乳杆菌和动物双歧杆菌接菌量比例为1:10,混菌液态发酵2她，溫度为37°C ;
[0096] 所述发酵培养基制备方法同活化培养基一致。
[0097] (3)发酵液处理
[0098] 发酵结束后经乳化、加稳定剂、调酸、调香、均质、杀菌后获得的小扁豆发酵液即为 小扁豆益生菌液态发酵饮料；
[0099] 稳定剂与发酵液质量体积比组成如下:簇甲基纤维素钢0.9%，黄原胶0.4%，乳化 剂0.9%;
[0100] 发酵结束后添加与发酵液质量体积比为8%的薦糖；
[0101] 均质条件为均质溫度65°C、压力30MPA、均质次数为一次；
[0102] 杀菌条件为 90°C、10min。
[0103] 利用高效液相法测定GABA含量；参考Rozan等人的文章（Rozan,Kuo,and Lambein (2000).Free amino acids present in commercially available seedlings sold for human consumption.A potential hazard for consumers.Journal of Agriculture and Food Qiemistry，48,716-723.);
[0104] 利用福林酪反应测定总酪类含量;参考Adler-Nissen等人的文章(Adler-Nissen, J.(1979).Determination of the degree of hydrolysis of food proteinhydroIysates by trinitrobenzenesulfonic acid.Journal of Agricultural and !^odQiemistry,27,1256-1262.);
[0105] 利用2，4，6-S硝基苯横酸和酶标仪来测定游离氨基含量；
[0106] 利用活氧指数法(ORAC)测定抗氧化物含量；
[0107] ACEI含量测定方法参考Hyun和化in等人文章化yun，C.K.，&化in，H.K. (2000) ?Utilization of bovine blood plasma proteins for theproduction of angotensin I converting enzyme inhibitory peptides.ProcessBiochemistry,36,65-71.)。
[0108] 液态发酵结果如下表：
[0110] 注:单菌发酵方法同混菌发酵，仅需选择混菌发酵中对应的单一菌种及对应单一 菌种的接种量即可。
[0111] 由上表格可知，小扁豆发酵饮料中GABA含量、总酪类、游离氨基、抗氧化物及ACEI 含量均增加显著。特别是，植物乳杆菌(CGMCC 1.6971)和动物双歧杆菌(CGMCC 1.3003)混 菌发酵后GABA含量及植物乳杆菌TK9和动物双歧杆菌937混菌发酵后的GABA含量均高于单 菌发酵产物的总和，该成分对高血压有缓解和治疗的功效;游离氨基的发酵数据同样显示 混菌发酵的效果优于单菌发酵之和。
[0112] 实施例2、固态发酵工艺(菌种接种量与接种比例选择、发酵工艺参数选择、活性成 分变化）
[0113] (1)菌种接种量与接种比例选择
[0114] 植物乳杆菌TK9和动物双歧杆菌937甘油管分别按1 %接种于小扁豆液态培养基进 行一次活化，均活化20h，然后均按10% (v/w)的接菌量转接入二次活化培养基（同一次活化 培养基）中，二次活化2地，在小扁豆固态发酵培养基中同时接种植物乳杆菌化.Plantarum TK9)和动物双歧杆菌937(B. animaliS 937)种子液进行混菌发酵。
[0115] 菌种接种量与接种比例见下表3，4，在抑7.2-7.4，培养溫度37 ± rC，混菌发酵24h 后。同时分别做植物乳杆菌TK9和动物双歧杆菌937的单菌发酵小扁豆固态发酵培养基的对 照，对所有培养基中的益生菌活菌数进行检测。
[0116] 结果表明：固态发酵饮料中最佳的接种量为植物乳杆菌TK9为IX 10化FU/g，植物 乳杆菌TK9和动物双歧杆菌937接入比例为1:5(见附图2)。
[0117] 表3植物乳杆菌TK9接菌量为I X 107-5 X IO8CFlVg,植物乳杆菌TK9和动物双歧杆菌 937接菌比例为1-10:1-10时，物乳杆菌TK9的活菌数。
[0119] 表4植物乳杆菌TK9接菌量为1 X IO7-S X IO8CFlVg,植物乳杆菌TK9和动物双歧杆菌 937接菌比例为1-10:1-10时，动物双歧杆菌937的活菌数。
[0121] (2)发酵工艺参数选择
[0122] 1)、发酵培养基添加剂的确定
[0123] 在接种量已优化的条件下，将植物乳杆菌TK9和动物双歧杆菌937甘油管分别按 1%接种于小扁豆液态培养基培养进行一次活化均活化20h，均按10% (v/w)的接菌量转接 入小扁豆粉二次活化培养基中，二次活化24h。
[0124] 发酵培养基:在小扁豆浆料中分别添加不同浓度梯度(0、0.25、0.5邑/25111〇碳酸 巧、酵母粉、葡萄糖、心谷氨酸。
[0125] 在小扁豆固态发酵培养基中同时接种植物乳杆菌化.Plantarum TK9)和动物双歧 杆菌937(B.animalis 937)种子液混菌发酵。使得接入固态发酵培养基中的植物乳杆菌 (L.plantarum)为1 X 10化FU/g，植物乳杆菌化.plantarum TK9)和动物双歧杆菌937 (B. animal iS 937)的接入比例为1: 5，pH7.2-7.4，培养溫度37 ± TC，混菌发酵2地，分别对 培养基中的益生菌活菌数进行检测。
[01%]结果:混菌固态发酵培养基最佳配方为:小扁豆lOg、蒸馈水15mL、碳酸巧0.25g、酵 母粉0.5g、葡萄糖0.25g、k谷氨酸0.25g(见附图1)。
[0127]在碳酸巧添加量为0.25g(/25g)时，测得的总活菌数为4.395 X IO9CFlVg,其中植 物乳杆菌化.plantarum TK9)活菌数为3.7 X 10化FU/g、动物双歧杆菌937 (B. animal is 937)活菌数为6.95 X IO8C即/g;在酵母粉添加量为0.5g(/25g)时，测得的总活菌数为4.82 X 109C即/g，其中植物乳杆菌化.plantarum TK9)活菌数为3.9 X 109C即/g、动物双歧杆菌 937(B. animalis937)活菌数为9.2 X 10化即/g;在葡萄糖添加量为0.25g(/25g)时，测得的 总活菌数为3.825 X IO9C即/g,其中植物乳杆菌化.plantarum TK9)活菌数为3.1 X IO9C即/ 邑、动物双歧杆菌937(B.animalis 937)活菌数为7.25X10化FU/g;在レ谷氨酸添加量为 0.25g(/25g)时，测得的总活菌数为4.89X 109CFU/g，其中植物乳杆菌化.plantarumTK9) 活菌数为3.8 X I〇9cFU/g、动物双歧杆菌937(B. animaliS 937)活菌数为1.09 X l〇9cFU/g。
[0128] 2)、培养时间的确定
[0129] 在接种量已优化的条件下，将植物乳杆菌TK9和动物双歧杆菌937甘油管分别按 1%接种于小扁豆液态培养基培养进行一次活化均活化20h，均按10% (v/w)的接菌量转接 入二次活化培养基中活化24h，在小扁豆固态发酵培养基中同时接种植物乳杆菌 化.plantarum TK9)和动物双歧杆菌937(B.animalis 937)种子液混菌发酵。
[0130] 使得接入固态发酵培养基中的植物乳杆菌化.plantarum)为1 X IO8CFlVg,植物乳 杆菌化.plantarum TK9)和动物双歧杆菌937(B.animalis 937)的接入比例为1:5,抑7.2-7.4，培养溫度37 ± rC，混菌发酵4、10、16、22、28、34、4化，分别对培养基中的益生菌活菌数 进行检测。
[0131] 结果:混菌固态发酵最佳培养时间为34h，总培养时间为7她(见附图3)。测得的总 活菌数为5.67 X l〇9cFU/g，其中植物乳杆菌化.plan化rum TK9)活