专利名称：河蚌脂质体的制备方法及其应用的制作方法
技术领域：
本发明利用圆背角无齿蚌(Anodoonta Woodiana)简称HB为原料制成脂质体，并研究其应用。圆背角无齿蚌是河蚌中的一种。
背景技术：
圆背角无齿蚌为原料，经过适当提取后可得到其中抗肿瘤部分产品，定名为HB，其均为糖蛋白。其分子量在1万与10万之间，蛋白质含量达50％左右，糖含量为20％左右，含16种氨基酸。药理实验表明，HB对于肿瘤，尤其是下述瘤株EAC，S180，B16肺转移瘤，Lewis肺癌，Lewis肺转移癌，B16实体瘤，P338，抑瘤率分别为75.42％、76.31％、52.17％、59.50％、100％、87.32％、240％(ip，25—50mg/Kg)，腹腔注射显示了较强的抗肿瘤作用，同时具有一定的免疫功能，可促进吞噬细胞的吞噬能力，也可激活巨噬细胞抑制肿瘤细胞的生长，但HB是一类糖蛋白，口服易被肠胃道分解，故口服给药未显示明显的抑瘤作用。
发明内容
本发明的目的是研制一种制备HB脂质体的方法。
本发明的目的是研究HB脂质体的应用。
脂质体系为一种定向药物载体，属于靶间给药系统(targeting drug deliverysystem)的一种新剂型。它具有类细胞结构和生物膜的特性与功能，进入体内主要被网状内皮系统吞噬而激活机体的自身免疫功能，并改变被包封药物的体内分布，使药物主要在肝、脾、肺和骨髓等组织器官中蓄积，从而提高药物的治疗指数，减少药物的治疗剂量和降低药物的毒性。因此，脂质体在许多疾病尤其是癌症的治疗中显示了明显的优越性。将HB粉末制成口服脂质体，其协同效应，势必增强该类药物的抑瘤效果，但至今未见报道。
本发明制备HB脂质体时，将胆固醇、卵磷脂溶于溶剂，如溶于乙醇，乙醚等溶剂，然后加入溶有HB粉末的生理盐水，冰浴超声振荡数分钟，一般2—5分钟即可，在水浴温度下蒸发除去溶剂，再进行超声振荡，继续蒸发，如此重复2—4次，以彻底去除乙醚等溶剂，最后得到混悬液，即为HB脂质体。所用原料重量比是，胆固醇∶卵磷脂∶HB＝1∶(1.0—3.0)∶(3.0—5.0)。上述方法是将逆相蒸发法用于HB脂质体的制备。
本发明中胆固醇∶卵磷脂∶HB＝1∶(2.0—3.0)∶(4.0—5.0)的重量比范围更好，能提高HB脂质体的得率。
卵磷脂和胆固醇溶于乙醚较好，乙醚更易挥发，给制备工艺带来了极大方便。
水浴蒸发时可用旋转蒸发仪除去溶剂，水浴温度在35—40℃，在此温度范围内工艺方便，产品性能稳定。
冰浴超声振荡是间歇进行的，即每振荡一次，间歇一次，再振荡，再间歇，一般以0.5—1.0分钟为间隔较好。
HB粉未是溶解在生理盐水中再加入溶有胆固醇和卵磷脂的溶液中去，HB粉未在生理盐水中的浓度是(40—50)mg/ml较为合适。
本发明方法中HB粉未制备时将圆背角无齿蚌原料水通过提取，用乙醇等溶剂沉淀，沉淀物用NaCl等盐溶解，盐溶液经膜过滤器过滤后取1万至10万分子量范围的产物为产品。进一步纯化，浓缩至粉未即可。该盐溶液主要含有两种糖蛋白，其分子量分别为1.8万D、6.7万D，等电点分别为4.64和4.76。
本发明方法制得的HB脂质体经显微镜观察，显示了类似脂质体生物膜的双层结构；经过包封率的测定，其可达到60％以上。
本发明的HB脂质体是一种口服制剂，克服了HB是糖蛋白，口服易被胃肠道分解之不足。
该口服制剂可制成胶囊剂或片剂，其制备方法与添加剂均可利用现有制备工艺。
从HB脂质体的药效学结果可以说明其抑瘤率效果良好，与腹腔注射相比，并不逊色。以下是本发明方法获得的产品HB脂质体的药效结果(1)试验动物F1代雄性小鼠，体重20-22g，上海海军医学研究动物实验室提供(2)肿瘤模型S180瘤株，腋下注射接种，上海医药工业研究院提供(3)给药方式第一组HB粉末25mg/kg腹腔注射给药第二组HB粉末100mg/kg口服给药第三组HB脂质体 100mg/kg口服给药第四组HB脂质体 200mg/kg口服给药对照组生理盐水 空白给药连续给药八天，解剖小鼠，称瘤重。
(4)实验结果
抑瘤％＝(对照组平均瘤重-给药组平均瘤重)/对照组平均瘤重×100％本发明用逆相蒸发法制备HB脂质体，由于该方法可包裹较大水容积，适合包裹水溶性药物。从显微镜观察结果和包封率的测定，均说明HB脂质体已经形成并获得较高的包封率。由于脂质体膜材中的磷脂种类和性质、各种磷脂的比例等均会影响脂质体的稳定性，因此本发明选择了合适的磷脂及合适的配比，使制得的产品稳定性良好；加之本发明方法条件温和，又保证了HB脂质体的活性。从药效学结果可知，脂质体不仅提高了HB在体内的活性，而且使HB口服从无效到有效，克服了高分子药物仅注射有效之不足，拓宽了临床给药途径。本发明方法简便，效果良好，给临床肿瘤治疗带来了福音。
图1是本发明方法制得的HB脂质体的显微镜图，从图中可见其显示了脂质体的双层结构。
具体实施例方式实施例操作步骤取卵磷脂100毫克，胆固醇50毫克，溶于15毫升乙醚，加入200mg HB粉末的生理盐水4毫升，用冰浴超声振荡仪振荡2分钟(每振荡0.5分钟，间歇0.5分钟)，水浴温度40摄氏度，用旋转蒸发仪除去乙醚后，用超声振荡仪振荡2分钟(每振荡0.5分钟，间歇0.5分钟)，继续置于旋转蒸发仪上，以除去剩余乙醚，约1小时后取下，得混悬液4ml，即HB脂质体。
权利要求
1.一种圆背角无齿蚌简称HB脂质体的制备方法，其特征是将原料卵磷脂、胆固醇溶于溶剂，然后加入溶有HB粉末的生理盐水，冰浴超声振荡后水浴蒸发除去溶剂，重复2—4次，最后进一步除去溶剂，得混悬液HB脂质体；上述原料重量比如下，胆固醇∶卵磷脂∶HB＝1∶(1.0—3.0)∶(3.0—5.0)。
2.根据权利要求1所述的HB脂质体的制备方法，其特征是胆固醇∶卵磷脂∶HB原料的重量比是1∶(2.0—3.0)∶(4.0—5.0)。
3.根据权利要求1所述的HB脂质体的制备方法，其特征是卵磷脂、胆固醇溶于乙醚。
4.根据权利要求1所述的HB脂质体的制备方法，其特征是水浴蒸发温度是35—40℃。
5.根据权利要求1所述的HB脂质体的制备方法，其特征是冰浴超声振荡是间歇的。
6.根据权利要求1所述的HB脂质体的制备方法，其特征是HB粉未溶解在生理盐水中的浓度是(40—50)mg/ml。
7.根据权利要求1所述的HB脂质体的制备方法，其特征是HB粉末是如下制得将圆背角无齿蚌原料通过水提、醇沉、盐溶后，得盐溶原液，盐溶原液经膜过滤器后取分子量范围在1万至10万之间产品，进一步纯化即可。
8.根据权利要求1所述的HB脂质体的制备方法，其特征是该产品制成口服制剂。
9.根据权利要求8所述的HB脂质体的制备方法，其特征是该口服制剂是胶囊剂，片剂或口服液。
10.根据权利要求1所述的HB脂质体的制备方法，其特征是该产品制成口服制剂用于防治肿瘤。
全文摘要
本发明是用圆背角无齿蚌为原料制成脂质体的方法。圆背角无齿蚌简称HB,其经适当提取获得的有效成份具有抗肿瘤效果。由于HB是一类糖蛋白,口服效果差,注射有效。本发明将HB与卵磷脂、胆固醇用逆相蒸发法制成HB脂质体,经药效学研究结果显示,其抑瘤效果良好。本发明方法简捷,产品活性高,拓宽了HB抑瘤的给药途径。
文档编号A61P35/00GK1329885SQ0112618
公开日2002年1月9日 申请日期2001年7月16日 优先权日2001年7月16日
发明者胡水根, 吴萍萍, 朱国平, 张吉德, 蔡定国, 杜罗喜, 卞俊 申请人:中国人民解放军第四一一医院