最大溶解度，使 得在增强较花酸溶解度的条件下制备提取物（并由此获取果渣的多酪分布情况），从而使 得制备的提取物具有更高的抗氧化剂活性。如同WO2010/014870和WO2010/014873(通 过参考将其并入本文中）中所公开的，具有改善的较花酸溶解度的圆叶葡萄提取物能够在 非饮料食品、饮料、膳食增补物或局部软膏中单独地或与其他化合物组合给药。公开了制备 合并提取物的各种方法，例如将青铜色圆叶葡萄果渣提取物与紫色圆叶葡萄果渣提取物合 并W生产圆叶葡萄果渣提取物，其中青铜色圆叶葡萄果渣提取物对紫色圆叶葡萄果渣提取 物之比为0. 1~10 (重量对重量）如0. 3~3 (重量对重量）。通过单独提取青铜色和紫色 圆叶葡萄并随后合并所述提取物，或通过同时提取W期望比例合并的青铜色和紫色圆叶葡 萄，可W提取合并的提取物。
[0080] 在WO2010/014870和WO2010/014873中，发明人单独并W组合的方式（W混合 物或膳食增补物的方式）确定了标准化成98%反式-白襲芦醇的所公开圆叶葡萄果渣提取 物和日本虎杖提取物的抗氧化能力，按ORAC测定法进行测量。对试样的亲水性抗氧化能力 和亲脂性抗氧化能力两者都进行了测量。运些研究表明，圆叶葡萄果渣提取物和日本虎杖 根提取物的混合物标准化成98%反式-白襲芦醇，具有强的协同亲脂性抗氧化剂效果。在 亲脂性条件下展示的选择性协同效应是出乎意料地。用于组合物中的圆叶葡萄提取物能够 为天然提取物并且在保持协同亲脂性抗氧化剂活性的同时能够因物种和提取工艺而变化。 在特定实例中，具体公开比例的圆叶葡萄多酪和白襲芦醇存在于组合物中。
[0081] 当与由包含在组合物中的单独提取物所贡献的亲脂性抗氧化能力之和相比时，W 与圆叶葡萄果渣提取物组合的方式包含标准化成98%反式-白襲芦醇的日本虎杖提取物 的组合物具有改善的亲脂性抗氧化能力。认为发生在亲脂性环境中的氧化过程引发了许多 疾病状态的发病机制，例如在动脉粥样硬化中的低密度脂蛋白（LDL)氧化和在II型糖尿病 中肥胖引起的膜岛素抗性。而且，膳食类脂质在胃肠道内的氧化导致吸收细胞毒性和基因 毒性的脂质过氧化反应产物如丙二醒（MDA)。已经发现，通过抑制脂质过氧化反应和由脂质 过氧化反应产生的产物如交联剂，亲脂性抗氧化剂在降低各种皮肤损害中是有效的。由于 氧化应激是在正常老化下的中屯、机制，所W公开的抗氧化剂组合物对于抑制自由基产物或 活性是有用的，由此减缓了与细胞老化相关的过程。 阳0間 申请人的WO2010/014870和WO2010/014873公开了具有改善的抗氧化剂活性的 圆叶葡萄果渣提取物组合物。作为非饮料食品、饮料、液体或固体膳食增补物或局部软膏 的组分而公开了圆叶葡萄果渣提取物组合物。生产所公开组合物的方法包括将具有至少 2%多酪含量的圆叶葡萄（Vitisrotundi化Iia)果渣提取物与源自圆叶葡萄之外的源的具 有至少5%最小纯度的反式-白襲芦醇合并，其中圆叶葡萄多酪对反式-白襲芦醇之比为 0. 1/1~10/1 (重量对重量）。生产所公开组合物的方法包括将具有至少2%多酪含量的圆 叶葡萄（Vitisrotundi化Iia)果渣提取物与源自圆叶葡萄之外的源的具有至少5%最小 纯度的反式-白襲芦醇合并，其中圆叶葡萄果渣提取物对反式-白襲芦醇之比为0. 2/1~ 50/1 (重量对重量）如5/1~50/1 (重量对重量），包括20/1~50/1 (重量对重量）如18~ 1 (重量对重量），由此生产具有抗氧化剂活性的圆叶葡萄果渣提取物和反式-白襲芦醇混 合物。在某些实施方案中，青铜色对紫色圆叶葡萄果渣提取物之比为0. 1~10如0. 3~3， 如下面更详细描述的。
[0083] B.圆叶葡萄果渣提取物
[0084] 在WO2010/014870和WO2010/014873中公开的圆叶葡萄果渣提取物衍生自青 铜色圆叶葡萄果渣和紫色圆叶葡萄果渣。在某些实施方案中，在圆叶葡萄果渣提取物中青 铜色圆叶葡萄果渣提取物对紫色圆叶葡萄果渣提取物之比为0. 1~1〇(重量对重量）如 0. 3~3 (重量对重量）。例如青铜色圆叶葡萄果渣提取物对紫色圆叶葡萄果渣提取物之比 为约2. 75~约1 (重量对重量）、2. 5~约1 (重量对重量）、约2. 25~约1 (重量对重量）、 约2~约1 (重量对重量）、约1. 5~约1 (重量对重量）或约1~约1 (重量对重量）。在 其他实例中，所述比例为约10~约1、约7. 5~约1或约5~约1。如本文中所使用的，术 语"约"定义为±0.5。在特定实例中，青铜色圆叶葡萄果渣提取物对紫色圆叶葡萄果渣提 取物之比为约2. 25~约1 (重量对重量）。 阳0化]在特定实施方案中，圆叶葡萄（Vitisrotundi化Iia)果渣提取物具有至少2%的 多酪含量。例如，所述多酪含量为至少3%、至少3. 5%、至少4%、至少4. 5%、至少5%、 至少6%、至少8 %、至少10 %、至少12 %或至少14%。在特定实例中，圆叶葡萄（Vitis rotundi化Iia)果渣提取物具有约4%的多酪含量。
[0086] 在某些实施方案中，所公开圆叶葡萄果渣提取物包括在液体中的20 %~50 %的 固体如至少25%、至少30%、至少35%、至少37%、至少40%、至少42%、至少44%、至少 46%或至少48%。在特定实例中，提取物在液体中包括约40%的固体。
[0087] 在存在于整个葡萄中时或从提纯的基本不含葡萄汁的果渣，能够对圆叶葡萄果渣 进行提取。在特定实例中，提纯的果渣是在已经将葡萄中的果汁除去至少50%之后剩余的 果皮、种子和果肉。在其他实例中，提纯的果渣是在已经将至少60 %、70 %、80 %或90 %的 果汁除去之后剩余的果皮、种子和果肉，从而果渣基本仅由果皮、种子和果肉构成。
[0088] 由包含在整个葡萄中的葡萄果渣制备的提取物具有包含源自葡萄果渣和葡萄果 汁两者的提取组分的优势。紫色圆叶葡萄在其果汁中包含花色素巧，使得紫色葡萄的溶剂 提取提供一种包含附加量的花色素巧的提取物，所述附加量的花色素巧有助于紫色圆叶葡 萄提取物将较花酸溶解在合并的青铜色和紫色圆叶葡萄提取物中的能力。
[0089] C.制备圆叶葡萄果渣提取物的方法
[0090] WO 2010/014870和WO 2010/014873还公开了制备圆叶葡萄果渣提取物的方法， 其中青铜色圆叶葡萄果渣提取物对紫色圆叶葡萄果渣提取物之比为0. 1~10(重量对重 量）如0.3~3(重量对重量）。尽管通过任意提取方法如在压力下的压制或利用溶剂的 提取，能够得到提取物，但特定实例是例如利用醇、水（例如热水）或醇和水的组合进行溶 剂提取的。在一个公开的实施方案中，通过同时对W得到期望的青铜色和紫色提取物之比 的比例存在的青铜色圆叶葡萄果渣和紫色圆叶葡萄果渣进行提取，制备了圆叶葡萄果渣提 取物。在其他实例中，分别制备了青铜色圆叶葡萄果渣提取物和紫色圆叶葡萄果渣提取物。 例如，利用水、优选热水分别对青铜色圆叶葡萄果渣和紫色圆叶葡萄果渣进行提取。
[0091] 提取物还能够被发酵W除去提取的糖。在一个实例中，在提取青铜色圆叶葡萄果 渣和紫色圆叶葡萄果渣之后但在将青铜色圆叶葡萄果渣提取物与紫色圆叶葡萄果渣提取 物合并W生产所公开的圆叶葡萄果渣提取物之前，实施发酵。在其他实例中，在将青铜色圆 叶葡萄果渣提取物与紫色圆叶葡萄果渣提取物W期望的提取后比率（例如在约2. 25~1 的青铜色对紫色之比下）进行合并之后，实施发酵。
[0092] 通过本领域内技术人员已知的任意方法，包括本文中所述的方法，可W实施发酵。 例如能够将酵母和酵母养分添加到果渣并继续发酵，直至残留的糖内容物转化成乙醇。在 一个实例中，每100加仑IX(未浓缩的）提取物能够添加两磅酵母；发酵典型地在=天 之后完成。在其他实例中，酵母的量和/或菌株W及发酵的持续时间和溫度可W随本领 域技术人员已知的各种方法而变化。在某些实例中，使用酶来澄清和/或沉降残液或提 高在果渣提取物中的提取收率。运种酶的实例包括果胶酶、或源自黑曲霉（Aspergillus niger)的酶的共混物，所述源自黑曲霉（Aspergillusniger)的酶商购得自诸如Scott Uboratories。运些酶可W在发酵之前或期间添加到果渣提取物。
[0093] 在某些实施方案中，在发酵之前和/或之后，对青铜色圆叶葡萄果渣提取物和紫 色圆叶葡萄果渣提取物进行过滤。过滤能够根据本领域内技术人员已知的普通方法来实 施。在特定实例中，通过合适的筛孔尺寸的筛子如USP网（典型地120目）或类似的布过 滤器（例如商购得自MilliporeCo巧oration的过滤器）对提取物进行过滤。
[0094] 在特定实施方案中，制备圆叶葡萄果渣提取物的方法还包括对青铜色圆叶葡萄果 渣提取物和紫色圆叶葡萄果渣提取物进行浓缩，使得各提取物在液体中包含20%~50% 的固体如至少25%、至少30%、至少35%、至少37%、至少40%、至少42%、至少44%、至 少46 %或至少48 %。在特定实例中，对提取物进行浓缩，W使得各提取物在液体中包含约 40%固体。能够使用普通已知的用于浓缩试样的方法W对青铜色和紫色提取物进行浓缩， 包括本文中所公开的样品浓缩方法。
[0095] 在特定实例中，为了制备在40%固体下的圆叶葡萄果渣提取物，将圆叶葡萄果渣 提取物干燥至粉末形式并在40%固体水平下在水中重新构造。或者，更接受的商业方法是 使用分批或连续工艺在真空下通过蒸发除去提取溶剂而浓缩。分批工艺设及在对容器夹套 进行加热W提供能量来升高溶剂蒸气压的同时将提取物放入在20~29"水银真空下的容 器中。溶剂蒸气在容器外部冷凝且冷凝速率控制冷凝物的溫度。相同的原理适用于连续蒸 发工艺，但具有如下优势，即冷凝物暴露在高溫下的时间段缩短。两种工艺都可应用于本文 中所述的圆叶葡萄果渣提取物的浓缩。
[0096] 在特定实施方案中，将青铜色和紫色果渣分别进行提取并在将青铜色和紫色果渣 提取物在期望比例下合并之前对各种提取物进行过滤。在某些实例中，该方法还包括对合 并的圆叶葡萄果渣提取物进行发酵W除去提取的糖。在一个实例中，通过例如在发酵之前 和之后对提取物进行过滤，使用超过一个的过滤步骤。在某些实例中，所述方法还包括对提 取物进行浓缩，如本文中所述的。例如，通过真空蒸发除去提取物溶剂，对提取物进行浓缩。
[0097] 现在已经发现，在提取方法的任一上述实例中，整个紫色葡萄能够取代葡萄果渣。 紫色圆叶葡萄果渣提取物包括：(a)整个紫色圆叶葡萄的提取物；化）源自整个葡萄之外的 紫色圆叶葡萄果渣的提取物；或（C) (a)和化）的混合物。整个紫色葡萄包含作为源自葡 萄果渣之外的花色素巧的源的葡萄汁，且当从整个葡萄进行溶剂提取时，现在已经发现运 些花色素巧惊奇地增强了较花酸在青铜色和紫色圆叶葡萄提取物的混合物中的溶解度。然 而，通过有色果实或除紫色圆叶葡萄之外的有色果实如蓝替、黑替或树替果实的副产物，也 能够提供花色素巧的其他源。在其他实例中，花色素巧源自果实加工流的产物如果汁浓缩 物或果实加工流的副产物如从果泥加工流分离的果皮。源自整个圆叶葡萄或其他有色果实 的其他花色素巧大大提高了较花酸的溶解度，其是圆叶葡萄中的期望的抗氧化剂。
[0098] 在提取方法的某些实施方案中，通过W1:5~1:12(重量：重量）的比例对整个 紫色圆叶葡萄和青铜色圆叶葡萄果渣同时进行提取，生产了圆叶葡萄果渣提取物。在其他 实例中，生产了提取物，所述提取物包含（a)整个紫色圆叶葡萄对化）青铜色和紫色圆叶 葡萄果渣的混合物之比为1:7~1:16(重量：重量）的（a)和化）的提取物。在其他实 施方案中，圆叶葡萄果渣提取物衍生自任意组合的整个紫色圆叶葡萄、青铜色圆叶葡萄果 渣和紫色圆叶葡萄果渣，其中在起始材料（整个葡萄和果渣）中花色素巧对较花酸之比为 0. 5:1~5:1 (重量：重量）。在其他实例中，圆叶葡萄果渣提取物衍生自与花色素巧的其 他源（例如整个紫色圆叶葡萄或其他有色果实如黑替、树替、红醋栗或蓝替果实、或任一运 些果实的废物流）组合的青铜色圆叶葡萄果渣和紫色圆叶葡萄果渣，其中花色素巧对较花 酸之比为0. 5:1~5:1 (重量：重量）。
[0099] 化具有抗氧化剂活性的组合物
[0100] 本文中公开了具有改善的抗氧化剂活性的组合物。在某些公开的实施方案中，所 述组合物包括具有至少2%多酪含量的圆叶葡萄（Vitisrotundi化Iia)果渣提取物与源 自圆叶葡萄之外的源（例如日本虎杖的根提取物）的具有至少5%最小纯度的反式-白襲 芦醇，其中圆叶葡萄的多酪对反式-白襲芦醇之比为0. 1/1~10/1 (重量对重量），由此提 供具有抗氧化剂活性的组合物。运些和所有其他具体实例和实施方案旨在作为本发明的特 定实施方案，且不用于限制本发明的范围，任一具体实例也不旨在暗示本发明被限定至特 定特征，除非另有说明。 阳101] 在某些实例中，所述组合物包括：圆叶葡萄（Vitisrotundi化Iia)果渣提取物， 其具有至少3%、至少3. 5%、至少4%、至少4. 5%、至少5%、至少6%、至少8%、至少10%、 至少12%或至少14%的总的多酪含量讯源自圆叶葡萄之外的源的反式-白襲芦醇，其具 有至少5%、至少10%、至少25%、至少50%、至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、 至少85 %、至少90 %、至少95 %、至少97 %或至少98 %的最小纯度。在特定实例中，所述组 合物包括具有约4%多酪含量的圆叶葡萄（Vitisrotundi化Iia)果渣提取物和源自圆叶 葡萄之外的源的具有至少98%最小纯度的反式-白襲芦醇。
[0102] 在某些实施方案中，所述组合物包括圆叶葡萄果渣提取物，其在液体中具有 20%~50%的固体，例如至少23%、至少25%、至少30%、至少35%、至少37%、至少40%、 至少42%、至少44%、至少46%或至少48%。在特定实例中，提取物在液体中包括约40% 的固体。 阳103]在其他实施方案中，所述白襲芦醇包括至少5 %的反式-白襲芦醇，例如至少10 % 的反式-白襲芦醇、至少20%的反式-白襲芦醇、至少30%的反式-白襲芦醇、至少40%的 反式-白襲芦醇、至少50%的反式-白襲芦醇、至少55%、至少60%、至少70%、至少75%、 至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至