含有稠合吡咯并咔唑的成颗粒组合物的制作方法

专利名称：含有稠合吡咯并咔唑的成颗粒组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及含有稠合吡咯并咔唑或其衍生物的非含水的成颗粒药物组合物。本发明还涉及在本发明成颗粒组合物与水介质接触后产生的稳定的溶液。本发明还涉及医疗方法，包括用本发明的组合物或溶液治疗受试者。
背景技术：
稠合吡咯并咔唑显示不同的药理学活性。例如，稠合吡咯并咔唑可以用于治疗神经疾病或紊乱，而其中一些则显示杀真菌，抗微生物，或抗肿瘤活性。在一些情况下，通过对蛋白激酶活性的作用而调节神经营养反应而实现(Berg等J.Biol.Chem.26713-16(1992))。已经从不同的微生物分离到稠合的咔唑和其衍生物，包括S.staurosporeus，N.aerocoligenes，马杜拉放线菌(Actinomadura)和诺卡氏放线菌(Nocardiopsis sp)，(Kase等，Biochem.Biophys.Res.Commun.142436-440，(1987))。
已经表征的具体的稠合吡咯并咔唑，比如吲哚并咔唑，包括以下staurosporine和rebeccamycin(Moody等，同上)；K-252a，K-252b(Kase等，同上)；K-252c(也称作staurosporine aglycon)(Moody等，同上)，K-252d和其衍生物(公开的日本专利申请60-257652，60-295172，62-327858，62-327859，和60-295173)。K-252a，K-252b，K-252c，和K-252d不溶于水(Nakanishi等，J.Antibodies，341066，(1986))。
通常，稠合吡咯并咔唑显示很低的水溶性。可以包含聚乙二醇和聚乙烯吡咯烷酮的staurosporine衍生物的干药物制剂(糖丸，片剂和胶囊)已经描述于美国专利No.5,093,330。包括吲哚并咔唑的常规药物制剂描述于美国专利No.5,043,335和PCT公开WO93/00909中。含水的吲哚并咔唑组合物描述于美国专利No.5,599,808。
已经开发了用于显示很低水溶性但是良好油溶性的药物的自乳化药物递送系统(“SEDDS”)。参见，如Shah等，International Journal ofPharmaceutics(荷兰)10615-23，(1994)。尽管稠合的咔唑水溶解性低，但由于油溶性也低，它们不适宜用于SEDDS。
发明概述因此，本发明的一个目的是提供含有稠合吡咯并咔唑或其衍生物的成颗粒组合物。具体的，本发明的组合物是非含水的，并包含适量的足以使得稠合吡咯并咔唑或其衍生物形成颗粒的表面活性剂。
本发明的另一个目的是提供包含口服后生物利用度大大改善的含有悬浮的稠合吡咯并咔唑颗粒的稳定悬浮液。
本发明的另一个目的是提供形成含有稠合吡咯并咔唑颗粒的稳定悬浮液的方法，包括将本发明的成颗粒组合物与水介质接触。
本发明的另一个目的是提供治疗哺乳动物疾病或紊乱的方法，包括给药治疗有效量的本发明的成颗粒组合物。
这些及其他目的通过以下详细说明而变得明显，本发明人发现稠合吡咯并咔唑和其衍生物可以与合适浓度的一种或者多种表面活性剂配制成非含水的成颗粒组合物，其中该组合物在与水介质接触后自发分散成为悬浮颗粒。
发明详述因此，在一种实施方案中，本发明提供非含水的成颗粒组合物，其包含稠合吡咯并咔唑和表面活性剂。在优选实施方案中，所述稠合吡咯并咔唑具有通式I 或其立体异构体或药物可接受的盐形式，其中环B和环F独立地选自a)不饱和的6-元碳环的芳环，其中1到3个碳原子可以被氮原子取代；b)不饱和5-元碳环的芳环；和c)不饱和5-元碳环的芳环，其中或者1)一个碳原子被氧，氮，或硫取代；.
2)两个碳原子被硫和氮，氧和氮，或两个氮取代；或3)三个碳原子被三个氮取代；G-X-W选自a)-(Z1Z2)C-N(R1)-C(Z1Z2)-；b)-CH(R1)-C(＝O)-N(R1)-；和c)-N(R1)-C(＝O)-CH(R1)-；Z1和Z2每次出现时独立地选自H，H；H，OR；H，SR；H，N(R)2；以及其中Z1和Z2共同形成的部分选自＝O，＝S，和＝NR的基团；前提是Z1和Z2对中至少一个形成＝O；R选自H，具有1到6个碳的取代的或未取代的烷基，OH，具有1到4个碳的烷氧基，OC(＝O)R1a，OC(＝O)NR1cR1d，O(CH2)pNR1cR1d，O(CH2)pOR1b，具有6到10个碳的取代或未取代的芳烷基，和取代或未取代的杂芳烷基；R1独立地选自
a)H，具有1到6个碳的取代或未取代的烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的芳烷基，取代或未取代的杂芳基，和取代或未取代的杂芳烷基；b)C(＝O)R1a；c)OR1b；d)C(＝O)NHR1b，NR1cR1d，(CH2)pNR1cR1d，(CH2)pOR1b，O(CH2)pOR1b和O(CH2)pNR1cR1d；R1a选自取代或未取代的烷基，取代或未取代的芳基和杂芳基；R1b选自H和具有1到6个碳的取代或未取代的烷基；R1c和R1d各自独立地选自H，1到4个碳的取代或未取代的烷基，和通式-(CH2)2-X1-(CH2)2-的连接基团；X1选自-O-，-S-和-CH2-；R2选自H，SO2R2a，CO2R2a，C(＝O)R2a，C(＝O)NR2cR2d，和1到8个碳的烷基，2到8个碳的烯基，2到8个碳的炔基，其中1)各烷基，烯基，和炔基被取代；或2)各烷基，烯基，和炔基被1-3个R5取代；R2a选自1到6个碳的烷基，芳基，OR2b，CONH2，NR2cR2d，(CH2)pNR2cR2d，和O(CH2)pNR2cR2d；R2b选自H和1到6个碳的取代或未取代的烷基；R2c和R2d各自独立地选自H，1到6个碳的取代或未取代的烷基，和通式-(CH2)2-X1-(CH2)2-的连接基团；R3和R4每次出现时独立地选自a)H，芳基，杂芳基，F，Cl，Br，I，CN，CF3，NO2，OH，OR9，O(CH2)pNR11R12，OC(＝O)R9，OC(＝O)NR11R12，O(CH2)pOR10，CH2OR10，NR11R12，NR10S(＝O)2R9，和NR10C(＝O)R9；b)CH2OR14；c)NR10C(＝O)NR11R12，CO2R10，C(＝O)R9，C(＝O)NR11R12，CH＝NOR10，CH＝NR10，(CH2)pNR11R12，(CH2)pNHR14，和CH＝NNR11R12；d)S(O)yR9，(CH2)pS(O)yR9，CH2S(O)yR14；e)具有1到8个碳的烷基，具有2到8个碳的烯基，和具有2到8个碳的炔基，其中1)各烷基，烯基，或炔基是被取代的；或2)各烷基，烯基，或炔基被1到3个R5取代；R5选自具有6到10个碳的芳基，杂芳基，芳烷氧基，杂环烷氧基，羟基烷氧基，烷氧基-烷氧基，羟基烷基硫代，烷氧基-烷基硫代，F，Cl，Br，I，CN，NO2，OH，OR9，X2(CH2)pNR11R12，X2(CH2)pC(＝O)NR11R12，X2(CH2)pOC(＝O)NR11R12，X2(CH2)pCO2R9，X2(CH2)pS(O)yR9，X2(CH2)pNR10C(＝O)NR11R12，OC(＝O)R9，OC(＝O)NHR10，O-四氢比喃基，NR11R12，NR10C(＝O)R9，NR10CO2R9，NR10C(＝O)NR11R12，NHC(＝NH)NH2，NR10S(O)2R9，S(O)yR9，CO2R10，C(＝O)NR11R12，C(＝O)R9，CH2OR10，CH＝NNR11R12，CH＝NOR10，CH＝NR9，CH＝NNHCH(N＝NH)NH2，S(＝O)2NR11R12，P(＝O)(OR10)2，OR14，和具有5到7个碳的单糖，其中单糖的各羟基独立地是未取代或被H、具有1到4个碳的烷基、具有2到5个碳的烷基羰基氧基、或具有1到4个碳的烷氧基取代；X2是O，S，或NR10；Q选自1)NR6；2)1-3个碳的未取代的亚烷基；3)1-3个碳的取代的亚烷基；4)CH＝CH，CH(OH)CH(OH)，O，S，S(＝O)，S(＝O)2，C(＝O)，C(＝NOR11)，C(OR11)(R11)，C(＝O)CH(R13)，CH(R13)C(＝O)，C(R10)2，C(＝NOR11)CH(R13)，CH(R13)C(＝NOR11)，CH2Z，Z-CH2，CH2ZCH2；Z选自C(R11)(OR11)，O，S，C(＝O)，C(＝NOR11)和NR11；R6选自H，SO2R2a，CO2R2a，C(＝O)R2a，C(＝O)NR1cR1d，和1-8个碳的烷基，2-8个碳的烯基，2-8个碳的炔基，其中1)各烷基，烯基和炔基是未取代的；2)各烷基，烯基和炔基是用1-3个R5取代；或替代的是，当Q是NR6或C(R10)2，R6或一个R10与R2连接形成
其中R7和R8各自独立地选自H，OH，具有1到6个碳的烷基，1到6个碳的烷氧基，6到10个碳的取代或未取代的芳烷基，取代或未取代的杂芳烷基，(CH2)pOR10，(CH2)pOC(＝O)NR11R12，和(CH2)pNR11R12；或R7和R8共同形成通式CH2-X3-CH2的连接基团；X3是键，O，S，或NR10；R9选自1到6个碳的烷基，(CH2)r芳基和(CH2)r杂芳基；R10选自H，1到6个碳的烷基，(CH2)r芳基和(CH2)r杂芳基；R11和R12每次出现时独立地选自1)H和1到6个碳的取代或未取代的烷基；或2)R11和R12共同形成-(CH2)2-X1-(CH2)2-；Y选自O，S，N(R10)，N+(O-)(R10)，N(OR10)，和CH2；J选自以下键，O，CH＝CH，S，C(＝O)，CH(OR10)，N(R10)，N(OR10)，CH(NR11R12)，C(＝O)N(R17)，N(R17)C(＝O)，N(S(O)yR9)，N(S(O)yNR11R12)，N(C(＝O)R17)，C(R15R16)，N+(O-)(R10)，CH(OH)CH(OH)，和CH(O(C＝O)R9)CH(OC(＝O)R9)；R13选自1到4个碳的烷基，芳基，和7到14个碳的芳烷基；R14是羧基的羟基被除去后的氨基酸残基；R15和R16每次出现时，选自H，OH，C(＝O)R10，O(C＝O)R9，烷基-OH，和CO2R10；R17选自H，烷基，芳基，和杂芳基；m和n独立地选自0，1，和2；p独立地选自1，2，3，和4；r独立地选自0，1，和2；和y独立地选自0，1和2。
在一些优选实施方案中，环B和环F是苯基。在其他优选实施方案中，G-X-W选自CH2NR1C(＝O)，C(＝O)NR1CH2，和C(＝O)NR1C(＝O)。在其他优选的实施方案中，Q是NR6。
在其它的优选实施方案中，所述稠合吡咯并咔唑具有通式II-a 在一些优选实施方案中，Z1和Z2是H，R3和R4选自H，烷基，Cl，Br，CH2OH，CH2SOCH2CH3，CH2SO2CH2CH3，NHCONHC6H5，CH2SCH2CH3，CH2SC6H5，NHCO2CH3，CH2OC(＝O)NHCH2CH3，N(CH3)2，CH＝NNH，CH2N(CH3)2，CH2OCH2CH3，R7选自H和烷基，而R15和R16独立地选自H，烷基，OH，CH2OH，烷氧基，和CO2烷基。在一些更优选实施方案中，稠合的咔唑为表1-A和1-B中所列的吲哚并咔唑。
在某些优选实施方案中，所述成颗粒组合物还包含一种或者多种有机溶剂，脂质，或抗氧化剂。在某些优选实施方案中，表面活性剂的量至少大约20％(w/w)。在某些更优选实施方案中，表面活性剂的量至少大约40％(w/w)。在某些更优选实施方案中，表面活性剂的量至少大约50％(w/w)。
在某些优选实施方案中，表面活性剂选自聚乙二醇硬脂酸酯，d-α-生育酚聚丁二酸乙二醇酯，硬脂酸聚烃氧基酯(poloxyl stearate)，聚烃氧基蓖麻油(poloxyl castor oil)，聚氧化乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯，聚乙二醇醚，饱和的聚乙二醇化甘油酯，聚乙二醇的脂肪酸酯，羟基化卵磷脂，中链单甘油酯，中链脂肪酸酯，和聚乙二醇/丙二醇共聚物。在其它的优选实施方案中，所述脂质是可可脂肪酸和丙二醇的二酯。在其它的优选实施方案中，有机溶剂选自丙二醇，碳酸异丙烯酯，二甲基异山梨醇，和聚乙二醇(PEG)。在其它的优选实施方案中，抗氧化剂选自抗坏血酸，抗坏血酸的脂肪酸酯，和丁基化羟基苯甲醚。
在某些优选实施方案中，所述稠合吡咯并咔唑存在的浓度为大约1到大约300mg/ml。在某些更优选实施方案中，稠合吡咯并咔唑存在的浓度为大约1到大约100mg/ml。在某些更优选的实施方案中，浓度为大约1到大约50mg/ml。
在某些实施方案中，所述组合物在室温下是半固体或固体。在某些更优选实施方案中，半固体或固体是胶囊或片剂的形式。
在另一个实施方案中，本发明提供含有稠合吡咯并咔唑颗粒在含水的悬浮介质中的稳定悬浮液。在某些优选实施方案中，颗粒直径小于大约400nm。在某些更优选实施方案中，颗粒直径小于大约100nm。
在另一个实施方案中，本发明提供含有稠合吡咯并咔唑悬浮颗粒的稳定悬浮液的形成方法，包括将稠合吡咯并咔唑在含有大约20％到大于99％的表面活性剂的非含水液体中与水介质接触。在优选的方法中，成颗粒组合物与水介质在体外接触。在优选的方法中，成颗粒组合物与水介质在体内接触。
在另一个实施方案中，本发明提供含有稠合吡咯并咔唑悬浮颗粒的稳定悬浮液的形成方法，包括(a)将稠合吡咯并咔唑溶解在含有大约20％到大于99％的表面活性剂的非含水液体中，以形成成颗粒组合物；和(b)将成颗粒组合物与水介质接触以形成稳定悬浮液。
在另一个实施方案中，本发明提供治疗哺乳动物疾病或紊乱的方法，包括对哺乳动物给药治疗有效量的稠合吡咯并咔唑的非含水的成颗粒组合物，该组合物包括含量至少20％(w/w)的表面活性剂。
在另一个实施方案中，本发明提供治疗哺乳动物疾病或紊乱的方法，包括(a)将稠合吡咯并咔唑的非含水的成颗粒组合物与水介质接触，以形成包含悬浮颗粒的稳定悬浮液，所述组合物包括含量至少20％(w/w)的表面活性剂；和(b)对哺乳动物给药治疗有效量的该稳定悬浮液。
在某些优选实施方案中，所述表面活性剂存在的量至少40％(w/w)。在其它的优选实施方案中，所述疾病或紊乱是神经紊乱，或癌症比如前列腺癌。在其它的优选实施方案中，对象是哺乳动物。
此处所述材料，方法，和例子是用作说明性的，而不是打算限制本发明的范围。此处提到的所有出版物，专利申请，专利，及其他参考文献皆引作参考。除非另外规定，所有的技术术语和科学名词表示其在本领域公认的意思。
本发明涉及非含水的成颗粒组合物，其包含稠合吡咯并咔唑，和表面活性剂。在与水介质接触后，成颗粒组合物自发分散成为悬浮颗粒，从而形成稳定悬浮液，提供大大改进的口服给药稠合吡咯并咔唑化合物的生物利用度。
本发明的成颗粒组合物在室温下可以是液体，半固体，或固体。如果是液体，所述组合物可以包含在胶囊中。如果是半固体或固体，所述组合物可以是胶囊或片剂的形式。
如此处使用的“非含水的”组合物是表示按重量计算包含0％到大约10％水的组合物。如此处使用的“成颗粒组合物”是表示在进入水介质后自发分散成为悬浮颗粒的组合物。如此处使用的“悬浮悬浮颗粒”是表示微胶粒，微球体，小滴，或其它基本上非晶体的物理结构，其保持悬浮在水介质中，无需实质性相分离。如此处使用的，“水介质”是表示包含大于10％水的任何介质，其中本发明的组合物是成颗粒的。
开始，稠合吡咯并咔唑溶解在非含水的成颗粒组合物中。随后，所述成颗粒组合物与水介质接触以形成含水悬浮体。在与水介质接触后，含有稠合吡咯并咔唑的非含水的成颗粒组合物自发形成合适大小的颗粒，即，无需能量输入。因此，与直接放置在可比较的含有预制颗粒的含水悬浮液中相比，当最初溶解在非含水的成颗粒组合物中时，稠合吡咯并咔唑可以具有更高溶解性。
所述成颗粒组合物可以与含水的介质在体外接触，即，在被哺乳动物摄入前进行预稀释。或者，与水介质的最初接触可以是在体内，例如，与哺乳动物胃肠组成的含水内容物接触。
成颗粒组合物经受预稀释，稀释率优选从大约1∶1000(1份制剂对999份水介质)到大约1∶2(1份制剂对1份水介质)。更优选，所述稀释率从大约1∶500(1份制剂对499份水介质)到大约1∶3(1份制剂对2份水介质)。作为常规指导，用于给药到人的方便的比率为大约1∶250，其大致对应于1mL单位剂量分散在8-盎司玻璃杯的含水液体中。
还发现得到的悬浮着含有稠合吡咯并咔唑颗粒的溶液是稳定的悬浮液。优选，包含在这个介质中的颗粒直径小于400nm。更优选，颗粒直径小于100nm。
含有一定量制剂的给定体积的水的光学透明度是有用的粒径指示。这是因为颗粒散射可见光，颗粒越多引起越大的散射。通常，光学透明度越大，粒径越小。高光学透明度，即，不可见或接近不可见的带蓝色的混浊，通常指示粒径小于100nm。清楚的带蓝色的混浊通常表明粒径从大约100nm到大约400nm。不受理论的限制，值得注意的是对于给定制剂粒径趋向于基本是常数，而不管稀释率如何。如果颗粒没能形成，可以增加稀释率用于促进颗粒形成。
本发明的制剂在室温下是液体、半固体或固体，这取决于组分的选择，或其它的考虑例如商业寿命，给药等等。例如，半固体或固体制剂便于制造单位剂量的胶囊形成的稠合吡咯并咔唑，包括硬的明胶和软的明胶胶囊，和片剂。当液体或固体制剂接触水介质，例如胃肠液体，制剂分散成为其中稠合吡咯并咔唑为生物学可利用的悬浮颗粒。
其惰性组分(即，除了稠合吡咯并咔唑外的组分)在室温下全是液体的组合物可以通过简单混合组分无需加热而制备。可以称重所需量的稠合吡咯并咔唑并溶解在惰性组分的混合物中，无需加热。适度加热，优选小于60C，可以被用于加速惰性组分的完全混合，加速稠合吡咯并咔唑的溶出，或以上两个方面。
含有一种或者多种室温下是固体的组分的组合物的制备在中温下进行，优选小于60℃。虽然适度加热可能有用，但过度的加热会导致制剂中一种或者多种组分分解。例如，聚山梨酯80的分解可以以温度高于60℃发生。在存在短链聚乙二醇如，PEG 400的情况下在温度大约60-90℃观察到某些稠合吡咯并咔唑的不稳定性。
如果保持在90C超过一个小时可以发生聚山梨酯80的分解。本领域技术人员将理解，加热的任何有害影响随着时间积累。因此，当使用加热时，通常时间和温度将彼此保持平衡。
本发明所有的成颗粒组合物的制剂具有宽的范围。优选，成颗粒组合物中所有的非稠合吡咯并咔唑组分是食品级材料或GRAS(一般认为安全)材料。关于GRAS材料的资料可以在，由美国食品和药品监督局(药物信息资源部，Rockville，MD)出版的“非活性成分指南(InactiveIngredient Guide)”中找到，其公开的内容在此以其全文引为参考。非活性成分指南提供目前市场销售用于人类的已批准或有条件地批准的药物产品中所有非活性成分的列表。
本发明的组合物还可以优选包含表面活性剂。尽管所述表面活性剂可以以任何形成成颗粒组合物的量存在，通常组合物包含大约20％到大于99％的表面活性剂。优选，取决于组合物另外的组分，表面活性剂的量至少30％，至少40％，或至少50％。
表面活性剂包括，但是不限于，聚氧化乙烯硬脂酸酯，聚氧化乙烯蓖麻油，聚氧化乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯(聚山梨酯)，聚乙二醇醚，饱和的聚乙二醇化甘油酯，聚乙二醇脂肪酸酯，羟基化卵磷脂，中链单甘油酯，中链脂肪酸酯，聚乙二醇/丙二醇共聚物，聚乙二醇硬脂酸酯，d-α-生育酚聚丁二酸乙二醇酯，硬脂酸聚烃氧基酯(如Myrjs52)和聚烃氧基蓖麻油。
聚氧化乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯(聚山梨酯)是非离子型表面活性剂(去污剂)，其可以由脂肪酸的混合物组成。可商业购得的例子是Tween20(聚氧化乙烯(20)山梨糖醇酐单月桂酯)，Tween s40(聚氧化乙烯(20)山梨糖醇酐单棕榈酯)，和Tween s80(聚氧化乙烯(20)山梨糖醇酐单油酸酯)。
优选的聚乙二醇醚是非离子型表面活性剂PEG-4-异辛基苯基醚。可商业购得的聚乙二醇醚表面活性剂的例子是TritonX-100，TritonX-114，TritonX-405，和TritonN-101。优选非离子型表面活性剂。
其它有用的表面活性剂的例子是饱和的聚乙二醇化的甘油酯，由聚乙二醇的单、二或三甘油酯，聚乙二醇的二脂肪酸酯组成，如，Gelucire44/14；羟基化卵磷脂，如，CentroleneA；中链单甘油酯，如，单辛酸甘油酯(Imwitor308，CapmulMCM C-8)；中链单甘油酯和甘油二酯，如，辛酸/癸酸甘油酯(CapmulMCM)；聚乙二醇/丙二醇共聚物，环氧乙烷和环氧丙烷的嵌段共聚物(如，Poloxamer 188，PluronicF-68)；乙氧基化蓖麻油(如，CremophorEL)；和乙氧基化羟基硬脂酸(如，SolutoloHS 15)。一些表面活性剂在室温下是固体或半固体，如，Poloxamer 188，单辛酸甘油酯，和Gelucire 44/14。其他的表面活性剂是那些在由药物出版社，伦敦和美国药学会(1994)出版的The Handbookof Pharmaceutical Excipients，第二版中找到的表面活性剂，该手册内容是本领域通用的，在此以其全文引作参考。
所述成颗粒组合物还可包括有机溶剂，脂质，抗氧化剂，或这些组分的组合。这样的组分包括在The Handbook of PharmaceuticalExcipients找到的组分，并包括任何本领域技术人员公知的药物制剂应用中可接受的组分。合适的组分由本领域技术人员选择。
在本发明的一些实施方案中，包含有机溶剂改善稠合吡咯并咔唑在成颗粒组合物中的溶解性。某些有用的有机溶剂在室温下形成固体(或半固体)，如聚乙二醇1450。有机溶剂的效力可以部分地取决于包含在成颗粒组合物中具体的稠合吡咯并咔唑。作为常规的指导，有机溶剂包括但是不限于，碳酸异丙烯酯，二甲基异山梨醇，苯甲醇，和二醇比如丙二醇和聚乙二醇(PEG)。此处使用的“聚乙二醇”或“PEG”表示通式H(OCH2CH2)nOH的液体或固体聚合物，其中n至少4。
在本发明的一些实施方案中，合适的抗氧化剂被包括作为成颗粒组合物的组分。如此处使用的“抗氧化剂”表示任何对延迟氧化变质或抑制由氧或过氧化物促进的反应有用处的物质。抗氧化剂包含但是不限于抗坏血酸；抗坏血酸的脂肪酸酯，如棕榈酸抗坏血酸酯；丁基化羟基甲苯(“BHT”)；没食子酸丙酯；和丁基化羟基苯甲醚(“BHA”)。合适的抗氧化剂还包括抗氧化剂的混合物，例如BHA，没食子酸丙酯和柠檬酸的混合物。当稠合吡咯并咔唑包含对氧化敏感的官能团如硫醇或硫醚时，抗氧化剂是特别有用的。这种稠合吡咯并咔唑的具体的例子是吲哚并咔唑化合物IIa-51，其包含两个硫醚官能团。抗氧化剂可以通过清除氧化化合物或抑制氧化反应而起作用。
在本发明的一些实施方案中，合适的脂质被包括作为成颗粒组合物的组分。如此处使用的“脂质”是表示脂肪，油，蜡，甾醇，甘油醚，甘油三酯，或其组合。包含脂质可以改变粒子特性，包括粒径。脂质可以改变粒子特性的一种方法是通过形成微乳而不是微胶粒。脂质引起的粒子特性的变化还可以影响生物利用度。
尽管此处描述的组合物可以令人信服地使用具有差的水溶性特性的任何医疗物质，成颗粒组合物优选包含稠合吡咯并咔唑。优选稠合吡咯并咔唑存在于成颗粒组合物中的浓度为1到300mg/ml。更优选，所述稠合吡咯并咔唑存在的浓度为1到100mg/ml。更优选，所述稠合吡咯并咔唑存在的浓度大约1到50mg/ml。
如此处使用的“稠合吡咯并咔唑”表示具有稠合吡咯并咔唑核心结构的化合物 其中G，X，或W中至少一种是氮，B是芳基或杂芳基，而*表示其他稠环系统的连接点。
此处提供的核心结构被呈现作为常规指导，而不是用于限制本发明的范围。例如，为了说明性的目的某些核心显示存在某些原子。应当理解这类原子可以键合到另外的基团，或可以被取代而不偏离本发明的精神。
因此，吡咯并咔唑核心结构包括但是不限于到通式Ia的结构 其中Q可以是含有一个或者多个氮或碳的部分。这种结构包括但是不限于吲哚并咔唑，茚并咔唑和桥联的茚并咔唑。
这里使用的“吲哚并咔唑”指通式Ia的化合物，其中Q是氮，Y是键 这些化合物包括但是不限于，其中咔唑的氮和吲哚形成环状桥联部分的结构
这样的桥联结构包括但是不限于，称为K-252a的微生物衍生的材料的衍生物。
如此处使用的“茚并咔唑”表示通式Ia的化合物，其中Q不是氮。这些化合物包括但是不限于，其中Q是一个或者多个碳的化合物。例如，在某些茚并咔唑中，Q是单个碳 如此处使用的“桥联茚并吡咯并咔唑”表示通式Ia的化合物，其中Q是含有至少一个碳的部分，其与咔唑衍生物的氮连接形成桥联部分 适于本发明的成颗粒组合物的稠合吡咯并咔唑是稳定的化合物。如此处使用的“稳定的化合物”或“稳定结构”用于表示足够稳定以致在从反应混合物分离至有用的纯度中幸存的化合物，并优选能够配制成有效的治疗剂。
所述稠合吡咯并咔唑还可以是取代的。如此处使用的“取代”是指所示原子上一个或多个氢原子被此处称作“取代基”的选定基团取代，条件是不超过取代的原子的化合价，而且取代导致形成稳定的化合物。
如此处使用的术语“烷基”表示具有1到8个碳原子的直链，环状，或支链烷基，比如甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，异丁基，仲丁基，叔丁基，戊基，异戊基，新戊基，1-乙基丙基，己基，辛基，环丙基，和环戊基。含有烷基的基团例如烷氧基，烷氧羰基，和烷基氨基羰基的烷基部分，具有与上述定义的烷基相同的意思。低级烷基，其是优选的，表示上述定义的包含1到4个碳的烷基。
取代基包含的烷基和烷基部分例如芳烷基，烷氧基，芳烷氧基，羟基烷氧基，烷氧基烷氧基，羟基烷基硫代，烷氧基烷基硫代，烷基羰基氧基，羟烷基和酰氧基可以是取代或未取代的。取代的烷基具有1到3个独立选择的取代基，优选羟基，低级烷氧基，低级烷氧基烷氧基，取代或未取代的芳烷氧基低级烷氧基，取代或未取代的杂芳烷氧基低级烷氧基，取代或未取代的芳烷氧基，取代或未取代的杂环烷氧基，卤素，羧基，低级烷氧羰基，硝基，氨基，单或二低级烷基氨基，dioxolane，二噁烷，二硫戊环，二硫酮，呋喃，内酯，或内酰胺。
如此处使用的术语“烯基”包括具有至少一个碳碳双键的直链，环状，或支链的烃链。烯基的例子包括乙烯基，丙烯基，3-甲基丁烯基，和环已烯基。如此处使用的术语“炔基”包括具有至少一个碳碳三键的直链，环状，或支链烃链。炔基的例子包括乙炔基，丙炔基，3-甲基丁炔基，和环己炔基。
如此处使用的含酰基的基团比如酰氧基的“酰基”部分包括具有1到6个碳原子的直链，支链，或环状的烷酰基的基团，比如甲酰基，乙酰基，丙酰基，丁酰基，戊酰基，新戊酰基或己酰基。
如此处使用的术语“碳环”是指其中环部分只由碳原子构成的环状基团。这些环状基团包括，但是不限于环丙基，环丁基，环戊基，环己基，环庚基，环辛基。术语“碳环的芳环”包括其还是芳环的碳环。术语“杂环基”和“杂环”是指其中环部分包括至少一个杂原子例如O，N，或S的环状基团。杂环基团包括杂芳基和杂烷基。
如此处使用的术语“芳基”指具有6到12个碳原子的芳环，比如苯基，联苯基和萘基。优选的芳基包括未取代或取代的苯基和萘基。如此处使用的术语“杂芳基”表示其中一个和多个环碳原子被杂原子(即非碳原子)例如O，N或S取代的芳基。优选的杂芳基包括吡啶基，嘧啶基，吡咯基，呋喃基，噻吩基，咪唑基，三唑基，四唑基，喹啉基，异喹啉基，苯并咪唑基，噻唑基，吡唑基，和苯并噻唑基。术语“杂烷基”表示其中一个和多个环碳原子被杂原子比如O，N，或S取代的环烷基。
如此处使用的术语“芳烷基”(或“芳基烷基”)用以表示具有7到15个碳、由带有芳基的烷基组成的基团。芳烷基的例子包括但是不限于苯甲基，苯乙基，二苯甲基和萘基甲基。取代的芳基，取代的杂环和取代的芳烷基各自具有1到3个独立地选择的取代基，其优选低级烷基，羟基，低级烷氧基，羧基，低级烷氧羰基，硝基，氨基，单或二低级烷基氨基，和卤素。
与氮原子形成的优选的杂环基团包括吡咯烷基，哌啶基，哌啶子基，吗啉基，吗啉代，硫代吗啉基，N-甲基哌嗪基，吲哚基，异吲哚基，咪唑，咪唑啉，恶唑啉，唑，三唑，噻唑啉，噻唑，异噻唑，噻二唑，三嗪，异噁唑，羟吲哚，吲哚氧基，吡唑，吡唑啉酮，嘧啶，吡嗪，喹啉，异喹啉，和四唑基团。与氧原子形成的优选的杂环基团包括呋喃，四氢呋喃，吡喃，苯并呋喃，异苯并呋喃，和四氢吡喃基团。与硫原子形成的优选的杂环基团包括噻吩，硫茚，四氢噻吩，四氢噻喃和苯并噻吩。
如此处使用的“羟烷基”基团是其上连接羟基的烷基。如此处使用的“羟基烷氧基”其其上连接羟基的烷氧基。如此处使用的“卤素”指氟，氯，溴和碘。
如此处使用的术语“杂芳烷基”表示在芳基部分包含杂原子的芳烷基。术语“氧基”表示存在氧原子。因此“烷氧基”基团是通过氧原子连接的烷基，“羰氧基”基团是通过氧原子连接的羰基。
如此处使用的术语“杂环烷基”和“杂环烷氧基”表示其烷基部分连接有杂环基团的烷基或烷氧基，术语“芳烷氧基”表示其烷基部分连接有芳基的烷氧基。如此处使用的术语“烷基羰基氧基”表示通式-O-C(＝O)-烷基的基团。
如此处使用的术语“烷氧基烷氧基”表示包含附着于其烷基部分的烷氧基取代基的烷氧基。术语“烷氧基烷基硫代”表示包含连接到其烷基部分的烷氧基取代基的烷基硫代基团(即通式S-烷基)。术语“羟基烷基硫代”指包含连接到其烷基部分的羟基取代基的烷基硫代基团(即，通式S-烷基)。
如此处使用的术语“单糖”具有其惯用意思，表示简单的糖。如此处使用的术语“氨基酸”表示含有氨基和羧基的分子。氨基酸的实施方案包括a-氨基酸；即，通式HOOC-CH(NH2)-(侧链)的羧酸。氨基酸的侧链包括天然存在的和非天然存在的部分。非天然存在的(即，非天然的)氨基酸侧链是用于替代例如氨基酸类似物中天然存在的氨基酸侧链的部分。参见，例如Lehninger，Biochemistry，第二版，Worth出版公司，1975，第73-75页，此处引作参考。在某些实施方案中，此处描述的化合物取代基包括除去其羧基的羟基部分后的氨基酸残基；即，通式-C(＝O)CH(NH2)-(侧链)的基团。
所述稠合吡咯并咔唑优选以治疗有效量存在于此处描述的组合物中。如此处使用的“治疗有效量”指有效防止或治疗具体的紊乱症状的化合物量。这样的紊乱包括但是不限于，那些与靶受体异常活性有关的病理和神经紊乱，其中治疗或防止包括通过将受体与活性药物物质接触而抑制，诱导，或增强其活性。可以容易地理解，稠合吡咯并咔唑的浓度和剂量将取决于以下因素，例如给药的药物总剂量，使用的化合物化学特性，给药途径，病人的年龄、体重和症状等等。作为常规指导，人的剂量可以每天给药大约0.1mg到大约1000mg。优选，所述剂量为大约1到大约500mg，每天给药两次。更优选，所述剂量大约10mg到大约300mg，每天两次。
稠合吡咯并咔唑可以以本领域技术人员理解的不同形成存在。这样的形式包括但是不限于，药物可接受的盐，前药，多晶型物，立体异构体等等。如此处使用的术语“药物可接受”指那些化合物、材料、组合物和/或剂型，其在合理的医学判断范围内适于与人和动物组织接触，而没有过度的毒性、刺激、变态反应或其它问题并发症，并与合理的利益/风险率相称。
如此处使用的“药物的可接受的盐”指公开的化合物的衍生物，其中母体化合物通过制造其酸式或碱式盐而改性。药物可接受的盐的例子包括但是不限于碱性残基例如胺的无机或有机酸盐；酸性残基例如羧酸的碱金属或有机盐；等等。药物可接受的盐包括例如从无毒无机或有机酸中形成的母体化合物的常规无毒盐或季铵盐。例如，这样的常规的无毒盐包括那些来源于无机酸的盐，所述无机酸比如盐酸，氢溴酸，硫酸，氨基磺酸，磷酸，硝酸等等；和从有机酸比如乙酸，丙酸，琥珀酸，乙醇酸，硬脂酸，乳酸，苹果酸，酒石酸，柠檬酸，抗坏血酸，pamoic，马来酸，羟基马来酸，苯乙酸，谷氨酸，安息香酸，水杨酸，对氨基苯磺酸，2-乙酰氧基苯甲酸，反丁烯二酸，甲苯磺酸，甲磺酸，乙烷二磺酸，草酸，羟乙基磺酸等制备的盐。
本发明的药物可接受的盐可以从包含碱性或酸性部分的母体化合物通过常规的化学方法合成。通常，这样的盐可以通过将这些化合物的游离酸或碱形式与化学计量量的适当的碱或酸在水或有机溶剂或两者的混合物中反应而制备。通常，非含水介质如乙醚，乙酸乙酯，乙醇，异丙醇，或乙腈是优选的。合适的盐的列表可以在Remington′sPharmaceutical Sciences，第17版，Mack出版公司，Easton，PA，1985，第1418页找到，其公开的内容在此引作参考。
本发明的稠合吡咯并咔唑可以以前药形式存在。如此处使用的“前药”用以包括当这样的前药给药到哺乳动物对象后体内释放本发明的通式I或其它通式化合物的活性母体药物的任何共价键合的载体。因为已知前药增强药物的许多合乎需要的性质(如，溶解性，生物利用度，生产工艺等等)，本发明的化合物可以以前药形式递送。因此，本发明预期要求保护的化合物的前药，含有该前药的组合物，和递送该前药的方法。本发明化合物的前药，例如通式I的化合物的前药，可以通过改性存在于化合物的官能团而制备，其以或者常规操作或者在体内将改性部分切割成母体化合物的方式进行。
因此，前药包括例如本发明的化合物，其中羟基，氨基，或羧基被键合到任何基团，该基团当前药被给药到哺乳动物对象时切割以分别形成游离羟基，游离氨基，或羧酸。例子包括但是不限于，醇和胺官能团的乙酸酯，甲酸酯和苯甲酸酯衍生物；和烷基，碳环，芳基，和烷基芳基酯例如甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，异丁基，仲丁基，叔丁基，环丙基，苯基，苄基，和苯乙基酯等等。
本发明的化合物以许多本领域技术人员了解的方法制备。该化合物可以通过本领域技术人员理解的如下所述的方法或其变体而合成。与本发明有关的所有公开的方法预期以任何规模实施，包括毫克，克，数克，千克，数千克或商业的工业规模。
应当理解本发明的化合物可以包含一个和多个非对称的取代碳原子，并可以以光学活性或外消旋形式分离。因此所有手性的，非对映的，外消旋的形式和所有几何异构的形式的结构等是想要的，除非该具体的立体化学或异构的形式被特别地指出。如何制备和分离这样的光学活性形式是本领域公知的。例如，立体异构体的混合物可以通过标准技术分离，包括然而并非限于外消旋形式的拆分，正相、反相和手性层析，有择盐形成，重结晶等等，或通过从手性原材料手性合成或者通过靶手性中心精心合成。
可以容易地理解，存在的官能团可以包含合成过程中的保护基。例如，通式Ia化合物的氨基酸侧链取代基可以被保护基取代，所述保护基例如苄氧基羰基或者叔丁氧基羰基。已知本身作为可以被选择性从官能团连接和除去的化学官能团的保护基，例如羟基和羧基。这些基团存在于化学化合物中以使这样的官能团对该化合物被暴露其中的化学反应条件是惰性的。本发明可以使用各种保护基中的任何一种。优选的保护基包括苄氧基羰基(Cbz；Z)基团和叔丁氧基羰基(Boc)基团。本发明其他的优选保护基可以在Greene，T.W.和Wuts，P.G.M.，Protective Groups in Organic Synthesis第二版，Wiley & Sons，1991中找到。
稠合吡咯并咔唑，比如吲哚并咔唑，可以通过以下文献中教导的方法合成，例如美国专利Nos.4,923,986；4,877,776；5,093,330；5,461,146；5,468,872；5,621,100；5,621,101；5,516,771；和5,599,808；和PCT公开WO93/08809和WO97/46565，其公开的内容在此以其全文引为参考。其他制备方法如Moody等，J.Org.Chem.572105-2114(1992)中所述，也在此引为参考。
其中Q不是单个氮的稠合吡咯并咔唑，比如茚并咔唑，以及另外的化合物，可以通过以下文献中教导的方法合成，例如，U.S.专利Nos.5,475,110；5,591,855；5,594,009；5,705,511；5,616,724；和5,801,190；其公开的内容在此以其全文引为参考。
稠合吡咯并咔唑，比如桥联的茚并咔唑，可以通过例如美国专利申请序号09/325,140教导的方法制备，其公开的内容在此以其全文引为参考。
所有在先参考文献中公开的稠合吡咯并咔唑被预期用于本发明的成颗粒组合物。其它的示例性稠合吡咯并咔唑是表IA和IB陈述的吲哚并咔唑，其中各条目对应于相应的结构。
表I-A
表I-B
1IVa-1和IVa-4是组分1.5∶1.0的混合物。
一些优选的吲哚并咔唑为具有以下结构的通式IIa-4，IIa-12，和IIa-51指定的化合物。
本发明非含水的成颗粒组合物提供了稠合吡咯并咔唑生物利用度的大大改进。例如，化合物IIa-12在水中基本上不溶解。在纯Tween 80中，它的溶解度为28.43mg/ml。当直接放置在2％Tween 80的水溶液中，化合物IIa-12溶解度为0.18mg/ml。当开始溶解在Tween 80(成颗粒组合物)并随后用水稀释50倍(以产生2％Tween 80的水溶液)，最终的溶解度为0.57mg/ml。
因此，开始在这个特别的成颗粒组合物中溶解稠合吡咯并咔唑使得最终溶液中稠合吡咯并咔唑浓度达到3.2倍以上的增加。因为初始与水介质接触发生在体外或在体内，非含水的成颗粒组合物对于将稠合吡咯并咔唑治疗性给药到哺乳动物是有益的。
本发明特征还在于一种形成含有稠合吡咯并咔唑颗粒的稳定悬浮液的方法。所述方法通常包括(a)将稠合吡咯并咔唑溶解在含有表面活性剂的非含水的液体中，从而形成含有稠合吡咯并咔唑的成颗粒组合物，所述表面活性剂的量从大约20％到大于99％，和(b)将成颗粒组合物与水介质接触。所述成颗粒组合物可以与含水的介质在体外或在体内接触。优选，表面活性剂的量至少30％，更优选其至少40％，特别优选至少50％。成颗粒组合物任选包括有机溶剂，脂质，抗氧化剂，或这些组分的组合。
本发明另外的特征在于用于制备此处所述的成颗粒组合物的方法。在一个实施方案中，第一步包括加热至少一种有机溶剂。优选该溶剂在或者使那些在室温下是固体或半固体的溶剂液化，或者使活性剂的增溶作用最大化，但是低于导致混合物降解或者不稳定的温度下加热。一些组合物可以需要添加至少一种抗氧化剂以使组合物的降解最小化。第二步包括将活性剂混合到加热过的溶剂或加热过的溶剂混合物中。所述活性剂包括此处公开的稠合吡咯并咔唑。优选利用高剪切混合器或者均化器以高速混合，以使搅拌时间最小化并彻底分散活性剂。优选得到的混合物是均化的混合物。第三步包括添加表面活性剂和任何另外的赋形剂到均化的混合物中。优选所述另外的赋形剂被搅拌进入均化的混合物，或以低速度混合。生成的组合物可以分配入明胶或者HPMC胶囊作为热溶液并允许固化。或者，所述溶液可以被板冷却(slab cooled)或喷雾凝结并通过碾磨，造粒和掺混而进一步处理，干粉被填充入明胶或者HPMC胶囊。
在另一实施方案中，制备本发明组合物的方法包括加热至少一种有机溶剂和任选一种或者多种抗氧化剂，随后添加稠合吡咯并咔唑并以高剪切均化器混合，然后添加一种或者多种表面活性剂。具体的，本发明包括制备包含稠合吡咯并咔唑、至少一种有机溶剂、至少一种表面活性剂、和任选至少一种抗氧化剂的组合物的方法，其中组合物是非含水的和成颗粒的，该方法包括(a)加热有机溶剂和任选加热抗氧化剂到大约50-90℃以形成加热的混合物；(b)以高剪切均化器在加热的混合物中混合稠合吡咯并咔唑，形成均化的混合物；和(c)混合表面活性剂至均化的混合物。
优选，至少一种抗氧化剂与有机溶剂一起加热。优选所述温度范围是50-70℃，更优选是60-70℃。
本发明特征还在于一种治疗哺乳动物如人的神经疾病或者紊乱的方法。所述方法包括配制稠合吡咯并咔唑的非含水的含有稠合吡咯并咔唑的、成颗粒组合物，该组合物含有至少20％(w/w)量的表面活性剂，和对哺乳动物给药治疗有效量的成颗粒组合物。在该方法的一个实施方案中，成颗粒组合物与水介质在体外接触以形成稳定悬浮液。然后对哺乳动物给药治疗有效量的稳定悬浮液。在替代的实施方案中，直接对哺乳动物给药治疗有效量的成颗粒组合物，其中该组合物在体内接触水介质。
本发明特征还在于一种治疗哺乳动物如人的癌症，包括前列腺癌的方法。所述方法包括配制稠合吡咯并咔唑的非含水的含有稠合吡咯并咔唑的成颗粒组合物，该组合物含有至少20％(w/w)量的表面活性剂，和对哺乳动物给药治疗有效量的成颗粒组合物。在该方法的一个实施方案中，成颗粒组合物与水介质在体外接触以形成稳定悬浮液。然后对哺乳动物给药治疗有效量的稳定悬浮液。在替代的实施方案中，直接对哺乳动物给药治疗有效量的成颗粒组合物，其中该组合物在体内接触水介质。
本发明还通过以下实施例来举例说明。所述实施例仅仅为提供说明的目的，它们不应视为对本发明范围或者内容的限制。
实施例制剂本发明的许多成颗粒组合物已经使用各种组分以彼此不同的量配制。一些成颗粒组合物的配方显示于下表2。
表2示例的配方
其它示例的制剂包括包含稠合吡咯并咔唑、聚乙二醇和硬脂酸聚烃氧基酯的组合物。在某些实施方案，所述稠合吡咯并咔唑是化合物IIa-4，IIa-12或者IIa-51。在其它的实施方案中，所述聚乙二醇的分子量从大约300到8000道尔顿，或优选从400-3350道尔顿，或者更优选从400-1500道尔顿。在其它的实施方案中，硬脂酸聚烃氧基酯是Myrj52。
在另外的示例性制剂中，稠合吡咯并咔唑是化合物IIa-12，聚乙二醇是PEG-400，PEG-600，PEG-1000，或者PEG-1450，表面活性剂是硬脂酸聚烃氧基酯Myrj52。聚乙二醇∶硬脂酸聚烃氧基酯的比率范围从50∶50到80∶20，优选比率为50∶50或者80∶20。
在其它的示例性制剂中，有机溶剂可以是聚乙二醇的混合物。在一个实施方案中，聚乙二醇选自PEG-400，PEG-600，PEG-1000和PEG-1450。在其它的实施方案中，聚乙二醇的混合物可以是PEG-400/PEG-1000，PEG-400/PEG-1450，PEG-600/PEG-1000，PEG-600/PEG-1450。在另外的实施方案中，表面活性剂是硬脂酸聚烃氧基酯，优选是Myrj52。聚乙二醇混合物∶硬脂酸聚烃氧基酯的比率范围从50∶50到80∶20，优选比率为50∶50或者80∶20。在某些实施方案中，所述组合物包含比率为25∶25∶50的PEG-400∶PEG-1000∶硬脂酸聚烃氧基酯，或比率为25∶25∶50的PEG-400∶PEG-1450∶硬脂酸聚烃氧基酯，或比率为25∶25∶50的PEG-600∶PEG-1000∶硬脂酸聚烃氧基酯，或比率为25∶25∶50的PEG-600∶PEG-1450∶硬脂酸聚烃氧基酯。在另一些实施方案中，所述组合物包含比率为40∶40∶20的PEG-400∶PEG-1000∶硬脂酸聚烃氧基酯，或比率为40∶40∶20的PEG-400∶PEG-1450∶硬脂酸聚烃氧基酯，或比率为40∶40∶20的PEG-600∶PEG-1000∶硬脂酸聚烃氧基酯，或比率为40∶40∶20的PEG-600∶PEG-1450∶硬脂酸聚烃氧基酯。
大鼠中的生物利用度化合物IIa-12在大鼠前列腺癌肿瘤模型中显示抗癌活性。利用大鼠对在非含水的成颗粒组合物中配制的化合物IIa-12的生物利用度进行研究。在静脉内(i.v.)给药和口服(p.o.)给药到大鼠之后测量药物动力学参数。此外，在单独给药三种不同的制剂之后检查化合物IIa-12的绝对口服生物利用度(F)。
雄性Sprague-Dawley大鼠被施用给药至尾静脉的团注(bolus)i.v.剂量或者通过灌饲p.o.剂量的三种制剂中的一种。制剂描述于下表2A中。制剂(a)不是成颗粒组合物。
表2A大鼠研究中的制剂
在预定的时间点收集血液样品。通过HPLC测定化合物IIa-12的血浆水平。药物动力学参数的平均值总结在下表3中。在表3中，Cmax是血浆浓度峰值；Tmax是到达血浆浓度峰值的时间；Tt/2是表观清除半寿期；AUC0-4是曲线下面积(血清浓度vs.时间)；以及F％是绝对生物利用度(总剂量/AUC)。
表3药物动力学数据总结
亲水制剂(a)的口服生物利用度比成颗粒组合物(b)和(c)的低。这些数据显示通过使用本发明的成颗粒组合物，大鼠中的生物利用度可以显著提高，即，超过300％。
狗中的生物利用度在禁食的比格犬中测量两种液体化合物IIa-12制剂的生物利用度。使用交叉(crossover)研究设计，两种单独的制剂，表1的制剂16和18被给药到六只狗组。在交叉设计中包含静脉内剂量作为第三种制剂。各只狗接受10mg剂量的化合物IIa-12。通过HPLC采用荧光检测测定的血浆浓度被归一化到1mg/kg剂量。测量了药物动力学参数，包括血浆浓度峰值(Cmax)，达到血浆浓度峰值的时间(Tmax)，表观清除半寿期(t1/2)，曲线下面积(AUC00)和绝对生物利用度(F％)。
在1mg/kg静脉内剂量之后化合物IIa-12的血浆浓度时间图被拟合到Vc和Vβ的分配值的表观容积分别为0.96L/kg(范围0.70-1.43L/kg)和1.35L/kg(范围0.69-202L/kg)的两室开放模型。血浆浓度随着最终清除半寿期1.16小时(范围0.89-1.38小时)而下降。在狗的1mg/kg团注静脉内剂量之后化合物IIa-12的血浆清除率是0.79L/hr·kg(范围0.40-1.08L/hr·kg)。
从两种液体制剂中快速吸收化合物IIa-12，浓度峰值在服药两小时内记录。对于Tween/碳酸异丙烯酯/PG和Tween/PG制剂，血浆浓度峰值平均分别为269±175ng/ml(范围94-469ng/ml)和219±143ng/ml(范围96-458ng/ml)。两种制剂的绝对生物利用度非常相似，平均分别为41.68±8.4％和39.3±11.3％。
利用狗对在非含水成颗粒组合物中配制的化合物IIa-12的生物利用度进行单独研究。在口服给药8种单独的制剂之后测量药物动力学参数。剂量为每只狗每天50mg化合物IIa-12。使用平行研究设计以三只狗组评价各制剂。
称重7.9-14.2kg的比格犬用于该研究中。在服药前狗被禁食过夜，但是被允许随意饮水。在研究完成后将食物返给动物。
各制剂(胶囊或者液体)以50mg剂量给药到三只狗组。该制剂描述于下表4。制剂C和D不是成颗粒组合物。
表4在狗中研究的制剂
在研究的第一个星期给药对照制剂和制剂A-C。在一个星期清洗(wash-out)阶段之后给药制剂D-G。服药前充分混合液体制剂A、E、F和G。各液体剂量(2ml)被置于注射器中，并喷射入各狗的喉咙背面，随后注射大约10ml水。对接受胶囊制剂的各狗给药相似量的水。
在服药前和在给药各制剂0.25，0.5，1.0，1.5，2，3，4，6，9和15小时后从各狗的颈静脉获得按序肝素化的血液样品。血液样品在冰浴上迅速致冷。收集后两小时内，将样品离心(2500rpm 10min.)，血浆被转移到聚丙烯管中，并在-20℃冷冻用于随后分析。
通过HPLC，如下所述测定化合物IIa-12的血浆水平。通过最小平方线性回归分析(未加权分析)刺状的狗血浆标准品相对于浓度的峰面积比(母体/内标准)，计算各样品的血浆浓度。血浆浓度被归一化到5mg/kg剂量。
药物动力学参数的平均值(±SD，N＝3)总结在下表5。在表5中，Cmax是血浆浓度峰值；Tmax是达到血浆浓度峰值的时间；Tt/2是表观消除半寿期；AUC0-4是曲线下面积(血浆浓度vs.时间)；以及％制剂H是相对生物利用度。
表5药物动力学数据总结
使用血浆时间表的线性梯形法则计算出服药后0到t小时(最后可测量的血浆浓度时点)的曲线下面积。测定作为最终测量的血浆浓度(Ct)除以终期清除速率常数的推到无穷大的剩余区域被增加至AUC0-4以产生曲线下总面积(AUC0-4)。通过将各制剂的AUC0-4除以制剂REF的AUC0-4计算出相对于制剂REF的生物利用度。
在用乙酸乙酯∶正已烷(1∶1体积比)在中性pH液液提取样品后，通过反相HPLC用荧光检测测定化合物IIa-12的血浆浓度。蒸发有机溶剂后，用连续份试样的甲醇和0.1％三氟乙酸的水(最终比例1∶1，体积比)复溶样品。该母体化合物和内标准品(化合物IIa-4)在25cm×4.6cm 5μm Prodigy柱上与共提取的血浆污染物分离。流动相由乙腈∶甲醇∶0.01四甲铵高氯酸盐的0.1％含水三氟乙酸(45∶5∶55)组成。流速是1.0ml/min。荧光检测(λem＝288纳米，λex＝390纳米)用于该分析物的定量。吲哚并咔唑的HPLC分析在0-5000ng/ml浓度范围内是线性的。这些数据显示，通过使用本发明的成颗粒组合物，大鼠中的生物利用度可以显著提高，即，超过300％。
猴中的生物利用度利用猴对在非含水的成颗粒组合物中配制的化合物IIa-51的生物利用度进行研究。在静脉内(i.v.)给药和口服(p.o.)给药后测量药物动力学参数。试验由四只雄性猕猴(cynomolgus monkey)组成。i.v.剂量团注给药，剂量水平为3mg/kg。口服剂量以软明胶胶囊给药，剂量水平为10mg/kg(2胶囊剂/猴/剂量)。口服的制剂描述于下表6。
表6猴中研究的制剂
i.v.制剂是PEG 1450pluronic 7；F68羟丙基-β-环糊精水。
在预定的时间点收集血液样品。通过反相HPLC测定化合物IIa-51的血浆水平。通过非分室方法估计药物动力学参数。药物动力学参数的平均值总结在下表7中。在表7中，Cmax是血浆浓度峰值；Tmax是到达血浆浓度峰值的时间；Tt/2是表观清除半寿期；AUC是曲线下面积；以及F％是绝对生物利用度。
表7药物动力学数据总结
i.v.服药后，平均清除值是1.1±0.1L/hr/kg，以及平均分配体积是4.9±0.7L/kg。结果证明在i.v.给药后，化合物IIa-51具有大分配体积，迅速的清除，和中等Tt/2。基于口服给药，与在本试验中测试的其它制剂相比，制剂D有较好的生物利用度。与来自亲脂的颗粒相比，来自亲水的颗粒的化合物IIa-51被较好的吸收，表明制剂依赖的吸收。
本领域技术人员将理解，根据上述教导，本发明的许多改变和变化是可能的。因此应当理解在权利要求的范围内，本发明可以以此处具体描述的方案之外的形式实施，发明的范围包围所有这样的变化。
权利要求
1.组合物，包含具有以下通式的稠合吡咯并咔唑或其立体异构体或药物可接受的盐形式，至少20％(w/w)硬脂酸聚烃氧基酯和至少一种聚乙二醇 其中R3和R4选自H，烷基，Cl，Br，CH2OH，CH2SOCH2CH3，CH2SO2CH2CH3，NHCONHC6H5，CH2SCH2CH3，CH2SC6H5，NHCO2CH3，CH2OC(＝O)NHCH2CH3，N(CH3)2，CH＝NNH，CH2N(CH3)2和CH2OCH2CH3；R7选自H和烷基；R15和R16独立地选自H，烷基，OH，CH2OH，烷氧基，和CO2烷基。
2.权利要求1的组合物，其中稠合吡咯并咔唑存在的浓度为大约1到大约100mg/mL。
3.权利要求2的组合物，其中稠合吡咯并咔唑存在的浓度为大约1到大约50mg/mL。
4.权利要求1的组合物，其中稠合吡咯并咔唑具有下列通式
5.权利要求4的组合物，其中稠合吡咯并咔唑具有下列通式
6.权利要求1的组合物，其中聚乙二醇的分子量为大约300-8000道尔顿。
7.权利要求6的组合物，其中聚乙二醇的分子量为大约400-3350道尔顿。
8.权利要求7的组合物，其中聚乙二醇的分子量为大约400-1500道尔顿。
9.权利要求5的组合物，其中聚乙二醇选自PEG-400，PEG-600，PEG-1000，和PEG-1450。
10.权利要求9的组合物，其中硬脂酸聚烃氧基酯是Myrj52。
11.权利要求10的组合物，其中聚乙二醇∶硬脂酸聚烃氧基酯的比例从50∶50到80∶20。
12.权利要求11的组合物，其中聚乙二醇∶硬脂酸聚烃氧基酯的比例为50∶50。
13.权利要求11的组合物，其中聚乙二醇∶硬脂酸聚烃氧基酯的比例为80∶20。
14.权利要求1的组合物，包含选自PEG-400/PEG-1000，PEG-400/PEG-1450，PEG-600/PEG-1000，和PEG-600/PEG-1450的聚乙二醇混合物。
15.权利要求14的组合物，其中聚乙二醇混合物∶硬脂酸聚烃氧基酯的比例从50∶50到80∶20。
16.权利要求15的组合物，其中聚乙二醇混合物∶硬脂酸聚烃氧基酯的比例为50∶50。
17.权利要求15的组合物，其中聚乙二醇混合物∶硬脂酸聚烃氧基酯的比例为80∶20。
18.权利要求16的组合物，其中组合物含有比例为25∶25∶50的PEG-400∶PEG-1000∶硬脂酸聚烃氧基酯。
19.权利要求16的组合物，其中组合物含有比例为25∶25∶50的PEG-400∶PEG-1450∶硬脂酸聚烃氧基酯。
20.权利要求17的组合物，其中组合物含有比例为40∶40∶20的PEG-400∶PEG-1000∶硬脂酸聚烃氧基酯。
21.权利要求17的组合物，其中组合物含有比例为40∶40∶20的PEG-400∶PEG-1450∶硬脂酸聚烃氧基酯。
22.一种治疗哺乳动物疾病或紊乱的方法，包括对需要的对象给药权利要求1，12或19的组合物。
23.权利要求22的方法，其中紊乱是神经紊乱。
24.权利要求22的方法，其中紊乱是癌症。
25.权利要求24的方法，其中癌症是前列腺癌。
26.权利要求24的方法，其中癌症是急性骨髓性白血病。
27.一种制备组合物的方法，所述组合物包括稠合吡咯并咔唑，至少一种有机溶剂，至少一种表面活性剂，和任选抗氧化剂，其中该组合物是非含水的和成颗粒的；所述方法包括a)加热有机溶剂和任选抗氧化剂至大约50-90℃以形成加热的混合物；b)以高剪切均化器在加热的混合物中混合稠合吡咯并咔唑以形成均化的混合物；和c)将表面活性剂混合到均化的混合物中。
28.权利要求27的方法，其中组合物包括至少一种抗氧化剂。
29.权利要求27的方法，其中温度为大约50-80℃。
30.权利要求29的方法，其中温度为大约50-70℃。
31.权利要求27的方法，其中稠合吡咯并咔唑具有以下通式，或是其立体异构体或药物可接受的盐形式 其中环B和环F独立地选自a)不饱和的6-元碳环的芳环，其中1到3个碳原子可以被氮原子取代；b)不饱和5-元碳环的芳环；和c)不饱和5-元碳环的芳环，其中或者1)一个碳原子被氧，氮，或硫取代；2)两个碳原子被硫和氮，氧和氮，或两个氮取代；或3)三个碳原子被三个氮取代；G-X-W选自a)-(Z1Z2)C-N(R1)-C(Z1Z2)-；b)-CH(R1)-C(＝O)-N(R1)-；和c)-N(R1)-C(＝O)-CH(R1)-；Z1和Z2每次出现时独立地选自H，H；H，OR；H，SR；H，N(R)2；以及其中Z1和Z2共同形成的部分选自＝O，＝S，和＝NR的基团；前提是Z1和Z2对中至少一个形成＝O；R选自H，具有1到6个碳的取代的或未取代的烷基，OH，具有1到4个碳的烷氧基，OC(＝O)R1a，OC(＝O)NR1cR1a，O(CH2)pNR1cR1d，O(CH2)pOR1b，具有6到10个碳的取代或未取代的芳烷基，和取代或未取代的杂芳烷基；R1独立地选自a)H，具有1到6个碳的取代或未取代的烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的芳烷基，取代或未取代的杂芳基，和取代或未取代的杂芳烷基；b)C(＝O)R1a；c)OR1b；d)C(＝O)NHR1b，NR1cR1d，(CH2)pNR1cR1d，(CH2)pOR1b，O(CH2)pOR1b和O(CH2)pNR1cR1d；R1a选自取代或未取代的烷基，取代或未取代的芳基和杂芳基；R1b选自H和具有1到6个碳的取代或未取代的烷基；R1c和R1d各自独立地选自H，1到4个碳的取代或未取代的烷基，和通式-(CH2)2-X1-(CH2)2-的连接基团；X1选自-O-，-S-和-CH2-；R2选自H，SO2R2a，CO2R2a，C(＝O)R2a，C(＝O)NR2cR2d，和1到8个碳的烷基，2到8个碳的烯基，2到8个碳的炔基，其中1)各烷基，烯基，和炔基是未取代的；或2)各烷基，烯基，和炔基被1-3个R5取代；R2a选自1到6个碳的烷基，芳基，OR2b，CONH2，NR2cR2d，(CH2)pNR2cR2d，和O(CH2)pNR2cR2d；R2b选自H和1到6个碳的取代或未取代的烷基；R2c和R2d各自独立地选自H，1到6个碳的取代或未取代的烷基，和通式-(CH2)2-X1-(CH2)2-的连接基团；R3和R4每次出现时独立地选自a)H，芳基，杂芳基，F，Cl，Br，I，CN，CF3，NO2，OH，OR9，O(CH2)pNR11R12，OC(＝O)R9，OC(＝O)NR11R12，O(CH2)pOR10，CH2OR10，NR11R12，NR10S(＝O)2R9，和NR10C(＝O)R9；b)CH2OR14；c)NR10C(＝O)NR11R12，CO2R10，C(＝O)R9，C(＝O)NR11R12，CH＝NOR10，CH＝NR10，(CH2)pNR11R12，(CH2)pNHR14，和CH＝NNR11R12；d)S(O)yR9，(CH2)pS(O)yR9，CH2S(O)yR14；e)具有1到8个碳的烷基，具有2到8个碳的烯基，和具有2到8个碳的炔基，其中1)各烷基，烯基，或炔基是未取代的；或2)各烷基，烯基，或炔基被1到3个R5取代；R5选自具有6到10个碳的芳基，杂芳基，芳烷氧基，杂环烷氧基，羟基烷氧基，烷氧基-烷氧基，羟基烷基硫代，烷氧基-烷基硫代，F，Cl，Br，I，CN，NO2，OH，OR9，X2(CH2)pNR11R12，X2(CH2)pC(＝O)NR11R12，X2(CH2)pOC(＝O)NR11R12，X2(CH2)pCO2R9，X2(CH2)pS(O)yR9，X2(CH2)pNR10C(＝O)NR11R12，OC(＝O)R9，OC(＝O)NHR10，O-四氢吡喃基，NR11R12，NR10C(＝O)R9，NR10CO2R9，NR10C(＝O)NR11R12，NHC(＝NH)NH2，NR10S(O)2R9，S(O)yR9，CO2R10，C(＝O)NR11R12，C(＝O)R9，CH2OR10，CH＝NNR11R12，CH＝NOR10，CH＝NR9，CH＝NNHCH(N＝NH)NH2，S(＝O)2NR11R12，P(＝O)(OR10)2，OR14，和具有5到7个碳的单糖，其中单糖的各羟基独立地是未取代的或被H、具有1到4个碳的烷基、具有2到5个碳的烷基羰基氧基或具有1到4个碳的烷氧基替换；X2是O，S，或NR10；Q选自1)NR6；2)1-3个碳的未取代的亚烷基；3)1-3个碳的取代的亚烷基；4)CH＝CH，CH(OH)CH(OH)，O，S，S(＝O)，S(＝O)2，C(＝O)，C(＝NOR11)，C(OR11)(R11)，C(＝O)CH(R13)，CH(R13)C(＝O)，C(R10)2，C(＝NOR11)CH(R13)，CH(R13)C(＝NOR11)，CH2Z，Z-CH2，CH2ZCH2；Z选自C(R11)(OR11)，O，S，C(＝O)，C(＝NOR11)和NR11；R6选自H，SO2R2a，CO2R2a，C(＝O)R2a，C(＝O)NR1cR1d，和1-8个碳的烷基，2-8个碳的烯基，2-8个碳的炔基，其中1)各烷基，烯基和炔基是未取代的；2)各烷基，烯基和炔基用1-3个R5取代；或者替代的是，当Q是NR6或C(R10)2，R6或一个R10与R2连接形成 其中R7和R8各自独立地选自H，OH，具有1到6个碳的烷基，1到6个碳的烷氧基，6到10个碳的取代或未取代的芳烷基，取代或未取代的杂芳烷基，(CH2)pOR10，(CH2)pOC(＝O)NR11R12，和(CH2)pNR11R12；或R7和R8共同形成通式CH2-X3-CH2的连接基团；X3是键，O，S，或NR10；R9选自1到6个碳的烷基，(CH2)r芳基和(CH2)r杂芳基；R10选自H，1到6个碳的烷基，(CH2)r芳基和(CH2)r杂芳基；R11和R12每次出现时独立地选自1)H和1到6个碳的取代或未取代的烷基；或2)R11和R12共同形成-(CH2)2-X1-(CH2)2-；Y选自O，S，N(R10)，N+(O-)(R10)，N(OR10)，和CH2；J选自键，O，CH＝CH，S，C(＝O)，CH(OR10)，N(R10)，N(OR10)，CH(NR11R12)，C(＝O)N(R17)，N(R17)C(＝O)，N(S(O)yR9)，N(S(O)yNR11R12)，N(C(＝O)R17)，C(R15R16)，N+(O-)(R10)，CH(OH)CH(OH)，和CH(O(C＝O)R9)CH(OC(＝O)R9)；R13选自1到4个碳的烷基，芳基，和7到14个碳的芳烷基；R14是羧基的羟基被除去后的氨基酸残基；R15和R16每次出现时选自H，OH，C(＝O)R10，O(C＝O)R9，烷基-OH，和CO2R10；R17选自H，烷基，芳基，和杂芳基；m和n独立地选自0，1，和2；p独立地选自1，2，3，和4；r独立地选自0，1，和2；和y独立地选自0，1和2。
32.权利要求31的方法，其中稠合吡咯并咔唑的环B和环F是苯基，G-X-W选自CH2NR1C(＝O)，C(＝O)NR1CH2，和C(＝O)NR1C(＝O)，以及Q是NR6。
33.权利要求32的方法，其中稠合吡咯并咔唑具有下列通式
34.权利要求33的方法，其中稠合吡咯并咔唑的R3和R4选自H，烷基，Cl，Br，CH2OH，CH2SOCH2CH3，CH2SO2CH2CH3，NHCONHC6H5，CH2SCH2CH3，CH2SC6H5，NHCO2CH3，CH2OC(＝O)NHCH2CH3，N(CH3)2，CH＝NNH，CH2N(CH3)2，和CH2OCH2CH3；R7选自H和烷基，而R15和R16独立地选自H，烷基，OH，CH2OH，烷氧基和CO2烷基。
35.权利要求34的方法，其中稠合吡咯并咔唑具有下列通式
36.权利要求27的方法，其中有机溶剂是至少一种分子量从大约300到8000道尔顿的聚乙二醇。
37.权利要求36的方法，其中聚乙二醇的分子量从大约400到1500道尔顿。
38.权利要求37的方法，其中聚乙二醇选自PEG-400，PEG-600，PEG-1000，和PEG-1450。
39.权利要求27的方法，其中表面活性剂选自聚氧化乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯，聚乙二醇醚，饱和的聚乙二醇化甘油酯，聚乙二醇的脂肪酸酯，羟基化卵磷脂，中链单甘油酯，中链脂肪酸酯，d-α-生育酚聚丁二酸乙二醇酯，聚乙二醇/丙二醇共聚物，硬脂酸聚烃氧基酯，聚烃氧基蓖麻油，和聚乙二醇羟基硬脂酸酯。
40.权利要求39的方法，其中表面活性剂选自聚乙二醇醚，饱和的聚乙二醇化甘油酯，聚乙二醇的脂肪酸酯，羟基化卵磷脂，中链单甘油酯，中链脂肪酸酯，d-α-生育酚聚丁二酸乙二醇酯，聚乙二醇/丙二醇共聚物，硬脂酸聚烃氧基酯，聚烃氧基蓖麻油，和聚乙二醇羟基硬脂酸酯。
41.权利要求40的方法，其中表面活性剂是硬脂酸聚烃氧基酯。
42.权利要求28的方法，其中抗氧化剂选自抗坏血酸，抗坏血酸的脂肪酸酯，丁基化羟基甲苯，没食子酸丙酯和丁基化羟基茴香醚。
43.权利要求42的方法，其中抗氧化剂是丁基化羟基苯甲醚，没食子酸丙酯和柠檬酸的混合物。
44.权利要求27的方法，其中有机溶剂是分子量从大约400到1500道尔顿的聚乙二醇，而表面活性剂是硬脂酸聚烃氧基酯。
45.权利要求44的方法，其中聚乙二醇是PEG-400，PEG-600，PEG-1000，或PEG-1450，而硬脂酸聚烃氧基酯是Myrj52。
46.权利要求27的方法，其中有机溶剂是选自PEG-400/PEG-1000，PEG-400/PEG-1450，PEG-600/PEG-1000，或PEG-600/PEG-1450的聚乙二醇混合物，而硬脂酸聚烃氧基酯是Myrj52。
全文摘要
本发明公开一种含有稠合吡咯并咔唑的非含水的成颗粒组合物。在与水介质接触后，成颗粒组合物自发分散成为悬浮颗粒，从而形成稳定悬浮液，提供口服给药稠合吡咯并咔唑化合物的大大改进的生物利用度。
文档编号A61K31/55GK1882594SQ200480034403
公开日2006年12月20日 申请日期2004年11月12日 优先权日2003年11月20日
发明者达弗·迪卡松, 布雷德利·T·麦金太尔, 皮尤什·R·帕特尔 申请人:赛福伦公司