专利名称：一种猪苓多糖冻干粉针剂及其制备方法
技术领域：
本发明属于中药制药技术领域，具体涉及一种猪苓多糖冻干粉针剂及其制备方法。
背景技术：
猪苓多糖是多孔菌科真菌猪苓Polyporusumbellatus(Pers)Fries中提取的有效成分，它有调节机体免疫功能的作用，对慢性肝炎、肿瘤病有一定的疗效。以猪苓多糖为主要有效成分的制剂有猪苓多糖胶囊[申请号为CN93101212的专利文献]、猪苓多糖注射液和猪苓多糖冻干粉针剂。猪苓注射液[部颁中药十八册]的制备方法如下水提醇沉两次的方法得到猪苓多糖粗品，粗品用鞣酸处理、活性炭处理、乙醇沉淀、过中性氧化铝、乙醇沉淀的方法得到猪苓多糖纯品，再配制成注射液；猪苓多糖冻干粉针剂[申请号为CN95115855的专利文献]的制备方法如下水提醇沉两次、过阴、阳树脂柱，过葡聚糖凝胶柱、微孔滤膜或超滤、用喷雾干燥或冷冻干燥得到猪苓多糖。上述方法均采用经典的水提醇沉方法来得到猪苓多糖，但是却含有很大的不足热水提取，虽然多糖的提取效率较高，但是热水溶解的杂质的量也随之增加；杂质量的增加使得后续的除杂工艺非常的复杂、繁琐；工艺的复杂、繁琐就会使得在除杂的过程中，有效成分遭受损失；其结果使得最终从猪苓药材中得到的多糖的提取率非常的低。这对于资源不是非常丰富的猪苓药材来说，是一种很大的浪费；而且提取效率低，会使得制成的注射制剂的成本很高，对于患者来说，也是一种负担；提取物中除了含有特定范围分子量的活性猪苓多糖成分之外，还含有其它无活性的大分子和小分子成分，所以并未达到真正的“去粗取精”。
发明内容
本发明的目的是公开一种猪苓多糖冻干粉针剂。
本发明的另一个目的是公开上述粉针剂的制备方法。
本发明通过以下方案实现。
一、制备方法(1)取猪苓药材，粉碎，过40目筛，加8-14倍量水，浸泡半小时，放入超声提取罐中，进行超声振荡提取，时间为30-60分钟，振荡频率为20-80kHz，提取3-4次，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩成浸膏；(2)将上述浸膏加入30-40倍量60℃-80℃的水，搅拌，静置片刻，倾出上清液，减压浓缩至溶液∶药材为1∶1，加入95％乙醇使得含醇量为70％-90％，静置24小时，过滤，沉淀备用；(3)将上述沉淀用20-30倍量水溶解，在搅拌下滴加1％鞣酸的同时加温，煮沸后离心除去沉淀物，继续加鞣酸至溶液不产生混浊，过已处理好的聚酰胺柱，用4-8倍的水洗脱，收集水洗液，用截留分子量为30000-40000的超滤膜超滤，滤液再用截留分子量为5000-8000的超滤膜超滤，收集未通过液，减压浓缩，干燥，即得猪苓多糖；(4)称取上述猪苓多糖，加入水溶性冻干赋形剂，用葡甲胺调节pH值为7.0-8.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，包装得到本发明冻干粉针制剂。
超声提取技术是利用超声波产生强烈振动，高速度，强烈的空化效应，搅拌作用，能破坏药材的细胞，使溶剂能渗透到药材细胞中，从而加速药材中的有效成分溶解于溶剂中。超声技术提出率高、提取时间短、提取温度低，在本发明的制备方法中对猪苓药材的提取，可以使得猪苓多糖有效成分提取率高；温度低，对于杂质的提取量比起水煎少了很多，对于后续的除杂过程来了方法。
鞣酸除蛋白是经典的方法，但是鞣酸的量不易控制。鞣酸加入过少，对蛋白的沉淀不完全，会使得药物的安全性下降；加入过多，若不除去，会增加注射时患者的疼痛感。聚酰胺对于鞣酸有很好的吸附作用，对猪苓多糖则没有吸附作用。利用这一点，可以除去沉淀蛋白所加入的过量的鞣酸和一些能被聚酰胺吸附的杂质，对猪苓多糖进一步纯化。
超滤技术是指常温下以一定压力和流量，利用不对称微孔结构和半透膜分离介质、以错流方式进行过滤，使溶剂及小分子物质通过，高分子物质被滤膜阻留，从而达到分离、纯化、浓缩的发展最快的新型膜分离技术。与传统分离方法相比，具有分离过程无相变、分离效率高、无需添加化学试剂无污染、无需加热、能耗低、条件温和不破坏成分、操作方便、流程短的特点。本发明利用超滤技术，选择合适的超滤膜，去除了无活性的大分子和小分子物质，对具有活性的猪苓多糖进一步纯化。
二、制备方法提取率的比较为了说明本发明制备方法的科学性、合理性，本发明研究人员进行了下述的比较实验。
将同一批猪苓药材分成数份，每份5kg，制备成下述的1、2、3号样品。
1号猪苓多糖样品按部颁中药十八册中的猪苓多糖注射液中的方法制备；2号猪苓多糖样品按申请号为CN95115855的专利文献中的方法制备；3号猪苓多糖样品按本发明的制备方法制备。均由广东天之骄药物开发有限公司提供。
含量测定方法按照部颁中药十八册中猪苓多糖注射液项下含量测定中的分光光度法进行。猪苓药材中多糖的含量为0.76％(g/g)。结果见表1。
表1制备方法提取率的比较
由表1的实验数据可以看出，在相同量的原料药材时，本发明制备方法的猪苓多糖提取率比其它两种方法的提取率有显著性的提高，这充分说明本发明制备方法更加科学、合理。
三、含量测定为了证实本发明制备方法得到的猪苓多糖中具有活性成分的猪苓多糖的含量更高，本发明研究人员对上述1号、2号、3号样品进行了含量测定。
测定法精密称取上述1号、2号、3号各50mg，置50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。精密量取1ml置50ml量瓶中，加水置刻度，摇匀。将溶液分别通过截留分子量为40000的超滤膜，收集的滤液再通过截留分子量为5000的超滤膜，收集未通过液于50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。以下按照部颁中药十八册中的猪苓多糖注射液中的含量测定方法进行测定。结果见表2。
表2含量测定结果的比较
由以上含量测定结果可以看出本发明制备方法得到的猪苓多糖中活性多糖的含量明显高于其它两种方法得到的猪苓多糖，这充分说明本发明制备方法更加科学、合理。
四、制备方法成品量的比较部颁标准十八册中猪苓多糖注射液的规格为20mg/支。为了便于比较和用药安全，将上述得到的1、2、3号样品也配制成20mg/支，也制备成相应的剂型。均由广东天之骄药物开发有限公司提供。结果见表3。
表3制备方法成品量的比较
由表3数据可以看出，在相同量的猪苓药材，制剂规格含量相同的前提下，本发明制备方法制成的猪苓多糖冻干粉针剂的数量远远大于其它两种方法得到的制剂的数量。这进一步说明本发明制备方法可以大大节省原料药，降低药物成本。
总结由以上实验可以看出，本发明制备方法的对于猪苓药材中猪苓多糖提取率、活性多糖的提取率都明显高于其它方法。为了用药的安全和有效，在药物规格相同的情况下，本发明的制备方法得到的猪苓多糖冻干粉针剂的成品量远远大于其它方法的成品量，这无形中降低了药物的生产成本，对于生产厂家、患者来说都是非常有益的，说明本发明猪苓多糖冻干粉针剂的制备方法是科学的、合理的。本发明猪苓多糖冻干粉针剂的制备方法在现有的技术水平下很容易实现，而且完全可以实现自动化，比起上述的其它两种生产方法，本发明生产方法周期短，步骤少，原料消耗少，说明本发明猪苓多糖冻干粉针剂的制备方法对于上述方法中不足的改进是成功的，合理的，科学的。
五、药理实施例为了证实本发明猪苓多糖冻干粉针剂的治疗效果，本发明研究人员对本发明猪苓多糖冻干粉针剂进行了药效学试验。
本发明猪苓多糖冻干粉针剂(规格为20mg/支)，由广东天之骄药物开发有限公司提供；市售猪苓多糖注射液(规格为20mg/2ml/支)由江苏正大天晴药业股份有限公司生产。
体内肿瘤生长抑制实验选用昆明种雄性小鼠30只，18-22g。将接种后7天的H22瘤株荷瘤小鼠颈椎脱臼处死，在无菌条件下取出腹水，用生理盐水1∶3稀释，于腋窝皮下接种瘤液0.2ml。接种后24小时，将动物随机分为4组，每组10只。设空白对照组，猪苓多糖注射液组，本发明猪苓多糖冻干粉针剂低剂量组，本发明猪苓多糖冻干粉针剂高剂量组。阴性对照组给予等体积的生理盐水，猪苓多糖注射液组和本发明猪苓多糖冻干粉针剂高剂量组按照20mg/kg的剂量腹腔注射给药，本发明猪苓多糖冻干粉针剂低剂量组按照15mg/kg的剂量腹腔注射给药。每日1次，连续给药10天。末次给药后，颈椎脱臼处死动物，分别称体重、瘤重，计算肿瘤抑制率，进行疗效评价。
肿瘤生长抑制率(％)＝(对照组平均瘤重-治疗组平均瘤重)/对照组平均瘤重×100％实验结果见表4。
表4对小鼠肝癌H22生长的抑制作用(X±S)
注与对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01；与猪苓多糖注射液组比较#P＜0.05。
由表4实验结果可以看出本发明猪苓多糖冻干粉针剂和猪苓多糖注射液均能抑制小鼠肝癌H22生长的作用，与对照组比较有显著性的差异；且在给药剂量相同时，本发明猪苓多糖冻干粉针剂的对于小鼠肝癌H22生长的抑制率大于猪苓多糖注射液。说明本发明猪苓多糖冻干粉针剂的治疗效果更好。
五、制备实施例实施例1(1)取猪苓药材，粉碎，过40目筛，加14倍量水，浸泡半小时，放入超声提取罐中，进行超声振荡提取，时间为60分钟，振荡频率为20kHz，提取4次，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩成浸膏；(2)将上述浸膏加入40倍量80℃的水，搅拌，静置片刻，倾出上清液，减压浓缩至溶液∶药材为1∶1，加入95％乙醇使得含醇量为90％，静置24小时，过滤，沉淀备用；(3)将上述沉淀用30倍量水溶解，在搅拌下滴加1％鞣酸的同时加温，煮沸后离心除去沉淀物，继续加鞣酸至溶液不产生混浊，过已处理好的聚酰胺柱，用4倍的水洗脱，收集水洗液，用截留分子量为30000的超滤膜超滤，滤液再用截留分子量为5000的超滤膜超滤，收集未通过液，减压浓缩，干燥，即得猪苓多糖；(4)称取上述猪苓多糖20g，加入甘露醇，用葡甲胺调节pH值为7.0，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，包装得到本发明冻干粉针制剂1000支。
实施例2(1)取猪苓药材，粉碎，过40目筛，加8倍量水，浸泡半小时，放入超声提取罐中，进行超声振荡提取，时间为30分钟，振荡频率为80kHz，提取3次，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩成浸膏；(2)将上述浸膏加入30倍量60℃的水，搅拌，静置片刻，倾出上清液，减压浓缩至溶液∶药材为1∶1，加入95％乙醇使得含醇量为70％，静置24小时，过滤，沉淀备用；(3)将上述沉淀用20倍量水溶解，在搅拌下滴加1％鞣酸的同时加温，煮沸后离心除去沉淀物，继续加鞣酸至溶液不产生混浊，过已处理好的聚酰胺柱，用8倍的水洗脱，收集水洗液，用截留分子量为40000的超滤膜超滤，滤液再用截留分子量为8000的超滤膜超滤，收集未通过液，减压浓缩，干燥，即得猪苓多糖；(4)称取上述猪苓多糖20g，加入聚乙烯吡咯烷酮，用葡甲胺调节pH值为8.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，包装得到本发明冻干粉针制剂1000支。
实施例3(1)取猪苓药材，粉碎，过40目筛，加10倍量水，浸泡半小时，放入超声提取罐中，进行超声振荡提取，时间为50分钟，振荡频率为60kHz，提取3次，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩成浸膏；(2)将上述浸膏加入35倍量70℃的水，搅拌，静置片刻，倾出上清液，减压浓缩至溶液∶药材为1∶1，加入95％乙醇使得含醇量为80％，静置24小时，过滤，沉淀备用；(3)将上述沉淀用25倍量水溶解，在搅拌下滴加1％鞣酸的同时加温，煮沸后离心除去沉淀物，继续加鞣酸至溶液不产生混浊，过已处理好的聚酰胺柱，用6倍的水洗脱，收集水洗液，用截留分子量为35000的超滤膜超滤，滤液再用截留分子量为6000的超滤膜超滤，收集未通过液，减压浓缩，干燥，即得猪苓多糖；(4)称取上述猪苓多糖20g，加入葡聚糖，用葡甲胺调节pH值为7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，包装得到本发明冻干粉针制剂1000支。
实施例4(1)取猪苓药材，粉碎，过40目筛，加12倍量水，浸泡半小时，放入超声提取罐中，进行超声振荡提取，时间为45分钟，振荡频率为40kHz，提取4次，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩成浸膏；(2)将上述浸膏加入37倍量75℃的水，搅拌，静置片刻，倾出上清液，减压浓缩至溶液∶药材为1∶1，加入95％乙醇使得含醇量为85％，静置24小时，过滤，沉淀备用；(3)将上述沉淀用22倍量水溶解，在搅拌下滴加1％鞣酸的同时加温，煮沸后离心除去沉淀物，继续加鞣酸至溶液不产生混浊，过已处理好的聚酰胺柱，用5倍的水洗脱，收集水洗液，用截留分子量为38000的超滤膜超滤，滤液再用截留分子量为7000的超滤膜超滤，收集未通过液，减压浓缩，干燥，即得猪苓多糖；(4)称取上述猪苓多糖20g，加入果糖，用葡甲胺调节pH值为8.0，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，包装得到本发明冻干粉针制剂1000支。
实施例5(1)取猪苓药材，粉碎，过40目筛，加11倍量水，浸泡半小时，放入超声提取罐中，进行超声振荡提取，时间为35分钟，振荡频率为30kHz，提取3次，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩成浸膏；(2)将上述浸膏加入33倍量65℃的水，搅拌，静置片刻，倾出上清液，减压浓缩至溶液∶药材为1∶1，加入95％乙醇使得含醇量为75％，静置24小时，过滤，沉淀备用；(3)将上述沉淀用28倍量水溶解，在搅拌下滴加1％鞣酸的同时加温，煮沸后离心除去沉淀物，继续加鞣酸至溶液不产生混浊，过已处理好的聚酰胺柱，用7倍的水洗脱，收集水洗液，用截留分子量为32000的超滤膜超滤，滤液再用截留分子量为5600的超滤膜超滤，收集未通过液，减压浓缩，干燥，即得猪苓多糖；(4)称取上述猪苓多糖20g，加入乳糖，用葡甲胺调节pH值为7.3，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，包装得到本发明冻干粉针制剂1000支。
实施例6(1)取猪苓药材，粉碎，过40目筛，加9倍量水，浸泡半小时，放入超声提取罐中，进行超声振荡提取，时间为40分钟，振荡频率为50kHz，提取4次，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩成浸膏；(2)将上述浸膏加入35倍量70℃的水，搅拌，静置片刻，倾出上清液，减压浓缩至溶液∶药材为1∶1，加入95％乙醇使得含醇量为82％，静置24小时，过滤，沉淀备用；(3)将上述沉淀用25倍量水溶解，在搅拌下滴加1％鞣酸的同时加温，煮沸后离心除去沉淀物，继续加鞣酸至溶液不产生混浊，过已处理好的聚酰胺柱，用6倍的水洗脱，收集水洗液，用截留分子量为36000的超滤膜超滤，滤液再用截留分子量为6400的超滤膜超滤，收集未通过液，减压浓缩，干燥，即得猪苓多糖；(4)称取上述猪苓多糖20g，加入葡萄糖，用葡甲胺调节pH值为8.2，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，包装得到本发明冻干粉针制剂1000支。
权利要求
1.一种猪苓多糖冻干粉针剂，其特征在于，它是由分子量5000-40000的猪苓多糖和水溶性注射用药用辅料制备而成的。
2.一种猪苓多糖冻干粉针剂的制备方法，其特征在于，它包括以下步骤(1)取猪苓药材，粉碎，过40目筛，加8-14倍量水，浸泡半小时，放入超声提取罐中，进行超声振荡提取，时间为30-60分钟，振荡频率为20-80kHz，提取3-4次，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩成浸膏；(2)将上述浸膏加入30-40倍量60℃-80℃的水，搅拌，静置片刻，倾出上清液，减压浓缩至溶液∶药材为1∶1，加入95％乙醇使得含醇量为70％-90％，静置24小时，过滤，沉淀备用；(3)将上述沉淀用20-30倍量水溶解，在搅拌下滴加1％鞣酸的同时加温，煮沸后离心除去沉淀物，继续加鞣酸至溶液不产生混浊，过已处理好的聚酰胺柱，用4-8倍的水洗脱，收集水洗液，用截留分子量为30000-40000的超滤膜超滤，滤液再用截留分子量为5000-8000的超滤膜超滤，收集未通过液，减压浓缩，干燥，即得猪苓多糖；(4)称取上述猪苓多糖，加入水溶性冻干赋形剂，用葡甲胺调节pH值为7.0-8.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，包装得到本发明冻干粉针制剂。
全文摘要
本发明属于中药制药技术领域，具体涉及一种猪苓多糖冻干粉针剂，它是由分子量5000－40000的猪苓多糖和水溶性注射用药用辅料制备而成的。本发明还涉及上述粉针剂的制备方法。实验结果证明，本发明制备方法得到的猪苓多糖提取物中活性多糖的含量更高，而且本发明制备方法生产周期短、步骤少、成本低、非常适合工业化生产。
文档编号A61P1/16GK1682751SQ200510008760
公开日2005年10月19日 申请日期2005年2月25日 优先权日2005年2月25日
发明者张海峰 申请人:张海峰