专利名称：抗肿瘤化合物真菌环氧二酯的发酵基质的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种化合物的发酵基质，尤其是涉及一种抗肿瘤化合物真菌环氧二酯(Mycoepoxydiene)的发酵基质。
背景技术：
化合物乙酸2-(8-甲基-9-氧杂-双环[4.2.1]九-2，4-二烯-7-基)-6-氧-3，6-二氢-2H-吡喃-3-基酯(Mycoepoxydiene，俗称真菌环氧二酯)最早见于1999年的报道(Ping Cai，Andrew T et al.Mycoeoxydiene represents a novel class of fungal metabolites[J].Tetrahedron Letters，1999，401479-1482)，它从一株稀有真菌OS-F66617发酵液中分离得到，但文献未报道其具有抗肿瘤生理活性。林昕、黄耀坚等从一株海洋木栖真菌菜豆间座壳菌HLY2菌株分离获得，该化合物具有抗肿瘤活性，并已申请发明专利(专利申请号200410084809.3)。文献未见有与本申请专利相同的发酵培养基配方的报道。利用液体发酵培养基，HLY2菌株液体发酵Mycoepoxydiene产量为40μg/L；利用固体发酵培养基，Mycoepoxydiene的固体发酵产量为552μg/L。
菜豆间座壳菌(Diaporhe phaseolorum)分离于福建省漳州市九龙江口浮宫镇草埔头村红树林生态区红树植物腐叶，该属真菌为植物寄生菌(裘纬蕃主编，菌物学大全，北京科学出版社，1998)，该菌株在半海水配方PDA(马铃薯琼脂培养基)培养基上，生长良好，菌丝纯白，无明显色素产生，不产孢子，培养10d以后，产生黑色子座。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用菜豆间座壳菌(Diaporhe phaseolorum)HLY2菌株发酵真菌代谢Mycoepoxydiene的发酵基质及其发酵方法。
本发明所采用的真菌为本申请发明人从福建省漳州市九龙江口浮宫镇草埔头(地名)红树林生态区的红树植物腐叶中分离得到的菌株HLY2，经鉴定为菜豆间座壳菌(Diaporhephaseolorum)。该菌株已保藏于中国典型培养物保藏中心，登记入册的保藏编号为CCTCC NOM 204061，保藏的培养物名称及注明的鉴别特征为菜豆间座壳菌Diaporhephaseolorum，保藏日为2004年9月1日。
本发明所说的真菌代谢产生的化合物乙酸2-(8-甲基-9-氧杂-双环[4.2.1]九-2，4-二烯-7-基)-6-氧-3，6-二氢-2H-吡喃-3-基酯(Mycoepoxydiene)的结构式为
本发明所说的化合物Mycoepoxydiene的发酵基质的组成及其按质量比的含量为马铃薯90～110g，葡萄糖90～110g，乳糖28～32g，硫酸氨9～11g，KH2PO40.5mmol，海水150～250ml，水补足1000ml，pH自然。
本发明所说的化合物Mycoepoxydiene的发酵基质的发酵方法为将上述培养基灭菌后，接种HLY2菌株，26～30℃通气搅拌发酵7～10d，发酵液经过滤，除去菌体，收集发酵液用等量乙酸乙脂搅拌萃取，萃取6～36h，收集萃取所得的有机相，45℃减压浓缩至干即为化合物Mycoepoxydiene的粗提物。
利用本发明的发酵培养基，采用常规的发酵技术，发酵的Mycoepoxydiene产量可达40mg/L。
具体实施例方式
以下实施例将对本发明作进一步的说明。
实施例1培养基配制培养基的配方为马铃薯100g，葡萄糖100g，乳糖30g，硫酸氨10g，KH2O40.5mmol，海水200ml，水补足1000ml，pH自然。
发酵将上述培养基灭菌后，接种HLY2菌株，30℃发酵7d。发酵液经过滤，除去菌体，收集发酵液用等量乙酸乙脂搅拌萃取，萃取6h，收集萃取所得的有机相，45℃浓缩至干即为本品的粗提物。
实施例2培养基配制培养基的配方为马铃薯90g，葡萄糖110g，乳糖28g，硫酸氨9g，KH2O40.5mmol，海水250ml，水补足1000ml，pH自然。
发酵将上述培养基灭菌后，接种HLY2菌株，26℃发酵10d。发酵液经过滤，除去菌体，收集发酵液用等量乙酸乙脂搅拌萃取，萃取12h，收集萃取所得的有机相，45℃浓缩至干即为本品的粗提物。
实施例3培养基配制培养基的配方为马铃薯110g，葡萄糖90g，乳糖32g，硫酸氨11g，KH2PO40.5mmol，海水150ml，水补足1000ml，pH自然。
发酵将上述培养基灭菌后，接种HLY2菌株，28℃发酵8d。发酵液经过滤，除去菌体，收集发酵液用等量乙酸乙脂搅拌萃取，萃取24h，收集萃取所得的有机相，45℃浓缩至干即为本品的粗提物。
权利要求
1.抗肿瘤化合物真菌环氧二酯的发酵基质，其特征在于其组成及其按质量比的含量为马铃薯90～110g，葡萄糖90～110g，乳糖28～32g，硫酸氨9～11g，KH2PO40.5mmol，海水150～250ml，水补足1000ml，pH自然。
2.如权利要求1所述的抗肿瘤化合物真菌环氧二酯的发酵基质的发酵方法，其特征在于将培养基灭菌后，接种HLY2菌株，26～30℃通气搅拌发酵7～10d，发酵液经过滤，除去菌体，收集发酵液用等量乙酸乙脂搅拌萃取，萃取6～36h，收集萃取所得的有机相，45℃减压浓縮至干即为化合物真菌环氧二酯的粗提物。
全文摘要
抗肿瘤化合物真菌环氧二酯的发酵基质，涉及一种化合物的发酵基质，尤其是涉及一种抗肿瘤化合物真菌环氧二酯的发酵基质。提供一种用菜豆间座壳菌HLY2菌株发酵真菌代谢真菌环氧二酯的发酵基质及发酵方法。发酵基质的组成及含量为马铃薯90～110g，葡萄糖90～110g，乳糖28～32g，硫酸氨9～11g，KH
文档编号A61P35/00GK1904057SQ20051008567
公开日2007年1月31日 申请日期2005年7月25日 优先权日2005年7月25日
发明者王若宇, 黄耀坚, 郑忠辉, 宋思扬, 苏文金, 沈月毛 申请人:厦门大学