专利名称：青蒿素及其脂溶性衍生物乳剂的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种抗癌药物的制备方法，具体地说是一种利用青蒿素及其脂溶性衍生物制备乳剂的方法以及在治疗肿瘤和心率失常方面的应用。
2、技术背景青蒿素及其脂溶性衍生物现市场主要以片剂抗疟为主，以其疗效确切、毒副作用低而广为应用。青蒿素之所以能够控制疟疾，是因为它能够与疟原虫内部的高浓度铁元素发生反应，青蒿素与铁元素接触发生化学反应能产生称为“自由基”的带电原子向疟原虫的细胞膜发起攻击，冲破细胞膜以后就将单细胞的疟原虫杀死。根据青蒿素抗疟原理，美国华盛顿赖亨利教授发布了关于青篙素具有神奇的杀死癌细胞作用的信息。根据赖亨利教授的理论癌症细胞分裂时需要大量铁元素才能复制DNA，因此，癌细胞所含铁元素的量比正常细胞要高出许多。通过用患有严重骨癌的狗作试验，用药16小时后，几乎所有癌细胞均死亡。所以赖亨利教授称“它有可能成为无毒的抗癌药”。根据试验进一步证明，青蒿素及其脂溶性衍生物不但有效，而且选择性非常强，对癌细胞有很高的毒性，但对正常细胞的影响很小。青蒿素及其脂溶性衍生物在癌症治疗方面国内外专家也已进行了大量研究，广州中医药大学、中国军事医学科学院临床试验也表明，青蒿素具有一定的抗癌作用，且毒副作用小。现虽已有“青蒿琥酯和二氢青蒿素抗血管生成作用的药物制剂及用途”的专利，但青蒿素及其脂溶性衍生物在人类攻克癌症这一技术领域仅仅是开始，仍需在用药机理、药物科学配伍、制药工艺、提高疗效、减少毒副作用以及癌症治疗广普性等技术问题作大量深入的研究。另外由于青蒿素及其脂溶性衍生物药物不溶于水，在临床作为注射制剂应用时需采用聚氧乙烯蓖麻油和无水乙醇(50∶50)作为助溶载体，由于前者易导致组织胺释放会使患者产生严重的过敏反应。
3、发明内容本发明的目的在于增加青蒿素对癌组织的靶向性，在避免抑制癌细胞生长的同时，减少对人体正常细胞造成的毒副作用而提供一种疗效确切、毒副作用小的青蒿素及其脂溶性衍生物乳剂新型抗癌药物制剂。
4、实施方式本发明的原料的重量比组成为乳化剂0.1-9.9份、青蒿素或其脂溶性衍生物100-1份、注射用油0.2-1份、表面活性剂适量，制备步骤为按比例称取卵磷脂或大豆磷脂与青蒿素或其脂溶性衍生物和表面活性剂混合均匀，然后与经水化超声处理的注射用油混合通过高压射流乳匀机使其微乳化制剂，最后经灌装机灌瓶包装制成乳剂。
原料的重量比组成为乳化剂3-8份、青蒿素或其脂溶性衍生物90-20份、注射用油0.3-0.8份。
原料的重量比组成为乳化剂5.5份、青蒿素或其脂溶性衍生物60份、注射用油0.65份。
乳化剂是指卵磷脂或大豆磷脂其中的一种。
青蒿素的脂溶性衍生物是指青蒿琥酯、双氢青蒿素、蒿甲醚其中的一种。
所得药物中的微乳粒径控制在0.05-1.0μm，包封率应≥95.0％。
所得药物可静脉注射用药也可作口服用药。
所得药物可用于肺、肝、淋巴等系统肿瘤的治疗。
该药物还可用于肿瘤放疗和化疗过程中的辅助治疗以及作为抗心率失常药物使用。
实施例配方一、卵磷脂5.5份、青蒿素30份、注射用油0.65份。
配方二、大豆磷脂7份、青蒿素60份、注射用油1份。
配方三、大豆磷脂5份、青蒿琥酯40份、注射用油0.5份配方四、卵磷脂6份、双氢青蒿素50份、注射用油0.7份。
配方五、卵磷脂6份、蒿甲醚55份、注射用油0.7份制备步骤按比例称取乳化剂、青蒿素或其脂溶性衍生物和适量表面活性剂与经水化超声处理的注射用油混合，进一步超声处理后，通过高压射流乳匀机使其微乳化，得微乳粒径为0.05-1.0μm，包封率≥99.2％的微乳液，灌瓶包装即为成品。
产品检验形态观察、粒径及其分布测定取样品溶液经超速冷冻离心分离后，取沉淀物，加蒸馏水少量使分散后的电镜抽样铜网上，自然干燥后，放人电镜中，观察形态并拍照。
取微乳样品适量，稀释至主药浓度为0.5mg/ml，用粒径测定仪经乱反射测定微乳粒径及分布。电镜下观察青蒿素微乳呈均匀规则的球形粒子。
试验测得的青蒿素微乳粒径分布均匀，平均直径为(80±14)μm，在50-100μm范围内的微乳占总数93.55％以上。依据乳剂分散相液滴的大小，
该乳剂属于微乳。粒径小于100μm的乳剂有较好的稳定性和生物利用度。包封率及载药量取微乳10mg，加入磷酸盐缓冲液(PH7.0)10ml，5000r/min，离心5min，取沉淀溶于甲醇并定容一定体积，采用RP-HPLC测定游离青蒿素量，计算公式 取上清液，加入胰脂肪酶1000U，混匀后置37℃保温8h，待微乳完全消解后，5000r/min离心5min，取沉淀，用甲醇溶解定容至一定体积经PR-HPLC测定微乳内青蒿素含量。计算公式 按4mg/Kg剂量单位次耳缘静脉和口服给药，分别于给药后不同时间白兔另一耳缘静脉取血5ml，于2000-3000r/min离心10min，分离血浆。取血浆300μl，以地西泮为内标，用叔丁基甲醚两步提取，常温下氮气吹干，残渣用移动相溶解，进样20μl。
标准曲线制作精密称取青蒿素标准品，用空白血浆分别制作浓度为0.03，0.10，0.50，1.00，2.00，3.00，5.00mg/l的标准系列，其操作同血浆标本处理方法。以青蒿素浓度C为横坐标，青蒿素峰高于内标峰高之比为纵坐标绘制标准曲线。
本分析方法和标准曲线在16.4-3500μg/ml血浆浓度范围内呈良好的线性关系，最低检测浓度为10g/ml，回收率88.1-91.8％。
数据处理方法血药浓度数据用中国药理学会数学药理委员会编制的3p87药动学程序进行处理。药—时曲线下的面积(auc-∞)由梯形法求得，并经对数转换后进行方差分析。
本实验采用兔以泰素静脉注射制剂为参比标准，侧得静脉和口服青蒿素微乳的绝对生物利用度分别为(107±2)％和22.4％，但口服吸收机制尚不清楚，有待进一步进行药代动力学的研究。
青蒿素属一种水不溶性药物，单纯口服其生物利用度几近于零。经微乳化处理，兔口服生物利用度达到22.4％。
临床效果，该乳剂注射液静注后，不同粒径的微乳在不同部位定向缓慢释放，使作用时间延长，提高药物的生物利用度，降低毒副作用，不仅静脉注射具有更好的生物利用度，并且口服用药的生物利用度也有所提高。
动物试验大鼠体重200～240g，雌雄兼用，ip乌抗坦1.2g/kg麻醉，随机分4组，每组12只。用恒速泵以2ug/min的速度尾静脉注人乌头碱液。对照组iv乌头碱后出现室性早搏和室性心动过速的时间分别为3.3±0.5min(x±SD)，4.2±0.7min，青蒿素微乳剂20mg/kg，40mg/kg，80mg/kg组大鼠口服后1小时后、室性早搏和室性心动过速发生时间分别为3.8±0.6min(P＞0.05)；4.9±0.8min(P＞0.05)；4.7±0.7(P＜0.01)，5.8±0.8(P＜0.01)5.1±0.8(P＜0.01)，6.2±0.9(P，0.01)，证明青蒿素微乳剂对乌头碱诱发大鼠室性心律失常有明显抑制作用，呈剂量依赖性加强。
青蒿素微乳剂对哇巴因诱发豚鼠心律失常作用取体重280-320g的豚鼠，ip乌抗坦麻醉。各组动物首先iv 50ug/kg哇巴因，然后用恒速泵以6ug/min速度iv哇巴因。观察各组随机分成5组，每组12只，空白组给生理盐水，青蒿素微乳组为20mg/kg，40mg/kg，80mg/k8，维拉帕米5mg/kg，各组均给哇巴因前1小时口服灌胃给药。观察各组给哇巴因后室性早搏，室速发生时间。空白组iv哇巴因后，室性早搏和室速发生时间分别为3.7±1.2min，4.0±1.0min。青蒿素微乳20mg/kg组为3.9±1，0min(P＞0.05)，4.5±1.1min(P＞0.05)；青蒿素微乳40mg/kg组为4.4±0。9mi(P＜0.05)，6.2±0.8min(P＜0.01)；青蒿素微乳80mg/ke组为5.9±1.3min(P＜0.01)，9.0±1.5min(P＜0.01)，维拉帕米组5.1±0.9min(P＜0.01)，6.7±1.1min(P＜0.01)。表明青蒿素微乳对哇巴因诱发的心律失常有明显抑制作用。
青蒿素微乳制剂对室性快速心律失常患者的30例疗效观察本病例组男21例，女9例，年龄8-62岁。因这些患者的室性心律失常大多数是心肌炎后遗症，少数是冠心病所引起，其中29例为频发性室性早搏，1例为反复发作性短阵室性心动过速，病程为1-18年。所有患者在接受青蒿素微乳治疗前，均使用过1-5种抗心律失常药物，其中包括胺碘酮，普鲁卡因酰胺，慢心律、心得安、异搏定。多数患者服用这些药物后疗效不理想，少数患者虽取得一定疗效，但因无法耐受其副作用未能坚持服药。
患者在服用青蒿素乳剂乳剂治疗期间，每周复查1次，均听诊1分钟，并作心电图检查，计算每分钟室早搏次数。评价指标为，治疗后1分钟听诊和1分钟心电图记录到的室性早搏次数的平均数比治疗前减少超过50％为有效，治疗后完全消失为显效。此外分析室性心率，P-R间期，QRS时间和Q-T间期等指标。
本发明涉及的青蒿素或其脂溶性衍生物O/W微乳，具有良好的水溶性，粒径达到0.05-1.0μm，是一种控释缓释剂型，对肿瘤组织具有靶向作用，不仅静脉注射具有更好的生物利用度，并且口服用药的生物利用度也有所提高。因此本发明的药物及制备方法与现有技术相比具有制备工艺简单，药物制剂粒径可控，安全可靠；生物利用度高；降低放疗、化疗药物的毒副作用，可用于肺癌、肝癌、淋巴癌的治疗和辅助治疗，对心率失常也具有很好的疗效。
权利要求
1.青蒿素及其脂溶性衍生物乳剂的制备方法，其特征在于原料的重量比组成为乳化剂0.1-9.9份、青蒿素或其脂溶性衍生物100-1份、注射用油0.2-1份、表面活性剂适量，制备步骤为按比例称取卵磷脂或大豆磷脂与青蒿素或其脂溶性衍生物和表面活性剂混合均匀，然后与经水化超声处理的注射用油混合通过高压射流乳匀机使其微乳化制剂，最后经灌装机灌瓶包装制成乳剂。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于原料的重量比组成为乳化剂3-8份、青蒿素或其脂溶性衍生物90-20份、注射用油0.3-0.8份。
3.根据权利要求1-2所述的方法，其特征在于原料的重量比组成为乳化剂5.5份、青蒿素或其脂溶性衍生物60份、注射用油0.65份。
4.根据权利要求1-3所述的方法，其特征在于乳化剂是指卵磷脂或大豆磷脂其中的一种。
5.根据权利要求1-4所述的方法，其特征在于青蒿素的脂溶性衍生物是指青蒿琥酯、双氢青蒿素、蒿甲醚其中的一种。
6.根据权利要求1-5所述的方法，其特征在于所得药物中的微乳粒径控制在0.05-1.0μm，包封率应≥95.0％。
7.根据权利要求1-6所述的方法，其特征在于所得药物可静脉注射用药也可作口服用药。
8.根据权利要求1-7所述的方法，其特征在于所得药物可用于肺、肝、淋巴等系统肿瘤的治疗。
9.根据权利要求1-8所述的方法，其特征在于该药物还可用于肿瘤放疗和化疗过程中的辅助治疗以及作为抗心率失常药物使用。
全文摘要
本发明提供一种青蒿素及其脂溶性衍生物乳剂的制备方法，原料的重量比组成为乳化剂0.1－9.9份、青蒿素或其脂溶性衍生物100－1份、注射用油0.2－1份、表面活性剂适量，制备步骤为按比例称取卵磷脂或大豆磷脂、青蒿素或其脂溶性衍生物及表面活性剂混合均匀，然后与经水化超声处理的注射用油混合通过高压射流乳匀机使其微乳化制剂，最后经灌装机灌瓶包装制成乳剂。本发明的乳剂，具有良好的水溶性，粒径达到0.05－1.0μm，具有控释和对肿瘤组织有靶向作用，不仅静脉注射具有更好的生物利用度，而且口服用药的生物利用度也有所提高，与现有技术的同类药物相比具有制备工艺简化，药物制剂粒径可控，安全可靠；生物利用度高；可用于肺癌、肝癌、淋巴癌的治疗和辅助治疗，对心率失常也具有很好的疗效。
文档编号A61K9/107GK1559404SQ20041002373
公开日2005年1月5日 申请日期2004年3月12日 优先权日2004年3月12日
发明者阎勇, 田景振, 郭敬兰, 阎 勇 申请人:山东居仁生物医药技术研究所