专利名称：二十二碳六烯酸和花生四烯酸促进不足月婴儿生长的用途的制作方法
本申请是申请号为98805569.4、申请日为1997年3月27日、发明名称为“二十二碳六烯酸和花生四烯酸促进不足月婴儿生长的用途”的专利申请的分案申请。
与相关专利申请的交叉引用本申请是于2002年2月19日提交的美国专利申请序列号09/381,484的分案申请，是根据35 U.S.C.§371于1999年9月21日提交的美国非临时专利申请序列号09/381,484的继续申请，是于1998年3月20日提交的国际申请PCT/US98/10566的国家阶段申请，指定了美国并请求保护于1997年3月27日提交的美国临时申请序列号60/042,366的利益，要求每一个这些专利申请的优先权，这些专利申请均在此以其全部内容引入本文作为参考，且涉及共同委托的和共同未决的申请，即于2004年11月14日提交的美国专利申请序列号10/713,936。
背景技术：
(1)发明领域本发明涉及提高不足月婴儿的生长，包括给婴儿使用含二十二碳六烯酸和花生四烯酸组合(combination)的制剂。
(2)相关领域描述已证明长链多不饱和脂肪酸(LC PUFA)在婴儿发育中很重要。具体地讲，花生四烯酸(ARA)和二十二碳六烯酸(DHA)是对婴儿有特别营养价值的LC PUFA，因为发现它们在大脑(Sastry PS，神经组织的脂类组成和代谢，Progress Lipid Res 1985；2469-176)和视网膜(Fliesler SJ和Anderson RE.在脊椎动物视网膜中的脂类化学与代谢，Progress Lipid Res 1983；2279-131)中的浓度很高。ARA(204n-6)和DHA(226n-3)由母体基本脂肪酸亚油酸(182n-6)和α-亚麻酸(183n-3)通过交替去饱和作用和延伸衍生，并在妊娠的最后一个月和产后第一个月迅速在胎儿神经组织蓄积(Makrides M，Neuman MA，Byard RW，Simmer K，Gibson RA，母乳和奶粉喂养婴儿的脑、视网膜和红细胞中的脂肪组成，Am J Clin Nutr 1994；60189-94)。
与足月婴儿不同，不足月婴儿在妊娠的最后3个月内没有从母体和胎盘LC PUFA供应中得到充分的益处。尽管不足月婴儿能从其18碳前体合成DHA和ARA(Carnielli VP，Wattimena DJL，Lui jendi jk IHT，Boerlage A，Degenhart HJ，Sauer PJJ，出生体重非常低的早产婴儿能由亚油酸和亚麻酸合成花生四烯酸和二十二碳六烯酸，PediatRes 1996；40169-174)，然而在饮食中缺乏这些脂肪酸的情况下，合成的速度是否适于中枢神经系统生长的最佳需要尚不清楚。不足月婴儿依靠它们自己的饮食供应亚油酸和α-亚麻酸，这些饮食可以是母乳，其中也含有少却有效量的ARA和DHA的，或者是市售的人工配方奶粉，在美国没有奶粉其中含有ARA和DHA。
最近的一些研究表明(Hoffman DR和Uauy R，不足月婴儿的基本的饮食ω-3脂肪酸血浆和红细胞脂肪酸组成，Lipids 1992；27886-95)，对于接受补充了DHA(总脂肪酸的0.35％)的配方奶粉的婴儿，他们的红细胞膜脂类的脂肪酸组成类似于母乳喂养的婴儿。在同样的研究中，Birch(Birch DG，Birch EE，Hoffman DR，Uauy RD，Ω-3脂肪酸不同的饮食喂养的出生体重非常低的婴儿的视网膜发育，Investigation Ophthalmology Visual Science 1992；332365-76)发现对于出生体重非常低的婴儿提供含有DHA的饮食改善了他们的视网膜功能。
Carlson等比较研究了喂标准配方奶粉和喂补充有鱼油LC PUFA的配方奶粉的不足月婴儿第一年的成长情况(Carlson SE，Cooke RJ，Werkman SH，Tolley EA，喂标准配方奶粉和补充了鱼油n-3的配方奶粉的不足月婴儿第一年生长的对比，Lipids 1992；27901-907)。试验用配方奶粉提供了占总脂肪酸0.2％的DHA，并还提供了0.3％的EPA(205n-3)。该EPA浓度高于母乳中的浓度而DHA浓度类似于母乳中的浓度。妊娠的第40周开始，与对照组相比补充了鱼油的婴儿的体重、身长和头围明显小。由此研究中，Carlson(Carlson SE，WerkmanSH，Peeles JM，Cooke RJ，Tolley EA，花生四烯酸在不足月婴儿第一年生长中的地位，Proc Natl Acad Sci USA 1993；901073-77)假设饮食ARA可改善不足月婴儿第一年的生长，表现为将生长恢复到不含LC PUFA的对照配方奶粉的水平。
在另一个研究(Montalto FB等，Pediatric Research，Vol 39，316A页，文摘号1878)中，表明喂补充了鱼油的配方奶粉(含DHA但是基本不含ARA)的男性婴儿与喂标准配方奶粉的婴儿相比，在4至6个月，他们的头围小，身长、重量和不含脂肪的物质低。第3个研究也表明，与不含LC PUFA的对照配方奶粉相比，喂养补充了鱼油的配方奶粉(含LC PUFA)的不足月婴儿在其校正年龄为9和12月体重下降到其校正年龄2个月时的体重(Carlson SE等，Am.J.Clin.Nutr.，63，687-97页，1996)。
现有技术已说明由于其饮食中缺乏LC PUFA而导致的组织LC PUFA水平变化的婴儿，与母乳喂养的婴儿相比，可能有出现神经问题的危险，在认知试验中的评分也低，且视网膜发育差。世界协调组织如WHO/FAO人类营养中的脂肪和油专家委员会已建议在不足月婴儿配方奶粉中加入LC PUFA。这些建议是在尽管观察到DHA填加物对生长的负作用的情况下做出的。文献中尚未说明ARA和DHA，特别是加入婴儿配方奶粉时，与不含ARA和DHA的对照配方奶粉比较提高了婴儿的生长。
发明概述令人意外地发现接受补充了DHA和ARA的婴儿配方奶粉的不足月婴儿显示出了增强的生长。本发明涉及提高不足月婴儿的生长，包括给该婴儿施用生长提高量的DHA和ARA。
发明详述正如Carlson SE报告的对不足月婴儿生长的综述(The Jrnl ofPediatrics，vol 125，533-8页，1994)，“妊娠后年龄调整后，不足月婴儿在正常分娩期后约2-4个月表现出低于(而不是赶上)正常体重的现象”。
现有技术的一些研究报告了给婴儿使用DHA的价值。但是，当DHA作为主要的LC PUFA或与EPA联合给不足月婴儿使用时，所述婴儿的生长降低。已建议ARA可能对生长有益；但是，迄今还不知道使用DHA和ARA对不足月婴儿的生长作用。令人惊奇地发现，使用ARA和DHA的组合较单独喂DHA来讲导致婴儿生长的增强。也已发现使用含ARA和DHA的婴儿配方奶粉的不足月婴儿较喂不含DHA和ARA的对照配方奶粉(如现代育儿中常用的那些配方奶粉)的不足月婴儿表现出更强的生长。还进一步发现本发明方法的实施使不足月婴儿的生长在短得意想不到的时间内赶上足月产的母乳喂养婴儿。
通过实施本发明的方法，达到类似于或等于足月、母乳喂养的婴儿的生长，所需时间小于9个月的校正年龄；优选小于6个月的校正年龄，更优选小于4个月的校正年龄，特别是更优选小于2个月的校正年龄，并最优选不大于足月的校正年龄。
本发明的方法需要DHA和ARA的联合。ARA∶DHA的重量比可以是约1∶2至约5∶1，优选约1∶1至约3∶1，并更优选约2∶1。
本发明的方法中，DHA和ARA的联合优选作为婴儿配方奶粉的一部分使用。用于本发明的婴儿配方奶粉优选是营养全面的，并一般含有适宜类型和适量的脂类、碳水化合物、蛋白质、维生素和矿物质。脂类或脂肪的量一般为约3至约7g/100kcal。蛋白质的量一般为约1至约5g/100kcal。碳水化合物的量一般为约8至约12g/100kcal。蛋白质的来源可以是本领域使用的任何物质，例如，脱脂牛奶、乳清蛋白、酪蛋白、大豆蛋白、水解蛋白、氨基酸等。碳水化合物来源可以是本领域使用的任何物质，例如，乳糖、葡萄糖、玉米浆固体、麦芽糖糊精、蔗糖、淀粉、水稻浆固体等。脂类来源可以是本领域使用的任何物质，例如，植物油如棕榈油、豆油、棕榈油精、椰子油、中链甘油三酯油、高油酸葵花油、高油酸红花油等。较便利地是使用商购的婴儿配方奶粉。例如，Enfamil、Enfamil不足月配方奶粉(Premature Formula)、含铁的Enfamil、Lactofree、Nutramigen、Pregestimil、ProSobee(由Mead Johnson & Company，Evansville，Indiana，美国提供)、Similac、Isomil、Alimentum、Neocare和Similac特别护理(Special Care)(由Ross Laboratories，Columbus，Ohio，美国提供)，可以添加适当浓度的、适当比例的ARA和DHA，并用于本发明方法的实施中。
本发明方法中，DHA和ARA的使用形式不是严格限定的，只要使用促进生长的量即可。最方便的是，将DHA和ARA添加进婴儿配方奶粉，再用该奶粉喂养婴儿。或者，DHA和ARA可以不与配方奶粉作为整体，而是作为对其的补充，以与其它营养添加物如维生素等联合的形式使用，例如，油滴剂、小药囊。
DHA促进生长的量一般为约2.5mg/kg体重/天至约60mg/kg体重/天，优选约6mg/kg体重/天至约40mg/kg体重/天，更优选约12mg/kg体重/天至约30mg/kg体重/天，特别更优选约18mg/kg体重/天至约24mg/kg体重/天。
ARA促进生长的量一般为约5mg/kg体重/天至约120mg/kg体重/天，优选约12mg/kg体重/天至约80mg/kg体重/天，更优选约24mg/kg体重/天至约60mg/kg体重/天，特别更优选约36mg/kg体重/天至约48mg/kg体重/天。
用于本发明的婴儿配方奶粉中的DHA的量一般为约2mg/100kcal(千卡)至约50mg/100kcal，优选约5mg/100kcal至约33mg/100kcal，更优选约10mg/100kcal至约25mg/100kcal，并特别更优选约15mg/100kcal至约20mg/100kcal。
用于本发明的婴儿配方奶粉中的ARA的量一般为约4mg/100kcal至约100mg/100kcal，优选约10mg/100kcal至约67mg/100kcal，更优选约20mg/100kcal至约50mg/100kcal，并特别更优选约30mg/100kcal至约40mg/100kcal。
可以使用本领域已知的标准技术制备用于本发明的添加含有DHA和ARA的油的婴儿配方奶粉。例如，替换等量的普通存在的油，如高油酸葵花油。
ARA和DHA的来源可以是本领域已知的任何来源，例如，鱼油、单细胞油、蛋黄脂类、脑脂类等。该DHA和ARA可以是天然的形式，条件是LC PUFA原料中的其余物质对婴儿不产生任何有害作用。或者，DHA和ARA可以是精炼的形式。优选用于本发明的LC PUFA含有极少或不含EPA。例如，优选本发明使用的婴儿配方奶粉含有少于约20mg/100kcal的EPA；优选少于约10mg/100kcal；更优选少于约5mg/100kcal；并最优选基本不含EPA。
DHA和ARA的优选来源是单细胞油，如美国专利5374657、5550156和5397591教导的，将其公开的内容全部引入作为参考。
下列实施例用于举例说明本发明，不应将其解释为对本发明的限制。
实施例I临床研究设计1.介绍该试验是双盲的、随机的、平行对照设计的、对含微观藻类(microalgae)和真菌来源的油的不足月婴儿配方奶粉的预期试验，该油中含有部分作为其组分的花生四烯酸和二十二碳六烯酸。将配方奶粉喂养的对象随机分入3个喂养组之一·不足月配方奶粉加DHA(约占能量的0.13％)和ARA(约占能量的0.26％)·不足月配方奶粉加DHA(约占能量的0.13％)·不含DHA和ARA的不足月配方奶粉这些产品具有相同的营养成分(见附录A)，只是在DHA和ARA水平上有所不同。这些产物是隐蔽的。配方奶粉的顺序与随机性没有关系。
登记正常的、足月、母乳喂养的婴儿以提供正常视觉分辨能力的参考。
每个组中完成五十个评价对象。不足月婴儿达到90kcal/kg/天后继续所试验的配方奶粉最少28天或直到出院，二者中采用时间长的。28天或出院后，二者中采用时间长的，所有不足月婴儿接受含铁的Enfamil或Enfalac。如治疗需要，可以用ProSobee、Lactofree、Alactamil、Nutramigen或Pregestimil代替含铁的Enfamil或Enfalac。足月婴儿将从母乳中接受最少85％的营养。对效果的主要检测包括视觉分辨能力和红细胞膜脂肪酸特性(即DHA和ARA水平)。对安全性的检测为生长和不利经历的报告。
2.对象2.1试验组的来源和特征可接受的不足月对象是吃不足月配方奶粉的、较健康的不足月婴儿。住院期足以允许28天的肠内摄入≥90kcal/kg/天并接受≥85％的试验用配方奶粉。所有种族和两种性别对该研究都是适用的。
2.2包括的标准不足月婴儿·出生体重≥900g·试验登记时，喂养配方奶粉·预计肠内摄入≥90kcal/kg/天，出院回家前进行时间≥28天·得到允许足月婴儿·38至42周妊娠·进行母乳喂养·得到允许2.3排除的标准不足月婴儿·出生时体重≥1500g不足月和足月婴儿·有患有疾病或先天畸形的病史，这些可能干扰研究者对对象的评价意见·在出生和完全口服喂养(≥90kcal/kg/天)之间大于24天·出生时小于妊娠年龄(＜10百分点(percentile))(SGA)·由医生确诊的引起坏死的小肠结肠炎·其它胃肠疾病·出生时视力或眼部损坏2.4伴随的药物治疗，住院，生病·在检测的3天内没有可能影响FPL反应的药物治疗·在FPL试验中没有病毒或细菌感染的迹象·没有已知的影响脂类代谢的药物治疗(例如，治疗水平的肝素)3.研究产物信息3.1配方包括的营养成分见附录A。
4.研究程序4.2.1登记在6个月内登记。理想的是，登记足够的对象，以便每组有10个对象完成多中心试验中的每点上的研究。每个配方奶粉组共50个婴儿完成该试验。
4.2.2试验进程的方案(见流程图，8.4节)4.2.2.1募集对象与合格的、健康的、不足月配方奶粉和足月的、母乳喂养的婴儿的母亲联系，给她们解释该试验，如果她们同意，那么签书面的许可材料。
从出生至48周探视或在期间的任何时间段的婴儿都可以作为足月婴儿登记。
4.2.2.2随机性募集的配方奶粉喂养的对象被随机分入试验组中。随机性可发生在肠内喂养达到50kcal/kg/天后的任何时间，直到全部肠内喂养开始(即≥90kcal/kg/天)。
4.2.2.3喂养同意后，所有不足月婴儿将接受给他们分配的研究配方奶粉，肠内喂养至少50kcal/kg/天。达到90kcal/kg/天后或者直到出院，该婴儿将继续该试验用配方奶粉28天，二者之间取时间长的。口服喂养的量、强度和速度将优选对临床处置婴儿适宜的。
指导所有的双亲在此研究期间不喂固体食物。指导这些父母试验用配方奶粉或母乳在登记至试验结束时用作唯一的食物来源。
4.2.2.4基准数据的采集由调查者在登记和随机的时间以病例报告的形式收集下列数据·获得父母的允许。
·孕后年龄。
·对象是不足月婴儿，其出生体重≥900g和≥1500g，或者38至42周孕足月的婴儿。
·不足月的婴儿接受婴儿配方奶粉或足月的婴儿接受母乳喂养。
·预计不足月的婴儿肠内摄取≥90kcal/kg/天，在出院回家前摄取时间≥28天。
·该对象没有潜在疾病、代谢的先天错误或先天畸形的病史，这些对调查者来说容易干扰对试验用配方奶粉的评价。
·该对象出生时不小于(＜10百分点)妊娠年龄。
·该对象没有医生确诊的坏死性小肠结肠炎。
·该对象无胃肠疾病。
·在出生和全部肠内喂养(即≥90kcal/kg/天)之间不超过24天。
·该对象出生时没有视力或眼部损坏。
·出生日期、性别、种族。
·出生体重、身长和头围4.2.2.5调查者周期数据的采集“在住院期间，当他们接受试验用配方奶粉时，每天记录不足月对象的体重。每周记录身长和头围，再附带测量体重。对于所给出的对象，每周称重应该使用同一秤。”“还在孕后年龄40、48和57周(不足月)和56和119天年龄观察(足月)时，记录体重、身长和头围。”4.2.2.6采血当不足月婴儿在试验中登记时，以及在试验用配方奶粉结束时(即出院或接受90kcal/kg/天试验用产品28天后)，调查者将确定该婴儿基本上是只喂配方奶粉。如果合乎标准，采血1.2ml检测血脂。将该样品按照附录B所述处理。
当对足月和不足月婴儿都检测视觉分辨能力时，还尝试在PCA 48周观察时采集类似的血样。
4.2.2.7在孕后年龄为48周和57周±4天时，通过被迫选择特惠照顾(FPL)进行视觉分辨能力调查当婴儿孕后年龄为48周和57周±4天时，在每个试验点由训练有素的人员根据Teller Acuity Card Procedure检测所有被试对象的视觉分辨能力。只有在FPL过程中接受过测定视觉分辨能力训练的人员才能作此试验，这是必要的。如果需要，按照附录C的方法，在华盛顿的西雅图儿童医院医疗中心眼科训练相应的人员并提供圆满结束训练的证明材料。
如果婴儿不能完成在孕后年龄为48周或57周±4天时的程序(即太闹、太嗜睡、太注意力不集中)，应在7天内重复该试验。
4.2.2.8暂时评价在不足月婴儿出院或接受试验用配方奶粉喂养达到90kcal/kg/天后28天时(二者中取时间长的)，调查者将填写“暂时评价”表。在回顾该对象的记录并与父母和医护人员讨论后，调查者将指出·该对象是否完成了至少28天的试验用配方奶粉的摄入≥90kcal/kg/天，以及是否得到了两个血样·是否试验未完成，以及原因·对象是否接受了甾类药物(糖皮质激素)·调查者对试验用配方奶粉的评价记录获得研究材料的开始和最后日期。
4.2.2.9最终评价在最后研究观察(孕后年龄为57周)时或者如果对象要出院则较早，调查者填写“最终评价”病例报告表。在回顾该对象的记录并与其父母讨论后，调查者将指出该对象是否(1)完成了喂养方案和所有的研究参数(即人体测量和视觉分辨能力检测)。
(2)未完成喂养方案。
(3)未完成及原因。
4.3临床观察4.3.1体检出生时，在住院时每周，然后在孕后年龄为40、48和57周±4天时，记录对象的体重、身长和头围。
用电子秤或精确到10g或1/2盎司的双梁称测量体重，其中砝码是不可分的。在住院期间，如果所用秤超过一种，应指定某一种为试验用秤，且在该秤上为特定对象的所有试验体重测量，或检查这些秤并确定为在预期的重量范围内称重相同。门诊病人的体重由校准办公室的秤测量。
表明在研究开始的12个月中对门诊病人用秤进行校准的文件将提供给负责人。
用适宜的测量仪器由两个检测者对躺着的婴儿进行身长的测量。一个人扶对象的头部将其与固定的垂直头板接触，而第二个人持对象的脚，让脚趾竖直，并还轻轻轻地牵引。用非张拉卷尺测量由头板至脚底的身体长度。
用可弯曲的、不伸展布或乙烯带测量头围。
4.3.2通过被迫选择特惠照顾(FPL)进行视觉分辨检测在孕后年龄为48周和57周±4天时，按照附录C给出的方法确定视觉分辨能力。
4.3.3实验室试验当开始使用或结束使用试验用配方奶粉时，通过刺脚根或静脉穿刺采集不足月婴儿的血样。在48周±4天PCA给足月和不足月婴儿采血。对该血样的处理方法见附录B。
4.4流程图
√当其发生时，应记录与配方奶粉消费有关或影响该消费的医疗问题。
*在住院期间每天记录和每周记录。
出院时或摄入试验用配方奶粉第28天时(达到90kcal/kg/天)，二者中取时间长的。
5.反应的标准反应的标准依靠下列因素·比对照用配方奶粉的视觉分辨能力好。
·视觉分辨能力与母乳喂养的足月婴儿具有可比性·红细胞磷脂酰乙醇胺DHA和ARA重量百分数大于配方奶粉的对照组。
·在孕后年龄为48和57周时以重量检测表示的生长与配方奶粉对照组具有可比性。
6.统计学6.1随机性如果该对象符合包括和排除的标准，对三个配方奶粉组之一将发生随机性。该随机性方案由Mead Johnson Research Center提供。对男性和女性提供独立的随机性方案。
6.2样本量的大小令人感兴趣的主要参数是视觉分辨能力，其通过被迫选择特惠照顾(FPL)检测。最小的临床相关差异为0.5倍频程。视觉分辨能力领域的顾问医生估计的标准误差为0.5倍频程。该研究中此值在变化性强的例子中增加了0.7。当在α水平为0.05时，每组需要32个对象以达到80％的可能性。
样本量的大小估计为每组50个时，对于接受试验用油的婴儿重量在孕后年龄为48周时比对照组低得超过400g，或在孕后年龄为57周时比对照组低得超过500g，标准偏差为800g，确定达到α+0.05，β+0.20。因此，确定每组50个对象将用于本试验。
6.3分析方法在每厘米周期中记录视觉分辨能力数据。这些值将用下列公式转化为每度周期数周期数/度＝(38×周期数/厘米)/55在分析前，将数据进行对数变换。用变量分析技术评估喂养方案组在视觉分辨能力方面的差异。如果喂养方案的整体F检验在α为0.05的水平有显著性，将在α为0.05的水平进行成对比较。如果未检测到显著性差异，则再进行试验后效力分析以说明该试验对检测最小临床相关差异具有适当的效力。
用变量分析来评价喂养方案在每个时间点的磷脂酰胆碱DHA和ARA水平和磷脂酰乙醇胺DHA和ARA水平的差异。如果整体F检验在α为0.05的水平具有显著性，则再在α水平为0.05时进行成对比较。
用变量分析评价喂养方案在孕后年龄为48和57周时的重量差异。统计模型包括喂养方案的期限、研究中心、性别和所有双向的相互作用。无显著性的相互作用将从最终的统计模型中除去。进行比较每个试验配方奶粉(EC)与对照配方奶粉(CF)的两个单方向检验。被检验的假设如下H0＝重量(CF)≤重量(EF)。
或假设如下H1＝重量(CF)＞重量(EF)。
如果H0不合格，而在孕后年龄为48周时对照配方奶粉的平均重量超过试验配方奶粉400mg以上，或在孕后年龄为57周时超过500g，那么结论是在孕后年龄为48周时该试验配方奶粉没有超过试验配方奶粉400g以上或在57周孕后年龄时没有超过500mg以上，则结论是该试验配方奶粉没有提供适当的生长。如果H0合格，那么将进行研究后效力分析以说明该研究有适当的效力来检测上述临床相关差异。如果达到了适当的效力，那么该结论是此试验配方奶粉确实提供了适当的生长。
用Fisher′s精确检验比较每组中在研究期间患病/症状的对象的比例。对报告的每个类型的疾病/症状进行此分析，如果需要，由调查者将其分类命名为相似的技术术语。
附录A配方奶粉的营养成分所有试验用配方奶粉为24kcal/floz并除所用试验用油外其成分与市售Enfamil不足月配方奶粉相同。这些油在方案中描述。
II最终研究报告试验设计在北美洲的16个新生儿中心(研究数目9698-9709，9712，9723，9743和9746)，进行此双盲、平行研究(计划3338)。比较三种不足月婴儿的食物。除加入占脂肪混合物的直到约3％的真菌和/或微观藻类油以提供试验水平的二十二碳六烯酸(DHA)和花生四烯酸(ARA)外，每种食物的成分相同。对照配方奶粉(C，Enfamil不足月配方奶粉)不含DHA或ARA，DHA配方奶粉(D)含有约占能量0.15％的DHA(占脂肪的0.34％)，而DHA+ARA配方奶粉(DA)含有约占能量0.14％的DHA(占脂肪的0.33％)和占能量0.27％的ARA(占脂肪的0.60％)。用这些配方奶粉喂养284个随机的婴儿，这些婴儿出生时重846至1560g，喂养至少28天。试验用配方奶粉摄入完毕时，给他们常规的婴儿配方奶粉，并延续到4个月的妊娠校正年龄。登记了90个只用人母乳喂养的足月婴儿，并延续到4个月龄作为参考组(H)。
试验目的和统计分析本试验主要的目的是建立在他们开始住院期间给不足月婴儿喂养D或DA的安全性，通过下列检测确定1)当使用该配方奶粉至少一个月时，检测生长、接受性和耐受性，及2)随后的4至5个月期间内，使用不添加的、常规足月婴儿配方奶粉的同时，严密控制和观察(治疗时间的4-5倍)。选择的主要生长参数为体重，评价使用试验用配方奶粉的重量大于或等于使用对照配方奶粉的重量的命题。对生长的副作用的单向统计学检验使检测如果存在的差异的效力最大。对所有的其它参数用双向检验。p值小于0.05证明其有显著性。
本试验的第二个目的是1)在试验喂养结束时评价红细胞磷脂中脂肪酸水平的影响，以及2)在2和4个月的校正年龄时，确定是否能显示出大于半个倍频程的对平均时间分辨能力的任何作用。
结果6个婴儿刚好超出了该重量参数而5个婴儿刚好比该试验中登记的小于24天的按时间顺序的年龄参数大。在每种情况下，临床和医学监控者作出判断，登记前根据他们与其它试验婴儿在所有其他项目的一致性，将他们包括在该试验中，该项目例如，健康状况、并发症的类型和妊娠年龄的体重。所有这些婴儿包括在本试验结果的分析中。
在登记时比较配方奶粉组(见表1)。孕后年龄、体重、身长和头围在登记时在组之间无差别。
所有的组具有可比性最终试验状态(表2)。在住院期间，在配方奶粉喂养组之间的离队情况没有差别。在试验完成时，在四个组之间的离队情况也没有差别。
当与配方奶粉C比较时，配方奶粉D和DA提供了适当的生长(见表3，
图1和附录1)。在住院期间，就体重的增加来说，D和DA组不比C组小，分别为33.3、34.7和30.7g/天。此外，在孕后年龄为40、48和57周时，D或DA与C相比，体重没有降低的现象(见表4，图2和附录1)；检测临床上相关降低的统计学可能性大于0.89。
此后的分析表明喂DA的婴儿比接受C和D的婴儿生长快(见表5和图1)。这种提高的生长提供了与C和D相比快速“不足月婴儿追赶”的现象。在孕后年龄为40周时，DA组达到的体重(3198g)大于C(3075g)和D(3051g)，但是没有完全赶上H组的足月出生体重(3438g)(见表4和图2)。这种追赶趋势在48至57周继续，那时DA组的平均体重与H组的没有差别，而C和D组还显著地低。
虽然平均身长的顺序与体重的相同，但是在住院和随访期间，配方奶粉组之间的身长没有差别(见表7和图3)。这可能是至少部分由于就生长而言身长参数较体重更不敏感。基于相同的原因，在孕后年龄为40、48和57周时，H组的平均身长比所有不足月婴儿组的长，这表明此参数上追赶得较慢。
头围是最不敏感的生长参数，且在除孕后年龄为40周时以外的任何时间在任何这四个组的之间没有差别(见表8和图4)。此时，不出所料，H组的出生头围比配方奶粉喂养的不足月婴儿的小，这可能是由于分娩时的形成和没有足够的时间调整子宫外环境。
在本试验中，报告了视觉分辨能力的提高，其中在医院中及出院后继续用补充DHA的配方奶粉喂养不足月的婴儿。在该研究中，视觉分辨能力检测约3个月，停止试验用配方奶粉后检查约5个月，以确定是否能观察到在至少半个倍频程中残留的有益效果。虽然在这些时间在配方奶粉组之间没有发现在视觉分辨能力上的差异(见表8和图5)，但是使用的分辨能力卡方法、试验用配方奶粉的喂养时间和/或不使用试验用配方奶粉的时间长度在检查时可能预防该发现。但是，在孕后年龄为57周时，与被测配方奶粉组相比，母乳喂养的足月婴儿确实具有统计学上较高的视觉分辨能力评分。但是即使这些差别最多只0.33倍频程并没有临床的显著性(见图6)。重要的是注意在3至5个月的随访中母乳喂养婴儿继续接受DHA和ARA，而配方奶粉喂养组没有。因此，在表现时的这点小差别在以前的研究发现以及即使在相同妊娠年龄的足月和不足月婴儿的发育差异的基础上不是意外的。
在配方奶粉喂养前，在试验配方奶粉喂养结束时，及孕后年龄为48周时，在红细胞的磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺部分测定个体脂肪酸水平(见表9和10)。不足月婴儿组在试验配方奶粉喂养开始时是相当的。在试验配方奶粉喂养结束时，在这些组之间的个体脂肪酸水平有所不同。在分别的补充组中DHA和ARA统计学上显著较高。其它脂肪酸水平反映了补充的效果。在脂肪酸水平或代谢无临床显著变化。中断试验用配方奶粉并使用不含DHA或ARA食物约3个月后，在配方奶粉喂养组之间没有检测到脂肪酸水平的差别，除了磷脂酰乙醇胺水平为18∶2(范围8.9-9.3)和DHA(范围3.2-4.1％)外，其差异没有确定为临床显著性。但是，母乳喂养组在13脂肪酸水平方面与配方奶粉喂养婴儿相比显示了统计学显著性差异。无疑这些差异是由于人母乳和足月配方奶粉的脂肪酸组成的差别，该差别包括后者中缺乏DHA和ARA。
不足月婴儿并发症在所有组中相似(见表11)。所有婴儿中超过80％进行了眼科检查，而其中超过90％用超声波评价了头部。具体地讲，早产的视网膜病的发病率和严重性(ROP或晶状体后纤维组织形成/RLF)和心室内出血或其并发症的发病率在配方奶粉组之间无差异。没有鉴定出与喂养组相关的并发症。
在配方奶粉组之间的严重不利经历没有不同(p＝0.93)，并在不足月婴儿人群预计的范围内，对于试验用配方奶粉在C组中为6％，在D组中为5％，而在DA组中为6％(见表12)。试验用配方奶粉阶段结束后，在不足月组之间的严重不利经历也没有差别(见表13)在C组中为13％，在D组中为15％，而在DA组中为15％。但是，足月婴儿母乳喂养组如所预期的显著地极少有严重的不利经历(1％，p＝0.002)。报告了两个婴儿患有婴儿猝死综合征(SIDS)，一个在C组中，一个在D组中；在所有四个组之间此并发症没有显著差异。
结论我们推断在它们在孕后年龄为40周前开始住院期间，在不足月婴儿配方奶粉的基础上，给不足月婴儿喂养0.13％卡的来自微观藻类油的DHA以及0.13％卡的来自微观藻类油的DHA加上0.26％卡的来自真菌油的ARA，这是安全的。这些微观藻类和真菌油添加物对生长、临床并发症或不利的事件不会导致不利作用。此外，本研究表明了对不足月婴儿来说，使用添加有这些来源的DHA和ARA的Enfamil不足月配方奶粉，比使用没有添加这些成分的配方奶粉或只添加了DHA的配方奶粉，产生了生长的优势。当在婴儿在补充的配方奶粉中断后约3至5个月(校正年龄2至4个月)进行检测时，没有检测出视觉分辨能力的可检测的优点。但是，提供摄入人母乳水平的长链不饱和酸是有保障的，因为它们对脑发育是重要的，并且在此早期发育期促进了提高了的追赶生长。
表1不足月对象的出生统计
表2最终试验状态总结
*9709-03(DHA)和9743-304(DHA)的CRFs标记为中断，因为这些对象至在27天内符合使用试验用配方奶粉的标准。此处这些对象被计算为完成，因为这些对象在有类似摄入的其它点标记为完成。
**基于完成了试验用配方奶粉阶段的对象。在足月配方奶粉阶段中，给对象喂市售的配方奶粉。转换为不同的市售配方奶粉不导致足月配方奶粉阶段的结束。
表3
*虚假设的单向检验检验平均值＞＝对照平均值表4
*虚假设的单向检验检验平均值＞＝对照平均值表5此后的重量分析
表6
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表10
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表11不足月婴儿并发症
*该统计检验基于二分反应存在或不存在。
表12在试验用配方奶粉阶段报告的严重不利事件
表13足月配方奶粉阶段报告的严重的不利事件
附录1统计学分析包括的重量表
*在生长速度计算中4个对象有9次称重。续表见下一页。
附录1统计学分析包括的重量表
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附录1统计学分析包括的重量表
权利要求
1.DHA和ARA在制备增强婴儿身体生长的营养产品或营养添加物中的用途，其中DHA和ARA以增强身体生长的量应用，包含含量为至少约10mg/100kcal的DHA和含量为至少约30mg/100kcal的ARA，且其中DHA和ARA来源于选自鱼油、单细胞油和脑脂类的来源。
2.权利要求1的用途，其中营养产品或添加物是婴儿制剂。
3.权利要求2的用途，其中婴儿制剂是完全营养的，且包含含量为约3g/100kcal-约7g/100kcal的脂类、含量为约1g/100kcal-约5g/100kcal的蛋白质和含量为约8g/100kcal-约12g/100kcal的碳水化合物。
4.权利要求1的用途，其中婴儿营养产品或婴儿营养添加物包含含量为每100kcal营养产品或添加物至少约17mg的DHA和含量为每100kcal营养产品或添加物至少约31mg的ARA。
5.权利要求1的用途，其中婴儿营养产品或婴儿营养添加物包含含量为每100kcal营养产品或添加物至少约18.5mg的DHA和含量为每100kcal营养产品或添加物至少约33.6mg的ARA。
6.权利要求1的用途，其中婴儿营养产品或婴儿营养添加物包含含量为每100kcal营养产品或添加物10mg-约50mg的DHA和含量为每100kcal营养产品或添加物约30mg-约100mg的ARA。
7.权利要求1的用途，其中婴儿营养产品或婴儿营养添加物包含含量为每100kcal营养产品或添加物10mg-约33mg的DHA和含量为每100kcal营养产品或添加物约30mg-约67mg的ARA。
8.权利要求1的用途，其中婴儿营养产品或婴儿营养添加物包含含量为每100kcal营养产品或添加物10mg-约25mg的DHA和含量为每100kcal营养产品或添加物约30mg-约50mg的ARA。
9.权利要求1的用途，其中婴儿营养产品或婴儿营养添加物包含含量为每100kcal营养产品或添加物10mg-约20mg的DHA和含量为每100kcal营养产品或添加物约30mg-约40mg的ARA。
10.权利要求1的用途，其中婴儿营养产品或婴儿营养添加物包含含量为每100kcal营养产品或添加物约15mg-约20mg的DHA和含量为每100kcal营养产品或添加物约30mg-约40mg的ARA。
11.权利要求1的用途，其中婴儿营养产品或婴儿营养添加物包含含量为每100kcal营养产品或添加物约17mg-约50mg的DHA和含量为每100kcal营养产品或添加物约31mg-约100mg的ARA。
12.权利要求1的用途，其中婴儿营养产品或婴儿营养添加物包含含量为每100kcal营养产品或添加物约17mg-约33mg的DHA和含量为每100kcal营养产品或添加物约31mg-约67mg的ARA。
13.权利要求1的用途，其中婴儿营养产品或婴儿营养添加物包含含量为每100kcal营养产品或添加物约17mg-约25mg的DHA和含量为每100kcal营养产品或添加物约31mg-约50mg的ARA。
14.权利要求1的用途，其中婴儿营养产品或婴儿营养添加物包含含量为每100kcal营养产品或添加物约17mg-约20mg的DHA和含量为每100kcal营养产品或添加物约31mg-约40mg的ARA。
15.权利要求1的用途，其中婴儿营养产品或婴儿营养添加物包含含量为每100kcal营养产品或添加物约18.5mg-约33mg的DHA和含量为每100kcal营养产品或添加物约33.6mg-约67mg的ARA。
16.权利要求1的用途，其中婴儿营养产品或婴儿营养添加物包含含量为每100kcal营养产品或添加物约18.5mg-约25mg的DHA和含量为每100kcal营养产品或添加物约33.6mg-约50mg的ARA。
17.权利要求1的用途，其中婴儿营养产品或婴儿营养添加物包含含量为每100kcal营养产品或添加物约18.5mg-约20mg的DHA和含量为每100kcal营养产品或添加物约33.6mg-约40mg的ARA。
18.权利要求1的用途，其中DHA和ARA来源于包含鱼油的来源。
19.权利要求1的用途，其中DHA和ARA来源于包含单细胞油的来源。
20.权利要求1的用途，其中DHA和ARA来源于包含脑脂类的来源。
21.权利要求1的用途，其中营养添加物选自油滴剂、小药囊和维生素。
22.用于增强婴儿身体生长的婴儿制剂，包含含量为每100kcal婴儿制剂至少10mg的DHA和含量为每100kcal婴儿制剂至少约30mg的ARA，且其中DHA和ARA来源于选自鱼油、单细胞油和脑脂类的来源。
23.权利要求22的婴儿制剂，其中婴儿制剂是完全营养的，且包含含量为约3g/100kcal-约7g/100kcal的脂类、含量为约1g/100kcal-约5g/100kcal的蛋白质和含量为约8g/100kcal-约12g/100kcal的碳水化合物。
24.权利要求22的婴儿制剂，其中婴儿制剂包含含量为每100kcal婴儿制剂至少约17mg的DHA和含量为每100kcal婴儿制剂至少约31mg的ARA。
25.权利要求22的婴儿制剂，其中婴儿制剂包含含量为每100kcal婴儿制剂至少约18.5mg的DHA和含量为每100kcal婴儿制剂至少约33.6mg的ARA。
26.权利要求22的婴儿制剂，其中婴儿制剂包含含量为每100kcal婴儿制剂10mg-约50mg的DHA和含量为每100kcal婴儿制剂约30mg-约100mg的ARA。
27.权利要求22的婴儿制剂，其中婴儿制剂包含含量为每100kcal婴儿制剂10mg-约33mg的DHA和含量为每100kcal婴儿制剂约30mg-约67mg的ARA。
28.权利要求22的婴儿制剂，其中婴儿制剂包含含量为每100kcal婴儿制剂10mg-约25mg的DHA和含量为每100kcal婴儿制剂约30mg-约50mg的ARA。
29.权利要求22的婴儿制剂，其中婴儿制剂包含含量为每100kcal婴儿制剂10mg-约20mg的DHA和含量为每100kcal婴儿制剂约30mg-约40mg的ARA。
30.权利要求22的婴儿制剂，其中婴儿制剂包含含量为每100kcal婴儿制剂约15mg-约20mg的DHA和含量为每100kcal婴儿制剂约30mg-约40mg的ARA。
31.权利要求22的婴儿制剂，其中婴儿制剂包含含量为每100kcal婴儿制剂约17mg-约50mg的DHA和含量为每100kcal婴儿制剂约31mg-约100mg的ARA。
32.权利要求22的婴儿制剂，其中婴儿制剂包含含量为每100kcal婴儿制剂约17mg-约33mg的DHA和含量为每100kcal婴儿制剂约31mg-约67mg的ARA。
33.权利要求22的婴儿制剂，其中婴儿制剂包含含量为每100kcal婴儿制剂约17mg-约25mg的DHA和含量为每100kcal婴儿制剂约31mg-约50mg的ARA。
34.权利要求22的婴儿制剂，其中婴儿制剂包含含量为每100kcal婴儿制剂约17mg-约20mg的DHA和含量为每100kcal婴儿制剂约31mg-约40mg的ARA。
35.权利要求22的婴儿制剂，其中婴儿制剂包含含量为每100kcal婴儿制剂约18.5mg-约33mg的DHA和含量为每100kcal婴儿制剂约33.6mg-约67mg的ARA。
36.权利要求22的婴儿制剂，其中婴儿制剂包含含量为每100kcal婴儿制剂约18.5mg-约25mg的DHA和含量为每100kcal婴儿制剂约33.6mg-约50mg的ARA。
37.权利要求22的婴儿制剂，其中婴儿制剂包含含量为每100kcal婴儿制剂约18.5mg-约20mg的DHA和含量为每100kcal婴儿制剂约33.6mg-约40mg的ARA。
38.权利要求22的婴儿制剂，其中DHA和ARA来源于包含鱼油的来源。
39.权利要求22的婴儿制剂，其中DHA和ARA来源于包含单细胞油的来源。
40.权利要求22的婴儿制剂，其中DHA和ARA来源于包含脑脂类的来源。
全文摘要
促进不足月婴儿生长的方法，包括使用某种长链多不饱和脂肪酸。优选给这些婴儿使用含二十二碳六烯酸和花生四烯酸的组合的婴儿制剂。
文档编号A61K31/202GK1660065SQ200510004488
公开日2005年8月31日 申请日期1998年3月20日 优先权日1997年3月27日
发明者D·A·沙德, K·L·默克尔, J·W·汉森 申请人:布里斯托尔-迈尔斯斯奎布公司