专利名称：取代苯烷基类－氧化氮合酶抑制剂、其制备方法及其用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及新的取代苯烷基类化合物、它们的制备方法、含有这些化合物的药用组合物以及它们的医疗用途，特别是作为一氧化氮合酶抑制剂的用途。
近年来在研究NOS抑制剂方面取得了不少进展，其中，含有异硫脲和胍结构的化合物具有较好的NOS抑制活性(Southan GJ，Szabo C.Biochem Pharmacol.1996，51383-394)。1997年，Shearer BG等(Shearer BG，et al.J Med Chem.1997，40(12)1901-1905)报道S-乙基-N-取代苯基异硫脲具有较强的NOS抑制作用，且对nNOS具有选择性。但它们在体内消除迅速，影响了其应用价值。
本发明设计并合成的一系列(取代)苯烷基异硫脲类和胍类化合物，通式如下 其中R1可以表示氢、3，4-亚甲二氧基或硝基；R2表示氢或C1-4的烷基；R3表示C1-4的烷硫基、氨基或C1-4的烷氨基；n＝1-5。优选的化合物为R2表示氢或甲基，R3表示甲硫基或乙硫基或氨基。更为优选的化合物为R1表示4-硝基，R2表示氢，R3表示氨基。
根据本发明，药学上可接受的盐包括与下列酸形成的酸加成盐盐酸、氢溴酸、硫酸、柠檬酸、酒石酸、磷酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、马来酸、苯磺酸上述通式的化合物及其药学上可接受的盐可以是(1)S-甲基-N-(3，4-亚甲二氧基苯基)乙基异硫脲氢碘酸盐(2)S-乙基-N-(3，4-亚甲二氧基苯基)乙基异硫脲氢碘酸盐(3)S-甲基-N-苯乙基异硫脲氢碘酸盐(4)S-乙基-N-苯乙基异硫脲氢碘酸盐(5)S-甲基-N-苄基异硫脲氢碘酸盐(6)S-乙基-N-苄基异硫脲氢碘酸盐(7)S-甲基-1-甲基-3-(4-硝基苯基)乙基异硫脲氢碘酸盐(8)S-乙基-1-甲基-3-(4-硝基苯基)乙基异硫脲氢碘酸盐(9)S-甲基-1-甲基-3-苯乙基异硫脲盐酸盐(10)S-乙基-1-甲基-3-苯乙基异硫脲氢碘酸盐(11)S-甲基-1-甲基-3-苄基异硫脲氢碘酸盐(12)S-乙基-1-甲基-3-苄基异硫脲盐酸盐(13)S-甲基-1-甲基-3-(3，4-亚甲二氧基)苯乙基异硫脲盐酸盐(14)S-乙基-1-甲基-3-(3，4-亚甲二氧基)苯乙基异硫脲氢碘酸盐(15)N-(3，4-亚甲二氧基苯基)乙基胍硫酸盐(16)N-(4-硝基苯基)乙基胍硫酸盐通式(I)化合物的制备方法如下当R2为氢、R3为烷硫基或烷胺基时，制备方法包括以下步骤将通式(II)的化合物与异硫氰酸苯甲酰酯(PhCONCS)反应，得中间体1-苯甲酰基-3-(取代)苯烷基硫脲，在碱性水溶液中加热水解，得中间体N-(取代)苯烷基硫脲，再与卤代烷反应得到R3为烷硫基的产物；该产物再与烷基胺反应，得到R3为烷胺基的产物。 当R2为烷基，R3为烷硫基、氨基或烷胺基时，制备方法包括以下步骤将通式(II)的化合物与异硫氰酸烃基酯在丙酮或C1-4醇或乙腈或N，N-二甲基甲酰胺等有机溶剂中反应，得中间体1-烃基-3-(取代)苯烷基硫脲，再与卤代烷反应得到R3为烷硫基的产物；该产物再与氨或烷基胺反应，得到R3为氨基或烷胺基的产物。
当R2为氢，R3为氨基时，制备方法包括以下步骤将通式(II)的化合物与S-烷基异硫脲反应，反应溶剂可以是C1-4的有机醇、乙腈、DMF以及它们与水组成的混合液。
药理测试结果表明，通式(I)的化合物及其药学上可接受的盐对体外神经细胞NOS均有不同程度的抑制作用，因此，式(I)化合物及其药学上可接受的盐可以用于治疗与NOS抑制剂有关的临床病症。这些病症包括神经退行性疾病、炎性疾病、休克状态、免疫疾病及胃肠蠕动紊乱等。
神经退行性疾病包括早老性痴呆症、帕金森氏症和舞蹈症。
化合物的部分药理活性测试方法如下取牛脑海马，置于0.25％的胰蛋白酶消化液中，在37℃，5％CO2条件下，孵育20-30分钟，用含小牛血清的DMEM培养液终止消化。将消化好的组织移入离心管中，加入2-3mlDMEM培养液，用吸管吹打数次，静置数分钟，吸取上层细胞悬液，用同样的培养液稀释成1.5×106细胞/ml，接种于预先用多聚赖氨酸涂布过的培养板上，置CO2培养箱中培养。取培养好的神经细胞，加入L-精氨酸和三个浓度的化合物溶液，同时设空白对照和阳性对照，培养两小时后，向每份样品中加入等量的Griess试剂(1％磺胺，0.1％盐酸萘乙二胺，3％磷酸)，混匀，静置3-5分钟，在722光删分光光度计上测定540nm处的吸收度。将测得的吸收度，在亚硝酸钠浓度标准曲线上变为相应的浓度，由统计学处理求出IC50值。以上药理活性测试方法参照文献报道的方法(Southan GJ，et al.Life Sci.1996，58(14)1139-1148；Wolff DJ，et al.JBiol Chem.1993，268(13)9425-9429)。
部分化合物药理测试结果如下化合物 IC50 化合物 IC501 7.21×10-610 5.06×10-52 3.27×10-611 9.37×10-53 4.47×10-512 8.13×10-74 4.67×10-513 1.43×10-65 3.11×10-514 1.74×10-76 8.46×10-615 7.67×10-77 3.26×10-416 5.22×10-88 2.23×10-7阳性对照药 9.50×10-79 7.64×10-5阳性对照药选用已报道的nNOS选择性抑制剂S-甲基N-对甲氧基苯基异硫脲(Shearer BG，et al.J Med Chem，1997，401901-1905)。
将(1b)1.5g(6.7mmol)溶于20ml甲醇中，加入CH3I 0.65ml(1.52g，10.7mmol)，回流4小时，浓缩得红色油状物。甲醇-乙醚重结晶，得淡粉红色晶体(1)1.8g，收率76.4％，mp60-61℃。Anal(C11H15N2O2SI；C％H％N％)Req36.01，4.10，7.65；Found35.78，4.27，7.40.IR(cm-1)3300，1650，1600，1500.1HNMR(90MHz，CDCl3-DMSO-d6)δ2.60(s，3H)，2.81(t，2H)，3.30(br，1H)，3.55(t，2H)，5.95(s，2H)，6.70-6.85(m，3H)，9.02(br，2H)，9.35(br，1H).MS(SCIm/z)239(M+1).
例2S-乙基-1-甲基-3-(4-硝基苯基)乙基异硫脲氢碘酸盐(8)的制备4-硝基苯乙胺(8a)将发烟硝酸90ml置于250ml三颈瓶中，冰盐浴冷却至0℃，快速搅拌下，滴加β-苯乙胺20g(165mmol)，滴毕，保温0-5℃搅拌2小时。倒入碎冰200g中，用40％NaOH调pH7.5-8，乙醚萃取3次，水层再用10％NaOH调pH10，用二氯甲烷萃取3次(25ml×3)，萃取液用饱和食盐水洗涤，活性炭脱色，无水硫酸钠干燥，室温减压浓缩得黄色液体(8a)19.4g。异硫氰酸甲酯(8b)将氢氧化钠36g(900mmol)溶于水80ml中，冰浴冷却至10-15℃，加入二硫化碳54.4ml(68.5g，900mmol)，机械搅拌下，于30分钟内滴入25％甲胺水溶液112g(900mmol)，逐渐升温至80℃，搅拌1.5小时，冷至35℃，滴加氯甲酸乙酯87.5ml(98g，900mmmol)，加毕，继续搅拌30分钟，分取上层液体，无水硫酸钠干燥，分馏，收集116-119℃馏份，得无色液体(8b)38.4g。1-甲基-3-(4-硝基苯基)乙基硫脲(8c)将(8a)1.2g(7.2mmol)溶于15ml无水乙醇中，加入(8b)0.75ml(0.8g，10.9mmol)，回流3小时，浓缩得橘红色粘稠液体，放冷后固化，柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝5～2/1)得(8c)1.2g。
取(8c)0.5g(2.1mmol)溶于5ml乙腈中，加入C2H5I 1.05g(0.55ml，6.3mmol)，于50℃反应5小时，浓缩得黄色油状物，柱层析(氯仿/甲醇＝99/1)得白色固体(8)0.4g，收率50％，mp138-139℃。Anal(C12H18N3O2SI；C％，H％，N％)Req36.46，4.56，10.63；Found 36.55，4.60，10.43IR(cm-1)3300，1620，1600，1500，1300，800.1HNMR(90MHz，CDCl3-DMSO-d6)δ1.31(t，3H)，2.85-3.30(m，7H)，3.78(t，2H)，7.56(d，2H)，8.15(d，2H)，9.0(br，2H).MS(SCI m/z)268(M+1)例3S-乙基-1-甲基-3-苄基异硫脲盐酸盐(12)的制备1-甲基-3-苄基硫脲(12a)将苄胺5g(46.6mmol)溶于无水乙醇30ml中，加入例2方法制备的(8b)5.1g(70mmol)，回流3小时，减压浓缩后，加适量石油醚/乙酸乙酯，冷却析晶，抽滤，得白色晶体(12a)6.4g，收率76.2％，mp76-78℃。
以(12a)为原料，类似(8)的方法，得黄色油状物。将该黄色油状物溶于水，用碳酸钾水溶液调pH11，二氯甲烷萃取，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物溶于丙酮，滴加饱和氯化氢无水乙醇溶液至pH2左右，再次减压浓缩，残留物以CHCl3/CH3OH为洗脱剂，快速柱层析，减压浓缩得无色油状物，冷后固化，得(12)，mp85-87℃Anal(C11H16N2S.HCl.H2O；C％，H％，N％)Req50.27，7.29，10.66；Found 50.11，7.55，10.97.IR(cm-1)3300，1620，1600，1500.1HNMR(90MHz，CDCl3)δ1.23(t，3H)，3.12(s，3H)，3.29(q，2H)，4.69(s，2H)，7.1-7.6(m，5H，ArH)，8.63(br，2H).MS(SCI m/z)209(M+1)例4S-乙基-1-甲基-3-(3，4-亚甲二氧基)苯乙基异硫脲氢碘酸盐(14)的制备1-甲基-3-(3’，4’-亚甲二氧基)苯乙基硫脲(14a)以3，4-亚甲二氧基苯乙胺为原料，类似(12a)的方法，浓缩得橘红色液体。以石油醚/乙酸乙酯为洗脱剂，进行梯度洗脱，得黄色固体(14a)，mp88-90℃。
以(14a)为原料，类似例2制备(8)的方法，得黄色油状物，放置后凝固为固体。以氯仿/乙酸乙酯/甲醇为洗脱剂，柱层析分离得(14)，mp166-167℃Anal(C13H18N2O2S.HI；C％，H％，N％)Req 39.60，4.86，7.11.Found 40.05，5.04，7.06.IR(cm-1)3200，1620，1600，1500，12501HNMR(90MHz，CDCl3-DMSO-d6)δ1.29(t，3H)，2.85(t，2H)，2.98(d，3H)，3.19(q，2H)，3.55(t，2H)，5.96(s，2H)，6.6-6.9(m，3H)，8.80(br，1H)，9.10(br，1H).MS(SCI m/z)267(M+1)例5N-(3，4-亚甲二氧基)苯乙基胍硫酸盐(15)的制备S-甲基异硫脲硫酸盐(15a)将硫脲30g(394mmol)溶于水15ml中，慢慢滴入硫酸二甲酯6.8g(539mmol)，升温至回流，反应3小时，放置过夜，过滤，晶体用95％乙醇洗涤，得白色晶体(15a)41g，收率84.5％，mp234℃将(15a)1.2g(8.62mmol)溶于50％乙醇20ml中，加入3，4-亚甲二氧基苯乙胺1.2g(7.26mmol)，回流6小时，浓缩得白色固体，用乙醇-水重结晶，得白色晶体。mp＞255℃Anal(C10H13N3O2.1/2H2SO4.H2O；C％，H％，N％)Req 43.79，5.88，15.32，Found44.04，5.74，15.06IR(cm-1)3300，1660，1630，1600，1500，1250.1HNMR(90MHz，CDCl3-DMSO-d6)δppm 2.70(t，2H)，3.23(t，2H)，5.92(s，2H)，6.70-6.85(m，3H)，7.71(br，4H)，8.55(br，1H)MS(ES(+)70V，m/z)208[M+H]+；例6N-对硝基苯乙基胍硫酸盐(16)的制备将用例5方法制备的(15a)7g(50mmol)溶于50％乙醇100ml中，加入对硝基苯乙胺(8a)7g(42mmol)，回流6小时，浓缩得淡黄色固体，用乙醇-水重结晶，得白色晶体(16)5.8g，收率53.5％，mp215-217℃。Anal(C9H12N4O2.1/2H2SO4；C％，H％，N％)Req42.02，5.09，21.78；Found 41.86，5.21，21.52IR(cm-1)3418，3131，1668，1640，1605，1515，1510，1346，1110，8531HNMR(90MHz，DMSO-d6)δ2.85(t，2H)，3.30(t，2H)，7.53(d，2H)，7.74(br，4H)，8.03(d，2H)，8.64(br，1H).MS(ES(+)70V，m/z)209[M+H]+；
权利要求
1.通式(I)的化合物及其药学上可接受的盐 其中R1表示氢、卤素、3，4-亚甲二氧基或硝基；R2表示氢或C1-4的烷基；R3表示C1-4的烷硫基、氨基或C1-4的烷氨基；n＝1-5。
2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于R2表示氢或甲基。
3.根据权利要求1或2所述的化合物，其特征在于R3表示甲硫基或乙硫基。
4.根据权利要求1或2所述的化合物，其特征在于R1表示3，4-亚甲二氧基，R2表示氢，R3表示氨基。
5.通式(I)化合物的制备方法，其特征在于当R2为氢、R3为烷硫基、烷胺基时，制备方法包括以下步骤将通式(II)的化合物与异硫氰酸苯甲酰酯反应，得中间体1-苯甲酰基-3-苯烷基硫脲，在碱性水溶液中加热水解，得中间体N-苯烷基硫脲，再与卤代烷反应得到R3为烷硫基的产物该产物再与烷基胺反应，得到R3为烷胺基的产物； 当R2为烷基，R3为烷硫基、氨基或烷胺基时，制备方法包括以下步骤将通式(II)的化合物与异硫氰酸烃基酯在丙酮或C1-4醇或乙腈或N，N-二甲基甲酰胺等有机溶剂中反应，得中间体1-烃基-3-苯烷基硫脲，再与卤代烷反应得到R3为烷硫基的产物；该产物再与氨或烷基胺反应，得到R3为氨基或烷胺基的产物；当R2为氢，R3为氨基时，制备方法包括以下步骤将通式(II)的化合物与S-烷基异硫脲反应，反应溶剂可以是C1-4的有机醇或乙腈或DMF或它们与水组成的混合液。
6.通式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于预防或治疗与NO合酶抑制剂有关的临床疾病的药物中的用途。
7.按照权利要求6的方法，其中所述临床疾病选自败血性休克、肠炎、风湿性关节炎、大脑缺血损伤、早老性痴呆。
全文摘要
本发明涉及新的通式为(I)的化合物,其中R
文档编号A61P9/10GK1388118SQ0211318
公开日2003年1月1日 申请日期2002年6月18日 优先权日2002年6月18日
发明者徐云根, 张敬新, 华维一, 朱东亚 申请人:中国药科大学