制备圆叶葡萄果渣提取物的方法

制备圆叶葡萄果渣提取物的方法
【专利说明】
[oow] 相关申请
[0002] 本发明还主张2013年3月14日提交的美国申请13/828, 707号的优先权，通过参 考将其并入。
技术领域
[0003] 本发明设及制备抗氧化剂组合物的方法，所述抗氧化剂组合物包含圆叶葡萄提取 物，尤其是得自青铜色和紫色圆叶葡萄的提取物。
[0004] 发明背景 阳0化]活性氧物种（RO巧是需氧代谢的必然副产物并由此在人体和其他生物体内连续 产生。人体还暴露在源自外源/环境源如污染、太阳光和饮食的ROS下。尽管存在不同化 学形式的R0S，但其都对细胞成分和大分子的结构和功能产生有害作用。将ROS产生/暴露 的强度称作氧化应激。 阳006] 认为氧化应激与慢性发炎疾病如糖尿病、癌症、动脉粥样硬化和其他屯、血管疾病 的发病机制相关，并与变性神经疾病如阿尔茨海默（Alzheimer)病和帕金森（Parkinson) 病相关。而且，多方面的证据支持如下观点，氧化应激是在正常老化下的中屯、机制。因此， 需要开发组合物和方法W抑制氧化应激。
[0007] 已经报道，适度使用葡萄酒可W降低喝葡萄酒人群的屯、血管疾病的发病率并因此 降低其死亡率。还报道，适度摄入葡萄酒对痴呆具有神经保护效果。葡萄包含几种生物活 性多酪化合物，包括黄酬类化合物（例如黄烧-3-醇及其称作原花色素的低聚物；黄酬醇、 花色素巧和黄烧酬）和非黄酬类化合物（例如酪酸、单宁酸和巧衍生物，例如白襲芦醇）。 认为非黄酬类化合物白襲芦醇介导葡萄产物对人体屯、血管系统带了许多有益的效果。认为 黄酬类化合物的保护和消炎效果是因为，清除自由基，对细胞信号传导通路和基因表达的 各种效果，W及选择性干扰多种因素，所述多种因素影响快速和反常增生的哺乳动物细胞 的细胞分裂循环。 阳00引发明概述
[0009] 本文中公开了生产圆叶葡萄果渣溶剂提取物组合物的方法和组合物，所述组合物 包含青铜色圆叶葡萄果渣提取物和紫色圆叶葡萄果渣提取物的组合。出乎意料地发现，源 自不同颜色葡萄的提取物的组合有利地提高较花酸在组合物中的溶解度。还发现，通过将 花色素巧包括在所述组合物和/或提取方法中能够进一步提高较花酸的溶解度，所述花色 素巧不是得自仅果渣（pomace-only)的提取物。所述花色素巧能够得自例如整个紫色圆叶 葡萄（wholePU巧Iemuscadinegrape)或另一种有色果实如蓝替、黑替或树替、或果实加 工废物流。在其他实例中，花色素巧得自运种有色果实的果汁或果皮或所述两者。在一个 特别公开的实施方案中，将青铜色圆叶葡萄仅果渣和整个紫色圆叶葡萄（果渣加果汁）例 如利用水单独或一起进行溶剂提取，使得合并的提取物包含源自整个紫色圆叶葡萄的花色 素巧。在某些实施方案中，则可W将合并的提取物与紫色圆叶葡萄仅果渣的提取物合并W 生产具有出乎意料地提高的较花酸溶解度的组合物。
[0010] 因此，在所述方法的一个实施方案中，紫色圆叶葡萄果渣包括包含在整个紫色圆 叶葡萄中的果渣，且紫色圆叶葡萄果渣提取物至少部分包含得自整个紫色圆叶葡萄的提取 物。因此，紫色圆叶葡萄果渣提取物能够包括得自如下物质的提取物的混合物：(a)整个 紫色圆叶葡萄；和化）得自从其已经提前提取了果汁的紫色圆叶葡萄的仅果渣部分的提取 物。或者，圆叶葡萄提取物仅得自青铜色和紫色圆叶葡萄的仅果渣，其中仅果渣基本由果渣 构成而不含果汁。在任一情况中，能够将青铜色圆叶葡萄果渣提取物与紫色圆叶葡萄果渣 提取物（例如紫色圆叶葡萄仅果渣的提取物）合并W生产其中青铜色圆叶葡萄果渣提取物 与紫色圆叶葡萄果渣提取物W0. 1~10的比例（重量对重量）存在的圆叶葡萄果渣提取 物且所述圆叶葡萄果渣提取物具有至少2%如约4%W上的多酪含量。在更特别的实例中， 青铜色圆叶葡萄果渣提取物和紫色圆叶葡萄果渣提取物W0. 3~3范围内的比例存在。在 运些比例中，"果渣提取物"包括来自仅果渣和/或整个葡萄的果渣组分的提取物。
[0011] 所述青铜色和紫色提取物能够同时或先后生产。在同时提取的一个实例中，将青 铜色圆叶葡萄仅果渣（不是整个葡萄）和整个紫色圆叶葡萄合并并同时溶剂提取W提供混 合的来自（a)青铜色仅果渣和化）整个紫色葡萄的提取物（其包括在整个紫色葡萄内所包 含的果汁的提取物和整个紫色葡萄的仅果渣部分的提取物）的提取物。或者，将青铜色和 紫色圆叶葡萄仅果渣（不含任何的青铜色或紫色的整个葡萄）合并并同时提取。在另一个 实例中，将青铜色仅果渣、紫色仅果渣和整个紫色葡萄合并并将所有=者同时提取。在先后 提取的实例中，将源自整个葡萄之外的紫色圆叶葡萄果渣（例如仅果渣）和源自整个葡萄 之外的青铜色圆叶葡萄果渣（例如仅果渣）分别提取，然后将那些提取物合并。在先后提 取的另外实例中，然后接着将合并的紫色/青铜色提取物与源自紫色圆叶葡萄果渣（不是 整个葡萄）的提取物或源自整个紫色圆叶葡萄的提取物、或源自整个紫色葡萄的提取物与 源自青铜色果渣（不是整个葡萄）的提取物的组合合并。
[0012] 在某些特别公开的实施方案中，制备青铜色圆叶葡萄果渣提取物和紫色圆叶葡萄 果渣提取物，然后将青铜色圆叶葡萄果渣提取物与紫色圆叶葡萄果渣提取物合并W生产具 有至少2%多酪含量的圆叶葡萄果渣提取物。例如，将青铜色圆叶葡萄果渣和紫色圆叶葡萄 果渣用水进行提取W生产青铜色圆叶葡萄果渣提取物和紫色圆叶葡萄果渣提取物，然后将 青铜色圆叶葡萄果渣提取物与紫色圆叶葡萄果渣提取物合并W生产具有至少2%多酪含量 的圆叶葡萄果渣提取物。
[0013] 制备青铜色圆叶葡萄果渣提取物和紫色圆叶葡萄果渣提取物能够还包括（a)在 将其合并之前单独或化）在将其合并之后一起对青铜色圆叶葡萄提取物和紫色圆叶葡萄 提取物进行过滤W生产具有至少2%多酪含量的圆叶葡萄提取物。青铜色和紫色果渣提取 物还可单独或W组合的方式进行发酵W有助于除去提取的糖。运种发酵可W发生在对圆叶 葡萄果渣提取物进行过滤之前或之后。
[0014] 对青铜色和紫色圆叶葡萄提取物进一步进行浓缩，使得各种提取物在液体中包含 20%~50%的固体，例如在液体中包含约40%的固体。在某些实例中，在对圆叶葡萄果渣 提取物进行过滤之后，对圆叶葡萄果渣提取物进行浓缩。
[0015] 将赋形剂或其他成分添加到提取之后的提取物W例如制备抗氧化剂组合物。其他 成分可W包括白襲芦醇或花色素巧。在一个特定的实例中，在通过对整个紫色圆叶葡萄进 行提取W同时提取葡萄的果渣和存在于葡萄汁中的花色素巧的提取期间，添加花色素巧。
[0016] 还公开了通过上述或其他方法制备的组合物。在特定实例中，在组合物中青铜色 圆叶葡萄果渣提取物对紫色圆叶葡萄果渣提取物之比W0. 1~10范围内的比例（重量对 重量）存在且圆叶葡萄果渣提取物具有至少2%的多酪含量。能够将运些组合物给药到需 要其的对象W通过防止或抑制与细胞老化相关的一个或多个过程如自由基的形成或活性 来抑制细胞老化。在某些实施方案中，紫色圆叶葡萄果渣提取物包括：(a)整个紫色圆叶葡 萄的提取物；化）源自整个葡萄之外的紫色圆叶葡萄果渣提取物；或（C) (a)和化）的混合 物。所述组合物可W包括在非饮料食品、饮料、膳食增补物、美容组合物或抗老化增补物中。 通过将足W降低或抑制氧化应激的组合物剂量给药到需要其的对象，所述组合物还可W用 于抑制氧化应激的方法中。在某些实施方案中，在进餐消耗之前或之后10~30分钟给药 所述剂量。
[0017] 所述圆叶葡萄组合物能够在抗氧化剂组合物中包括源自圆叶葡萄果渣或圆叶葡 萄之外的源的白襲芦醇或花色素巧。例如，所述组合物能够在抗氧化剂组合物中包含源自 日本虎杖提取物的白襲芦醇或源自圆叶葡萄果渣之外的源如整个紫色圆叶葡萄中的果汁 的花色素巧、或源自提取工艺期间添加的另一种有色果实如红醋栗、蓝替、黑替或树替的花 色素巧。在一个实施方案中，花色素巧能够源自果实加工废物流。例如，废物流花色素巧能 够源自有色果实的在其已经加工成果泥、果冻、果酱和果汁浓缩物之后的果皮。废物流在提 取工艺期间添加且不是随后在完成提取工艺之后添加到组合物。然而，最终产物抗氧化剂 组合物能够还具有添加到其的其他花色素巧（例如源自接骨木提取物）。在某些实施方案 中，从起始材料（例如圆叶葡萄果渣和添加的花色素巧源）的混合物制备提取物，所述混合 物包含0.5:1~5:1 (重量：重量）范围内如1:1 (重量：重量）或1.3:1(重量：重量） 的花色素巧对较花酸的起始材料之比。例如，与其他果实材料如红醋栗、蓝替、黑替或树替 合并的圆叶葡萄果渣材料应具有至少0. 5:1如大至5:1的花色素巧对较花酸之比。在其他 实例中，所述比例为至少或3:1和/或不超过5:1或4:1。在其他实例中，在合并 的起始材料中花色素巧对较花酸的重量比为超过0. 5:1、1:1、10:1或20:1。在其他实例中， 在合并的起始材料中花色素巧对较花酸的重量比为不超过30:1、40:1或50:1。在其他实例 中，从提取物的混合物（例如圆叶葡萄果渣提取物加上添加的花色素巧，所述花色素巧源 自有色果实如接骨木果的提取物）制备提取物，其中在合并的提取物材料中花色素巧对较 花酸的重量比为超过0. 5:1、1:1、10:1或20:1，例如其可为24:1。在其他实例中，在合并的 起始材料中花色素巧对较花酸的重量比为不超过30:1、40:1或50:1。
[0018] 在某些实例中，圆叶葡萄果渣提取物W如下比例包含整个紫色圆叶葡萄和青铜色 圆叶葡萄果渣或通过W如下比例同时提取整个紫色圆叶葡萄和青铜色圆叶葡萄果渣来制 备：1:5~1:12(重量：重量），如1:7(重量：重量）或1:9(重量：重量）或1:10(重量： 重量）的整个紫色圆叶葡萄对青铜色圆叶葡萄果渣之比。在另一个实例中，圆叶葡萄果渣 提取物W如下比例包含（a)整个紫色圆叶葡萄和化）青铜色和紫色圆叶葡萄果渣的混合物 或通过W如下比例提取（a)和化）来制备：（a)对化）之比为1:7~1:16(重量：重量）， 如1:9 (重量：重量）或1:12 (重量：重量）。或者，圆叶葡萄果渣提取物由整个紫色圆叶 葡萄、紫色圆叶葡萄果渣和青铜色圆叶葡萄果渣制备，其中在它们中的花色素巧对较花酸 之比为至少0. 5:1，例如0. 5:1~5:1 (重量：重量）如1:1 (重量：重量）或1. 3:1 (重量： 重量）。
[0019] 根据参考附图的如下详细说明将使得本发明的上述和其他目的、特征和优势变得 更明显。尽管在如下页面中对本发明的具体实例进行了讨论，但具体组分、成分或量的描述 不意味着本发明的任何运种方面是必须的。
[0020] 详细说明
[0021]I.缩写和术语 阳0巧（a)缩写
[0023] FRAP：等离子体的S价铁还原能力 1^0024] mg ：晕克 阳02引 y g: 微克
[0026] ml ：毫升
[0027] ORAC：氧自由基吸收能力 阳0測 ROS : 活性氧物种
[0029] TE ： Trolox当量
[0030] TEAC： Trolox当量抗氧化能力
[0031]Wt: 重量
[0032] (b)术语
[0033] 术语和方法的如下说明是用于更好地说明本发明并用于指导本领域技术人员实 践本发明。术语"或者"是指所述可选要素的单个要素或两个W上要素的组合，除非上下文 明确表明不是。如本文中所使用的，"包含"是指"包括"。由此，"包含A或B"是指"包括 A、B、或A和B"，而不排除其他要素。
[0034]除非另有解释，否则本文中所使用的所有技术和科学术语都具有与本发明所属领 域技术人员所普通理解的相同的含义。尽管本发明的实践或试验中使用与本文中所述的类 似或等价的方法和材料，但下面描述了合适的方法和材料。除非另有规定，否则所有百分比 和比例都是用重量来计算的。
[0035] 给药：通过任意有效路线向对象提供或给予药剂。给药的示例性路线包括但不限 于口服、注射（例如皮下注射、肌肉注射、皮内注射、腹膜内注射、静脉内注射和瘤内注射）、 舌下、经表皮、鼻内、局部和吸入路线。
[0036] 花色素巧：在许多植物中发现的水溶性空泡色素会因抑而呈现红色、紫色或蓝 色。花色素巧属于称作黄酬类化合物的母体类分子，所述黄酬类化合物是通过苯基丙酸类 路径合成的。花色素巧具有如下所示的普通化学结构：
[0037]
[0038] "源自圆叶葡萄之外的源的花色素巧"是指得自除圆叶葡萄之外的源的花色素巧。 运种非圆叶葡萄源的实例包括接骨木、红醋栗果实、蓝替、黑树替、红树替、越枯、葡萄或紫 色胡萝h。
[0039] 抗氧化剂活性：通过例如清除和中和氧化自由基而降低氧化应激的活性。使用本 文中公开的方法W及本领域内已知的方法能够测量抗氧化剂活性，包括氧自由基吸收能力 (ORAC)测定法、等离子体的铁还原能力（FRAF0测定法和化olox当量抗氧化剂能力（TEAC) 测定法。例如，组合物具有抗氧化剂活性且如果其具有每mg多酪至少24ymolTrolox当 量UmolTE/mg多酪）的总0RAC，则能够用作抗氧化剂。
[0040] 抗氧化剂组合物：一种具有抗氧化剂活性的组合物。
[0041] 抗氧化性有效量：在给药一定量组合物的对象中足W诱发抗氧化剂效果的量。在 某些实例中，通过将ORAC^g提高至比根据组合物单独的组分的ORAC^g值的加和所预测的 更大程度，所述组合物诱发ORAC^g抗氧化剂活性选择性协同升高。
[0042] 黑替：来自产生可食用黑替果实的Rosaceas科中的Rubus属的多年生植物。
[0043] 红醋栗：在产生开胃的红醋栗浆果的Grossulariaceae科中的木质灌木。
[0044] 蓝替：来自Vaccinium属内切anococ州S部分的具有說色浆果的常年生开花植物。 运些植物的蓝替果实是微红到紫色并在成熟时最终呈黑紫色的浆果。 W45] 接骨木（Sambucusnigra):属于在欧洲和北美洲发现的Adoxaceae科的具有几个 区域性品种或亚种的植物。花是平的伞房花序。浆果是黑色到绿灰蓝并包含花色素巧和其 他多酪（例如原花色素和黄酬醇如栋精），其中花色素巧和其他多酪的量和类型取决于品 种。
[0046] "接骨木提取物"是一种通过根据本领域技术人员已知的任