专利名称：一种莪术注射制剂及其制备方法
技术领域：
本发明属于中药制药技术领域，具体涉及一种莪术注射制剂及其制备方法。
背景技术：
2-羟丙基-β-环糊精(简称HP-β-CD)是一类β-环糊精的羟烷基化衍生物。β-环糊精(β-CD) 的每一个葡萄糖残基中有C-2、C-3和C-6中3个羟基的氢原子可以被羟丙基(-CHCHOHCH)取代，取代后生成2-HP-β-CD、3-HP-β-CD、2，3-DHP-β-CD、2，6-DHP-β-CD、2，3，6-THP-β-CD等同系物。若控制条件也可以生成以2-HP-β-CD为主的产物。2-HP-β-CD是目前研究最多、工作做得最充分、收集的安全性方面资料最全面、对药物增溶和提高稳定性效果最好的CD衍生物.2-HP-β-CD的很多性质发生改变，主要表现为以下几个方面(1)2-HP-β-CD为非结晶性粉末，β-CD固体为结晶性粉末；(2)溶解性质变化，2-HP-β-CD在水中的溶解度大于50％，并可溶于醇溶液，而β-CD水溶性比较差，常温下(25℃)在水中的溶解度只有1.85％，在醇溶液中可结晶；(3)2-HP-β-CD肾毒性低，可用于非肠道给药途径，β-CD非肠道给药具有肾毒性，所以只能口服而不能用于非肠道给药的处方；(4)2-HP-β-CD不被胃酸和α-淀粉酶水解，几乎不参与生物体内代谢，也不蓄积，口服后基本上全部以完整的形态随大便排出体外，非肠道给药基本上以完整的形态随尿排出；(5)β-CD与药物形成复合物对药物有缓释作用，而2-HP-β-CD与药物形成复合物对药物有促释作用， 使药物在生物体内迅速释放；(6)β-CD有溶血作用，非肠道给药也有一定的刺激性，2-HP-β-CD表面活性低，基本上没有溶血性和刺激性。
环糊精对药物的包和率和包结率是考察制备工艺技术参数，包合率的定义为包合率＝〔包合物的重量/(2-HP-β-CD的重量+加入药物的重量)〕×100％)，包结率的定义为包结率＝(回收的药物的重量/加入的药物重量×空白回收率)×100％。目前，β-CD对脂溶类药物的包和率只有60％左右，因为脂溶类药物在中药提取特别困难，包和率低会使大量经过高难度提取的脂溶性药物得不到充分利用，对中药资源是巨大的浪费，降低中药制剂的药理药效；包结率在目前制剂工艺过程中也没有得到很好的解决，被β-CD包合的脂溶性药物释放度较低，导致脂溶性药物的浓度低，药理作用不能充分发挥。
莪术为姜科植物莪术Curcuma aerugionosa Roxb.的根茎，具有行气破血、消积止痛的作用，现代药理研究表明，从莪术中提取得到的有效部位具有抗癌、抗病毒、止痛、止痒等作用，以莪术有效部位制成的注射剂、栓剂、软膏剂已广泛应用于临床；莪术的有效部位为脂溶性成分，难溶于水，上市的莪术注射制剂，主要采用一些表面活性剂助溶，如吐温等，但这些助溶剂具有溶血的副作用，在临床应用中具有很大的限制，对患者也存在潜在的危险性；专利申请号为02109680的专利，采用搅拌法或研磨法或超声振荡法，用羟丙基-β-环糊精对莪术有效部位进行包合，专利中提到包合率在相同包合条件下，只是羟丙基-β-环糊精的用量的不同，使的包合率从62％跨越到95％，其可信度值得怀疑，并且该专利对羟丙基-β-环糊精的包结率未做任何实验和阐述。
发明内容
基于上述原因，本发明对提取纯化的莪术的脂溶性有效部位采用低温饱和法，用2-HP-β-CD进行包合，使莪术有效部位的包合率达到90％以上、包结率达到80％以上，得到的莪术有效部位包合物与药用辅料混合，制备成水针制剂、输液制剂、粉针剂、冻干粉针剂，药理实验结果表明，本发明的莪术注射制剂具有更好的药理作用。
本发明通过以下技术方案实现的。
一.工艺制法(1)取莪术，粉碎，放入挥发油提取器中，提取挥发油完全，挥发油备用；提取挥发油后的残渣用6倍量80％乙醇提取两次，第一次2小时，第2次1小时，过滤，合并提取液，滤液减压回收乙醇，并浓缩至相对密度为1.10-1.20(50℃)左右的浸膏，浸膏用等量醋酸乙酯萃取6次，合并醋酸乙酯萃取液，减压回收醋酸乙酯至尽，浓缩干燥备用；(2)取莪术挥发油和乙醇提取物，加入乙醇溶解完全，同时按照莪术挥发油和乙醇提取物2-羟丙基β-环糊精＝1∶20-60的比例，将2-羟丙基β-环糊精用蒸馏水制成饱和溶液，放入30℃-40℃的水浴中，严格控制好温度，等到2-羟丙基β-环糊精饱和水溶液达到水浴温度，进行搅拌，缓慢滴加溶解完全的莪术挥发油和乙醇提取物，继续搅拌12-24小时，在冰箱放置12-24小时，30℃-40℃干燥，得到莪术有效部位包合物；(3)将莪术有效部位与药用辅料混合，制备成水针制剂或输液制剂或粉针剂或冻干粉针剂。
二.检测分析气相色谱法测定莪术醇的含量实验仪器日本岛津GC-9A型气相色谱仪；C-R3A微处理机。
实验药品莪术醇对照品(中国药品生物制品检定所提供)莪术油注射液(黑龙江庆安制药股份有限公司提供)按照专利申请号为02109680的专利进行制备的莪术注射液(北京乾露春科技有限公司实验室提供)
本发明莪术注射制剂(北京乾露春科技有限公司实验室提供)色谱条件3.2mm*2m玻璃填充柱；担体chromosorb WAW60-80目；固定液OV-17；检测器FID；柱温155℃；进样口及检测温度220℃；N2为载气50ml/min，Air500ml/min；实验方法精密称取对照品适量，加无水乙醇配制成5mg/ml，精密量取对照品溶液1.25、2.5、5.0、10.0、20.0ml分别置于50ml容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，每种浓度进样2微升，连续进样3次，得到回归方程为Y＝994.2+5314.8X，r＝0.996.
将样品用乙醇提取完全，精密量取2ml置50ml容量瓶，用乙醇稀释至刻度，摇匀，每种浓度进样2微升，连续进样3次，进行计算，得到结果见表1表1各组制剂莪术醇含量比较莪术醇含量组别mg/每次用量市售莪术油注射液 7.412专利申请号为02109680的莪术注射液9.501本发明莪术水针剂 14.793本发明莪术输液剂 14.801本发明莪术粉针剂 14.797本发明莪术冻干粉针剂 14.795结论通过上述分析检测实验，本发明的有效成分含量均有所提高，充分说明本发明的工艺具有实际意义。
三.包和率和包结率的测定
实验药物本发明工艺进行包合的莪术有效部位的包合物(北京乾露春科技有限公司实验室提供)按照专利申请号为02109680的专利进行制备的莪术包合物(北京乾露春科技有限公司实验室提供)实验方法取包合物置圆底烧瓶中，加入蒸馏水150ml及少许沸石蒸馏4h，用挥发油测定器提取挥发油，待冷却30min后测定挥发油体积，进行三次实验(注经测定，1ml混合挥发油重0.9218g)包结率＝(回收的挥发油体积/加入的挥发油体积×空白回收率)×100％[空白回收率分别(1)为91.2％(2)为91.0％]包合率＝〔包合物的重量/(环糊精的重量+加入挥发油的重量)〕×100％。根据公式计算，见表2表2包合物包和率和包结率的比较脂溶性药环糊精 包合物量 包和率 回收挥发油量 包结率药物 物或挥发油量用量(mg)(mg) (％) (V/ml) (％)(V/ml)本发明包合1.000 30.05528.499 92.0 0.8265 82.7物专利申请号为02109680 1.000 30.00827.332 88.4 0.7746 77.5的包合物结论通过上述实验本发明的工艺制备的包合物的包合率和包结率均有明显提高，充分说明本发明的工艺具有实际意义。
四.药理实施例实施例1对小鼠S180肿瘤生长抑制作用实验动物健康小鼠，体重16-20g，雌雄各半。(北京中医药大学提供)瘤株小鼠S180(北京中医药大学提供)实验药物生理盐水(北京乾露春科技有限公司实验室提供)莪术油注射液(黑龙江庆安制药股份有限公司提供)按照专利申请号为02109680的专利进行制备的莪术注射液(北京乾露春科技有限公司实验室提供)本发明莪术注射制剂(北京乾露春科技有限公司实验室提供)实验方法取接种传代小鼠S180，在匀浆器中加入生理盐水，制成小鼠S180瘤匀浆液，再以生理盐水1∶3稀释，然后取0.2ml注入小鼠左腋下皮下，24小时称重，小鼠每日尾静脉给药一次，给药容积相同(0.5ml/只)，共7天。停药次日处死小鼠，称体重并细心剥离皮下瘤块，于EM50电子天平称取瘤重，并计算抑瘤率，见表3表3各组制剂对小鼠S180肿瘤生长抑制作用组别 瘤体重量 mg 抑瘤率％生理盐水1.4965100市售莪术油注射液1.028931.2**按照专利申请号为02109680的专利进行制备的羲术注射液0.976533.7**本发明水针剂 0.889340.6** #本发明输液剂 0.879641.2** #本发明粉针剂 0.882641.0** #本发明冻干粉针剂0.879141.3** #注与生理盐水组比较**P＜0.01，与阳性对照组比较#P＜0.05实施例2采用半体内法作抗病毒作用试验实验药物生理盐水(北京乾露春科技有限公司实验室提供)
莪术油注射液(黑龙江庆安制药股份有限公司提供)按照专利申请号为02109680的专利进行制备的莪术注射液(北京乾露春科技有限公司实验室提供)本发明莪术注射制剂(北京乾露春科技有限公司实验室提供)实验方法实验采用半体内法，正常对照组及病毒对照组，将不同浓度的药物分别与病毒直接作用，立即接种于鸡胚尿囊腔中，用石蜡封接种孔，置37℃孵箱培养48h，收取每胚之尿液，用0.5％鸡红血球凝集试验，判断药物的抗病毒活性，结果见表4。对乙型流感病毒的影响接种方法、药物剂量同甲型流感病毒实验。结果见下表4。
表4对流感病毒的作用比较组别 甲型流感病毒 乙型流感病毒生理盐水 +++ +++市售莪术油注射液 + ++按照专利申请号为02109680的专利进行制备的莪术注射液 - +本发明水针剂- -本发明输液剂- -本发明粉针剂- -本发明冻干粉针剂 - -注-代表无病毒生长，+代表少量病毒生长，++代表较多病毒生长，+++代表大量病毒生长结论通过药理实验表明，本发明的各组制剂具有更好的药理作用。
五.制备实施例实施例1(1)取莪术，粉碎，放入挥发油提取器中，提取挥发油完全，挥发油备用；提取挥发油后的残渣用6倍量80％乙醇提取两次，第一次2小时，第2次1小时，
过滤，合并提取液，滤液减压回收乙醇，并浓缩至相对密度为1.10(50℃)左右的浸膏，浸膏用等量醋酸乙酯萃取6次，合并醋酸乙酯萃取液，减压回收醋酸乙酯至尽，浓缩干燥备用；(2)取莪术挥发油和乙醇提取物，加入乙醇溶解完全，同时按照莪术挥发油和乙醇提取物2-羟丙基β-环糊精＝1∶20的比例，将2-羟丙基β-环糊精用蒸馏水制成饱和溶液，放入30℃的水浴中，严格控制好温度，等到2-羟丙基β-环糊精饱和水溶液达到水浴温度，进行搅拌，缓慢滴加溶解完全的莪术挥发油和乙醇提取物，继续搅拌12小时，在冰箱放置12小时，30℃干燥，得到莪术有效部位包合物；(经检测莪术有效部位包合物的包合率为92.1％，包结率为82.7％)(3)制剂处方为水针剂处方莪术有效部位包合物50克，氯化钠150克；输液剂处方莪术有效部位包合物200克，氯化钠600克；粉针剂处方莪术有效部位包合物50克，甘露醇150克；冻干粉针剂处方莪术有效部位包合物50克，甘露醇150克；(4)将莪术有效部位与药用辅料混合，制备成水针制剂1000瓶或输液制剂1000瓶或粉针剂1000瓶或冻干粉针剂1000瓶。(经检测上述注射制剂每次用药量中有效成分莪术醇含量为10.0mg)实施例2(1)取莪术，粉碎，放入挥发油提取器中，提取挥发油完全，挥发油备用；提取挥发油后的残渣用6倍量80％乙醇提取两次，第一次2小时，第2次1小时，过滤，合并提取液，滤液减压回收乙醇，并浓缩至相对密度为1.20(50℃)左右的浸膏，浸膏用等量醋酸乙酯萃取6次，合并醋酸乙酯萃取液，减压回收醋酸乙酯至尽，浓缩干燥备用；(2)取莪术挥发油和乙醇提取物，加入乙醇溶解完全，同时按照莪术挥发油和乙醇提取物2-羟丙基β-环糊精＝1∶60的比例，将2-羟丙基β-环糊精用蒸馏水制成饱和溶液，放入40℃的水浴中，严格控制好温度，等到2-羟丙基β-环糊精饱和水溶液达到水浴温度，进行搅拌，缓慢滴加溶解完全的莪术挥发油和乙醇提取物，继续搅拌24小时，在冰箱放置24小时，40℃干燥，得到莪术有效部位包合物；(经检测莪术有效部位包合物的包合率为92.6％，包结率为82.9％)(3)制剂处方为水针剂处方莪术有效部位包合物50克，葡萄糖150克；输液剂处方莪术有效部位包合物200克，氯化钠600克；粉针剂处方莪术有效部位包合物50克，蔗糖150克；冻干粉针剂处方莪术有效部位包合物50克，蔗糖150克；(4)将莪术有效部位与药用辅料混合，制备成水针制剂1000瓶或输液制剂1000瓶或粉针剂1000瓶或冻干粉针剂1000瓶。(经检测上述注射制剂每次用药量中有效成分莪术醇含量为15.0mg)实施例3(1)取莪术，粉碎，放入挥发油提取器中，提取挥发油完全，挥发油备用；提取挥发油后的残渣用6倍量80％乙醇提取两次，第一次2小时，第2次1小时，过滤，合并提取液，滤液减压回收乙醇，并浓缩至相对密度为1.15(50℃)左右的浸膏，浸膏用等量醋酸乙酯萃取6次，合并醋酸乙酯萃取液，减压回收醋酸乙酯至尽，浓缩干燥备用；(2)取莪术挥发油和乙醇提取物，加入乙醇溶解完全，同时按照莪术挥发油和乙醇提取物2-羟丙基β-环糊精＝1∶30的比例，将2-羟丙基β-环糊精用蒸馏水制成饱和溶液，放入32℃的水浴中，严格控制好温度，等到2-羟丙基β-环糊精饱和水溶液达到水浴温度，进行搅拌，缓慢滴加溶解完全的莪术挥发油和乙醇提取物，继续搅拌14小时，在冰箱放置16小时，32℃干燥，得到莪术有效部位包合物；(经检测莪术有效部位包合物的包合率为93.2％，包结率为83.5％)(3)制剂处方为水针剂处方莪术有效部位包合物50克，葡萄糖150克；输液剂处方莪术有效部位包合物200克，氯化钠600克；粉针剂处方莪术有效部位包合物50克，乳糖150克；冻干粉针剂处方莪术有效部位包合物50克，乳糖150克；(4)将莪术有效部位与药用辅料混合，制备成水针制剂1000瓶或输液制剂1000瓶或粉针剂1000瓶或冻干粉针剂1000瓶。(经检测上述注射制剂每次用药量中有效成分莪术醇含量为11.3mg)实施例4(1)取莪术，粉碎，放入挥发油提取器中，提取挥发油完全，挥发油备用；提取挥发油后的残渣用6倍量80％乙醇提取两次，第一次2小时，第2次1小时，过滤，合并提取液，滤液减压回收乙醇，并浓缩至相对密度为1.14(50℃)左右的浸膏，浸膏用等量醋酸乙酯萃取6次，合并醋酸乙酯萃取液，减压回收醋酸乙酯至尽，浓缩干燥备用；(2)取莪术挥发油和乙醇提取物，加入乙醇溶解完全，同时按照莪术挥发油和乙醇提取物2-羟丙基β-环糊精＝1∶40的比例，将2-羟丙基β-环糊精用蒸馏水制成饱和溶液，放入35℃的水浴中，严格控制好温度，等到2-羟丙基β-
环糊精饱和水溶液达到水浴温度，进行搅拌，缓慢滴加溶解完全的莪术挥发油和乙醇提取物，继续搅拌15小时，在冰箱放置15小时，35℃干燥，得到莪术有效部位包合物；(经检测莪术有效部位包合物的包合率为91.8％，包结率为82.0％)(3)制剂处方为水针剂处方莪术有效部位包合物50克，氯化钠150克；输液剂处方莪术有效部位包合物200克，氯化钠600克；粉针剂处方莪术有效部位包合物50克，甘露醇、蔗糖共150克；冻干粉针剂处方莪术有效部位包合物50克，甘露醇、乳糖共150克；(4)将莪术有效部位与药用辅料混合，制备成水针制剂1000瓶或输液制剂1000瓶或粉针剂1000瓶或冻干粉针剂1000瓶。(经检测上述注射制剂每次用药量中有效成分莪术醇含量为13.2mg)实施例5(1)取莪术，粉碎，放入挥发油提取器中，提取挥发油完全，挥发油备用；提取挥发油后的残渣用6倍量80％乙醇提取两次，第一次2小时，第2次1小时，过滤，合并提取液，滤液减压回收乙醇，并浓缩至相对密度为1.15(50℃)左右的浸膏，浸膏用等量醋酸乙酯萃取6次，合并醋酸乙酯萃取液，减压回收醋酸乙酯至尽，浓缩干燥备用；(2)取莪术挥发油和乙醇提取物，加入乙醇溶解完全，同时按照莪术挥发油和乙醇提取物2-羟丙基β-环糊精＝1∶45的比例，将2-羟丙基β-环糊精用蒸馏水制成饱和溶液，放入36℃的水浴中，严格控制好温度，等到2-羟丙基β-环糊精饱和水溶液达到水浴温度，进行搅拌，缓慢滴加溶解完全的莪术挥发油和乙醇提取物，继续搅拌18小时，在冰箱放置22小时，38℃干燥，得到莪术有效部位包合物；(经检测莪术有效部位包合物的包合率为92.2％，包结率为82.7％)(3)制剂处方为水针剂处方莪术有效部位包合物50克，葡萄糖150克；输液剂处方莪术有效部位包合物200克，氯化钠600克；粉针剂处方莪术有效部位包合物50克，甘露醇、蔗糖、乳糖共150克；冻干粉针剂处方莪术有效部位包合物50克，蔗糖、乳糖共150克；(4)将莪术有效部位与药用辅料混合，制备成水针制剂1000瓶或输液制剂1000瓶或粉针剂1000瓶或冻干粉针剂1000瓶。(经检测上述注射制剂每次用药量中有效成分莪术醇含量为13.8mg)实施例6(1)取莪术，粉碎，放入挥发油提取器中，提取挥发油完全，挥发油备用；提取挥发油后的残渣用6倍量80％7醇提取两次，第一次2小时，第2次1小时，过滤，合并提取液，滤液减压回收乙醇，并浓缩至相对密度为1.19(50℃)左右的浸膏，浸膏用等量醋酸乙酯萃取6次，合并醋酸乙酯萃取液，减压回收醋酸乙酯至尽，浓缩干燥备用；(2)取莪术挥发油和乙醇提取物，加入乙醇溶解完全，同时按照莪术挥发油和乙醇提取物2-羟丙基β-环糊精＝1∶50的比例，将2-羟丙基β-环糊精用蒸馏水制成饱和溶液，放入39℃的水浴中，严格控制好温度，等到2-羟丙基β-环糊精饱和水溶液达到水浴温度，进行搅拌，缓慢滴加溶解完全的莪术挥发油和乙醇提取物，继续搅拌22小时，在冰箱放置18小时，38℃干燥，得到莪术有效部位包合物；(经检测莪术有效部位包合物的包合率为92.9％，包结率为81.7％)
(3)制剂处方为水针剂处方莪术有效部位包合物50克，氯化钠150克；输液剂处方莪术有效部位包合物200克，葡萄糖600克；粉针剂处方莪术有效部位包合物50克，甘露醇、乳糖共150克；冻干粉针剂处方莪术有效部位包合物50克，甘露醇、蔗糖共150克；(4)将莪术有效部位与药用辅料混合，制备成水针制剂1000瓶或输液制剂1000瓶或粉针剂1000瓶或冻干粉针剂1000瓶。(经检测上述注射制剂每次用药量中有效成分莪术醇含量为14.8mg)实施例7(1)取莪术，粉碎，放入挥发油提取器中，提取挥发油完全，挥发油备用；提取挥发油后的残渣用6倍量80％乙醇提取两次，第一次2小时，第2次1小时，过滤，合并提取液，滤液减压回收乙醇，并浓缩至相对密度为1.17(50℃)左右的浸膏，浸膏用等量醋酸乙酯萃取6次，合并醋酸乙酯萃取液，减压回收醋酸乙酯至尽，浓缩干燥备用；(2)取莪术挥发油和乙醇提取物，加入乙醇溶解完全，同时按照莪术挥发油和乙醇提取物2-羟丙基β-环糊精＝1∶55的比例，将2-羟丙基β-环糊精用蒸馏水制成饱和溶液，放入34℃的水浴中，严格控制好温度，等到2-羟丙基β-环糊精饱和水溶液达到水浴温度，进行搅拌，缓慢滴加溶解完全的莪术挥发油和乙醇提取物，继续搅拌24小时，在冰箱放置12小时，32℃干燥，得到莪术有效部位包合物；(经检测莪术有效部位包合物的包合率为92.6％，包结率为82.6％)(3)制剂处方为水针剂处方莪术有效部位包合物100克，葡萄糖300克；
输液剂处方莪术有效部位包合物400克，氯化钠1200克；粉针剂处方莪术有效部位包合物100克，蔗糖、乳糖300克；冻干粉针剂处方莪术有效部位包合物100克，甘露醇、蔗糖300克；(4)将莪术有效部位与药用辅料混合，制备成水针制剂2000瓶或输液制剂2000瓶或粉针剂2000瓶或冻干粉针剂2000瓶。(经检测上述注射制剂每次用药量中有效成分莪术醇含量为14.3mg)
权利要求
1.一种莪术注射制剂，其特征在于采用低温饱和法将莪术有效部位用2-羟丙基β-环糊精对进行包合，使莪术有效部位包合率达到90％以上、包结率达到80％以上；其特征还在于本发明注射制剂每次用药有效成分莪术醇的含量为10-15mg。
2.根据权利要求1所述的一种莪术注射制剂的制备方法，其特征包括以下步骤(1)取莪术，粉碎，放入挥发油提取器中，提取挥发油完全，挥发油备用；提取挥发油后的残渣用6倍量80％乙醇提取两次，第一次2小时，第2次1小时，过滤，合并提取液，滤液减压回收乙醇，并浓缩至相对密度为1.10-1.20(50℃)左右的浸膏，浸膏用等量醋酸乙酯萃取6次，合并醋酸乙酯萃取液，减压回收醋酸乙酯至尽，浓缩干燥备用；(2)取莪术挥发油和乙醇提取物，加入乙醇溶解完全，同时按照莪术挥发油和乙醇提取物2-羟丙基β-环糊精＝1∶20-60的比例，将2-羟丙基β-环糊精用蒸馏水制成饱和溶液，放入30℃-40℃的水浴中，严格控制好温度，等到2-羟丙基β-环糊精饱和水溶液达到水浴温度，进行搅拌，缓慢滴加溶解完全的莪术挥发油和乙醇提取物，继续搅拌12-24小时，在冰箱放置12-24小时，30℃-40℃干燥，得到莪术有效部位包合物；(3)将莪术有效部位与药用辅料混合，制备成水针制剂、输液制剂、粉针剂、冻干粉针剂。
全文摘要
本发明公开了一种莪术注射制剂及其制备方法，其特征在于采用低温饱和法将莪术有效部位用2－羟丙基β－环糊精对进行包合，使莪术有效部位包合率达到90％以上、包结率达到80％以上，得到莪术有效部位包合物加入药用辅料，制备成水针制剂、输液制剂、粉针剂、冻干粉针剂，药理实验结果表明，本发明的莪术注射制剂具有更好的药理作用。
文档编号A61P31/12GK1586604SQ200410071179
公开日2005年3月2日 申请日期2004年7月30日 优先权日2004年7月30日
发明者张正生 申请人:张正生