，过滤，蒸发。用环己烷进行结晶，得到二亚异丙基葡萄糖(42)(41g，57％)。
实施例301，25，6-二-O-亚异丙基-3-O-甲基-α-D-呋喃葡萄糖(43)将四氢呋喃(300mL)中的α-D-呋喃葡萄糖(42)(41g，0.16mol)滴加至氢化钠(5g)的四氢呋喃(200mL)悬浮液中。0.5小时后，向反应混合物中滴加入四氢呋喃(100mL)中的甲基碘(25g)，然后搅拌24小时。向反应混合物中加入水，再用乙醚萃取三次。乙醚层用硫酸镁干燥，过滤，蒸发，得到甲基保护的葡萄糖(43)(38g，83％)。
实施例313-O-甲基-αβ-D-吡喃葡萄糖(44)将甲基二亚异丙基化合物(43)(38g，0.14mol)溶解于乙酸(50％，700mL)中，将溶液回流18小时。冷却后，蒸出乙酸。粗产物用柱色谱提纯，采用氯仿∶甲醇∶丙酮∶水(70∶27∶2∶1)洗脱，得到3-O-甲基-αβ-D-吡喃葡萄糖(44)(13g，50％)。
实施例32甲基3-O-甲基-αβ-D-吡喃葡萄糖(45)将3-O-甲基-αβ-D-吡喃葡萄糖(44)(10g)溶解于甲醇(50mL)和盐酸(浓盐酸，1mL)中，回流过夜。加入碳酸氢钠，将反应混合物过滤。蒸出甲醇，得到1，3-二-O-甲基-αβ-D-吡喃葡糖苷(45)(95％)。
实施例33甲基4，6-O-亚苄基-3-O-甲基-αβ-吡喃葡糖苷(46)在室温下，将吡喃葡糖苷(45)(8g)在苯甲醛(20mL)和氯化锌(5g)的溶液中搅拌。24小时后，加入冰，水层用氯仿萃取。氯仿层用硫酸镁干燥，过滤，蒸发。真空蒸馏除去苯甲醛，产物用硅胶柱色谱提纯，用丙酮∶氯仿(0.5∶9.5)洗脱，得到亚苄基-αβ-吡喃葡萄苷(46)(60％)。
实施例34甲基4-O-苯甲酰基-3-O-甲基-6-脱氧-αβ-吡喃葡糖苷(47)在80℃下，将亚苄基化合物(46)(5g)在N-溴琥珀酰亚胺(3.7g)和碳酸钡(4g)在四氯化碳中的混合物中回流。4小时后，将反应混合物过滤，用水洗涤四氯化碳层，用硫酸镁干燥，过滤，蒸发，得到溴代化合物(70％)。
在0℃下，将溴代化合物(4.3g)溶解于乙醇(300mL)和氯化镍(8.6g)的溶液中。向该溶液中在15分钟内滴加入水(50mL)中的硼氢化钠(8.6g)。将反应混合物在100℃下回流45分钟，冷却，过滤，蒸发。加入氯仿，氯仿层用水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，蒸发，得到6-脱氧糖(47)(70％)。
实施例354-O-苯甲酰基-3-O-甲基-1-苯硫基-6-脱氧-αβ-吡喃葡糖苷(48)将6-脱氧吡喃葡糖苷(47)(3g)溶解于二氯甲烷(50mL)中。向该溶液中加入苯硫基三甲基硅烷(2g)和三甲基甲硅烷基三氟甲磺酸酯(0.2mL)。将溶液在室温下搅拌过夜，此后，加入饱和碳酸氢钠溶液。二氯甲烷层用硫酸镁干燥，过滤，蒸发。产物用硅胶柱色谱提纯，用乙酸乙酯∶己烷(2∶8)洗脱，得到化合物(48)(60％)。
实施例364-O-苯甲酰基-3-O-甲基-2-O-新戊酰基-1-苯硫基-6-脱氧-αβ-吡喃葡糖苷(49)向吡喃葡糖苷(48)(2g)的吡啶(20mL)溶液中加入新戊酰氯(2mL)。将溶液在室温下搅拌过夜，此后加入水。水层用乙酸乙酯萃取，有机层用盐酸(6N)洗涤。有机层用硫酸镁干燥，过滤，蒸发，得到新戊酰基酯(49)(89％)。
实施例374-O-苯甲酰基-3-O-甲基-2-O-新戊酰基-1-氟-6-脱氧-β-吡喃葡糖苷(50)在0℃下，将N-溴琥珀酰亚胺(1.2g)和二乙氨基三氟化硫(1.2g)加至新戊酰基酯(49)(2g)的二氯甲烷(100mL)溶液中。1小时后，加入饱和碳酸氢钠溶液。将二氯甲烷用硫酸镁干燥，过滤，蒸发。通过硅胶柱色谱提纯β-氟吡喃糖苷(50)，用乙酸乙酯∶己烷(2∶8)洗脱。
实施例38说明制备化合物3-O-[4-O-苯甲酰基-2-苯硫基-β-D-吡喃磁麻糖基]-12，14-β-二羟基孕-5-烯-20-酮(51)的合成过程。
实施例383-O-[4-O-苯甲酰基-2-苯硫基-β-D-吡喃磁麻糖基]-12，14β-二羟基孕-5-烯-20-酮(51)在-15℃下，将氯化锡(190mg，1mmol)加至在无水乙醚和4分子筛中的3，12，14β-三羟基孕-5-烯-20-酮(15)(100mg，0.28mmol)和氟代吡喃磁麻糖苷(38)(210mg，0.56mmol)中。将反应混合物在-15℃下保持3天。向反应混合物中加入饱和碳酸氢钠溶液。乙醚层用硫酸镁干燥，过滤，蒸发。产物用硅胶柱色谱提纯，用氯仿∶甲醇(9.5∶0.5)洗脱，得到葡糖苷(51)(30mg，15％)。
实施例39-41说明偶联磁麻糖和黄夹竹桃糖的合成过程。
实施例39黄夹竹桃糖-磁麻糖二糖(53)将黄夹竹桃糖(50A)(1.5g)、磁麻糖(40)(1.3g)和分子筛4在二氯甲烷中的溶液在室温下搅拌1小时。将反应混合物冷却至-15℃，加入氯化锡(II)(0.8g)和三氟甲磺酸银(1.1g)。将混合物在-15℃下搅拌16小时，此后，加入三乙胺(0.5mL)。将反应产物过滤，蒸出二氯甲烷。将二糖用硅胶柱色谱提纯，用乙酸乙酯∶己烷(2∶8)洗脱，收率15％。
实施例40黄夹竹桃糖-磁麻糖二糖(54)向二糖(53)(200mg)的四氢呋喃(20mL)溶液中加入四丁基氟化铵(0.4mL)。将混合物在室温下搅拌1小时，此后加入饱和碳酸氢钠溶液。将反应混合物用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯层用硫酸镁干燥，过滤，蒸发。将二糖用硅胶柱色谱提纯，用丙酮∶氯仿(0.5∶9.5)洗脱，收率60％。
实施例41黄夹竹桃糖-磁麻糖二糖(55)在0℃下，将二糖(54)(80mg)的二氯甲烷(10mL)溶液中加入二乙氨基三氟化硫(80μL)。在0℃下搅拌0.5小时后，加入饱和碳酸氢钠溶液和更多的二氯甲烷。二氯甲烷层用硫酸镁干燥，过滤，蒸发。用硅胶柱色谱提纯(乙酸乙酯∶己烷1∶9)，得到二糖(55)(65％)。
实施例42以下给出下述三种食欲抑制剂的生物试验结果。
a)Irwin试验；b)急性毒性试验；和c)口服给药厌食试验。a)Irwin试验本试验的目的评价由前述植物提取物生产的本发明的食欲抑制剂，采用的方法是用于安定和镇静作用的简化动物Irwin试验。实验过程由本申请的申请人通过前述的方法从植物原料中提取食欲抑制剂，并将其施用于四组动物中的两组中，每组有三只动物，一组不进行治疗，一组接收溶剂二甲亚砜(DMSO)，一组接收50mg/kg的试验样品，一组接收300mg/kg的试验样品。通过腹膜内的注射进行治疗，在特定的时间间隔进行观察，直至治疗后五小时。除了DMSO治疗组的动物所观察到的症状之外的症状用于结果的解释。结果显然，溶剂DMSO对动物有显著的作用，特别是对热调节机理而言更是如此。包括单独施用DMSO或与试验样品一起施用DMSO在内所有用溶剂给药的动物的体温均有显著下降。
与包括对照组在内的所有其它组一样，低剂量组的动物显示出在笼中的分散性明显降低。在给药后15-60分钟观察到呼吸减弱。比DMSO组观察到更大程度的上睑下垂(眼皮关闭)。耳廓(耳)反应也可看出，还观察到阳性手指反应，表明有恐惧感。在给药后，体温下降至32.7℃。
与在其它组一样，在高剂量组的动物显示出初始笼内分散性降低，运动活性降低，但在死亡之前显示出分散性及运动活性增加，在给药后约1小时死亡。在给药后30分钟发生严重的阵挛性对称抽搐。开始出现呼吸减弱，但在死亡前会增加。耳廓(耳)反应延迟，并观察到阳性手指反应，表明有恐惧感，这些情形在低剂量组的动物中也观察到。在给药后，体温降至30.7℃。还观察到位置被动性增加及身体弹性降低。观察到异常肢体旋转，握力强度降低，存在无疼痛反应，发生翻正反射丧失。讨论与对照组和DMSO给药组动物比较时，接收低剂量(50mg/kg)的动物仅显示出呼吸减少及上睑下垂程度增加。而接收高剂量(300mg/kg)试验样品的动物反应非常强烈，显示出抽搐和死亡。所有在这些动物中进行的其它观察结果可归因于动物抽搐和死亡。在试验组中未观察到可能归因于试验样品的镇静作用的暗示性迹象，如笼中分散性明显减少，运动活性降低和淡漠等。因而，可以得到结论，当采用DMSO作为溶剂经腹膜内给药时，试验样品是导致300mg/kg组大鼠的致死因子，并对50mg/kg组的大鼠具有呼吸抑制作用。b)急性毒性试验本试验的目的是得到有关试验样品毒性的信息。实验过程将本发明按照前述过程制备的并具有食欲抑制剂作用的植物提取物提纯，将一种试验样品在增加剂量下使大鼠口服。每一剂量组使用两个大鼠，只是最高剂量组仅使用一个大鼠。大鼠经检查身体状态良好，在给药日测定它们的体重。
剂量范围为100mg/kg至3028.5mg/kg。经计算剂量并混入制备的马铃薯淀粉中，从而，每一个大鼠接收总剂量为0.2mL。大鼠13接收0.25mL。马铃著淀粉这样制备将20g的淀粉混入少量冷水中，再向其中加入热水，补充体积至1升。在服药前将悬浮液冷却至室温。
在第1组和第2组的大鼠在同一天给药。对它们观察24小时，如果无中毒迹象，则给药下一组。同样的研究过程继续，直至所有的大鼠给药。这一过程顺序进行以保证当急性毒性剂量在先前组已达到时，不必再给大鼠服药。
在给药后和此后的每天，对即时中毒(1-2小时)的临床迹象进行观察。每周测量一次体重，并测量每一支大鼠的总食物和水摄取量。
在实验的第14天通过腹膜内注射戊巴比通钠(商购，商品名Euthanaze，Centaur)将存活的大鼠处死。对这些大鼠进行尸体剖检，同样对在实验过程中死亡的大鼠进行尸体剖检。收集用于病理组织学的样品。结果第1组(对照组)在14天的观察期内，未观察到临床中毒迹象。食物和水摄取量均在正常范围内。体重的变化也在正常范围内。在肝样品中无病理组织学变化。第2组(100mg/kg)在14天的观察期内，未观察到临床中毒迹象。食物和水摄取量均在正常范围内。体重的变化也在正常范围内。在肝样品中未观察到肉眼可见的病变，也无病理组织学变化或形态学变化。第3组(200mg/kg)观察期间，该组的大鼠未显示出临床中毒迹象。食物和水摄取量均在正常范围内。体重的变化也在正常范围内。未观察到肉眼可见的病变，但经检测，在肝样品中显示出病理组织学变化。在第6号大鼠中，肝细胞轻微浊肿，但第5号大鼠则中等程度浊肿。在第5号大鼠中还出现中等程度的水肿性变性。第4组(400mg/kg)观察期间，该组的大鼠未显示出临床中毒迹象。在进行尸体剖检期间，未观察到肉眼可见的病变。在进行组织学观察时，发现中等程度浊肿和轻微的水肿变化。
动物7水和食物摄取正常，体重增加正常。动物8消耗的食物几乎比动物7多一倍(分别为144.6g和73.9g)，但体重仅增加了0.81g，与2.7g相比。第5组(800mg/kg)一个大鼠(第10个大鼠)在给药3个小时后死亡，未显示任何特殊的迹象。另一个大鼠(第9个大鼠)在整个观察期存活，未有任何中毒的迹象。存活的大鼠的水摄取正常(42.42mL)，而食物摄取增大(134.2g)。体重增加了2.85g，这是在实验中所有大鼠中的最高值。
在对大鼠10(口服给药后短期死亡)的尸体剖检时，发现肺充血。无其它外在身体反应发生，这表明了试验材料吸入。大鼠9未发现肉眼可见的病变。大鼠10存在轻微的细胞质空泡形成(水肿性变性)，但大鼠9则为中等程度。两个大鼠肝腺细胞质的外观均为中等程度。第6组(1600mg/kg)在实验期间，无任何临床中毒迹象。在尸体剖检时，未观察到肉眼可见的病变，但在组织生理学检测中观察到大鼠11的肝中存在中等程度的退化。大鼠12显示出中等程度的浊肿和轻微的肝细胞水肿性变性。食物与水摄取正常，体重在实验期间增加。第7组(3028.5mg/kg)在该剂量下仅给一只大鼠服药。在观察期间，未观察到该只大鼠有中毒迹象，也未观察到肉眼可见的病变。在组织生理学检测中，观察到中等程度的浊肿和肝细胞水肿性变性。该大鼠显示出在观察期内体重降低(-0.82g)，但食物和水摄取正常。讨论由于每一剂量下仅采用了少量的动物进行实验，因而做出任何结论均是困难的。在低剂量下仅有一只大鼠死亡这一事实，并不能显示出任何征兆，从而表明死亡与受试样品无关，而归因于在服药期间和/或服药之后的应激反应。在高剂量组中无大鼠死亡或表现出任何中毒的迹象，这进一步支持了这一假设。
对第8只大鼠观察到的食物摄取增加可能是食物过度溢出(spillage)的结果，而体重只增加很少也反映了这一点。需引起注意的是，在本实验中的所有大鼠均仅服药一次，因而，食欲抑制剂对食物或水的摄取或体积在14天内均有显著影响是不可能的，从实验结果看也是如此。
从肝样品的组织生理学实验可以清楚地看出，病理学变化与剂量有关，接收高剂量的大鼠显示出更强烈的变化。所观察到的病理学并非自然的代谢，但可能受测试样品的诱导。变化仅仅是一种退化，因而是可逆的。未观察到不可逆肝细胞变化的迹象。
因而，可以得出结论，仅有一只大鼠在低剂量(800mg/kg)下死亡，但其死亡可能并非与受试样品有关。在任何剂量组中的其它大鼠均在给药后14天的观察期内未有中毒的迹象，或由于给药导致的死亡。受试样品的单次口服剂量会产生可逆的与剂量相关的肝细胞变化。c)口服给药厌食试验本试验的目的是确定按照本发明制备的植物提取物的活性和最小有效剂量，同时研究可能产生的副作用如呼吸抑制，如在Irwin试验(如前)中所述的情形。实验过程采用随机选取的方式将大鼠分成几个给药组。每一个给药组均由三个大鼠组成，在对照组中有6个大鼠。使测试样品给药于已适应环境的100-150g的雌性幼鼠(大鼠)，连续给药三天。借助于金属耳标记和高锰酸钾皮肤标记简便地确认大鼠。在标准啮齿动物聚碳酸酯笼中单独关养大鼠，水和粉末状市售啮齿动物颗粒状物随意供给。每天测定水和食物的摄取值并进行计算。为了发现测试样品的最小有效剂量，测量了五种剂量。通过口服管饲法给药，测试样品悬浮于马铃薯淀粉中。
测试的物质为化合物(1)，是按照本发明由植物原料的提取物制备得的颗粒状粉末，试验量的测试样品与制备的马铃薯淀粉混合，并形成剂型。所述与马铃薯的混合物过程在每天给药前即刻进行。在对每一大鼠排放剂量体积时，悬浮液用Vortex进行充分混合。
测试了五种剂量范围，对照组仅接收载体物质。剂量的选择基于在上述Irwin试验中观察到的作用，它们是第1组0.00mg/kg(对照组)第2组6.25mg/kg第3组12.50mg/kg第4组25.00mg/kg第5组37.50mg/kg第6组50.00mg/kg结果在研究期间，所述的给药并未影响大鼠的健康。在整个研究期间，在所有剂量组中测试样品给药大鼠显示出平均体重增加值显著降低，五个给药组中的三组大鼠实际上减少了体重。
对所有给药组的平均食物摄取在研究期间下降。高剂量组的大鼠显示出水消耗增加。
在各剂量组中的大鼠均未表现出对呼吸率有明显影响。
在所有剂量组中的大鼠在进行尸体剖检时其肝脏均是易碎的，但是并无肉眼可见的病变。讨论适应环境期间收集的数据证实，实验中采用的所有的大鼠均属健康，大鼠间的体重是可以比较的。
某些大鼠的体积增加值降低甚至体重减少以及食物摄取减少强烈地表现出食欲中心的抑制作用。食物摄取减少和体重增加值减少即使在最低剂量组(6.25mg/kg)也发生，实际体重减少发生在12.50mg/kg组。
很重要的一点是，所有的给药组在饲料消耗减少的同时，水的消耗量均增加(图2)。这可能归因于测试样品的利尿作用，或者归因于在大脑中的渴感中心的刺激。
在上述采用腹膜内途径的急性毒性试验中观察时无呼吸抑制作用这一事实可看作值得肯定的方面。这可能归因于胃肠道吸收减少，从而减少了生物可利用率。但是，在所测试的口服剂量中的生物可利用率对测试样品而言足够有效。在大多数组中给药1小时后呼吸速度方面轻微的降低可看作归因于胃被剂量体积填充以及随之而产生的大鼠的被动性。
在给药组中观察到的易碎的肝脏可能是由于能量代谢中的变化弱于食物摄取的减少，从而引起脂肪代谢增加，肝负担超载。如果这确是事实，则这些变化可能会被看作是暂时的，在达到稳定态后将会恢复，或者在排出测试样品后会恢复。对肝可能的作用也需要进一步研究。
由于本研究对筛选试验而言仅是初步的，采用了很少的几组试验动物。这全程对数据的满意解释还很难，特别是当个体动物总体上存在反应差异。然而，数据也表明，测试样品具有食欲抑制作用，即使在最低测试剂量(6.25mg/kg)也如此。在测试剂量下未出现呼吸抑制的临床迹象。
实施例43将天然产生或人工培养种植的火地亚植物收割后首先在4℃下贮存最多48小时。将植物在自来水中清洗，然后切成±1cm的片。将切片后的小块合并，通过300巴压力的水压机压榨，每次压榨最少0.5小时。在压榨过程中，分别收集植物的汁液。将所述汁液在-18℃下贮存，直至所需的进一步加工过程。
在适宜的条件下，将所述汁液进行喷雾干燥，获得一种自由流动的粉末。喷雾干燥后粉末中的含水量优选小于5％，并且，如果需要的话，可在真空箱内进一步干燥，或采用流化床干燥器进行干燥。
所述汁液和喷雾干燥后的物料均在大鼠的生物试验中显示出可有效地用作食欲抑制剂。实验将50kg的火地亚gordonii用自来水清洗，然后切成1cm的片。将切片后的植物用300巴压力的水压机压榨，每次压榨最少0.5小时。收集汁液，采用天然环境的火地亚gordonii时，收集到的汁液重量为10kg，而从人工培养的火地亚gordonii植物则可得到20kg。采用下述条件将汁液(500g)进行喷雾干燥流速285mL/min入口温度110℃出口温度70℃工作室温度 78℃获得的喷雾干燥的粉末为自由流动的粉末(22g)，含水量为6.9％。
喷雾干燥后的粉末采用HPLC技术对活性成分含量进行分析。活性成分的含量经测定为13g/kg喷雾干燥后的粉末。HPLC分析法洗脱剂乙腈∶水(7∶3)，无梯度洗脱柱反相C-18UV吸收225nm流速 1mL/min注射体积 10μl方法将喷雾干燥的粉末(10mg)溶解于水(0.5mL)和乙腈(0.5mL)中。将10μl的该溶剂注入HPLC中，采用标准曲线测定活性化合物(1)的浓度，所述曲线由纯化合物(1)制得。
实施例44以下给出设计用来评价化合物(1)在大鼠中可能的减食欲作用的研究结果。其中，测试的样品为纯汁液(样品1)、喷雾干燥的汁液(样品2)和活性成分(样品3)。样品1和2分别为汁液和喷雾干燥的汁液，如实施例43所述。样品3为溶剂提取的化合物(1)，其纯度≥95％。
样品1-3分别以单次口服剂量给药于雄性Wistar大鼠。两组对照组给药载体(蒸馏水或DMSO)。口服给药芬氟拉明(7.5mg/kg)作为参考标准。
样品1(纯汁液)经口服给药，从统计结果看，与用载体给药的对照样相比，在剂量为1600mg/kg和高于该剂量时，产生依赖剂量的食物消耗量具有统计学意义的下降。也记录到体重(或增长率)的相应减少。在给药期间，在给药3小时(6400和10000mg/kg)和6小时(10000mg/kg)后记录到水消耗量有统计学意义的增加。在给药后24-48小时间，在剂量为3200mg/kg和高于该剂量时，记录到水消耗量有统计学意义的下降。
与给药载体的大鼠相比，样品2(喷雾干燥的汁液)在以76mg/kg口服给药时的食物消耗量和体重也产生统计学意义的减少。未记录到对水消耗量有统计学意义的影响。
样品3(活性成分)在以5.0mg/kg口服给药时，产生食物消耗量统计学意义的减少。与给药载体的大鼠相比，活性成分并未在统计学意义上有对体重的作用，虽然检测数据表明生长稍有延迟。未记录到对水消耗量的统计学意义的影响。
与给药载体的对照组相比，参考标准物芬氟拉明(7.5mg/kg)在给药6小时和24小时后食物消耗有统计学意义的减少。未记录到对水消耗量的统计学意义的影响。
未记录到与给药相关的对肝脏的影响。
试验物质特性 样品1(纯汁液) 样品2(喷雾干燥的汁液) 样品3(活性成分)外观 褪色液体粉末 白色粉末贮存条件暗处-20℃下 暗处室温下暗处4℃下纯度 纯汁液 纯喷雾干燥的汁液 ≥95％载体 蒸馏水 蒸馏水二甲亚砜(DMSO)实验过程55只雄性Wistar大鼠用于本研究。
从实验开始至研究终止的每一天的相同时间记录体重、食物消耗量(食物漏斗装料量)和水消耗量(瓶重)。
在第1天，按照下表使大鼠服用单次口服(管饲法)剂量组 n口服给药 剂量(mg/kg)15载体(蒸馏水) -24样品1(纯汁液)80035样品1(纯汁液)160045样品1(纯汁液)320055样品1(纯汁液)640065样品1(纯汁液)1000075样品2(喷雾干燥的汁液)3885样品2(喷雾干燥的汁液)7695样品3(活性成分) 2.510 5样品3(活性成分) 5.011 3芬氟拉明 7.512 3载体(DMSO) -第1-8组以稳定剂量体积10mL/kg进行给药，第9-12组采用的剂量体积为1mL/kg。
在第1天给药后在1、3和6小时测量食物消耗量和水消耗量。
在第8天测量后，通过二氧化碳窒息法处死大鼠，切除肝脏，并在显微解剖学研究前将其置于10％缓冲的福尔马林中。
取肝脏的石蜡切片4-5μm，用苏木精和曙红染色。在低温恒温器中取12μm的切片并对脂肪用油红O(ORO)进行染色。数据分析对P57-给药的大鼠在每一时间点处给药后的食物和水消耗量测量值和体重与相关的采用载体进行类似给药的对照组的相应数据进行比较，比较采用方差分析，再对对照组比较采用William试验。
采用t检验法对芬氟拉明给药的大鼠的数据与载体给药的对照组的数据进行比较。结果以下各表中列出的实验结果。
经口服给药的样品1(纯汁液)在每日的食物消耗量方面产生显著的与剂量相关的减少。这种食物消耗量减少的持续时间和幅度均与剂量有关。与载体给药的对照组相比，在24小时给药后，样品1(纯汁液)在剂量1600mg/kg和更高剂量时产生食物消耗量统计学意义的减少。样品1(汁液)的最高剂量(10000mg/kg)最多在给药5天后每日的食物消耗量也产生统计学意义的减少。
样品2(喷雾干燥的汁液)和样品3(活性成分)分别在76和5.0mg/kg的口服剂量时产生显著的和统计学意义的减少。在两种情形下，影响可持续至给药后48小时。
与载体给药的对照组(第12组)相比，在6小时和24小时给药后，参考标准物芬氟拉明(7.5mg/kg，p.o.)产生食物消耗量有统计学意义的减少。
样品2(喷雾干燥的汁液)和样品3(活性成分)并未对水消耗量产生显著的与剂量相关的影响。在给药的当天，在给药3小时(6400和10000mg/kg)和6小时(10000mg/kg)后，纯汁液产生统计学意义的水消耗量的增加。但在给药两天后，以3200、6400和10000mg/kg的剂量，大鼠接收样品1(汁液)时的水消耗量有统计学意义的下降。但是，这些下降并不能清楚确认与剂量有关，而仅发生在给药后1-2天内。因而，这些影响的生物学意义仍不清楚。
与用载体给药的对照组(第1组)相比，样品1(纯汁液)产生与剂量相关的统计学意义的影响。当以3200mg/kg和更高的剂量口服给药时，与采用载体给药的大鼠作比较，样品1(纯汁液)在体重或降低生长速度方面均有统计学意义的减少。这些作用从给药48小时直至研究结束在统计学上是有意义的。
与用载体给药的对照组(第1组)相比，样品2(喷雾干燥的汁液)在76mg/kg口服给药也产生大鼠生长统计学意义的减少。这些作用在第3天(给药48小时后)和第5天期间均在统计学上是有意义的。
虽然与用载体给药的对照组(第12组)相比，样品3(活性成分)显示出在最高剂量(5.0mg/kg)时大鼠生产延迟，但这种作用并不具有统计学意义。
与用载体给药的对照组(第12组)相比，芬氟拉明(7.5mg/kg)并不对水消耗量或体重产生显著的或统计学意义的影响。
未记录治疗对肝脏的相关作用。
表1a大鼠口服给药时食物消耗量的影响(每日初始剂量数据)
sd标准偏差表1b大鼠口服给药对食物消耗量的影响(每日初始剂量数据)<
sd标准偏差第2-8组与载体组1比较*p＜0.05，**p1＜0.01第9-11组与载体组12比较p＜0.05，p＜0.01
表2a口服给药对大鼠饮水消耗的影响(每天给药前数据)
sd标准偏差表2b口服给药对大鼠饮水消耗的影响(每天给药前数据
sd标准偏差第1-8组与载体组1比较*p＜0.05第9-11组与载体组12比较(无显著性)
表3a大鼠口服给药对体重的影响(每日初始剂量数据)
sd标准偏差表3b大鼠口服给药对体重的影响(每日初始剂量数据)
sd标准偏差第1-8组与载体组1比较*p＜0.05第9-11组与载体组12比较(无显著性)病理组织学报告病理组织学检测限于肝脏。对样品1(液体)、样品2(喷雾干燥的汁液)、样品3(活性成分)、芬氟拉明或DMSO对照组均未检测出与给药相应的变化。
表微观病理学发生率概要
<p>表(续)
<p>实施例45以下描述采用如实施例44所述相同的试验样品进行的另一个生物实验。在该研究中的动物接受严格的饮食，即动物仅在每日的1200至下午300间进食。这不同于所有目前进行的其它生物学试验，因而食物可以磅数供给大鼠。在七天期间(第-7天至第-1天)使大鼠适应环境，从第0天至第6的每天上午9点通过口管饲法给药。恢复期从第7天至第13天。剂量组如下表1所述。需要指出，实际的对照组标记为第09组。第5组为接收相当于第4组的饮食的对照组。设置该组的目的是评价严格限制饮食对大鼠肝的影响。结果在研究期间产生的结果表明，适应环境期间太短。大鼠进食主要是在夜间进行，突然改变为在日间的3个小时内严格进食导致每日摄取食物很少。在大多数组中，在适应环境期结束时，当开始采用试验项目给药时，每日食物的摄取值仍会增加。由于这一原因，在给药期间测试原料的作用对大鼠食物摄取值的影响变得没有意义。
表D1和表D2显示了对第-7天至第-1天不同组别的平均体重。不同剂量的汁液和喷雾干燥的汁液的作用显示在附图中，图5中涉及第0至第7天体重的变化％，图6涉及第-7天至第7天体重的变化％。不难看出，体重的减少与剂量相关，特别是对于较高剂量时更是如此。
在接收试验项目的各组中，肝脏的组织病理学检验并未显示出任何有意义的病症。食物在适应环境期间和研究期间，每天测量食物消耗量。食物每日的供应时间为3小时，从12点开始至下午3点。在其余时间，动物被禁食。第5组动物在第1天接收测量量的食物，相当于第4组在第0天的平均食物消耗量。根据第4组前一天的平均食物消耗量所测定，第5组的这种受控进食图在第1-7天进行。水水在标准容器中提供。水(Magalies Water Board Tap Water，适于人饮用)可随意供给。在食物消耗量测定完之后，在每天的同一时间测量一次水消耗量。适应环境动物在进行研究开始之前适应环境7天，在此期间，食物和水消耗量如前所述进行测定。在此期间，每天测量体重。研究设计和过程表1研究设计
给药方式试验项目采用胃饲管每天给药。在第一项给药前均使动物禁食18小时(在9点开始)。给药持续时间动物在连续7天内给药(从第0天至第6天)。每组的三支动物在最后给药24小时后(第7天)处死。其余的3支动物在最后给药7天后(第13天)处死。该过程适于所有各组，只是第5组中的三支动物在最后受控进食24小时后(第8天)处死，其余三支动物在最后给药后7天(第13天)处死。体重在研究期间，在每天的大约相同的时间测量体重，包括环境适应期。安死术每组中的三支动物在最后给药24小时后(第7天)处死。
其余三支动物在最后给药7天后处死。该过程适于所有各组，只是第5组中的三支动物在最后受控进食24小时后(第8天)处死，其余三支动物在最后给药后7天(第13天)处死。动物在研究结束时采用二氧化碳气体施以安乐死。检眼镜检查法在试验项目第一次给药前和试验终止时，采用检眼镜对所有组别的所有动物进行检眼镜检查。肉眼可见的病理学在研究结束时，对每种施以安乐死的动物进行全尸体剖检。组织病理学对每种动物的肝脏进行组织病理学实验。
表D.1平均体重/组别/星期<
>
表D.2平均体重/组别/星期(续)
<p>表D.3平均体重/组别/星期<
<p>表1来自雄性大鼠的肝切片的组织学评价样品1
第5组对照组ELGA OPTION纯化水严格食物摄取说明
C＝充血DHS ＝扩散水肿细胞肿胀FHS ＝病灶水肿细胞肿胀NPL ＝无实质性损害MLC ＝最小淋巴细胞成套1+ ＝轻微2+ ＝中等3+ ＝严重表2来自雄性大鼠的肝切片的组织学评价样品2
第9组对照组ELGA OPTION 4纯化水严格食物摄取说明<
C ＝充血DHS ＝扩散水肿细胞肿胀FHS ＝病灶水肿细胞肿胀NPL ＝无实质性损害MLC ＝最小淋巴细胞成套1+ ＝轻微2+ ＝中等3+ ＝严重在接收冷冻汁液及喷雾干燥汁液的实验用大鼠的肝脏切片中未记录到特别的损害，所述汁液通过口服给药。在对照组和实验组的大鼠中均记录到的水肿细胞肿胀表明正常代谢细胞肿胀和缺氧变化。在某些大鼠中发现极少量淋巴细胞血管周成套的病灶，最可能是一种偶然观察到的现象。在几个大鼠中，在肝脏的窦状隙中存在轻微程度的充血，其应被看作是一种偶然观察到的现象。
通过该研究的结果表明的本发明的一个重要特征是，在整个测试期间，未显示出对任一种样品的耐受性。这可提供重要功能，特别是采用本发明的化合物和组合物治疗肥胖症。
本发明的化合物和组合物主要被描述作食欲抑制剂，应当指出，“食欲抑制剂”这一描述用于本文中来提示会限制食欲和/或增加饱满感，因此，可减少总热量摄取；从而，可抵消肥胖。相应地，本发明扩大至治疗、预防或抵抗人或非人动物肥胖的方法，该使所述人或非人动物服用治疗、预防或抵抗肥胖有效量的式(2)化合物。本发明该方面的优选实施方案利用了含式(1)化合物的组合物或提取物。
本发明中术语“动物”扩展至(但不限于)陪伴动物，例如家庭宠物和养驯动物；这种动物的非限定性实例包括牛、羊、雪貂、猪、骆驼、马、家禽、鱼、兔子、山羊、狗和猫。
作为一种在治疗或预防人体肥胖的减食欲物质，式(2)的化合物优选式(1)的化合物，或权利要求9及25-31中任一项定义的组合物，这些化合物或组合物的给药剂量优选为约0.01mg/kg/天至约10mg/kg/天。优选剂量范围为0.05mg/kg/天至约0.5mg/kg/天。当采用来自本发明提取物的喷雾干燥粉末时，优选的剂量范围为0.1mg/kg/天至约20mg/kg/天。优选剂量范围为0.5mg/kg/天至约5mg/kg/天。
权利要求
1.一种Trichocaulon属或火地亚属植物提取物的制备方法，所述提取物包含食欲抑制剂，该方法包括下述步骤用一种溶剂处理收集到的植物原料以提取具有食欲抑制剂活性的成分，将提取溶液从其余植物原料中分离出来，从提取溶液中除去溶剂，回收提取物。
2.根据权利要求1的方法，其中，Trichocaulon属植物选自Trichocaulon piliferum和Trichocaulon officinale，火地亚属植物选自火地亚currorii、火地亚gordonii和火地亚lugardii。
3.根据权利要求1或2的方法，包括进一步用溶剂进行提取以浓缩提取的物料中活性剂的步骤。
4.根据权利要求1、2或3的方法，其中，溶剂提取步骤中采用的溶剂为二氯甲烷、水、甲醇、己烷、乙酸乙酯或其混合物中的一种或多种。
5.根据权利要求1-4任一项的方法，包括通过色谱分离法浓缩提取的物料中活性剂的步骤。
6.根据权利要求5的方法，其中，色谱分离法采用氯仿、甲醇、乙酸乙酯、己烷中的一种或多种作洗脱剂。
7.根据权利要求5或6的方法，包括在色谱柱上进行色谱分离，收集来自色谱柱的馏分中的洗脱液，评价馏分以测定它们的食欲抑制剂活性，选择至少一种含有食欲抑制剂的馏分。
8.根据前述任一项权利要求的方法，其中，将提取物进行处理以形成自由流动的粉末。
9.一种由前述任一项权利要求的方法生产的含有食欲抑制剂的提取物。
10.一种具有食欲抑制剂活性的组合物，其包含权利要求9的提取物。
11.根据权利要求10的组合物，其含有可药用赋形剂、稀释剂或载体。
12.根据权利要求10或11的组合物，其被制备成单位剂量形式。
13.权利要求9的提取物在生产具有食欲抑制剂活性的药物中的用途。
14.用作具有食欲抑制剂活性药物的权利要求9的提取物。
15.一种抑制食欲的方法，包括向人或动物给药有效剂量的权利要求10、11或12的组合物。
16.一种Trichocaulon属或火地亚属植物提取物的制备方法，所述提取物包含食欲抑制剂，该方法包括下述步骤压榨收集到的植物原料以从固体植物原料中分离出汁液，回收不含固体植物原料的汁液以形成提取物。
17.根据权利要求16的方法，其中，将提取物干燥形成自由流动的粉末。
18.一种由权利要求16或17的方法生产的含有食欲抑制剂的提取物。
19.一种具有食欲抑制剂活性的组合物，其包含权利要求18的提取物。
20.根据权利要求19的组合物，其含有可药用赋形剂、稀释剂或载体。
21.根据权利要求19或20的组合物，其被制备成单位剂量形式。
22.权利要求19的提取物在生产具有食欲抑制剂活性的药物中的用途。
23.用作具有食欲抑制剂活性药物的权利要求18的提取物。
24.一种抑制食欲的方法，包括向人或动物给药有效剂量的权利要求19、20或21的组合物。
25.一种可由Trichocaulon属或火地亚属植物获得的提取物，其包含具有下式的食欲抑制剂
26.根据权利要求25的提取物，其中，Trichocaulon属植物选自Trichocaulon piliferum和Trichocaulon officinale，火地亚属植物选自火地亚currorii、火地亚gordonii和火地亚lugardii。
27.根据权利要求26的提取物，其中，基本上所有的非活性杂质被除去。
28.根据权利要求25-27任一项的提取物，该提取物被加工成自由流动的粉末。
29.一种具有食欲抑制剂活性的组合物，其包含权利要求25-28任一项的提取物。
30.根据权利要求29的组合物，其含有可药用赋形剂、稀释剂或载体。
31.根据权利要求29或30的组合物，其被制备成单位剂量形式。
32.权利要求25-28任一项的提取物在生产具有食欲抑制剂活性的药物中的用途。
33.用作具有食欲抑制剂活性药物的权利要求25-28任一项的提取物。
34.一种抑制食欲的方法，包括向人或动物给药有效剂量的权利要求29、30或31的组合物。
35.一种具有以下结构式的化合物
其中，R为烷基；R1为氢、烷基、甲基巴豆酰基、苯甲酰基或任一种其它的有机酯基团；R2为氢，或6-脱氧糖中的一种或多种，或2，6-二脱氧糖中的一种或多种，或葡萄糖分子，或其组合；其中，虚线代表在C4-C5或C5-C6间可选择性地存在另一个键。
36.根据权利要求35的化合物，其中，在C5-C6间存在键，R为甲基，R1为甲基巴豆酰基，R2为3-O-[-β-D-吡喃黄夹竹桃糖基-(1→4)-β-D-吡喃磁麻糖基-(1→4)-β-D-吡喃磁麻糖基]，化合物具有下述结构式
37.一种具有下述结构式的化合物
其中，R为烷基；R1为氢、烷基、甲基巴豆酰基、苯甲酰基或任一种其它的有机酯基团；R2为氢，或6-脱氧糖中的一种或多种，或2，6-二脱氧糖中的一种或多种，或葡萄糖分子，或其组合；其中，虚线代表在C4-C5或C5-C6间可选择性地存在另一个键。
38.一种具有下述结构式的化合物
其中，R为烷基；R1为氢、烷基、甲基巴豆酰基、苯甲酰基或任一种其它的有机酯基团。
39.一种具有下述结构式的化合物
其中，R为烷基；R1为氢、烷基、甲基巴豆酰基、苯甲酰基或任一种其它的有机酯基团。
40.一种具有下述结构式的化合物
其中，R为烷基；R1为氢、烷基、甲基巴豆酰基、苯甲酰基或任一种其它的有机酯基团。
41.一种具有下述结构式的化合物
其中，R为烷基；R1为氢、烷基、甲基巴豆酰基、苯甲酰基或任一种其它的有机酯基团。
42.一种具有下述结构式的化合物
其中，R为烷基；R1为氢、烷基、甲基巴豆酰基、苯甲酰基或任一种其它的有机酯基团；R2为氢，或6-脱氧糖中的一种或多种，或2，6-二脱氧糖中的一种或多种，或葡萄糖分子，或其组合；其中，虚线代表在C4-C5或C5-C6间可选择性地存在另一个键。
43.一种具有下述结构式的化合物
其中，R为烷基；R1为氢、烷基、甲基巴豆酰基、苯甲酰基或任一种其它的有机酯基团；R2为氢，或6-脱氧糖中的一种或多种，或2，6-二脱氧糖中的一种或多种，或葡萄糖分子，或其组合；其中，虚线代表在C4-C5或C5-C6间存在另一个键。
44.一种具有下述结构式的化合物
其中，R为烷基；R1为氢、烷基、甲基巴豆酰基、苯甲酰基或任一种其它的有机酯基团；R2为氢，或6-脱氧糖中的一种或多种，或2，6-二脱氧糖中的一种或多种，或葡萄糖分子，或其组合；其中，虚线代表在C4-C5或C5-C6间可选择性地存在另一个键。
45.一种具有下述结构式的化合物
其中，R为烷基；R1为氢、烷基、甲基巴豆酰基、苯甲酰基或任一种其它的有机酯基团；R2为氢，或6-脱氧糖中的一种或多种，或2，6-二脱氧糖中的一种或多种，或葡萄糖分子，或其组合；其中，虚线代表在C4-C5、C5-C6或C14-C15间可选择性地存在另一个键。
46.一种具有下述结构式的化合物
其中，R为烷基；R1为氢、烷基、甲基巴豆酰基、苯甲酰基或任一种其它的有机酯基团；R2为氢，或6-脱氧糖中的一种或多种，或2，6-二脱氧糖中的一种或多种，或葡萄糖分子，或其组合；其中，虚线代表在C4-C5、C5-C6或C14-C15间可选择性地存在另一个键。
47.一种具有下述结构式的化合物
其中，R为烷基；R1为氢、烷基、甲基巴豆酰基、苯甲酰基或任一种其它的有机酯基团；R2为氢，或6-脱氧糖中的一种或多种，或2，6-二脱氧糖中的一种或多种，或葡萄糖分子，或其组合；其中，虚线代表在C4-C5、C5-C6或C14-C15间可选择性地存在另一个键；R3为氢、烷基、芳基、酰基或葡糖氧基(glucoxy)。
48.一种具有下述结构式的化合物
其中，R为氢、烷基、芳基或在C14位上具有β羟基，在C12位上具有β羟基官能团，C17位具有酰基，C5-C6位具有烯键的甾族基团，或其组合。
49.一种制备下式的甾族中间体的方法
该方法包括下述步骤(a)用还原剂处理下述化合物
产生下式的化合物3β，12β-二羟基-20，20-亚乙二氧基孕-5，14-二烯
(b)用N-溴乙酰胺(NBA)和一种碱处理化合物(23)，产生下式的化合物3β，12β-二羟基-14，15-环氧-20，20-亚乙二氧基孕-5-烯
(c)用一种还原剂处理化合物(24)，产生下式的化合物3β，12β，14β-三羟基-20，20-亚乙二氧基孕-5-烯
(d)用一种酸与水处理化合物(25)，产生化合物(15)。
50.一种用于制备化合物(15)的方法，该方法包括下述步骤(a)用对甲苯磺酰氯和一种碱处理化合物(22)产生下式的化合物3β，12β-二羟基-20，20-亚乙二氧基孕-5，14-二烯-3-甲苯磺酰基-12-乙酸酯
(b)用溶剂中的乙酸钾处理化合物(26)，产生下式的化合物6β，12β-二羟基-20，20-亚乙二氧基-3，5α-环孕-14-烯-12-乙酸酯
(c)用一种还原剂处理化合物(27)，产生下式的化合物6β，12β-二羟基-20，20-亚乙二氧基-3，5α-环孕-14-烯
(d)用N-溴乙酰胺和一种碱处理化合物(28)，产生下式的化合物6β，12β-二羟基-14，15-环氧-3，5α-环孕烷
(e)用一种还原剂处理化合物(29)，产生下式的化合物6β，12β，14β-三羟基-20，20-亚乙二氧基-3，5α-环孕烷
(f)用一种酸和一种溶剂处理化合物(30)，产生化合物(15)。
51.一种单糖磁麻糖形式的糖中间体的制备方法，该方法包含下述步骤(i)用PhSSiMe3、ZnI2和Bu4+I-处理下式的化合物
产生下式的化合物4-O-苯甲酰基-3-O-甲基-6-脱氧-αβ-D-苯硫基阿卓糖苷
(ii)选择性地，用二乙氨基三氟化硫(DAST)处理化合物(37)，产生下式的化合物4-O-苯甲酰基-3-O-甲基-2-苯硫基-2，6-二脱氧-αβ-D-氟代吡喃磁麻糖苷
或(iii)选择性地，用溶剂中的叔丁基二甲基甲硅烷基氯和咪唑处理化合物(37)，产生下式的化合物4-O-苯甲酰基-3-O-甲基-2-O-叔丁基二甲基甲硅烷基-αβ-D-苯硫基阿卓糖苷
其中，Z＝TBDMS＝叔丁基二甲基甲硅烷基；(iv)用一种碱处理化合物(39)，产生下式的化合物单糖3-O-甲基-2-O-叔丁基二甲基甲硅烷基-αβ-D-苯硫基阿卓糖苷
其中，Z＝TBDMS＝叔丁基二甲基甲硅烷基。
52.一种活化黄夹竹桃糖形式的糖中间体的制备方法，该方法包含下述步骤(i)用苯硫基三甲基硅烷和三甲基甲硅烷基三氟甲磺酸酯处理下式的化合物
产生下式的化合物4-O-苯甲酰基-3-O-甲基-1-苯硫基-6-脱氧-αβ-吡喃葡糖苷
(ii)用新戊酰氯和一种溶剂处理化合物(48)，产生下式的化合物4-O-苯甲酰基-3-O-甲基-2-O-新戊酰基-1-苯硫基-6-脱氧-αβ-吡喃葡糖苷
(iii)用溴化剂和二乙氨基三氟化硫处理化合物(49)，产生下式的化合物4-O-苯甲酰基-3-O-甲基-2-O-新戊酰基-1-氟-6-脱氧-β-吡喃葡糖苷，其为立体异构体
53.一种由权利要求49或50的方法生产的式(15)的甾族中间体。
54.一种由权利要求51的方法生产的式(40)的糖中间体。
55.一种由权利要求52的方法生产的式(50A)或式(50B)的糖中间体。
56.一种使单糖磁麻糖与甾族中间体进行偶联的方法，该方法包括下述步骤(i)在氯化锡存在下，在溶剂中，使式(38)的磁麻糖与权利要求53所述的式(15)的甾族中间体进行反应，产生下式的化合物3-O-[4-O-苯甲酰基-2-苯硫基-β-D-吡喃磁麻糖基]-12，14-β-二羟基孕-5-烯-20-酮
(ii)用吡啶中的甲基巴豆酰氯和用碱处理化合物(51)，产生下式的化合物3-O-[2-苯硫基-β-D-吡喃磁麻糖基]-12β-甲基巴豆酰基-14β-羟基孕-5-烯-20-酮
57.一种权利要求56的方法生产的式(52)的化合物。
58.一种使单糖磁麻糖与单糖黄夹竹桃糖偶联，并使形成的二糖与权利要求57所述的式(52)的化合物进行偶联的方法，该方法包括下述步骤(i)采用氯化锡和三氟甲磺酸银，使如权利要求54所述的式(40)的选择性保护的磁麻糖与如权利要求55所述式(50A)的单糖黄夹竹桃糖偶联，产生下式的化合物
其中，Z＝TBDMS＝叔丁基二甲基甲硅烷基；(ii)用四丁基氟化铵处理化合物(53)，产生下式的化合物
(iii)用二乙氨基三氟化硫处理化合物(54)，产生下式的化合物
(iv)使化合物(55)与如权利要求57所述的化合物(52)反应，产生下式的化合物
(v)在雷内镍反应中处理化合物(56)，再用碱处理，产生如权利要求36所述的化合物(1)。
59.一种形成三糖并使所形成的三糖与甾族中间体偶联的方法，该方法包括下述步骤(i)采用氯化锡、AgOTf、Cp2ZrCl2使如权利要求55所述的式(40)的选择性保护的磁麻糖与化合物(45)偶联，产生下式的化合物
其中，Z＝TBDMS＝叔丁基二甲基甲硅烷基；(ii)用四丁基氟化铵和二乙氨基三氟化硫处理化合物(57)，产生下式的三糖化合物
(iii)采用氯化锡、AgOTf、Cp2ZrCl2使式(58)的三糖与下式的甾族中间体偶联
产生如权利要求36所述的化合物(1)。
60.一种具有食欲抑制剂活性的组合物，其包含权利要求35-48任一项的化合物。
61.根据权利要求60的组合物，其中，化合物为权利要求36所述的式(1)的化合物。
62.根据权利要求60或61的组合物，其含有可药用赋形剂、稀释剂或载体。
63.根据权利要求60、61或62的组合物，其被制备成单位剂量形式。
64.权利要求35-48任一项的化合物在生产具有食欲抑制剂活性的药物中的用途。
65.权利要求36所述式(1)的化合物如权利要求64的用途。
66.用作具有食欲抑制剂活性药物的权利要求35-48任一项的化合物。
67.根据权利要求66的化合物，其是权利要求36所述的式(1)的化合物。
68.一种抑制食欲的方法，包括向人或动物给药有效剂量的权利要求60-63任一项的化合物。
69.一种食品或饮料，其包含当摄取时具有食欲抑制剂作用的权利要求35-48任一项的有效量化合物。
70.根据权利要求69的食品或饮料，其中，化合物为权利要求36所述的式(1)的化合物。
71.如权利要求36所述式(1)化合物在用于生产具有食欲抑制剂活性的药物中的用途，所述式(1)化合物是从Trichocaulon属或火地亚属植物分离得到的。
72.根据权利要求71的用途，其中，化合物是由Trichocaulonpiliferum或Trichocaulon officinale，或者从火地亚currorii、火地亚gordonii或火地亚lugardii分离得到的。
73.一种具有食欲抑制剂活性的组合物，其包含由Trichocaulon属或火地亚属植物分离得到的式(1)化合物。
74.根据权利要求73的组合物，其中，化合物是由Trichocaulonpiliferum或Trichocaulon officinale，或者从火地亚currorii、火地亚gordonii或火地亚lugardii分离/提纯得到的。
75.根据权利要求73的组合物，其中，化合物是由从Trichocaulonpiliferum或Trichocaulon officinale，或者从火地亚currorii、火地亚gordonii或火地亚lugardii的植物得到的提取物中分离/提纯得到的。
76.根据权利要求73、74或75的组合物，其含有可药用赋形剂、稀释剂或载体。
77.根据权利要求76的组合物，其被制备成单位剂量形式。
78.用作具有食欲抑制剂活性药物的、由Trichocaulon属或火地亚属植物分离出的权利要求35的式(1)的化合物。
79.根据权利要求78的化合物，其中，化合物是由Trichocaulonpiliferum或Trichocaulon officinale，或者从火地亚currorii、火地亚gordonii或火地亚lugardii种植物分离出的化合物。
80.一种抑制食欲的方法，包括向人或动物给药有效剂量的权利要求73-77任一项的组合物。
81.一种具有食欲抑制剂活性的组合物，其包含黑皮质素(melanocortin)4受体激动剂。
82.根据权利要求81的组合物，其中，激动剂为权利要求9、18或25中的提取物，或权利要求35-48中任一项的化合物。
83.根据权利要求81或82的组合物，其中，化合物为权利要求36的式(1)的化合物。
84.根据权利要求81、82或83的组合物，其中，其含有可药用赋形剂、稀释剂或载体。
85.根据权利要求81-84任一项的组合物，其被制备成单位剂量形式。
86.黑皮质素4受体激动剂在生产具有食欲抑制剂活性的药物中的用途。
87.权利要求9、18或25所述的提取物或权利要求35-48任一项所述的化合物如权利要求86的用途。
88.权利要求36所述的式(1)化合物如权利要求87的用途。
89.用作具有食欲抑制剂活性的药物的黑皮质素4受体激动剂。
90.如权利要求89的黑皮质素4受体激动剂，其是权利要求9、18或25的提取物，或为权利要求35-48任一项的化合物。
91.如权利要求90的黑皮质素4受体激动剂，其是权利要求36的式(1)的化合物。
92.一种抑制食欲的方法，包括向人或动物给药有效剂量的权利要求81-85任一项的组合物。
93.黑皮质素4受体激动剂抑制人或动物食欲和/或减肥的用途。
94.权利要求9、18或25所述的提取物或权利要求35-48任一项所述的化合物如权利要求93的用途。
95.权利要求36的式(1)的化合物如权利要求94的用途。
96.一种具有下述结构式的化合物
97.一种具有下述结构式的化合物
98.一种具有下述结构式的化合物
99.一种具有下述结构式的化合物
100.一种具有下述结构式的化合物
101.一种具有下述结构式的化合物
102.一种具有下述结构式的化合物
103.一种具有下述结构式的化合物
104.一种具有下述结构式的化合物
105.一种具有下述结构式的化合物
106.一种具有下述结构式的化合物
107.一种具有下述结构式的化合物
108.一种具有下述结构式的化合物
109.一种具有下述结构式的化合物
110.一种具有下述结构式的化合物
111.一种具有下述结构式的化合物
112.一种具有下述结构式的化合物
113.一种具有下述结构式的化合物
114.一种具有下述结构式的化合物
115.一种具有下述结构式的化合物
116.一种具有下述结构式的化合物
117.一种具有下述结构式的化合物
118.一种人或动物减肥方法，包括向人或动物给药减肥有效量的权利要求9、25、26、27或28任一项的提取物。
119.一种人或动物减肥方法，包括向人或动物给药减肥有效量的权利要求10的组合物。
120.一种人或动物减肥方法，包括向人或动物给药减肥有效量的权利要求35或36的化合物。
121.一种结构式3-O-β-D-黄夹竹桃糖基-(1→4)-β-D-吡喃磁麻糖基-(1→4)-β-D-吡喃磁麻糖苷-12β-O-甲基巴豆酰基-14β-羟基-孕-5-烯-20-酮的化合物。
全文摘要
本发明公开了一种包含由Trichocaulon属或火地亚属植物可获得的提取物的药物组合物,所述植物含有(1)的食欲抑制剂。本发明还公开了获得提取物的方法和合成化合物(1)和其类似物及衍生物的方法。本发明也涉及这种提取物和化合物(1)及其类似物在生产具有食欲抑制剂活性的药物中的用途。本发明还涉及用于合成化合物(1)的新的中间体。
文档编号A23L1/307GK1252000SQ9880416
公开日2000年5月3日 申请日期1998年4月15日 优先权日1997年4月15日
发明者F·R·范希尔丹, R·乌莱加尔, R·M·霍拉克, R·A·里尔蒙斯, V·玛哈耶, R·D维塔尔 申请人:Csir公司