专利名称：一种脉络宁冻干粉针剂的制备新方法
技术领域：
本发明属于中药制药技术领域，具体涉及一种脉络宁冻干粉针剂的制备新方法。
背景技术：
脉络宁注射液由石斛、金银花、牛膝、玄参制成，是在著名医方“四妙勇安汤”的基础上，以中医理论为指导，采用中西医结合的方法研究成的中药复方注射剂，具有养阴清热、补益肝肾、活血化淤的功效。临床上用于治疗各科的血瘀证和血栓闭塞性血管病，尤其是各种心、脑血管疾病。自投入临床验证至今已历20年，疗效确切，起效迅速，不良反应少，被国家中医药管理局评为“中医医院急诊科室必备中成药”，在全国范围的医院中广泛使用。
与此同时，资源枯竭的危机也大踏步走来，尤其是石斛药材。根据参考文献[张尊建，等。脉络宁注射液HPLC/UV/MS指纹图谱研究。中成药，2004，26(3)175]，脉络宁注射液主要原料药之一的石斛用的是密花石斛或马鞭石斛，可这些供药用的石斛由于药农的过度采收加上森林的破坏，目前国内绝大多数原产地已经没有可利用的野生资源，使用的石斛多产自缅甸、老挝、越南、孟加拉国等国的原始森林。由于石斛属植物被列入《濒危野生动植物国际贸易公约》附录II类，国家对其采收、经营、进出口进行严格限制和管理，目前这些石斛已越来越无法满足市场需求。供不应求直接导致的后果是价格上扬，这对于患者来说，无疑是一个很大的负担。石斛在处方中的作用非常重要，若是去掉，会直接影响药物的疗效。
近年来，虽然石斛产业基地在全国各地相继出现，尤其是铁皮石斛已在上海首次大批量移栽获得成功，人工种植也在研究中，但是资源仍然是供不应求。在目前的研究中，还未找到一种资源丰富、疗效好的可以替代石斛的中药，使得药物在疗效确切的前提下仍然可以保持较低的价格。比较可行的方法就是在保证疗效的前提下，降低药材的用量，以此来降低药物的成本和价格。
申请号为92107848的专利文献，公开了脉络宁注射液的工艺方法采用水提醇沉，醋酸乙酯萃取的方法得到有效部位。上述方法虽然经典，但对于有效成分的损失却非常大。水只能提取极性较大的成分，对于极性较小的有效成分提取效果非常的差；乙醇沉淀过程中，沉淀在形成、沉积的过程中会吸附、包裹有效成分；石斛药材入复方宜先煎、单用可久煎[《中国药典》2000年版，70]，可见上述方法对石斛药材有效成分的提取很不科学，很不合理。所以，致使脉络宁注射液中各原料药中有效成分的提取效率非常低，尤其是石斛药材中的有效成分滨蒿内酯的提取率非常低。这对于资源匮乏的石斛药材来说是一种很大的浪费。
脉络宁注射液一次用药剂量大，在临床应用中表现出很多的不良反应[陈爱群，等。70例脉络宁注射液不良反应文献分析。药物不良反应杂志，2003，2162]。
注射液的稳定性差，其中所含的有效成分很容易变质为活性弱的成分或无效成分，而且注射液在贮藏、运输中很不方便。
发明内容
由此看来，患者对疗效好、价格低廉的脉络宁新产品存在着很大的期待；而制药企业也渴求一种疗效好、低成本的脉络宁新产品的问世。本发明研究人员经过反复探索，找到一种脉络宁的制备方法。本发明的制备方法对于脉络宁中的原料药石斛、金银花、牛膝、玄参均有较高的提取率，可以降低原料药的使用量。本发明研究人员用资源相对丰富、价格低廉的铁皮石斛代替已经濒临灭绝的、野生的、昂贵的、进口的其它石斛药材，用本发明的制备方法对铁皮石斛药材单独进行提取，能明显提高铁皮石斛中有效成分的提取率，从而使得石斛的使用量减少。这不仅降低了石斛药材的使用量，保护了石斛药材的资源，而且降低了原料药的价格，使得最终制成的药物成本降低。原料药的降低，同时也使得本发明的冻干粉针剂的不良反应发生率大大降低。制成冻干粉针剂，使其稳定性更好，使用更方便。本发明专利是对申请号为200410002309的相关专利文献中的不足所进行的进一步研究和开发的结果。
本发明的一个目的是公开一种脉络宁冻干粉针剂的制备新方法。
本发明通过以下方案实现。
一、制备方法本发明脉络宁冻干粉针剂通过以下方法制备(1)原料药重量份组成为石斛2-3份、金银花3-6份、牛膝3-6份、玄参3-6份。
(2)取上述重量份牛膝、玄参药材，粉碎，加入6-15倍量的10％-40％乙醇溶液回流提取1-3次，每次1-2小时，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩得浸膏A；(3)取上述重量份石斛药材，粉碎，加入5-10倍量的30％-60％乙醇溶液在50℃-70℃浸泡1-2小时，然后回流提取2-3次，每次2小时，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩得浸膏B；(4)将上述浸膏A和浸膏B合并，得到浸膏C；(5)将上述浸膏C上已处理好的弱极性或非极性大孔吸附树脂，先用3-5倍柱体积的水洗脱，再用60％-80％乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，得溶液加入水使得乙醇浓度为20％-30％，静置，以14000-20000转/分的速度离心，离心液用截留分子量为5000的超滤膜超滤，滤液减压浓缩，干燥，粉碎，得到提取物X；(6)取上述重量份金银花药材，粉碎，按照下述1)或2)中的方法提取
1)将金银花药材加8-14倍量的水，浸泡半小时，放入超声提取罐中，进行超声振荡提取，时间为30-60分钟，振荡频率为20-80kHz，控制温度为室温，提取3-4次，合并提取液，提取液静置，过滤，滤液减压回收乙醇，上D101大孔吸附树脂，用4-6倍柱体积的水洗脱，收集水洗液，以14000-20000转/分的速度离心，离心液用截留分子量为3000的超滤膜超滤，滤液减压浓缩，干燥，粉碎，得到提取物Y；2)将金银花药材加8-14倍量的水，浸泡半小时，放入超声提取罐中，进行超声振荡提取，时间为30-60分钟，振荡频率为20-80kHz，控制温度为室温，提取3-4次，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩至溶液∶药材为1∶1，上NKA-II型大孔吸附树脂，先用3-5倍柱体积的水洗脱，再用60％-80％乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎，得到提取物Y；(7)将上述提取物X和提取物Y合并，用注射用水溶解，加入水溶性冻干赋形剂，用葡甲胺调节pH值为4.0-7.0，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，包装得到冻干粉针制剂。
上述制备方法中原料药石斛包括密花石斛、马鞭石斛和铁皮石斛；葡甲胺调节溶液pH值优选为5.0-6.0。
本发明制备方法的提取效率高，但是如果有效成分的含量超过了它的安全使用剂量，就会对人体造成伤害，发生不良反应。本发明研究人员经过大量的探索，发现本发明的原料药组成在上述重量份范围内，利用本发明方法制备的脉络宁冻干粉针剂在具有很好的治疗效果的同时，也具有很高的安全性。
上述本发明原料药重量份的组成为石斛2-3份、金银花3-6份、牛膝3-6份、玄参3-6份时，申请号为92107848的专利文献中脉络宁注射液各原料药的处方量的重量份均为10份。
二、两种制备方法的比较为了说明本发明制备方法的科学性、合理性，本发明研究人员进行了下述的比较实验。
药材量铁皮石斛1000g、金银花1000g、牛膝1000g、玄参1000g。
脉络宁注射液制备方法申请号为92107848的专利文献中的方法进行制备；本发明脉络宁冻干粉针剂按上述本发明制备方法制成。
均由广东天之骄药物开发有限公司提供。结果见表1。
表1 两种制备方法的比较
由表1可以看出，在相同量的原料药材时，本发明制备方法制成的脉络宁冻干粉针剂的数量是申请号为92107848的专利文献中的制备方法得到的产品数量的2-3倍。这充分说明本发明方法可以大大节省原料药，降低药物成本。
三、含量分析本发明脉络宁冻干粉针剂每支所含原料药材含量的降低，并没有使得本发明脉络宁冻干粉针剂中有效成分的含量下降；相反，利用本发明的制备方法可以大大提高药物中有效成分的含量，为药物具有好的临床治疗效果打下基础。为了考察本发明制备方法的科学性、合理性，研究人员对本发明脉络宁冻干粉针剂中各味药材的主要有效成分进行了测定。本发明脉络宁冻干粉针剂由广东天之骄药物开发有限公司提供；市售脉络宁注射液由南京金陵制药有限公司生产。
1、滨蒿内酯含量测定含量测定方法参照脉络宁注射液标准(WS3-B-3462-98)中的薄层色谱法进行。含量测定结果见表2。
表2 滨蒿内酯含量测定结果
注脉络宁注射液标准(WS3-B-3462-98)中含量测定项下规定脉络宁注射液含滨蒿内酯不得少于50μg/支。
由表2含量测定结果可以看出，本发明脉络宁冻干粉针剂中滨蒿内酯的含量明显高于脉络宁注射液的含量，说明本发明脉络宁冻干粉针剂的制备方法科学、合理。
2、绿原酸含量测定含量测定方法参照参考文献[李文莉，等。高效液相色谱法测定脉络宁注射液中绿原酸的含量。中国药学杂志，2003，38(3)210]中的方法进行。含量测定结果见表3。
表3 绿原酸含量测定结果
由表3含量测定结果可以看出，本发明脉络宁冻干粉针剂中绿原酸的含量明显高于脉络宁注射液的含量，说明本发明脉络宁冻干粉针剂的制备方法科学、合理。
3、蜕皮甾酮含量测定含量测定方法参照参考文献[李文莉，等。RP-HPLC测定脉络宁注射液中蜕皮甾酮的含量。华西药学杂志，2001，16(4)382]中的方法进行。含量测定结果见表4。
表4 蜕皮甾酮 含量测定结果
由表4含量测定结果可以看出，本发明脉络宁冻干粉针剂中蜕皮甾酮的含量明显高于脉络宁注射液的含量，说明本发明脉络宁冻干粉针剂的制备方法科学、合理。
4、肉桂酸含量测定含量测定方法参照参考文献[余明艳，等。反相高效液相色谱法测定脉络宁注射液中肉桂酸的含量。中国中医药杂志，2000，25(7)415]中的方法进行。含量测定结果见表5。
表5 肉桂酸含量测定结果
由表5含量测定结果可以看出，本发明脉络宁冻干粉针剂中肉桂酸的含量明显高于脉络宁注射液的含量，说明本发明脉络宁冻干粉针剂的制备方法科学、合理。
总结由以上含量测定结果可以看出，本发明脉络宁冻干粉针剂中各味药材中的有效成分含量均明显高于脉络宁注射液，而且本发明脉络宁冻干粉针剂处方中各味药材的处方量只有脉络宁注射液处方中药材处方量的20％-60％，说明本发明脉络宁冻干粉针剂的制备方法中对于各味药材中有效成分的提取率比脉络宁注射液提高许多，进一步说明本发明脉络宁冻干粉针剂的制备方法是科学的、合理的。本发明脉络宁冻干粉针剂的制备方法在现有的技术水平下很容易实现，而且完全可以实现自动化，比起脉络宁注射液的生产方法，本发明生产周期短，方法步骤少，原料消耗少，说明本发明脉络宁冻干粉针剂对于脉络宁注射液中的制备方法上的不足的改进是成功的，合理的，科学的。
四、药理实施例为了证实本发明脉络宁冻干粉针剂的治疗效果，本发明研究人员对本发明脉络宁冻干粉针剂进行了药效学试验。
本发明脉络宁冻干粉针剂由广东天之骄药物开发有限公司提供；市售脉络宁注射液由南京金陵制药有限公司生产。
1、对小鼠缺氧耐力的影响实验实验方法取健康昆明种小鼠40只，体重18-22g。随机分成对照组，脉络宁注射液组、本发明脉络宁冻干粉针剂低剂量组和高剂量组。每组10只，雌雄各半，分笼饲养。腹腔注射给药，脉络宁注射液组10.0g/kg，本发明脉络宁冻干粉针剂组5g/kg和2.5g/kg，对照组给予等体积的生理盐水。1次/天，连续5d。于末次给药后1h，将小鼠分别置于体积为150ml磨口瓶中，内放15g钠石灰，密闭观察其存活时间。结果见表6。
表6 对小鼠常压缺氧的影响(X±SD)
注与对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01。
由表6实验结果看出，本发明脉络宁冻干粉针剂能显著提高小鼠常压缺氧耐力，平均存活时间比对照组显著延长。
2、对小鼠心肌缺氧的保护作用实验实验方法取健康昆明种小鼠40只，体重18-22g，随机分成对照组，脉络宁注射液组、本发明脉络宁冻干粉针剂低剂量组和高剂量组。每组雌雄各半，分笼饲养。给药方式和剂量同上。对照组给予等体积的生理盐水。1次/天，连续5天。于末次给药后1小时用乌拉坦1.2g/kg腹腔注射麻醉，背部固定，分离气管，以动脉夹夹闭气管，用心电仪观察心电，并用秒表记下小鼠夹闭气管后至心电消失的时间。结果见表7。
表7 对小鼠心肌缺氧的影响(X±SD)
注与对照组比较*P＜0.05；**P＜0.01。
由表7实验结果看出，本发明脉络宁冻干粉针剂对小鼠心肌缺氧起显著的保护作用，小鼠平均存活时间比对照组显著延长。
3、对大鼠体内血栓形成的影响将大鼠随机分成4组，每组10只，随机分成对照组，脉络宁注射液组、本发明脉络宁冻干粉针剂低剂量组和高剂量组。给药方式和剂量同上。对照组给予等体积的生理盐水。每日1次，连续给药5天，末次给药后1小时，将大鼠用10％水合氯醛，按0.3g/kg体重麻醉后固定，分离左颈总动脉，在血栓仪上以2mA电流刺激血管7min后，记录血栓形成时间。结果见表8。
表8 对大鼠体内血栓形成的影响(X±SD)
注与对照组比较*P＜0.05；**P＜0.01。
由表8实验结果看出，本发明脉络宁冻干粉针剂能显著延长大鼠体内血栓的形成，血栓形成时间比对照组显著延长。
由以上药效学实验可以看出，在同等剂量下，本发明脉络宁冻干粉针剂具有更好的药理作用。说明在处方中药材量的减少的前提下，本发明脉络宁冻干粉针剂中药材的有效成分含量没有降低反而提高，说明本发明采用的制备方法是科学的，合理的，更具有实用性。
在药效学实验中本发明研究人员还发现，本发明的脉络宁冻干粉针剂的不良反应发生率比脉络宁注射液明显降低。由此可看出，本发明制备方法制成的脉络宁冻干粉针剂，不但提高了药物的临床疗效，而且降低了药物不良反应的发生，可谓一举两得。
五、制备实施例实施例1(1)原料药为铁皮石斛7500g、金银花15000g、牛膝15000g、玄参15000g。
(2)取上述牛膝、玄参药材，粉碎，加入15倍量的10％乙醇溶液回流提取3次，每次2小时，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩得浸膏A；(3)取上述石斛药材，粉碎，加入10倍量的60％乙醇溶液在70℃浸泡2小时，然后回流提取3次，每次2小时，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩得浸膏B；
(4)将上述浸膏A和浸膏B合并，得到浸膏C；(5)将上述浸膏C上已处理好的D101大孔吸附树脂，先用5倍柱体积的水洗脱，再用60％乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，得溶液加入水使得乙醇浓度为20％，静置，以20000转/分的速度离心，离心液用截留分子量为5000的超滤膜超滤，滤液减压浓缩，干燥，粉碎，得到提取物X；(6)将上述金银花药材加14倍量的水，浸泡半小时，放入超声提取罐中，进行超声振荡提取，时间为30分钟，振荡频率为20kHz，控制温度为室温，提取3次，合并提取液，提取液静置，过滤，滤液减压回收乙醇，上D101大孔吸附树脂，用6倍柱体积的水洗脱，收集水洗液，以14000转/分的速度离心，离心液用截留分子量为3000的超滤膜超滤，滤液减压浓缩，干燥，粉碎，得到提取物Y；(7)将上述提取物X和提取物Y合并，用注射用水溶解，加入聚乙烯吡咯烷酮，用葡甲胺调节pH值为4.0，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，包装得到冻干粉针制剂1000支。
实施例2(1)原料药为密花石斛5000g、金银花7500g、牛膝7500g、玄参7500g。
(2)取上述牛膝、玄参药材，粉碎，加入6倍量的40％乙醇溶液回流提取1次，每次1小时，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩得浸膏A；(3)取上述石斛药材，粉碎，加入5倍量的30％乙醇溶液在50℃浸泡1小时，然后回流提取2次，每次2小时，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩得浸膏B；(4)将上述浸膏A和浸膏B合并，得到浸膏C；(5)将上述浸膏C上已处理好的NKA大孔吸附树脂，先用3倍柱体积的水洗脱，再用80％乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，得溶液加入水使得乙醇浓度为30％，静置，以14000转/分的速度离心，离心液用截留分子量为5000的超滤膜超滤，滤液减压浓缩，干燥，粉碎，得到提取物X；(6)将金银花药材加8倍量的水，浸泡半小时，放入超声提取罐中，进行超声振荡提取，时间为60分钟，振荡频率为80kHz，控制温度为室温，提取4次，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩至溶液∶药材为1∶1，上NKA-II型大孔吸附树脂，先用5倍柱体积的水洗脱，再用80％乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎，得到提取物Y；(7)将上述提取物X和提取物Y合并，用注射用水溶解，加入葡聚糖，用葡甲胺调节pH值为7.0，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，包装得到冻干粉针制剂1000支。
实施例3(1)原料药为铁皮石斛6250g、金银花12500g、牛膝12500g、玄参12500g。
(2)取上述牛膝、玄参药材，粉碎，加入10倍量的30％乙醇溶液回流提取2次，每次2小时，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩得浸膏A；(3)取上述石斛药材，粉碎，加入8倍量的50％乙醇溶液在60℃浸泡2小时，然后回流提取2次，每次3小时，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩得浸膏B；(4)将上述浸膏A和浸膏B合并，得到浸膏C；(5)将上述浸膏C上已处理好的AB-8大孔吸附树脂，先用4倍柱体积的水洗脱，再用70％乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，得溶液加入水使得乙醇浓度为25％，静置，以18000转/分的速度离心，离心液用截留分子量为5000的超滤膜超滤，滤液减压浓缩，干燥，粉碎，得到提取物X；(6)将上述金银花药材加10倍量的水，浸泡半小时，放入超声提取罐中，进行超声振荡提取，时间为40分钟，振荡频率为60kHz，控制温度为室温，提取4次，合并提取液，提取液静置，过滤，滤液减压回收乙醇，上D101大孔吸附树脂，用5倍柱体积的水洗脱，收集水洗液，以18000转/分的速度离心，离心液用截留分子量为3000的超滤膜超滤，滤液减压浓缩，干燥，粉碎，得到提取物Y；(7)将上述提取物X和提取物Y合并，用注射用水溶解，加入甘露醇和葡萄糖，用葡甲胺调节pH值为6.0，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，包装得到冻干粉针制剂1000支。
实施例4(1)原料药为马鞭石斛6250g、金银花10000g、牛膝10000g、玄参10000g。
(2)取上述牛膝、玄参药材，粉碎，加入8倍量的20％乙醇溶液回流提取3次，每次2小时，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩得浸膏A；(3)取上述石斛药材，粉碎，加入7倍量的40％乙醇溶液在55℃浸泡1小时，然后回流提取1次，每次2小时，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩得浸膏B；(4)将上述浸膏A和浸膏B合并，得到浸膏C；(5)将上述浸膏C上已处理好的D101大孔吸附树脂，先用5倍柱体积的水洗脱，再用65％乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，得溶液加入水使得乙醇浓度为22％，静置，以17000转/分的速度离心，离心液用截留分子量为5000的超滤膜超滤，滤液减压浓缩，干燥，粉碎，得到提取物X；(6)将金银花药材加12倍量的水，浸泡半小时，放入超声提取罐中，进行超声振荡提取，时间为50分钟，振荡频率为50kHz，控制温度为室温，提取3次，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩至溶液∶药材为1∶1，上NKA-II型大孔吸附树脂，先用3倍柱体积的水洗脱，再用60％乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎，得到提取物Y；(7)将上述提取物X和提取物Y合并，用注射用水溶解，加入右旋糖酐，用葡甲胺调节pH值为5.0，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，包装得到冻干粉针制剂1000支。
实施例5(1)原料药为铁皮石斛7000g、金银花13750g、牛膝13750g、玄参13750g。
(2)取上述牛膝、玄参药材，粉碎，加入12倍量的15％乙醇溶液回流提取2次，每次1小时，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩得浸膏A；(3)取上述石斛药材，粉碎，加入9倍量的45％乙醇溶液在65℃浸泡2小时，然后回流提取2次，每次2小时，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩得浸膏B；(4)将上述浸膏A和浸膏B合并，得到浸膏C；(5)将上述浸膏C上已处理好的AB-8大孔吸附树脂，先用4倍柱体积的水洗脱，再用75％乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，得溶液加入水使得乙醇浓度为27％，静置，以19000转/分的速度离心，离心液用截留分子量为5000的超滤膜超滤，滤液减压浓缩，干燥，粉碎，得到提取物X；(6)将上述金银花药材加9倍量的水，浸泡半小时，放入超声提取罐中，进行超声振荡提取，时间为45分钟，振荡频率为30kHz，控制温度为室温，提取3次，合并提取液，提取液静置，过滤，滤液减压回收乙醇，上D101大孔吸附树脂，用4倍柱体积的水洗脱，收集水洗液，以15000转/分的速度离心，离心液用截留分子量为3000的超滤膜超滤，滤液减压浓缩，干燥，粉碎，得到提取物Y；(7)将上述提取物X和提取物Y合并，用注射用水溶解，加入聚乙烯吡咯烷酮和果糖，用葡甲胺调节pH值为5.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，包装得到冻干粉针制剂1000支。
实施例6(1)原料药为铁皮石斛6000g、金银花8750g、牛膝8750g、玄参8750g。
(2)取上述牛膝、玄参药材，粉碎，加入9倍量的35％乙醇溶液回流提取1次，每次2小时，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩得浸膏A；(3)取上述石斛药材，粉碎，加入6倍量的35％乙醇溶液在68℃浸泡1小时，然后回流提取1次，每次3小时，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩得浸膏B；(4)将上述浸膏A和浸膏B合并，得到浸膏C；(5)将上述浸膏C上已处理好的NKA大孔吸附树脂，先用3倍柱体积的水洗脱，再用62％乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，得溶液加入水使得乙醇浓度为24％，静置，以16000转/分的速度离心，离心液用截留分子量为5000的超滤膜超滤，滤液减压浓缩，干燥，粉碎，得到提取物X；(6)将金银花药材加11倍量的水，浸泡半小时，放入超声提取罐中，进行超声振荡提取，时间为35分钟，振荡频率为40kHz，控制温度为室温，提取4次，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩至溶液∶药材为1∶1，上NKA-II型大孔吸附树脂，先用4倍柱体积的水洗脱，再用70％乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎，得到提取物Y；(7)将上述提取物X和提取物Y合并，用注射用水溶解，加入果糖，用葡甲胺调节pH值为5.2，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，包装得到冻干粉针制剂1000支。
实施例7(1)原料药为铁皮石斛5750g、金银花10000g、牛膝10000g、玄参10000g。
(2)取上述牛膝、玄参药材，粉碎，加入11倍量的25％乙醇溶液回流提取3次，每次1小时，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩得浸膏A；(3)取上述石斛药材，粉碎，加入8倍量的55％乙醇溶液在54℃浸泡2小时，然后回流提取2次，每次3小时，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩得浸膏B；(4)将上述浸膏A和浸膏B合并，得到浸膏C；
(5)将上述浸膏C上已处理好的D101大孔吸附树脂，先用4倍柱体积的水洗脱，再用78％乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，得溶液加入水使得乙醇浓度为25％，静置，以15000转/分的速度离心，离心液用截留分子量为5000的超滤膜超滤，滤液减压浓缩，干燥，粉碎，得到提取物X；(6)将上述金银花药材加13倍量的水，浸泡半小时，放入超声提取罐中，进行超声振荡提取，时间为55分钟，振荡频率为70kHz，控制温度为室温，提取3次，合并提取液，提取液静置，过滤，滤液减压回收乙醇，上D101大孔吸附树脂，用6倍柱体积的水洗脱，收集水洗液，以19000转/分的速度离心，离心液用截留分子量为3000的超滤膜超滤，滤液减压浓缩，干燥，粉碎，得到提取物Y；(7)将上述提取物X和提取物Y合并，用注射用水溶解，加入聚乙烯吡咯烷酮，用葡甲胺调节pH值为2.7，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，包装得到冻干粉针制剂1000支。
本发明用于静脉滴注，一次2-4支，一日1次，用氯化钠注射液溶解后使用；若有不溶物，可加入增溶剂。
权利要求
1.一种脉络宁冻干粉针剂的制备方法，其特征在于，它包括以下步骤(1)原料药重量份组成为石斛2-3份、金银花3-6份、牛膝3-6份、玄参3-6份。(2)取上述重量份牛膝、玄参药材，粉碎，加入6-15倍量的极性溶剂M回流提取1-3次，每次1-2小时，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩得浸膏A；(3)取上述重量份石斛药材，粉碎，加入5-10倍量的极性溶剂N在50℃-70℃浸泡1-2小时，然后回流提取2-3次，每次2小时，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩得浸膏B；(4)将上述浸膏A和浸膏B合并，得到浸膏C；(5)将上述浸膏C上已处理好的弱极性或非极性大孔吸附树脂，先用3-5倍柱体积的水洗脱，再用60％-80％乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，得溶液加入水使得乙醇浓度为20％-30％，静置，以14000-20000转/分的速度离心，离心液用截留分子量为5000的超滤膜超滤，滤液减压浓缩，干燥，粉碎，得到提取物X；(6)取上述重量份金银花药材，粉碎，按照下述方法1)或2)提取1)将金银花药材加8-14倍量的水，浸泡半小时，放入超声提取罐中，进行超声振荡提取，时间为30-60分钟，振荡频率为20-80kHz，控制温度为室温，提取3-4次，合并提取液，提取液静置，过滤，滤液减压回收乙醇，上D101大孔吸附树脂，用4-6倍柱体积的水洗脱，收集水洗液，以14000-20000转/分的速度离心，离心液用截留分子量为3000的超滤膜超滤，滤液减压浓缩，干燥，粉碎，得到提取物Y；2)将金银花药材加8-14倍量的水，浸泡半小时，放入超声提取罐中，进行超声振荡提取，时间为30-60分钟，振荡频率为20-80kHz，控制温度为室温，提取3-4次，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩至溶液∶药材为1∶1，上NKA-II型大孔吸附树脂，先用3-5倍柱体积的水洗脱，再用60％-80％乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎，得到提取物Y；(7)将上述提取物X和提取物Y合并，用注射用水溶解，加入水溶性冻干赋形剂，用葡甲胺调节溶液pH值为4.0-7.0，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，包装得到冻干粉针制剂。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述石斛药材包括密花石斛、马鞭石斛和铁皮石斛。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，极性溶剂M是10％-40％乙醇溶液。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，极性溶剂N是30％-60％乙醇溶液。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，葡甲胺调节溶液pH值为5.0-6.0。
全文摘要
本发明属于中药制药技术领域，具体涉及一种脉络宁冻干粉针剂的制备新方法。本发明冻干粉针剂的原料药中以资源相对丰富的铁皮石斛代替现用、资源匮乏的野生石斛药材，而且本发明制备方法能显著提高各原料药中有效成分的提取率，因而使得本发明原料药，尤其是的石斛药材的使用量明显降低，对于节约石斛药材，保护野生植物资源，进而降低药物成本意义重大。药效学实验表明，本发明具有很好的清热养阴、活血化淤作用。
文档编号A61P7/00GK1682928SQ20051005152
公开日2005年10月19日 申请日期2005年3月4日 优先权日2005年3月4日
发明者张海峰 申请人:张海峰