CCL11，GATA-3)。因此，实验证 明通过在致敏的动物接受苹果提取物（二级预防）时减少相关基因的表达从而下调免疫应 答。认为其有助于所测试的苹果提取物在减少过敏症状（二级预防）中的抗过敏作用。
[0073] 结论：
[0074] 这些数据表明致敏的动物食用富含多酚类的苹果提取物（Pomactiv HFV)导致减 少暴露于致敏变应原时的过敏症状。症状的减少伴随着降低的MMCP-I的血清浓度水平和 降低的肠内与变态反应相关的关键基因的表达，这表明免疫系统的成员（例如肥大细胞） 的调节有助于保护效应。
[0075] 分析方法:
[0076] OVA畲物讨敏小鼠樽铟：
[0077] 在7周内，每周为间隔通过口服（用管饲针）20mg来自Fluka(Buchs,瑞士）的卵 白蛋白（OVA)+IOyg/小鼠的来自LuBioscience (Lucerne,瑞士）的霍乱毒素（用作佐剂） 使6周龄的成年普通BALB/c小鼠过敏。在最后一次致敏后一周，用IOOmg OVA进行口服激 发。在实验全程，用掺入食物（Kliba 3200, Kliba Nafag Kaiseraugst,瑞士）的来自Val de Vire Bioactives (Val de Vire Bioactives-BP2_50890Conde sur Vire,法国，目录 号："Pomactiv HFV"）的苹果提取物HFV或者来自Diana Naturals (Antrain,法国）的 AFP0MM9080(1% w/w)进行营养干预；作为致敏期间的一级预防或致敏期结束时开始的二 级预防（图1)。在激发后15分钟，分别观察小鼠30分钟。记录临床症状并如下进行量化 (过敏分数:无症状，低于4次搔抓；1:4-10次在鼻和头周围搔抓，无腹泻；2:多于10 次搔抓或直立的毛发和不动或软便；3:腹泻或呼吸吃力或紫绀；4:腹泻并且针刺后不动、 直立的毛发、呼吸吃力或紫绀；5:过敏反应。在激发后4个小时，处死小鼠（颈脱位法），取 血和采集最后一厘米的回肠和1个位于相同区域的派尔集合淋巴结，冷冻在液氮中。
[0078] 血清 MMCP-I ：
[0079] 根据制造商的说明，通过购自Moredun Scientific(Midlothian,苏格兰）的 ELISA来定量小鼠血清中的鼠肥大细胞蛋白酶I (MMCP-I)。通过用多项式标准曲线转化OD 值（pg/ml)来得到MMCP-I浓度。
[0080] 肠内基_表汰的低密度阵列分析:
[0081] RNA提取和定量：
[0082] 使用购自Promega(Dilbendorf,瑞士）的SV总RNA分离系统试剂盒，根据制造商 的方法，提取来自回肠和派尔集合淋巴结的总核糖核酸（RNA)。
[0083] 使用Promega (Dilbendorf,瑞士）提供的定量-IT Ribogreen试剂盒，根据制造商 的方法，定量RNA。
[0084] 逆转录：
[0085] 通过使用来自 Applied Biosystems (Foster City USA)的 Multiscribe 逆转录 酶试剂盒，在1 μ g总RNA上进行逆转录。总RNA与50 μ 1的终体积中的50 μM的随机六 聚体、0· 5mM 的 dNTPs、20U 的 RNase 抑制剂（Applied Biosystems)、62· 5U 的 Multiscribe 逆转录酶、IX RT缓冲剂和5. 5mM的MgC12进行混合。用以下循环程序在T3PCR仪 (Biometra, Gottingen,德国）上进行逆转录：在25°C 10分钟、在48°C 30分钟、在95°C 5 分钟，在4°C结束。
[0086] LDA ：
[0087] 在 Applied Biosytems 网站（http://www3.appliedbiosystems.com/index.htm) 上在线设计低密度阵列分析。根据制造商的方法在定量ABI-Prism 7900HT上进行加载、运 行和分析。
[0088] 用3个看家基因 （β -肌动蛋白、GAPDH和HPRT)的平均值使定量结果标准化。基 于所获得的循环阈（Ct)值，用ACt测量每一个基因的相对的和标准化的mRNA表达。通过 3个看家基因的Ct平均值校正每一个基因的Ct值。用公式-2-△ Ct XK将结果计算为相对 表达，K是IO6系数。倍数增加结果表达标准化为以阴性组的表达水平为基准。
【主权项】
1. 包含多酚类的苹果提取物在制备减少具有由食物变应原引发的变态反应的患者中 由食物引起的变态反应的症状的全营养组合物中的用途。2. 权利要求1的用途，其中所述的组合物提供对由所述的食物变应原引发的变态反应 的显著的二级预防。3. 上述权利要求任意一项的用途，其中所述的组合物对于所述患者对所述变应原的致 敏无效。4. 上述权利要求任意一项的用途，其中所述的苹果提取物富含多酚类，与粗苹果提取 物相比乘以至少1.5的因数。5. 上述权利要求任意一项的用途，其中所述的组合物包含0. 1 %w/w到1 %w/w的所述 的苹果提取物。6. 上述权利要求任意一项的用途，其中所述的组合物包含槲皮素。7. 上述权利要求任意一项的用途，其中所述的组合物包含水解的蛋白质。8. 上述权利要求任意一项的用途，其中所述的组合物减少以后生命中对其他变应原的 过敏。9. 上述权利要求任意一项的用途，其中所述的苹果提取物是来自ValdeVire Bioactives(CondesurVire,法国）的PomactivHFV〇10. 上述权利要求任意一项的用途，其中所述的症状是腹泻、皮肤刺激或呼吸系统或其 组合。11. 上述权利要求任意一项的用途，其中所述的组合物包含谷物蛋白。12. 上述权利要求任意一项的用途，其中所述的组合物是婴儿配方食品、后续配方食 品、成长乳、婴儿谷物或幼儿食品。13. 上述权利要求任意一项的用途，其中所述的组合物是用于1-4岁婴儿的婴儿谷物 组合物。14. 上述权利要求任意一项的用途，其中在断奶期和/或随后多达12个月期间向婴儿 提供所述的组合物。15. 上述权利要求任意一项的用途，其中所述的患者是6岁以下、优选出生至3岁的婴 儿或幼儿。16. 上述权利要求任意一项的用途，其中所述症状伴随着生化调节物例如类胰蛋白酶、 糜蛋白酶、组胺、白三烯的释放。
【专利摘要】本发明涉及包含苹果提取物并且特别是在儿童中减少食物过敏症状的营养组合物。具体而言，提供了包含多酚类的全营养组合物，其用于减少幼儿或婴儿的由食物变应原引起的变态反应的症状。优选地，组合物调节变态反应的二级预防、同时不显著影响一级预防。组合物包含苹果提取物。
【IPC分类】A23L33/105
【公开号】CN105326056
【申请号】CN201510883503
【发明人】S·霍尔沃特, A·梅赛尼尔, A·齐歇尔
【申请人】雀巢产品技术援助有限公司
【公开日】2016年2月17日
【申请日】2010年4月23日
【公告号】CA2757511A1, CN102413718A, EP2424385A1, EP2424385B1, US8911803, US20120021078, WO2010124997A1