专利名称：壳囊孢菌素b在制备抗真菌药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种来源于红树植物内生真菌-小穴壳菌HTF3(Dothiorella sp.HTF3)的壳囊孢菌素B化合物在制备抗真菌药物中的应用。
背景技术：
红树林是生长在港湾河口地区的淤泥滩涂上的木本植物群落，作为独特的海陆边缘生态系统在自然生态平衡中起着特殊的作用。红树林植物不仅是重要的经济植物，也是民间常用的药用植物，如红树植物老鼠簕(Acanthus ilicifolius)的树皮熬汁可以用于治血尿；角果木(Ceriops tagal)的树皮捣碎可以止血、通便和治疗恶疮，种子榨油可以止痒和治疗癣，还可治疗冻疮等。
红树植物中存在着丰富的内生真菌，有报道认为红树植物的药用成分都是由其内生真菌产生的，不多的文献(1、Brady，S.，Wagenaar，M.W，Singh，M.，et al.The cytosporonesisolated from an endophytic fungus.Org.Lett.2000，2(25)4043-4046；2、Bandaranayake，W.M..Traditional and medicinal uses of mangroves.Mangroves and Salt Marshes，1998，2133-148；3、Bandaranayake，W.M..Bioactivities，bioactive compounds and chemicalconstituents of mangrove plants.Wetland Ecology and Management，2002，10421-452；4、Lin Y.，Wu X.，Deng z.，et al.The metabolites of the mangrove fungus Verruculina enalia No.2606 from a salt lake in the Bahamas.Phytochemistry，2002，59469-471)报道也已证明红树植物的内生真菌确实可以产生具有新结构和强的生理活性的化合物。但目前国内外在这方面的工作才刚刚开始，为此其研究具有较高的理论价值和实际应用价值。
发明内容
本发明的目的在于提供一种来源于红树植物内生真菌(cytosporone B)的化合物在制备抗真菌药物中的应用。
本发明所用的红树植物内生真菌-小穴壳菌HTF3(Dothiorella sp.HTF3)已保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC，中国武汉大学校内)，保藏号为CCTCC NOM203067，保减日期为2003年8月29日。
本发明所说的壳囊孢菌素B(cytosporone B)化合物的结构式为 (3，5-二羟基-2-辛酮基)-苯乙酸乙酯所说的壳囊孢菌素B化合物可采用以下制备方法1)内生真菌(Dothiorella sp.HTF3)的种子培养培养基以g为单位，马铃薯去皮、切碎20，水煮，在过滤后的滤液中加葡萄糖1～3，琼脂1.5～2.0，海水定容至100ml，灭菌，制成试管斜面，挑取菌种接入斜面，室温下培养5～15天；2)内生真菌的发酵培养发酵培养基以g为单位马铃薯去皮、切碎20，水煮，在过滤后的滤液中加葡萄糖1～3，海水定容至100ml，灭菌，将斜面上培养好的菌株挑入发酵培养基，室温下培养5～15天；3)将上述发酵培养液过滤除去发酵液后得到菌体；4)菌体烘干，用乙酸乙酯反复浸泡，合并乙酸乙酯，减压浓缩，所得的膏状物用硅胶柱层析分离，石油醚/乙酸乙酯＝100/0到0/100进行梯度洗脱，收集二者比例为1/1时的洗脱液，减压浓缩即得到该化合物，含量为9mg/g菌体干重。
所得该化合物的实验数据为无色油状物；EMSm/z(rel.int.)323.3[M+H]+(100)，345.3[M+Na]+(11.4)，361.2[M+K]+(4.2)；1H NMR和13C NMR(400MHz，CDCl3，ppm)见表1。
本发明所说的壳囊孢菌素B化合物可用于制备抗真菌药物。
本发明提供了一类来源于红树林内生真菌的化合物壳囊孢菌素B对人体致病真菌和植物致病真菌有较好的抑制作用，可用于制备抗真菌药物。
表1.壳囊孢菌素B的NMR数据
具体实施方式
实施例1以下实施例给出所说的壳囊孢菌素B化合物的制备方法。
1)内生真菌的种子培养将20g马铃薯去皮、切碎，水煮30min，在过滤后的滤液中加葡萄糖1g，琼脂1.6g，50％海水定容至100ml，灭菌，制成试管斜面，挑取菌种接入斜面，25℃下培养10天；2)内生真菌的发酵培养将20g马铃薯去皮、切碎，水煮30min，在过滤后的滤液中加葡萄糖1.5g，50％海水定容至100ml，灭菌，将斜面上培养好的菌株挑入发酵培养基，26℃下培养8天；3)将上述发酵培养液过滤除去发酵液后得到菌体；4)菌体烘干，用乙酸乙酯反复浸泡，合并乙酸乙酯，减压浓缩，所得的膏状物用硅胶柱层析分离，石油醚/乙酸乙酯＝100/0到0/100进行梯度洗脱，收集二者比例为1/1时的洗脱液，减压浓缩即得到该化合物，含量为9mg/g菌体干重。
本发明所说的壳囊孢菌素B化合物可用于制备抗真菌药物，其抗真菌活性检测实验如下
1)真菌指示菌株白色假丝酵母菌、黑曲霉菌、木霉菌、镰刀菌、交链孢霉菌、白色面包霉菌、枝孢霉菌2)化合物cytosporone B的配置取一定量的cytosporone B，用甲醇溶解并调整浓度为1mg/ml，0.22μm孔径的滤膜过滤除菌，4℃保存备用。
3)活性检测(最低抑菌浓度MIC的测定)a用无菌水将在PDA(马铃薯-葡萄糖-琼脂)斜面培养基上生长的各指示菌洗下，制成孢子浓度为107个/ml的菌悬液，4℃保存备用；b cytosporone B的样品溶液按两倍稀释法，用甲醇稀释成一系列的浓度梯度，取20μl加入到已在超净工作台的紫外灯下照射30min的96孔板中。用超净工作台的风机鼓风吹干甲醇；c真菌悬液用PD(马铃薯-葡萄糖)培养基稀释成104个/μl的菌液，取100μl加入到上述96孔板上，25℃培养48h，肉眼观测，没有真菌生成的最小稀释浓度即为MIC。
d实验结果cytosporone B对白色假丝酵母菌、黑曲霉菌、木霉菌、镰刀菌、交链孢霉菌、白色面包霉菌、枝孢霉菌的MIC分别是0.156mg/ml、0.125mg/ml、0.0625mg/ml、0.0625mg/ml、0.07mg/ml、0.125mg/ml和1mg/ml。
权利要求
1.壳囊孢菌素B化合物用于制备抗真菌药物的用途。
全文摘要
涉及一种来源于红树植物内生真菌—小穴壳菌HTF
文档编号A61P31/10GK1720909SQ20051008567
公开日2006年1月18日 申请日期2003年11月8日 优先权日2003年11月8日
发明者徐庆妍, 黄耀坚, 郑忠辉, 宋思扬, 苏文金 申请人:厦门大学