专利名称：取代的酰胺β分泌酶抑制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及取代的酰胺β分泌酶抑制剂，包含所述化合物的药物组合物，其在治疗心血管、认知和神经变性疾病中的用途，以及其作为人免疫缺陷病毒、门冬氨酸蛋白酶(plasmepsins)、组织蛋白酶D和原虫酶(protozoal enzymes)的抑制剂的用途。
背景阿耳茨海默氏病(Alzheimer′s disease，AD)是一种最终可致命的进行性神经变性疾病。疾病进程中伴随与记忆、推理、定向性和判断力相关的认知功能逐渐丧失。行为改变包括意识错乱、抑郁和攻击性而且随着疾病发展变得明显。认知和行为机能障碍被认为是起因于神经元功能改变和海马及大脑皮层中的神经元缺失。目前可用的AD治疗是治标的，而且虽然它们改善了认知和行为障碍，但它们不能阻止疾病发展。因此阻止疾病发展的AD治疗不能满足医疗的需要。
AD的病理学表征是细胞外β淀粉状蛋白(Aβ)小半鞘翅和包含异常磷酸化蛋白τ的细胞内神经原纤维缠结的沉积。在已知对记忆和认知重要的脑区域，罹患AD的个体具有Aβ沉积的特征。据信Aβ是主要的神经元细胞丧失和与伴随认知和行为减退的机能障碍的致病因素。淀粉样蛋白斑主要由包含40-42氨基酸残基的Aβ肽组成，其来自淀粉样前蛋白(APP)的处理作用。APP是由多种不同的蛋白酶活动处理的。Aβ肽产生于由相应于Aβ的N-末端的β-分泌酶和C-末端经γ-分泌酶活动对APP的裂解。APP也由α-分泌酶活动而被裂解产生分泌的、非-淀粉样蛋白(amyloidogenic)片段，即已知的可溶性APP。
已知为BACE-1的天冬氨酰蛋白酶，其已确认为β-分泌酶活动造成在相应于Aβ肽N-末端的位置的APP裂解。
已积累的生物化学和遗传学证据支持了Aβ在AD病因学中的重要作用。例如，已知Aβ对离体及注入啮齿动物脑中的神经元细胞具有毒性。此外，已知早发性AD的遗传型中存在明确定义的APP变种或早老素。
取代的胺BACE-1抑制剂公开于WO 04/04396、WO 02/02505、WO 02/02506、WO 02/02512、WP 02/02518和WO 02/02520中。包含(1-氨基-2羟基-2-杂环)乙基部分的血管紧张肽原酶(Renin)抑制剂公开于WO 89/03842中。WO 02/088101公开了BACE抑制剂，其官能性地描述为包含四个疏水部分，以及优选包含杂环或杂芳基部分的系列化合物。
发明概述本发明涉及具有结构式I的化合物 或其药学可接受的盐或溶剂化物，其中R1是 或 R2是氢、烷基或环烷基；R3是亚芳基、杂亚芳基、杂环烯基或环烯基；R4是氢、-C(O)-烷基、烷基、环烷基、环烷基烷基、芳基、芳烷基、烷氧基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳烷基或杂芳基；R5和R7是1～4部分，各部分独立地选自氢、-OH、烷基、环烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、芳烷氧基、杂芳烷氧基和烷氧基，条件是当R5和R7是-OH、芳烷氧基、杂芳烷氧基和烷氧基时，R5和R7不与邻近于环氮的环碳连接；
R6是氢、烷基、环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、杂环基、杂环基烷基、-C(O)R8、-C(O)OR11、-S(O)R8、-S(O2)R8或-CN；条件是当Y是＝O时，R6不是-C(O)R8、-C(O)OR11、-S(O)R8、-S(O2)R8或-CN；R8是氢、烷基、环烷基、芳基、杂芳基、环烷基烷基、芳烷基、杂芳烷基、杂环基、杂环基烷基、链烯基、炔基或-N(R9)(R10)；R9和R10独立地选自氢、烷基、环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、杂环基、芳烷基、杂芳烷基、杂环基烷基、链烯基和炔基；或R9和R10与它们所连接的氮一起形成3-7元杂环基环；R11是烷基、环烷基、芳基、杂芳基、环烷基烷基、芳烷基、杂芳烷基、杂环基、杂环基烷基、链烯基或炔基；X是连接R3和R4的键、-O-、-S-、烯基、-烯基NH-、-烯基NHC(O)-、-烯基NHSO2-、-NH-、-NHC(O)-、或-NHSO2-；Y是＝O或(H，H)；m是0、1、2或3；并且n是1、2或3；其中各烷基任选的被1～3个选自以下的部分取代卤代、烷基、芳基、环烷基、氰基、羟基、烷氧基、烷硫基、氨基、-NH(烷基)、-NH(环烷基)、-N(烷基)2、羧基和-C(O)O-烷基；并且其中各亚芳基、杂亚芳基、杂环基烷基、杂环烯基、环烯基、环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、杂环基、芳烷基、杂芳烷基、芳烷氧基或杂芳烷氧基任选的被1～4个选自以下的部分取代-CF3、烷基、链烯基、炔基、芳基、杂芳基、芳烷基、烷基芳基、杂芳烷基、芳基链烯基、杂芳基链烯基、芳基炔基、杂芳基炔基、烷基杂芳基、羟基、羟基烷基、烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、酰基、芳酰基、卤代、硝基、氰基、羧基、烷氧基羰基、芳氧基羰基、芳烷氧基羰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、杂芳基磺酰基、烷硫基、芳基硫基、杂芳基硫基、芳烷基硫基、杂芳烷基硫基、环烷基、杂环基、-C(＝N-CN)-NH2、-C(＝NH)-NH2、-C(＝NH)-NH(烷基)、Y1Y2N-、Y1Y2N-烷基-、Y1Y2NC(O)-、Y1Y2NSO2-和-SO2NY1Y2，其中Y1和Y2可以相同或不同并且独立地选自氢、烷基、芳基、环烷基、-C(O)烷基和芳烷基，条件是环烷基、环烯基、杂环基和杂环烯基可以被＝O取代。
式I表示的化合物是用于预防和治疗阿耳茨海默氏病的β-分泌酶抑制剂。
另一方面，本发明涉及包括至少一种式I化合物和药学可接受的载体的药物组合物。
另一方面，本发明包括含向需要该治疗的患者施用至少一种式I化合物。
更特别的，本发明包括治疗心血管疾病例如高血压、肾衰竭、充血性心力衰竭或由血管紧张肽原酶抑制调节的其它疾病的方法；治疗人免疫缺陷症病毒的方法；治疗认知或神经变性疾病如阿耳茨海默氏病的方法；抑制门冬氨酸蛋白酶(plasmepsins)I和II以治疗疟疾的方法；抑制组织蛋白酶D以治疗阿耳茨海默氏病、乳腺癌和卵巢癌的方法；以及抑制原虫酶(protozoal enzymes)例如抑制Plasmodiumfalciparnum以治疗真菌感染的方法。所述的治疗方法包括向需要该治疗的患者施用至少一种式I化合物。特别地，本发明包括治疗阿耳茨海默氏病的方法，其包括向需要该治疗的患者施用至少一种式I化合物。
另一方面，本发明包括治疗阿耳茨海默氏病的方法，其包括向需要该治疗的患者施用至少一种式I化合物和胆碱酯酶抑制剂或毒碱m1激动剂或m2拮抗剂的组合物。
最后一方面，本发明涉及药盒，其包括供组合使用的单包装药物组合物的分离容器，其中一个容器包括在药学可接受的载体中的式I化合物，另一容器中包括在药学可接受的载体中的胆碱酯酶抑制剂或毒蕈碱m1激动剂或m2拮抗剂，该组合的量是治疗认知疾病或神经变性疾病例如阿耳茨海默氏病的有效量。
发明详述涉及上述式I的本发明优选的化合物，其具有以下立体化学
在式I优选的化合物中，R1可以是 其中n是2并且R6和R7是此处所定义的。
R2优选烷基，更优选甲基。
R3是亚芳基或卤素-取代的亚芳基，更优选亚苯基或卤素-取代的亚苯基，特别的卤素-取代的亚苯基，其中所述的卤代优选氟化物。
R4是氢、-C(O)-烷基、烷基、芳基、芳烷基、取代的芳基、取代的芳烷基、烷氧基烷基、杂芳烷基、取代的杂芳基、取代的杂芳烷基、烷氧基烷基、杂环基、杂环基烷基、取代的杂环基、取代的杂环基烷基或杂芳基。
或者另选的，R4优选氢、甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、-C(O)O乙基、
或 优选的，R5和R7独立地是烷基，其被环烷基烷基取代，或被芳基或杂芳基取代。
在式I化合物优选的实施方案中，R6可以是芳烷基，优选 或者另选的R6是-S(O)2-R8，或更优选的R6是 优选的，X是连接R3和R4的键、O、烯基、-烷基-NHSO2-或-烷基-NHC(O)-；Y是O并且n是2。
在式I化合物特别优选的实施方案中，R1是 n是2；R2是烷基；R3是亚苯基或卤素-取代的亚苯基；R4是氢、-C(O)-烷基、烷基、芳基、芳烷基、取代的芳基、取代的芳烷基、烷氧基烷基、杂芳烷基、取代的杂芳基、取代的杂芳烷基、烷氧基烷基、杂环基、杂环基烷基、取代的杂环基、取代的杂环基烷基或杂芳基；
R5和R7是氢、被环烷基取代的烷基、被芳基或杂芳基取代的烷基；R6是芳烷基或-S(O)2R8；R8是 X是连接R3和R4的键、O、烯基、-烷基-NHSO2-或-烷基-NHC(O)-；并且Y是O。
在上述优选的实施方案中，R2优选甲基；R3优选 R4优选氢、甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、-C(O)O乙基、
R6优选是 R7优选是氢；并且优选的X是连接R3和R4的键、O、烯基、-烷基-NHSO2-或-烷基-NHC(O)-；Y是O并且n是2。
已指出式I的碳可以被1～3个硅原子取代，只要所有原子价满足要求。
除非另有说明，以下定义适用于整个的本发明说明书和权利要求书。不管术语是其本身或与其它术语组合使用，这些定义都是适用的。因此″烷基″的定义适用于″烷基″以及″烷氧基″、″环烷基″等的″烷基″部分。
如上述以及整个说明书使用的，除非另有说明，以下术语应理解为具有以下含义″患者″包括人类和动物。
″哺乳动物″表示人类和其它哺乳动物。
″烷基″表示脂肪族烃基，其可以是直线的或分支的并且在链中包括约1至约20个碳原子。优选的烷基在链中含有约1至约12个碳原子。更优选的烷基在链中含有约1至约6个碳原子。分支的表示一个或多个低级烷基例如甲基、乙基或丙基连接于线性的烷基链上。
″低级烷基″表示在可以是直线或分支的链中具有约1至约6个碳原子。适合的烷基的非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、正戊基、庚基、壬基和癸基。取代的烷基包括但不限于氟甲基、三氟甲基和环丙基甲基。
″烯基″表示由上述定义的烷基除去氢原子得到的双官能基团。烯基的非限制性实例包括亚甲基和亚乙基。
″链烯基″表示含有至少一个碳-碳双键的脂肪族烃基，其可以是直线的或分支的，并且在链中包括约2至约15个碳原子。优选的链烯基在链中具有约2至约12个碳原子；并且更优选的在链中约2至约6个碳原子。分支表示的一个或多个低级烷基例如甲基、乙基或丙基连接于线性的链烯基链上。″低级链烯基″表示在可以是直线或分支的链中有约2至约6个碳原子。术语″取代的链烯基″表示该链烯基可以被一个或多个可以相同或不同的取代基取代，各取代基独立地选自卤代、烷基、芳基、环烷基、氰基、烷氧基和-S(烷基)。适合的链烯基的非限制性实例包括乙烯基、丙烯基、正丁烯基、3-甲基丁-2-烯基、正戊烯基、辛烯基和癸烯基。
″炔基″表示含有至少一个碳-碳三键的脂肪族烃基，其可以是直线的或分支的，并且在链中包括约2至约15个碳原子。优选的炔基在链中具有约2至约12个碳原子；并且更优选的在链中约2至约4个碳原子。分支的表示一个或多个低级烷基例如甲基、乙基或丙基连接于线性的炔基链上。″低级炔基″表示在可以是直线或分支的链中有约2至约6个碳原子。适合的炔基的非限制性实例包括乙炔基、丙炔基、2-丁炔基和3-甲基丁炔基。术语″取代的炔基″表示该炔基可以被一个或多个可以相同或不同的取代基取代，各取代基独立地选自烷基、芳基和环烷基。适合的炔基的非限制性实例包括乙炔基、丙炔基、2-丁炔基、3-甲基丁炔基、正戊炔基和癸炔基。
″芳基″表示芳香族单环或多环的环系统，其包括约6至约14个碳原子，优选约6至约10个碳原子。该芳基可任选的被一个或多个可以相同或不同的″环系统取代基″取代，并且如此处所定义的，或者在相邻碳上的两个取代基可连接在一起形成 或 适合的芳基的非限制性实例包括苯基和萘基。
″亚芳基″表示由上述芳基除去氢原子得到的双官能基团。亚芳基的非限制性实例包括亚苯基和亚萘基。
″杂芳基″表示芳香族单环或多环的环系统，其包括约5至约14个碳原子，优选约5至约10个碳原子，其中环原子的一个或多个是与碳不同的元素例如氮、氧或硫单独或组合。优选的杂芳基含有约5至约6个环原子。该″杂芳基″可任选的被一个或多个可以相同或不同的″环系统取代基″取代，并且如此处所定义的。在杂芳基根名前的前缀氮杂、氧杂或硫杂分别表示至少一个氮、氧或硫原子作为环原子存在。杂芳基氮原子可任选的被氧化成相应的N-氧化物。适合的杂芳基的非限制性实例包括吡啶基、吡嗪基、呋喃基、噻吩基、嘧啶基、吡啶酮(包括N-取代的吡啶酮)、异唑基、异噻唑基、唑基、噻唑基、吡唑基、呋吖基(furazanyl)、吡咯基、吡唑基、三唑基、1，2，4-噻二唑基、吡嗪基、哒嗪基、喹啉基、酞嗪基、羟吲哚基、咪唑并[1，2-a]吡啶基、咪唑并[2，1-b]噻唑基、苯并呋吖基、吲哚基、吖吲哚基(azaindolyl)、苯并咪唑基、苯并噻吩基、喹啉基、咪唑基、噻吩并吡啶基、喹唑啉基、噻吩并嘧啶基(thienopyrimidyl)、吡咯并吡啶基、咪唑并吡啶基、异喹啉基、苯并吖吲哚基、1，2，4-三嗪基、苯并三唑基等。术语″杂芳基″还指部分取代的杂芳基部分，例如四氢异喹啉基、四氢喹啉基等。
″杂亚芳基″表示从上述定义的杂芳基中除去氢原子得到的双官能基团。非限制性实例为次吡啶基、次吡嗪基、次呋喃基、次噻吩基和次嘧啶基。
″芳烷基″或″芳基烷基″表示芳基-烷基-基团，其中该芳基和烷基如上所述。优选的芳烷基包含低级烷基。适合的芳烷基的非限制性实例包括苄基、2-苯乙基和萘甲基。至母体部分的键穿过该烷基。
″烷基芳基″表示烷基-芳基-基团，其中该烷基和芳基如上所述。优选的烷基芳基包含低级烷基。适合的烷基芳基的非限制性实例是甲苯基。至母体部分的键穿过该芳基。
″环烷基″表示非芳香单环-或多环的环系统，其包括约3至约10个碳原子，优选约5至约10个碳原子。优选的环烷基环含有约5至约7个环原子。该环烷基可任选的被一个或多个可以相同或不同的″环系统取代基″取代，并且如上所述。适合的单环环烷基的非限制性实例包括环丙基、环戊基、环己基、环庚基等。适合的多环环烷基的非限制性实例包括1-萘烷基、降莰烷基(norbornyl)、金刚烷基(adamantly)等，以及部分取代的种类例如茚满基、四氢萘基等。环烷基的更多非限制性实例包括如下
和 ″环烯基″表示从上述定义的环烷基中除去氢原子得到的双官能基团。环烯基的非限制性实例包括环丁烯基和环丙烯基。
″卤代″表示氟代、氯代、溴代或碘代。优选的是氟代、氯代和溴代。
″环系统取代基″表示连接于芳香族或非芳香族环系统的取代基，其例如取代环系统上可利用的氢。环系统取代基可以相同或不同，各自独立地选自-CF3、烷基、链烯基、炔基、芳基、杂芳基、芳烷基、烷基芳基、杂芳烷基、杂芳基链烯基、杂芳基炔基、烷基杂芳基、羟基、羟基烷基、烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、酰基、芳酰基、卤代、硝基、氰基、羧基、烷氧基羰基、芳氧基羰基、芳烷氧基羰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、杂芳基磺酰基、烷硫基、芳基硫基、杂芳基硫基、芳烷基硫基、杂芳烷基硫基、环烷基、杂环基、＝O、-C(＝N-CN)-NH2、-C(＝NH)-NH2、-C(＝NH)-NH(烷基)、Y1Y2N-、Y1Y2N-烷基-、Y1Y2NC(O)-、Y1Y2NSO2-和-SO2N Y1Y2，其中Y1和Y2可以相同或不同并且独立地选自氢、烷基、芳基、环烷基和芳烷基。″环系统取代基″还可以表示单个部分，其在一个环系统的两个邻近的碳原子上(每个碳上一个氢)同时取代两个可利用的氢。该部分的实例是亚甲基二氧基、亚乙基二氧基、-C(CH3)2-等，其形成的部分例如 和 ″杂环基″(或杂环烷基)表示非芳香取代的单环或多环的环系统，其包括约3至约10个环原子，优选约4至约7个环原子，其中在该环系统中的一个或多个原子是与碳不同的元素例如氮、氧或硫单独或组合。在该环系统中没有相邻的氧和/或硫原子。优选的杂环基含有约5至约6个环原子。在杂环基根名前的前缀氮杂、氧杂或硫杂分别表示至少一个氮、氧或硫原子作为环原子存在。在杂环基环中的任何-NH可以存在受保护的例如-N(Boc)、-N(CBz)、-N(Tos)基团等；该保护物也被认为是本发明的部分。该杂环基可任选地被一个或多个可以相同或不同的″环系统取代基″取代，并且如此处所定义的。杂环基的氮或硫原子可任选地被氧化成相应的N-氧化物、S-氧化物或S，S-氧化物。适合的单环杂环基环的非限制性实例包括哌啶基、吡咯烷基、哌嗪基、吗啉基、硫吗啉基、噻唑烷基、1，3-二氧戊环基、1，4-二烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢硫吡喃基等。
″亚杂环基″表示由上述杂环基除去氢原子得到的双官能基团。亚杂环基的非限制性实例包括亚吡啶基、亚吡咯烷基、亚哌嗪基、亚吗啉基、亚硫吗啉基、亚噻唑烷基、1，4-亚二烷基、亚四氢呋喃基和亚四氢硫苯基。
应当指出，在包含于本发明环系统中的杂原子中，在与N、O或S相邻的碳原子上没有羟基，在与另一杂原子相邻的碳上也没有N或S基团。因此，例如在以下环中 没有与标记2和5的碳直接连接的-OH。
本领域技术人员认可，某些式I化合物是互变异构的，并且所有该互变异构型在此视为本发明的部分。例如，部分 和 被认为等同于本发明的某些实施方案。
类似的，″杂芳基烷基或杂芳烷基″和″环烷基烷基″表示杂芳基-或环烷基-基团，其中该杂芳基、环烷基和烷基如上所述。优选的基团含有低级烷基。至母体部分的键穿过该烷基。
″芳基链烯基″表示来自如此处所述的芳基和链烯基的基团。优选的芳基链烯基是那些其中芳基是苯基，并且该链烯基包括约3至约6个原子。该芳基链烯基可任选的被一个或多个环系统取代基取代。至母体部分的键穿过该非芳香族碳原子。
″芳基炔基″表示来自如此处所述的芳基和炔基的基团。优选的芳基炔基是那些其中芳基是苯基，并且该炔基包括约3至约6个原子。该芳基炔基可任选的被一个或多个环系统取代基取代。至母体部分的键穿过该非芳香族碳原子。
″炔基烷基″表示炔基-烷基-基团，其中该炔基和烷基如上所述。优选的炔基烷基含有低级炔基和低级烷基。至母体部分的键穿过该烷基。适合的炔基烷基的非限制性实例包括炔丙基甲基。
″杂芳烷基″表示杂芳基-烷基-基团，其中该杂芳基和烷基如上所述。优选的杂芳烷基含有低级烷基。适合的杂芳烷基的非限制性实例包括吡啶基甲基和喹啉-3-基甲基。至母体部分的键穿过该烷基。
″杂芳烷基硫基″表示杂芳烷基-S-基团，其中该杂芳烷基如上所述。优选的杂芳烷基硫基含有低级烷基。至母体部分的键穿过该硫。
″杂芳基链烯基″表示杂芳基-链烯基，其中该杂芳基和该链烯基如上所述。优选的杂芳基链烯基含有低级链烯基。至母体部分的键穿过该链烯基。
″杂芳基炔基″表示杂芳基-炔基，其中该杂芳基和该炔基如上所述。优选的杂芳基炔基含有低级炔基。至母体部分的键穿过该炔基。
″杂环基烷基″表示杂环基-烷基，其中该杂环基和该烷基如上所述。至母体部分的键穿过该烷基。
″羟基烷基″表示HO-烷基-基团，其中烷基如上所述。优选的羟基烷基含有低级烷基。适合的羟基烷基的非限制性实例包括羟甲基和2-羟乙基。
″酰基″表示H-C(O)-、烷基-C(O)-或环烷基-C(O)-基团，其中该不同的基团如上所述。至母体部分的键穿过该羰基。优选的酰基含有低级烷基。适合的酰基的非限制性实例包括甲酰基、乙酰基、丙酰基、2-甲基丙酰基、丁酰基和环己酰基。
″芳酰基″表示芳基-C(O)-基团，其中该芳基如上所述。至母体部分的键穿过该羰基。适合的基团的非限制性实例包括苯酰基和1-萘酰基。
″烷氧基″表示烷基-O-基团，其中该烷基如上所述。适合的烷氧基的非限制性实例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基和正丁氧基。至母体部分的键穿过该醚氧。
″烷氧基烷基″表示烷氧基-烷基基团，其中该烷氧基和烷基如上所述。适合的烷氧基烷基的非限制性实例包括乙氧基乙基、甲氧基甲基和乙氧基甲基。至母体部分的键穿过该烷基。
″芳氧基″表示芳基-O-基团，其中该芳基如上所述。适合的芳氧基的非限制性实例包括苯氧基和萘氧基。至母体部分的键穿过该醚氧。
″芳烷氧基″表示芳烷基-O-基团，其中该芳烷基如上所述。适合的芳烷氧基的非限制性实例包括苯甲氧基和1-或2-萘甲氧基。至母体部分的键穿过该醚氧。
″烷基杂芳基″表示烷基-杂芳基，其中该烷基和杂芳基如上所述。至母体部分的键穿过该杂芳基。
″烷硫基″表示烷基-S-基团，其中该烷基如上所述。适合的烷硫基的非限制性实例包括甲基硫基和乙基硫基。至母体部分的键穿过该硫。
″芳基硫基″表示芳基-S-基团，其中该芳基如上所述。适合的芳基硫基的非限制性实例包括苯基硫基和萘基硫基。至母体部分的键穿过该硫。
″芳烷基硫基″表示芳烷基-S-基团，其中该芳烷基如上所述。适合的芳烷基硫基的非限制性实例是苯甲基硫基。至母体部分的键穿过该硫。
″烷氧基羰基″表示烷基-O-C(O)-基团，其中该烷基如上所述。适合的烷氧基羰基的非限制性实例包括甲氧基羰基和乙氧基羰基。至母体部分的键穿过该羰基。
″芳氧基羰基″表示芳基-O-C(O)-基团，其中该芳基如上所述。适合的芳氧基羰基的非限制性实例包括苯氧基羰基和萘氧基羰基。至母体部分的键穿过该羰基。
″芳烷氧基羰基″表示芳烷基-O-C(O)-基团，其中该芳烷基如上所述。适合的芳烷氧基羰基的非限制性实例是苯甲氧基羰基。至母体部分的键穿过该羰基。
″烷基磺酰基″表示烷基-S(O2)-基团，其中该烷基如上所述。优选的基团是该烷基是低级烷基的那些。至母体部分的键穿过该磺酰基。
″芳基磺酰基″表示芳基-S(O2)-基团，其中该芳基如上所述。至母体部分的键穿过该磺酰基。
″环烷基烷基″表示环烷基-烷基-基团，其中该环烷基和烷基如上所述。优选的基团是该烷基是低级烷基的那些。至母体部分的键穿过该烷基。
″杂芳烷氧基″表示杂芳烷基-O-基团，其中该杂芳烷基如上所述。至母体部分的键穿过该醚氧。
″杂芳基磺酰基″表示杂芳基-S(O2)-基团，其中该杂芳基如上所述。至母体部分的键穿过该磺酰基。
″杂芳基硫基″表示杂芳基-S-基团，其中该杂芳基如上所述。至母体部分的键穿过该硫。
术语″取代的″表示在所指定原子上的一个或多个氢被选自所指定的基团取代，条件是在所存在的环境下，未超过所指定原子的正常原子价，并且该取代产生稳定的化合物。取代物和/或变量的组合仅在该组合产生稳定的化合物时才是允许的。″稳定的化合物′或″稳定的结构″表示一种化合物，其足够稳定(robust)地存在，从反应混合物中分离出可利用程度的纯度，并制成有效的治疗剂。
在烷基、芳基、杂环烷基等之上的后缀″ene″表示一个二价部分，例如-CH2CH2-是亚乙基，和 是对-亚苯基。
可以理解，多环二价基团例如芳杂环烯基，其可通过在所述基团任意一个环上形成的键连接于其它基团。例如， 术语″任意取代的″表示在可用的位置以特定的基团、根或部分任意的取代。
在环烷基烷基、杂环烷基烷基、芳基烷基或杂芳基烷基部分上取代包括在该基团的环部分和/或烷基部分取代。
当在一个基团中的变量出现一次以上时，例如在-N(R8)2中的R8，或者在式I结构中的一个变量出现一次以上时，例如，R15既可以出现在R1中又可出现在R3中，该变量可以相同或不同。
关于在一个化合物中部分(例如取代基、基团或环)的数目，除非另有说明，短语″一个或多个″和″至少一个″表示可以是化学上允许的许多部分，并且该部分的最大限度数目的确定是本领域技术人员熟知的。关于包括使用″至少一种式I化合物″的组合物和方法，1至3个式I化合物可同时被施用，优选1个。
作为键的波浪线 通常表示可能的异构体的混合或其任一个，例如，含有(R)-和(S)-立体化学。例如，
表示既包含 又包含 画入环系统中的线例如 表示该标明的线(键)可以连接于任意一个可取代的环碳原子上。
如本领域公知的，在键的末端未作描述的部分的特定原子，从其画出的键表示甲基通过那个键至该原子连接，除非另有说明。例如 表示 式I化合物的多晶形，或者式I化合物的盐、溶剂合物和前体药物的多晶形将包括在本发明中。
化合物的术语″分离的″或″分离型″指所述化合物在被从合成方法或天然来源或其组合分离出来后的物理状态。化合物的术语″纯化的″或″纯化型″指在从纯化方法或此处所述或熟练技术人员熟知的方法获得后，通过此处所述或熟练技术人员熟知的标准分析技术鉴定为足够纯的所述化合物的物理状态。
还应指出，在此处正文、方案、实施例和表格中，具有不饱和的原子价的任何杂原子被假定具有氢原子以达到饱和的原子价。
当化合物中的官能基团称为″保护的″时，这表示该基团是呈修饰型的，当该化合物在进行反应时，以排除在保护位置不期望的副反应。适合的保护基团是本领域普通技术人员公认的，以及参考标准教科书公认的，例如T.W.Greene等，Protective Groups in organic Synthesis(1991)，Wiley，New York。
在任意组成或在式I中，当任一变量(例如芳基、杂环基、R2等)出现一次以上是时，它在每次出现的含义是不依赖于在所有其它处出现时的含义。
如此处使用的，术语″组合物″意欲包括一种产品，其包含特定量的特定组分，以及任意直接或间接地产生于特定量的特定组分的组合的产品。
本发明化合物的前体药物和溶剂合物也在此考虑。前体药物的讨论提供于A.C.S.Symposium Series中的T.Higuchi和V.Stella，Pro-drugsas Novel Delivery Systems(1987)14，以及Bioreversible Carriers in DrugDesign，(1987)Edward B.Roche，ed.，American PharmaceuticalAssociation and Pergamon Press。术语″前体药物″表示一种化合物(例如药物前体)，其在体内转化而产生式(I)化合物或该化合物的药学可接受的盐、水合物或溶剂合物。该转化可通过不同的机理而发生(例如通过代谢的或化学的过程)，例如通过在血液中水解。前体药物应用的讨论在A.C.S.Symposium Series中的T.Higuchi和W.Stella，″Prodrugsas Novel Delivery Systems，″Vol.14，以及Bioreversible Carriers inDrug Design，ed.Edward B.Roche，American PharmaceuticalAssociation and Pergamon Press，1987中提供。
例如，如果式(I)化合物或该化合物的药学可接受的盐、水合物或溶剂合物含有羧酸官能基团时，前体药物可包含由酸基团的氢原子以例如以下的基团取代而形成的酯(C1-C8)烷基、(C2-C12)烷酰基氧基甲基、具有4至9个碳原子的1-(烷酰基氧基)乙基、具有5至10个碳原子的1-甲基-1-(烷酰基氧基)-乙基、具有3至6个碳原子的烷氧基羰基氧甲基、具有4至7个碳原子的1-(烷氧基羰基氧基)乙基、具有5至8个碳原子的1-甲基-1-(烷氧基羰基氧基)乙基、具有3至9个碳原子的N-(烷氧基羰基)氨甲基、具有4至10个碳原子的1-(N-(烷氧基羰基)氨基)乙基、3-酞基、4-巴豆酸内酯基(4-crotonolactoneyl)、γ-丁酸内酯-4-基、二-N，N-(C1-C2)烷基氨基(C2-C3)烷基(例如β-二甲基氨基乙基)、氮基甲酰-(C1-C2)烷基、N，N-二(C1-C2)烷基氨甲酰基-(C1-C2)烷基和哌啶代-、吡咯代-或吗啉代(C2-C3)烷基等。
类似的，如果式(I)化合物含有醇官能基团，前体药物可通过醇基团的氢原子由例如以下的基团取代而形成(C1-C6)烷酰基氧基甲基、1-((C1-C6)烷酰基氧基)乙基、1-甲基-1-((C1-C6)烷酰基氧基)乙基、(C1-C6)烷氧基羰基oxy甲基、N-(C1-C6)烷氧基羰基氨甲基、琥珀酰基(succinoyl)、(C1-C6)烷烃基(alkanoyl)、α-氨基(C1-C4)链烷基、芳基酰基和α-氨基酰基或者α-氨基酰基-α-氨基酰基，其中各个α-氨基酰基独立地选自天然产生的L-氨基酸、P(O)(OH)2、-P(O)(O(C1-C6)烷基)2或糖基(该基产生于碳水化合物半缩醛形式的羟基的去除)等。
如果式(I)化合物结合了胺官能基团，前体药物可通过胺基的氢原子由例如以下的基团取代而形成R-羰基，RO-羰基，NRR′-羰基其中R和R′各自独立地为(C1-C10)烷基、(C3-C7)环烷基、苄基或R-羰基为天然α-氨基酰基或天然α-氨基酰基，-C(OH)C(O)OY1其中Y1为H、(C1-C6)烷基或苄基，-C(OY2)Y3其中Y2为(C1-C4)烷基且Y3为(C1-C6)烷基，羧基(C1-C6)烷基，氨基(C1-C4)烷基或单-N-或二-N，N-(C1-C6)烷基氨基烷基，-C(Y4)Y5其中Y4为H或甲基且Y5为单-N-或二-N，N-(C1-C6)烷基氨基吗啉代，哌啶-1-基或吡咯烷-1-基等。
″溶剂合物″表示本发明化合物与一个或多个溶剂分子的物理结合。该物理结合包括不同程度的离子和共价结合，包括氢键。在某些实例中，该溶剂合物可以分离，例如当一个或多个溶剂分子结合在结晶固体的晶格中时。″溶剂合物″包括溶解状态(solution-phase)的和可分离的溶剂合物。适合的溶剂合物的非限制性实例包括乙醇合物、甲醇合物等。″水合物″是溶剂分子为H2O的溶剂合物。
式I化合物形成盐，其也包含在本发明的范围之内。此处提及的式I化合物理解为包括提及其盐，除非另有说明。如此处使用的，术语″盐(类)″表示与无机酸和/或有机酸形成的酸性盐，以及与无机碱和/或有机碱形成的碱性盐。此外，当式I化合物既含有碱部分例如但不限于吡啶或咪唑，又含有酸部分例如但不限于羧酸时，可以形成两性离子(″内盐″)，并且如此使用的包括在术语″盐(类)″之内。药学可接受的(即非毒性的、生理学上可接受的)盐是优选的，尽管其它盐也是有用的。该式I化合物的盐例如可以通过式I化合物与一定量例如等当量的酸或碱，在例如盐在其中沉淀的介质，或者在随后经冷冻干燥的水性介质中反应而形成。通常认为适合于从碱性(或酸性)药学化合物形成药学上可用的盐的酸(和碱)已作了讨论，例如S.Berge等，Journal ofPharmaceutical Sciences(1977)66(1)1-19；P.Gould，International J.ofPharmaceutics(1986)33201-217；Anderson等，The Practice of MedicinalChemistry(1996)，Academic Press，New York；在The Orange Book(Food& Drug Administration，Washington，D.C.在其网站上)中；和P.Heinrich Stahl，Camille G. Wermuth (Eds.)，Handbook ofPharmaceutical SaltsProperties，Selection，and Use，(2002)Int′l.Unionof Pure and Applied Chemistry，pp.330-331。这些公开作为参考并入于此。
典型的酸加成盐包括乙酸盐、抗坏血酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、重硫酸盐、硼酸盐、丁酸盐、枸橼酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、延胡索酸盐、氢氯酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、萘磺酸盐、硝酸盐、草酸盐、磷酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐(另称为甲苯磺酸盐(tosylates))等。此外，通常认为适合于从碱性药学化合物形成药学上可用的盐的酸已作了讨论，例如P.Stahl等，Camille G.(eds.)Handbook of Pharmaceutical Salts.Properties，Selection and Use.(2002)ZurichWiley-VCH；S.Berge等，Journal of PharmaceuticalSciences(1977)66(1)1-19；P.Gould，International J.of Pharmaceutics(1986)33 201-217；Anderson等，The Practice of Medicinal Chemistry(1996)，Academic Press，New York；和在The Orange Book(Food &Drug Administration，Washington，D.C.在其网站上)中。这些公开作为参考并入于此。
典型的碱性盐包括铵盐，碱金属盐例如钠盐、锂盐和钾盐，碱土金属盐例如钙盐和镁盐，铝盐，锌盐，与有机碱(例如有机胺)例如苄星类、二乙胺、二环己基胺、海巴胺类(hydrabamines)(与N，N-二(去氢松香)亚乙基二胺形成)、N-甲基-D-葡萄糖胺、N-甲基-D-葡萄糖酰胺、叔丁基胺、哌嗪、苯基环己基胺、胆碱、氨丁三醇的盐，以及与氨基酸例如精氨茇、赖氨酸等的盐。碱性含氮基团可以被例如以下的试剂四元化(quarternized)低级烷基卤化物(例如甲基、乙基、丙基和丁基的氯化物、溴化物和碘化物)、二烷基硫酸根(例如二甲基、二乙基、二丁基和二戊基硫酸根)、长链卤化物(例如癸基、十二烷基、十四烷基和十八烷基的氯化物、溴化物和碘化物)、芳烷基卤化物(例如苄基和苯乙基溴化物)及其它。
所有这些酸性盐或碱性盐均为本发明范围内的药学可接受的盐，并且所有酸性盐或碱性盐被认为等同于本发明目的的相应化合物的游离型。
式I化合物及其盐、溶剂合物和前体药物，可以以其互变异构型存在(例如酰胺或亚胺醚)。所有这些互变异构型在此认为作为本发明的部分。
所有本发明化合物(包括该化合物盐、溶剂合物和前体药物的那些以及该前体药物的盐和溶剂合物)的立体异构体(例如几何异构体、旋光异构体等)，例如由于在不同取代基上的不对称碳的存在的那些，包括对映异构体型(其甚至可以在没有不对称碳时存在)、旋转异构体型、阻转异构体和非对映体形式，均认为在本发明的范围之内，位置异构体(例如4-吡啶基和3-吡啶基)同样如此。本发明化合物的单个立体异构体例如可以是基本上没有其它异构体，或者可以是混合的，例如外消旋化合物，或者与其它所有的立体异构体或其它选定的立体异构体。本发明的手性中心可以具有如由IUPAC 1974推荐中所确定的S或R构型。术语″盐″、″溶剂合物″、″前体药物″等的应用同样用于本发明化合物的对映异构体、立体异构体、旋转异构体、互变异构体、位置异构体、外消旋化合物或前体药物的盐、溶剂合物和前体药物。
式I表示的化合物可以是可用于预防或治疗阿耳茨海默氏病的β-分泌酶抑制剂。
本发明一方面是治疗罹患由BACE-1(一种天冬氨酰蛋白酶)介导或化的疾病和症状的哺乳动物的方法，其通过向该哺乳动物施用治疗有效量的至少一种式I化合物，或所述化合物的药学可接受的盐或溶剂合物。
″有效量″或″治疗有效量″意指描述本发明化合物或组合物的量，该量在适合的患者中有效的抑制BACE-1并因此产生期望的治疗效果。
优选剂量是约0.001～1000mg/kg体重/天的式I化合物或其药学或其药学可接受的盐或溶剂合物。特别优选的剂量是约0.01～30mg/kg体重/天的式I化合物或所述化合物的药学可接受的盐或溶剂合物。
本发明的再另一方面是治疗认知或神经变性疾病例如阿耳茨海默氏病的方法，包括向需要该治疗的哺乳动物施用治疗有效量的至少一种式I化合物或所述化合物的药学可接受的盐或溶剂合物。
本发明再一方面是一种方法，用于治疗认知或神经变性疾病例如阿耳茨海默氏病，包括向哺乳动物施用治疗有效量的至少一种式I化合物或所述化合物的药学可接受的盐或溶剂合物。
本发明还涉及药物组合物，其包括至少一种式I化合物或所述化合物的药学可接受的盐或溶剂合物，以及至少一种药学可接受的载体。
本发明还涉及用于治疗神经变性疾病例如阿耳茨海默氏病的药物组合物，其包括有效治疗量的至少一种式I化合物或所述化合物的药学可接受的盐或溶剂合物，以及至少一种药学可接受的载体。
优选的剂量是约0.001～1000mg/kg体重/天的式I化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物。特别优选的剂量是约0.01～30mg/kg体重/天的式I化合物或所述化合物的药学可接受的盐或溶剂合物。
本发明的再另一方面是治疗认知或神经变性疾病例如阿耳茨海默氏病的方法，包括向需要该治疗的哺乳动物施用治疗有效量的至少一种式I化合物或所述化合物的药学可接受的盐或溶剂合物。
本发明再一方面是一种方法，用于治疗认知或神经变性疾病例如阿耳茨海默氏病，包括向哺乳动物施用治疗有效量的至少一种式I化合物或所述化合物的药学可接受的盐或溶剂合物。
本发明还涉及药物组合物，其包括至少一种式I化合物或所述化合物的药学可接受的盐或溶剂合物，以及至少一种药学可接受的载体。
本发明还涉及用于治疗神经变性疾病例如阿耳茨海默氏病的药物组合物，其包括有效治疗量的至少一种式I化合物或所述化合物的药学可接受的盐或溶剂合物，以及至少一种药学可接受的载体。
在组合物方面，除式I那些之外的任何β-分泌酶抑制剂的应用是期望的；β-分泌酶抑制剂活性可通过下述方法测定。可用的β-分泌酶抑制剂描述于，但不限于WO 02/02505、WO 02/02506、WO 02/02512、WP 02/02518、WO 02/02520和WO 02/088101中。
本发明再另一方面是式I化合物或所述化合物的药学可接受的盐或溶剂合物和如下所述的其它化合物的组合物。
相应地，包括于本发明的是一种治疗神经变性疾病例如阿耳茨海默氏病的方法，包括向哺乳动物(例如女性或男性的人类)施用a、一定量的第一化合物，所述第一化合物为式I化合物或所述化合物的药学可接受的盐或溶剂合物；和
b、一定量的第二化合物，所述第二化合物为胆碱酯酶抑制剂。
用于该组合物的胆碱酯酶抑制剂包括乙酰-和/或丁酰胆碱酯酶抑制剂。胆碱酯酶抑制剂的实例包括他克林(tacrine)、多奈哌齐、利伐斯的明(rivastigmine)、加兰他敏、吡啶斯的明(pyridostigmine)和新斯的明(neostigmine)。
相应地，包括于本发明的是一种治疗神经变性疾病例如阿耳茨海默氏病的方法，包括向哺乳动物(例如女性或男性的人类)施用a、一定量的第一化合物，所述第一化合物为式I化合物或所述化合物的药学可接受的盐或溶剂合物；和b、一定量的第二化合物，所述第二化合物为抗淀粉状蛋白抗体。抗淀粉状蛋白抗体例如描述于Hock等，Nature Medicine，8(2002)，p.1270-1275中。
相应地，包括于本发明的是一种治疗神经变性疾病例如阿耳茨海默氏病的方法，包括向哺乳动物(例如女性或男性的人类)施用a、一定量的第一化合物，所述第一化合物为式I化合物或所述化合物的药学可接受的盐或溶剂合物；和b、一定量的第二化合物，所述第二化合物为抗炎化合物。抗炎化合物的实例包括但不限于非甾体抗炎药例如双氯芬酸(Voltaren、Catafiam)、双氟尼酸(二氟尼柳)、依托度酸(Lodine)、氟比洛芬(Ansaid)、布洛芬(Motrin、Advil)、吲哚美辛(Indocin)、酮洛芬(Orudis、Oruvail)、酮咯酸(Toradol)、萘丁美酮(Relafen)、萘普生(Naprosyn、Alleve)、奥沙普秦(Daypro)、吡罗昔康(Feldene)、舒林酸(Clinoril)、托美丁(Tolectin)、塞来考昔(Celebrex)和罗非考昔(Vioxx)。
相应地，包括于本发明的是一种治疗神经变性疾病例如阿耳茨海默氏病的方法，包括向哺乳动物(例如女性或男性的人类)施用a、一定量的第一化合物，所述第一化合物为式I化合物或所述化合物的药学可接受的盐或溶剂合物；和b、一定量的第二化合物，所述第二化合物为γ分泌酶抑制剂。用于本发明组合物的γ-分泌酶抑制剂可通过本领域已知的方法确定。典型的γ-分泌酶抑制剂包括但不限于描述于WO 03/013527、US6,683,091、WO 03/066592、2003年9月16日提交的USSN 10/663,042、WO 00/247671、WO 00/050391、WO 00/007995和WO 03/018543中的那些。
相应地，包括于本发明的是一种治疗神经变性疾病例如阿耳茨海默氏病的方法，包括向哺乳动物(例如女性或男性的人类)施用a、一定量的第一化合物，所述第一化合物为式I化合物或所述化合物的药学可接受的盐或溶剂合物；和b、一定量的第二化合物，所述第二化合物为HMG-CoA还原酶抑制剂化合物。与式I化合物用于组合物的HMG-CoA还原酶抑制剂包括″他汀类″，例如阿托伐他汀、洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀和罗苏伐他汀。
相应地，包括于本发明的是一种治疗神经变性疾病例如阿耳茨海默氏病的方法，包括向哺乳动物(例如女性或男性的人类)施用a、一定量的第一化合物，所述第一化合物为式I化合物或所述化合物的药学可接受的盐或溶剂合物；和b、一定量的第二化合物，所述第二化合物为N-甲基-D-天冬氨酸盐受体拮抗剂。适合的N-甲基-D-天冬氨酸盐受体拮抗剂是例如美金刚。
优选的，药物制剂是单位剂量剂型。在该剂型中，该制剂再分成适合大小的单位剂量，其含有适宜量，例如有效量的活性成分以获得期望的目的。
在单位剂量制剂中的活性化合物的量可以根据具体应用而变化或调整为约1mg～约1000mg，优选约1mg～约50mg，更优选约1mg～约25mg。
实际使用剂量可以根据患者需要量和所治疗症状的严重度而变化。具体情况下适宜的给药方案的确定是本领域的技术。为了方便，总日剂量可以被分开并根据要求在一日内分次施用。
本发明化合物和/或其药学可接受的盐的施用量和频率将根据主治的临床医生鉴于以下因素的判断而调节年龄、症状和患者(体表)大小以及该治疗症状的严重度。对经口施用而言，通常推荐的每日给药方案可以是约1mg/天～约300mg/天，优选1mg/天～约50mg/天，分2～4次给药。
该组合物的化合物(不是式I那些的β分泌酶抑制剂、NSAIDS、他汀类药物、胆碱酯酶抑制剂等)和/或其药学可接受的盐的施用量和频率将根据主治的临床医生鉴于以下因素的判断而调节年龄、症状和患者(体表)大小以及该治疗症状的严重度。
由本发明描述的化合物，惰性的药学可接受的载体制备药物组合物既可以是固体，也可以是液体。固体形式的制剂包括粉剂、片剂、可分散的颗粒、胶囊剂、扁胶囊剂和栓剂。粉剂和片剂可以包含5～95％的活性成分。适合的固体载体是本领域已知的，例如碳酸镁、硬脂酸镁、滑石粉、蔗糖或乳糖。片剂、粉剂、扁胶囊剂和胶囊剂可作为适合经口施用的固体剂型而使用。药物可接受的载体的实例和不同组合物的制备方法可见于A.Gennaro(ed.)，Remington′s PharmaceuticalSciences，18th Edition，(1990)，Mack Publishing Co.，Easton，Pennsylvania。
对于制备栓剂，首先将低熔点蜡(low melting wax)例如脂肪酸甘油酯或可可豆脂的混合物熔化，通过搅拌将活性成分均匀地分散其中。然后将熔化的均匀混合物倾入适当大小的模具中，使之冷却并固化。
液休制剂包括溶液剂、混悬剂和乳剂。可提及的实例为供注射用的水或水-丙二醇溶液。液体制剂还可包括供鼻内施用的溶液。
适合吸入的气雾剂可包括溶液和粉末形式的固体，其可以是与药学可接受的载体例如惰性压缩气体的组合物。
还包括固体制剂是，其意欲在临用前转变成供经口或注射施用的液体制剂。该液体制剂包括溶液剂、混悬剂和乳剂。
本发明的化合物还可经皮释放。经皮组合物可以是乳膏、洗液、气雾剂和/或乳剂的形式，并且可包括骨架型或贮库型的经皮贴片，为了该目的，它们在本领域内是常规的。
优选该化合物为经口施用。
优选的，该药物制剂为单位剂量剂型。在该剂型中，该制剂再分成单元剂量，其含有适宜量例如有效量的活性化合物以达到预期的目的。
当式I化合物在与除式I那些以外的β-分泌酶抑制剂、HMG-CoA还原酶抑制剂、γ-分泌酶抑制剂、非甾体抗炎药、N-甲基-D-天冬氨酸盐受体拮抗剂、胆碱酯酶抑制剂或抗淀粉状蛋白抗体组合使用，以治疗认知障碍或神经变性障碍时，活性成分可以同时或连续地共同施用，或者可以施用包含在药学可接受的载体中的式I化合物和其它药物之一的单个药物组合物。组合物中的成分可以单个或一起的，以任意常规的经口或注射剂型例如胶囊剂、片剂、粉剂、扁胶囊剂、混悬剂、溶液剂、栓剂、鼻喷剂等施用。除式I那些以外的β-分泌酶抑制剂、HMG-CoA还原酶抑制剂、γ-分泌酶抑制剂、非甾体抗炎药、N-甲基-D-天冬氨酸盐受体拮抗剂、胆碱酯酶抑制剂或抗淀粉状蛋白抗体，其剂量可根据已知出版物确定，并且可以是0.001～100mg/kg体重。
当式I化合物和除式I那些以外的β-分泌酶抑制剂、HMG-CoA还原酶抑制剂、γ-分泌酶抑制剂、非甾体抗炎药、N-甲基-D-天冬氨酸盐受体拮抗剂、胆碱酯酶抑制剂或抗淀粉状蛋白抗体的分离的药物组合物被施用时，它们可提供于包括单个包装的药盒中，一个容器中包含在药学可接受的载体中的式I化合物，分开的一个容器中包含在药学可接受的载体中的其它药物，式I化合物和其它药物提供了使该组合物治疗有效的量。例如当各成分必需在不同的时间间隔给药时，或者当它们为不同的剂型时，对施用组合物而言药盒是方便的。
本发明还包括多成分组合物、药盒和治疗方法，例如，式I化合物可以与HMG-CoA还原酶抑制剂和非甾体抗炎药组合施用。
式I化合物可以通过本领域已知的方法，使用如下述反应方案所示的液相或固相合成而制备，但是本领域技术人员认可的其它方法也可以适用。
在以下的方案和实施例中，使用了下述缩写甲基Me；乙基Et；丙基Pr；丁基Bu；苄基Bn乙酸乙酯EtOAc苯甲基氧基羰基CbzN，N-二甲基甲酰胺DMF；1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸化合EDC或EDCl室温RT小时h分钟min保留时间tR三氟乙酸TFA四氢呋喃THF1-羟基苯并三唑HOBt
甲醇MeOH甲醇EtOH二乙基醚(乙醚)Et2O乙酸AcOH二甲基亚砜DMSO锂二异丙基酰胺LDA氯化叔-二甲基甲硅烷TBSCl叔-二甲基甲硅烷TBS三苯基膦PPh3二异丙基偶氮二甲酸酯DIAD铜(1)溴化-二甲基硫化物CuBr-Me2S叔丁基氧基羰基Boc钯合四(三苯基膦)Pd(PPh3)4三苯基膦PPh3四丁基氟化铵TBAF三乙胺Et3N，NEt3或TEA硼氢化锂LiBH4(三甲基硅烷基)重氮甲烷TMSCHN2苄基溴BnBr氢化铝锂LAH或LiAlH4二-叔-丁基重碳酸盐(Boc)2O4-二甲基氨基吡啶DMAP丁基锂BuLi苯甲醇BnCl乙二酰氯(COCl)2钯二苯基膦基二茂铁氯化物Pd(dppf)Cl2制备型薄层色谱法PTLC高压液相色谱法HPLC液相色谱质谱法LCMS薄层色谱法TLC三氟化硼乙酰合物BF3-Et2O三乙基甲硅烷Et3SiH
N，N-二异丙基乙胺DIEA二异丙基胺DIPA乙酸酐Ac2O二甲基乙酰胺DMA总方案总方案1 总方案2
总方案3 总方案4
总方案5 制备实施例1 步骤1 向Boc-L-3-溴苯丙氨酸(9.44g，27.4mmol)在甲苯(60ml)和MeOH(12ml)中的冰冷溶液中加入在己烷(20ml)中的2M(三甲基硅烷基)重氮甲烷。在室温下搅拌该溶液1h并加入AcOH(2ml)。将该混合物浓缩，残余物溶于20％MeOH/CH2Cl2(40ml)中。该溶液在冰水浴中冷却并通过滴液漏斗经30min加入4N HCl/二烷(36ml)。加料完成后，将混合物加热至RT并搅拌4h。将混合物浓缩得该产物(8.95g，100％)。MS m/e 258(M+H)+
步骤2 向步骤1产物(8.95g，27.4mmol)在THF(80ml)和DMSO(20ml)中的冰冷溶液中加入碳酸氢钠(14.6g，174mmol)和苄基溴(15.9g，91.4mmol)。在80℃下将该混合物搅拌24h。混合物冷却至RT，加入水(120ml)和EtOAc(100ml)。水层用EtOAc(2×100ml)提取，并将合并的有机层用饱和碳酸氢钠(100ml)洗涤，干燥(MgSO4)，浓缩并通过柱色谱法纯化(梯度EtOAc/己烷0-5％)得该产物(10.4g，87％)。MS m/e438(M+H)+步骤3 向步骤2产物(10.4g，23.8mmol)在THF(100ml)中的冰冷溶液中分成多份加入LAH(1.42g，37.4mmol)。加料完成后，将混合物加热至RT并搅拌4.5h。将反应用缓慢加入的水(5ml)、1N NaOH(10ml)和水(5ml)猝灭。搅拌该混合物直至灰色消失，然后过滤。将滤液浓缩，残渣在CH2Cl2(100ml)和盐水之间分配。将该有机层干燥(MgSO4)，浓缩并通过柱色谱法纯化(梯度EtOAc/己烷0-10％)得该产物(5.70g，58％)。MSm/e 410(M+H)+步骤4
向在冰水浴中的哌嗪酮(10.0g，100mmol)、三乙胺(20.2g，200mmol)和在CH2Cl2(250ml)中的DMAP(50mg)的溶液中，缓慢加入(Boc)2O(22.9g，105mmol)。将该混合物在冰水浴中搅拌1并在RT下搅拌4.5h。将该混合物用CH2Cl2(250ml)稀释，用水(200ml)、5％枸橼酸(200ml)、1N HCl(200ml)、饱和碳酸氢钠(20ml)和盐水洗涤。将该有机层干燥(MgSO4)并浓缩得该产物(18.0g，90％)。MSm/e 201(M+H)+步骤5 向在冰水浴中的步骤4产物(10.0g，50.0mmol)在无水DMF(250ml)中的溶液中加入氢化钠(2.40g，60.0mmol)和苄基氯(6.60g，52.5mmol)。将该混合物在RT下搅拌4.5h。将反应用水(10ml)猝灭，用CH2Cl2(500ml)稀释，并用水(2×250ml)洗涤。有机层用饱和NH4Cl(200ml)萃取，干燥(MgSO4)，浓缩并通过柱色谱法纯化(梯度MeOH/CH2Cl20-5％)得该产物(10.7g，74％)。1H-NMR(CDCl3)δ＝7.2-7.3(m，5H)，4.57(s，2H)，4.10(s，2H)，3.53(m，2H)，3.19(m，2H)，1.41(s，9H)。
步骤6
在干冰-丙酮浴中，向乙二酰氯(1.08g，8.30mmol)在CH2Cl2(7ml)中的溶液中加入DMSO(1.14g，14.6mmol)。5min后，加入步骤3产物(3.01g，7.34mmol)在CH2Cl2(7ml)中的溶液，并将该混合物搅拌1h。加入二异丙基乙胺(3.28g，25.4mmol)，2min后移开冷却浴。将混合物搅拌30min并用水(50ml)稀释。加入CH2Cl2(40ml)，水层用CH2Cl2(40ml)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，浓缩得该醛，其未进一步纯化。
在干冰-丙酮浴中，向二异丙基胺(896mg，8.85mmol)在THF(5ml)中的溶液中加入1.6M丁基锂在己烷(5.5ml，8.8mmol)中的溶液。5min后将该混合物置于冰水浴中，搅拌20min。该溶液再次在干冰-丙酮浴中冷却，并加入步骤5产物(2.14g，7.37mmol)在THF(8ml)中的溶液。将该混合物搅拌1h。加入上述酮在THF(10ml)中的溶液，并将该混合物搅拌1.5h。将反应用水猝灭并在醚(4×50ml)和水(50ml)之间分配。合并的有机层用盐水(50ml)洗涤，干燥(MgSO4)，浓缩并通过柱色谱法纯化(梯度EtOAc/己烷0-20％)得该产物(2.67g，52％)。MS m/e 698(M+H)+步骤7 将步骤6产物(194mg，0.277mmol)、在THF(2.2ml)中的0.5Mpropylzinc bromide和Pd(dppf)Cl2(25mg，0.031mmol)的混合物除气，并在熔封管中加热至45℃达16h。将该混合物用CH2Cl2(50ml)稀释，并用NH4OH(30ml)水溶液洗涤。将该有机层干燥(MgSO4)，浓缩并通过PTLC纯化(20％EtOAc/己烷)得该产物(124mg，68％)。MS m/e662(M+H)+步骤8
在H2(1大气压)下，将步骤7产物(124mg，0.188mmol)、20％Pd(OH)2/C(169mg)和在EtOH(12ml)中的催化量的AcOH的混合物搅拌4h。过滤该混合物并浓缩。残余物在CH2Cl2(40ml)和1N NaOH(20ml)之间分配。将该有机层干燥(MgSO4)并浓缩得该产物(81mg，89％)。MSm/e 482(M+H)+步骤9 在冰水浴中，将步骤8产物(81mg，0.17mmol)、三乙胺(24μl)，0.17mmol)和在CH2Cl2(8ml)中的乙酸酐(17mg，0.17mmol)的混合物搅拌2 h。将该混合物用CH2Cl2(50ml)稀释，并用1N NaOH(20ml)洗涤。将该有机层干燥(MgSO4)，浓缩并通过PTLC纯化(3％MeOH/CH2Cl2)，得该产物(81mg，91％)。MS m/e 524(M+H)+步骤10
在冰水浴中，将步骤9产物(81mg，0.15mmol)和TFA(1ml)在CH2Cl2(6ml)中的溶液搅拌1h，然后在RT下搅拌3h。将该混合物用CH2Cl2(40ml)稀释，并用NH4OH(20ml)水溶液洗涤。将该有机层干燥(MgSO4)，浓缩并通过PTLC纯化(5％MeOH/CH2Cl2)，得该产物(42mg，67％)。1H-NMR(CDCl3)δ＝7.1-7.4(m，8H)，7.01(m，1H)，6.15(m，1H)，4.72(d，1H，J＝14.8Hz)，4.46(m，1H)，4.35(d，1H，J＝14.8Hz)，4.04(m，1H)，3.40(m，1H)，3.27(m，1H)，3.06(m，2H)，2.95(m，1H)，2.83(m，1H)，2.65(m，1H)，2.54(t，2H，J＝7.6Hz)，1.86(s，3H)，1.61(m，2H)，0.91(t，3H，J＝7.4Hz)。LCMS tR＝3.33min m/e424(M+H)+通过制备实施例1中所述的基本相同的操作，制备了如下实施例。
制备实施例2
步骤1
在干冰-丙酮浴中，向1，3-二溴-5-氟苯(5.105g，20.11mmol)在醚(50ml)中的溶液中加入在己烷(12.5ml，20.0mmol)中的1.6M丁基锂。2h后加入苯甲醛(2.287g，21.55mmol)，让该混合物缓缓温热至RT并搅拌16h。将反应用盐水(70ml)猝灭，水层用醚(50ml)萃取。将合并的有机层干燥(MgSO4)，浓缩并通过柱色谱法纯化(梯度EtOAc/己烷0-10％)，得该产物(5.036g，90％)。1H-NMR(CDCl3)δ＝7.30(m，6H)，7.09(m，1H)，7.02(m，1H)，5.73(s，1H)。
步骤2 向步骤1产物(5.036g，17.92mmol)在CH2Cl2(70ml)中的溶液中加入三乙基甲硅烷(12.0ml，74.3mmol)。溶液在冰-水浴中冷却，并加入三氟化硼二乙基醚合物(3.35ml，26.7mmol)。将该混合物缓缓温热至RT并搅拌5h。在冰-水浴中将反应冷却并用饱和NaHCO3(100ml)猝灭。水层用CH2Cl2(50ml)提取，并将合并的有机层干燥(MgSO4)，浓缩得该产物(4.09g，86％)。1H-NMR(CDCl3)δ＝7.28(m，2H)，7.20(m，1H)，7.12(m，3H)，7.04(m，1H)16.78(m，1H)，3.90(s，2H)。
步骤3 向N-Boc-D-丝氨酸甲酯(10.0g，45.6mmol)在DMF(150ml)中的冰冷溶液中加入咪唑(9.26g，136mmol)和TBSCI(7.56g，50.16mmol)。在RT下将该混合物搅拌20h，浓缩。残余物用EtOAc(300ml)溶解，并用饱和NH4Cl和碳酸氢钠萃取。将该有机层干燥(MgSO4)，并浓缩得该产物(16.5g，100％)。MS m/e 356(M+Na)+步骤4
向步骤3产物(16.5g，45.6mmol)在THF(150ml)中的溶液中缓缓加入在THF(37.1ml)中的2M氢硼化锂。在RT下将混合物搅拌2.5h。将反应用饱和NH4Cl猝灭并用EtOAc(2×250ml)提取。将合并的有机层用饱和NH4Cl(100ml)、饱和碳酸氢钠和盐水洗涤，干燥，并浓缩得该产物(14.5g，100％)。MS m/e 306(M+H)+步骤5 向三苯膦(13.95g，53.19mmol)在THF(400ml)和CH3CN(50ml)中的冰冷溶液中加入DIAD(10.76g，53.21mmol)。将该混合物搅拌15min，并历经15min加入步骤4产物(8.20g，26.2mmol)在THF(100ml)中的溶液。加料完成后，移去冰-水浴，在RT下将混合物搅拌2d。将该混合物浓缩并通过柱色谱法纯化(梯度EtOAc/己烷0-5％)，得该产物(3.75g，50％)。MS m/e 288(M+H)+步骤6 向火焰-干燥瓶中加入镁转移剂(turnings)(499mg，20.5mmol)、步骤2产物(4.45g，16.8mmol)、1，2-二溴乙烷数滴和无水THF(20ml)。在干冰-丙酮浴中，在RT下将该混合物搅拌1.5h，并加至CuBr-Me2S(272mg，1.32mmol)在THF(15ml)的混悬液中。将该混合物搅拌1.5h，加入步骤5产物(2.52g，8.75mmol)在无水醚(20ml)中的溶液。所得混合物在冰-水浴中温热并让其缓缓温热至RT，搅拌3d。将反应用饱和NH4Cl(100ml)猝灭，并用EtOAc(2×150ml)萃取。将合并的有机层干燥(MgSO4)，浓缩并通过柱色谱法纯化(梯度EtOAc/己烷0-8％)，得该产物(1.51g，36％)。MS m/e 474(M+H)+步骤7 在THF(10ml)中，将步骤6产物(710mg，1.50mmol)和在THF(2.8ml)中的1M TBAF的混合物于RT下搅拌5h。将该混合物用EtOAc(50ml)稀释，并用水(50ml)萃取。将该有机层干燥(MgSO4)，浓缩并通过柱色谱法纯化(梯度MeOH/CH2Cl20-2.5％)，得该产物(508mg，94％)。MSm/e 382(M+Na)+步骤8 在干冰-丙酮浴中，向乙二酰氯(214mg，1.65mmol)在CH2Cl2(2.5ml)中的溶液中加入DMSO(356mg，4.56mmol)。5min后，加入步骤7产物(508mg，1.41mmol)在CH2Cl2(3.5ml)中的溶液，将该混合物搅拌1h。加入三乙胺(700μl，5.02mmol)，并将该混合物搅拌15min。将混合物加热至RT并搅拌15min。加入水(30ml)和CH2Cl2(40ml)，水层用CH2Cl2(30ml)萃取。将合并的有机层用盐水(50ml)洗涤，干燥(MgSO4)，浓缩得该醛，其未进一步纯化。
在干冰-丙酮浴中，向二异丙基胺(188mg，1.86mmol)在THF(2.5ml)中的溶液中加入在己烷(1.40ml，2.24mmol)中的1.6 M丁基锂。5min后，将混合物置于冰-水浴中并搅拌20min。在干冰-丙酮浴中将该溶液再次冷却，加入制备实施例1，步骤5产物(460mg，1.59mmol)在THF(4ml)中的溶液。将该混合物搅拌1h。加入上述醛在THF(4ml)中的溶液，并将该混合物搅拌1.5h。将反应用水(40ml)猝灭，并用醚(50ml)萃取。水层用醚(3×40ml)萃取。将合并的有机层用盐水(50ml)洗涤，干燥(MgSO4)，浓缩并通过PTLC纯化(40％EtOAc/己烷)得馏份1(137mg，15％)。MS m/e 648(M+H)+；馏份2(148mg，16％)。MS m/e 648(M+H)+步骤9 在冰-水浴中，将步骤8馏份1产物(136mg，0.211mmol)和TFA(1ml)在CH2Cl2(5ml)中的溶液搅拌30min，然后在RT下搅拌2.5h。将该混合物用CH2Cl2(40ml)稀释，并用NH4OH(10ml)水溶液洗涤。将该有机层干燥(Na2CO3)，浓缩并通过PTLC纯化(10％2M NH3/MeOH-90％CH2Cl2)，得该产物(72mg，77％)。MS m/e 448(M+H)+步骤10 向步骤9产物(70mg，0.16mmol)和三乙胺(16mg，0.16mmol)在CH2Cl2(3ml)中的冰冷溶液中，历经1h加入在CH2Cl2(3ml)中的乙酸酐(14mg，0.14mmol)。将该混合物缓缓温热至RT并搅拌2h。该溶液用CH2Cl2(40ml)稀释并用0.5N NaOH(30ml)洗涤。将该有机层干燥(MgSO4)，浓缩，并通过PTLC纯化(5％MeOH/CH2Cl2)得馏份A(24mg，36％)。1H-NMR(CDCl3)δ＝7.15-7.35(m，9H)，6.86(s，1H)，6.79(d，1H，J＝9.6Hz)，6.72(d，1H，J＝9.6Hz)，6.17(s，1H)，5.92(d，1H，J＝10.4Hz)，4.79(d，1H1 J＝15Hz)，4.41(m，1H)，4.35(d，1H，J＝15Hz)，3.92(s，2H)，3.76(d，1H，J＝9Hz)，3.47(s，2H)，3.36(m，1H)，3.20(d，1H，J＝9Hz)，3.05(m，2H)，2.90(m，3H)，1.89(s，3H)。MS m/e490(M+H)+馏份B(29mg，43％)。1H-NMR(CDCl3)δ＝7.15-7.35(m，10H)，6.89(s，1H)，6.84(d，1H，J＝9.6Hz)，6.73(d，1H，J＝9.6Hz)，6.08(d，1H，J＝9.2Hz)，4.73(d，1H，J＝14.6Hz)，4.42(m，1H)，4.36(d，1H，J＝14.6Hz)，4.03(m，1H)，3.91(s，2H)，3.37(d，1H，J＝7.6Hz)，3.25(m，1H)，3.00(m，3H)1 2.79(m，1H)，2.66(m，1H)，1.80(s，3H)。MS m/e490(M+H)+通过步骤9和步骤10中所述基本相同的操作，如下实施例从步骤8馏份2产物制备馏份C(27mg)MSm/e490(M+H)+馏份D(28mg)MSm/e490(M+H)+制备实施例3
步骤1 将(S)-m-氰基苯丙氨酸(5.00g，26.3mmol)和碳酸钾(14.5g，105mmol)在水(50ml)中的溶液加热至回流。滴加苄基溴(10.4ml，86.8mmol)。1h后，另外加入苄基溴(1.50ml，12.5mmol)，将该混合物回流1h。冷却该混合物并用醚(2×300ml)萃取。将合并的有机层用饱和NaHCO3(100ml)和盐水洗涤，干燥(MgSO4)，浓缩，并通过柱色谱法纯化(梯度EtOAc/己烷0-10％)，得该产物(10.9g，90％)。MS m/e 461(M+H)+步骤2 在干冰-丙酮浴中，向步骤1产物(2.30g，4.99mmol)在THF(25ml)中的溶液中，缓缓加入在THF(10.0ml)中的1M LiAlH4，将混合物搅拌3.5h。将反应用饱和NH4Cl(15ml)猝灭，并用醚(2×100ml)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，浓缩。将残余物溶于THF(300ml)中，并加入在THF(2ml)中的2M LiBH4。在RT下将该混合物搅拌18h。将反应用饱和NH4Cl(10ml)猝灭，并用醚(2×100ml)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，浓缩，并通过柱色谱法纯化(梯度EtOAc/己烷0-40％)，得该产物(1.26g，71％)。MS m/e357(M+H)+
步骤3 在干冰-丙酮浴中，向乙二酰氯(538mg，4.24mmol)在CH2Cl2(6ml)的溶液中加入DMSO(662mg，8.48mmol)。5min后，加入步骤2产物(1.26g，3.53mmol)在CH2Cl2(15ml)中的溶液，并将该混合物搅拌1h。加入三乙胺(1.71g，17.0mmol)，并将混合物加热至RT，搅拌30min。加入水(30ml)和CH2Cl2(50ml)，水层用CH2Cl2(2×100ml)萃取。将合并的有机层用水(50ml)和盐水洗涤，干燥(MgSO4)，浓缩得该醛，其未进一步纯化。
在干冰-丙酮浴中，向二异丙基胺(472mg，4.67mmol)在THF(3ml)中的溶液中加入在己烷(2.92ml，4.67mmol)中的1.6M丁基锂。5min后将该混合物置于在冰-水浴中，搅拌20min。在干冰-丙酮浴中再次将该溶液冷却，并加入制备实施例1，步骤5产物(1.23g，4.24mmol)在THF(10ml)中的溶液。将该混合物搅拌1h。加入上述醛在THF(15ml)中的溶液，并将混合物搅拌1h。将反应用饱和NH4Cl(10ml)猝灭，并用水(20ml)和醚(100ml)稀释。水层用醚(2×50ml)萃取。将合并的有机层用5％枸橼酸(50ml)、饱和NaHCO3(50ml)和盐水(50ml)洗涤，干燥(MgSO4)，浓缩并通过柱色谱法纯化(梯度EtOAc/己烷0-40％)得该产物(820mg，36％)。MS m/e 645(M+H)+
步骤4 在H2(1大气压)下，将步骤3产物(64mg，0.10mmol)、20％Pd(OH)2/C(40mg)和甲酸(0.1ml)在EtOH(3ml)中的混合物搅拌40min。将该混合物过滤并浓缩。将残余物和三乙胺(36μl，0.25mmol)溶于CH2Cl2(5ml)中，并在冰-水浴中冷却。向该溶液中滴加在CH2Cl2(1ml)中的(Boc)2O(24mg，0.11mmol)。将该混合物在冰水浴中搅拌1h并浓缩。通过PTLC纯化该残余物(5％2M NH3/MeOH-95％CH2Cl2)，得该产物(62mg，100％)。MS m/e 569(M+H)+步骤5 在冰-水浴中，将步骤4产物(62mg，0.11mmol)、乙酸酐(12mg，0.12mmol)和三乙胺(36μl，0.25mmol)在CH2Cl2(4ml)中的溶液搅拌30min。将该混合物浓缩并通过PTLC纯化(5％MeOH/CH2Cl2)，得该产物(51mg，76％)。MS m/e 611(M+H)+
步骤6 在RT下将步骤5产物(51mg，0.084mmol)和TFA(1ml)在CH2Cl2(4ml)中的溶液搅拌30min并浓缩。将残余物溶于CH2Cl2(50ml)中，并用NH4OH(5ml)水溶液和盐水洗涤。将该有机层干燥(K2CO3)，并浓缩得该产物(34mg，99％)。MS m/e 411(M+H)+步骤7 向步骤6产物(32mg，0.078mmol)和三乙胺(28μl，0.20mmol)在CH2Cl2(2.5ml)中的冰冷溶液中加入丙基磺酰基氯化物(9.6μl，0.086mmol)在CH2Cl2(0.5ml)中的溶液。将该混合物搅拌30min并浓缩。通过PTLC纯化该残余物(5％2M NH3/MeOH-95％CH2Cl2)，得该产物(27mg，66％)。1H-NMR(CDCl3)δ＝7.05-7.35(m，9H)，6.48(d，1H，J＝9.2Hz)，5.52(m，1H)，4.71(d，1H，J＝14.6Hz)，4.47(m，1H)，4.29(d，1H，J＝14.6Hz)，4.17(m，2H)，4.02(m，1H)，3.44(m，1H)，3.25(m，1H)，3.06(m，3H)，2.84(m，4H)，1.75(m，5H)，0.93(t，3H，J＝7.4Hz)。LCMStR＝2.80min m/e 517(M+H)+
制备实施例4 步骤1 在H2(1大气压)下，将制备实施例3，步骤3产物(64mg，0.10mmol)、乙酸酐(29μl，0.30mmol)、乙酸(0.1ml)和20％Pd(OH)2/C(64mg)在EtOH(3ml)中的混合物搅拌1.5h。将该混合物浓缩，残余物溶于CH2Cl2(30ml)中。该溶液用NH4OH水溶液和盐水萃取，干燥(MgSO4)，浓缩，并通过PTLC纯化(5％MeOH/CH2Cl2)，得该产物(14mg，25％)。MS m/e 553(M+H)+步骤2 在RT下将步骤1产物(14mg，0.025mmol)和TFA(1ml)在CH2Cl2(4ml)中的溶液搅拌1.5h。将该混合物浓缩并通过PTLC纯化(5％2M NH3/MeOH-95％CH2Cl2)，得该产物(8mg，74％)。1H-NMR(CDCl3)δ＝7.0-7.35(m，9H)，6.11(m，1H)，6.01(b，1H)，5.15(m，1H)14.67(d，1H，J＝14.8Hz)，4.47(m，1H)，4.33(m，3H)，3.99(m，1H)，3.38(m，1H)，3.26(m，1H)，3.01(m，3H)，2.80(m，2H)，1.98(s，3H)，1.77(s，3H)。LCMS tR＝2.30 min m/e453(M+H)+制备实施例5 步骤1 向60％NaH(6.40g，0.160mol)在无水DMA(400ml)中的混悬液中缓缓加入烯丙醇(8.90g，0.154mol)。在RT下将该混合物搅拌1h。加入3，5-二氟溴苯(30.0g，0.155mol)，并在RT下将该混合搅拌24h。将反应用水(1.5L)猝灭，并用醚(4×300ml)萃取。将合并的有机层用盐水(500ml)洗涤，干燥(MgSO4)，浓缩并通过柱色谱法纯化(己烷)，得该产物(14.3g，40％)。1H-NMR(CDCl3)δ＝6.81(m，2H)，6.53(m，1H)，5.96(m，1H)，5.34(m，2H)，4.46(m，2H)。
步骤2 向火焰-干燥瓶中加入镁转移剂(turnings)(292mg，12.0mmol)，接着加入步骤1产物(2.31g，10.0mmol)在THF(16ml)中的溶液三分之一份。该反应以1，2-二溴乙烷(50μl)开始，然后缓缓加入步骤1产物的剩余溶液。该混合物在RT下搅拌30min，并在-40℃下加入CuBr-Me2S(310mg，1.51mmol)在THF(30ml)中的混悬液。在4℃下将该混合物搅拌30min，加入制备实施例2，步骤5产物(1.20g，4.17mmol)在无水醚(15ml)中的溶液。所得混合物在4℃下搅拌1h，然后在RT下搅拌3d。将反应用饱和NH4Cl(100ml)猝灭，并用EtOAc(2×150ml)萃取。将合并的有机层用饱和碳酸氢钠和盐水洗涤，干燥(MgSO4)，浓缩并通过柱色谱法纯化(梯度EtOAc/己烷0-5％)，得该产物(1.00g，55％)。MS m/e 440(M+H)+步骤3 在RT下将步骤2产物(500mg，1.14mmol)在CH2Cl2(12ml)和4NHCl/二烷(6ml)中的溶液搅拌20 h。浓缩该反应物，残余物在CH2Cl2(50ml)和5N NH4OH(20ml)之间分配。将该有机层干燥(K2CO3)并浓缩得该产物(345mg，100％)。MS m/e 226(M+H)+
步骤4 将步骤3产物(3.10g，13.0mmol)和碳酸钾(5.39g，39.0mmol)在EtOH(30ml)和水(90ml)中的溶液加热至70℃。加入苄基溴(3.42ml，28.6mmol)，并将混合物在70℃下搅拌2.5h。除去EtOH，残余物用醚(2×200ml)萃取。有机层用盐水洗涤，干燥(K2CO3)，浓缩并通过柱色谱法纯化(梯度0-10％EtOAc/己烷)，得该产物(4.40 g，83％)。MS m/e406(M+H)+步骤5 在干冰-丙酮浴中，向乙二酰氯(762mg，6.00mmol)在CH2Cl2(10ml)中的溶液中加入DMSO(938mg，12.0mmol)。5min后，加入步骤4产物(2.03g，5.01mmol)在CH2Cl2(20ml)中的溶液，混合物搅拌1h。加入三乙胺(2.42g，23.9mmol)，2min后移去冷却浴。将混合搅拌30min，并用水(50ml)稀释。加入CH2Cl2(100ml)水层用CH2Cl2(2×100ml)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，浓缩得该醛，其未经进一步纯化。
在干冰-丙酮浴中，向二异丙基胺(667mg，6.59mmol)在THF(5ml)中的溶液中加入在己烷(4.13ml，6.61mmol)中的1.6M丁基锂。5min后将该混合物置于冰-水浴中，搅拌20min。在干冰-丙酮浴中将该溶液再次冷却，并加入制备实施例1，步骤5产物(1.74g，5.99mmol)在THF(20ml)中的溶液。将该混合物搅拌1h。加入上述醛在THF(30ml)中的溶液，使混合物缓缓温热至RT并搅拌16h。将反应用饱和NH4Cl(20ml)猝灭，并用醚(3×100ml)萃取。将合并的有机层用5％枸橼酸、饱和NaHCO3和盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，浓缩并通过柱色谱法纯化(梯度EtOAc/己烷0-40％)，得该产物(1.20g，35％)。MS m/e 694(M+H)+步骤6 将步骤5产物(280mg，0.404mmol)在MeOH(5ml)中的溶液用N2除气5min。加入Pd(PPh3)4(70mg，0.061mmol)，并将该混合物再次除气5min。加入无水碳酸钾(166mg，1.20mmol)，并将该混合物在RT下搅拌18h。过滤该混合物，滤液用CH2Cl2(100ml)稀释，用5％枸橼酸、饱和NaHCO3和盐水洗涤。将该有机层干燥(MgSO4)，浓缩并通过柱色谱法纯化(梯度EtOAc/己烷0-20％)，得该产物(230mg，87％)。MS m/e654(M+H)+步骤7 在H2(1大气压)下，将步骤6产物(230mg，0.352mmol)、20％Pd(OH)2/C(230mg)和乙酸(0.5ml)在EtOH(12ml)中的混合物搅拌16h。将该混合过滤，浓缩，置于CH2Cl2(20ml)中。加入乙酸酐(36mg，0.35mmol)和三乙胺(0.40ml，2.9mmol)，并在冰-水浴中将该混合物搅拌1.5h。将该混合物浓缩并通过柱色谱法纯化(梯度MeOH/CH2Cl20-5％)，得该产物(148mg，82％)。MS m/e 516(M+H)+步骤8
在RT下，将步骤7产物(15mg，0.029mmol)、4-溴甲基吡啶(15mg，0.058mmol)和碳酸钾(40mg，0.29mmol)在DMF(2.5ml)中的的混合物搅拌3d。将该混合物用CH2Cl2(50ml)稀释，用水(3×50ml)和饱和NaHCO3萃取。干燥(MgSO4)，浓缩。残余物溶于CH2Cl2(5ml)和TFA(1ml)中。在RT下将该混合物搅拌2.5h，浓缩并通过PTLC纯化(10％2MNH3/MeOH-90％CH2Cl2)，得该产物(9mg，63％)。1H-NMR(CDCl3)δ＝8.57(m，2H)，7.15-7.35(m，7H)，6.67(s，1H)，6.58(m，1H)，6.48(m，1H)，6.02(d，1H，J＝8.8Hz)，5.07(b，1H)，5.01(s，2H)，4.68(d，1H，J＝14.6Hz)，4.42(m，1H)，4.36(d，1H，J＝14.6Hz)，3.99(m，1H)，3.37(m，1H)，3.27(m，1H)，3.03(m，3H)，2.76(m，2H)，1.82(s，3H)，1.69(m，2H)。LCMS tR＝2.17min m/e 507(M+H)+通过制备实施例5中所述的基本相同的操作，制备了如下实施例。
制备实施例6
步骤1
在RT下，将制备实施例5，步骤7产物(15mg，0.029mmol)、2-吡啶基甲醇(9.5mg，0.087mmol)、DIAD(18mg，0.087mmol)和三苯膦(23mg，0.087mmol)在CH2Cl2(1ml)中的混合物搅拌24h。将该混合物浓缩并通过PTLC纯化(5％MeOH/CH2Cl2)，得该产物(20mg，100％)。MS m/e 607(M+H)+步骤2
在RT下将步骤1产物(20mg，0.029mmol)和TFA(0.5ml)在CH2Cl2(3ml)中的溶液搅拌2h。将该混合物浓缩并通过PTLC纯化(5％2M NH3/MeOH-95％CH2Cl2)，得该产物(8mg，57％)。1H-NMR(CDCl3)δ＝8.54(m，1H)，7.68(m，1H)，7.45(m，1H)，7.15-7.35(m，6H)，6.69(s，1H)，6.54(m，2H)，6.08(d，1H，J＝8.8Hz)，5.11(s，2H)，4.70(d，1H，J＝14.6Hz)，4.40(m，1H)，4.33(d，1H，J＝14.6Hz)，4.04(m，1H)，3.42(d，1H，J＝7.6Hz)，3.27(m，1H)，3.04(m，3H)，2.76(m，2H)，1.85(m，2H)，1.81(s，3H)。LCMS tR＝2.25 min m/e 507(M+H)+通过制备实施例6中所述的基本相同的操作，制备了如下实施例。
制备实施例7
步骤1
在H2下，将制备实施例5，步骤5产物(140mg，0.202mmol)、乙酸(0.2ml)和20％Pd(OH)2/C(90mg)在EtOH(5ml)中的混合物搅拌1.5h。将该混合物过滤，浓缩，并溶于CH2Cl2(5ml)中。向该溶液中加入乙酸酐(21μl，0.22mmol)和三乙胺(100μl，0.717mmol)。在RT下将该混合物搅拌25min。加入MeOH(1ml)，并将混合浓缩。通过PTLC纯化该残余物(5％MeOH/CH2Cl2)，得该产物(75mg，67％)。MS m/e 558(M+H)+
步骤2 在RT下将步骤1产物(75mg，0.13mmol)和TFA(1ml)在CH2Cl2(5ml)中的溶液搅拌30min。将该混合物浓缩并通过PTLC纯化(5％2MNH3/MeOH-95％CH2Cl2)，得该产物(67mg，100％)。1H-NMR(CDCl3)δ＝7.1-7.35(m，5H)，6.25-6.6(m，4H)，4.75(m，1H)，4.44(m，1H)，4.32(m，1H)，4.11(m，1H)，3.84(m，2H)，3.49(m，1H)，3.29(m，1H)，3.06(m，3H)，2.78(m，2H)，1.83(s，3H)，1.73(m，2H)，1.00(t，3H，J＝7.4Hz)。LCMS tR＝3.14min m/e 458(M+H)+制备实施例8 步骤1
将制备实施例5，步骤5产物(69mg，0.099mmol)、5-溴代戊烯(90mg，0.60mmol)和第2代Grubbs催化剂(19mg，0.022mmol)在CH2Cl2(5ml)中的混合物除气，并加热至50℃达6.5h。将该混合物浓缩并通过PTLC纯化(5％MeOH/CH2Cl2)，得该产物(60mg，74％)。MS m/e 814(M+H)+步骤2 在H2下，将步骤1产物(60mg，0.074mmol)、乙酸(0.2ml)和20％Pd(OH)2/C(50mg)在EtOH(3ml)中的混合物搅拌2h。将该混合物过滤并浓缩，得该化合物(39mg，95％)。MS m/e 558(M+H)+步骤3 在RT下将步骤2产物(39mg，0.070mmol)和乙酸酐(9mg，0.08mmol)在CH2Cl2(2.5ml)中的溶液搅拌2.5h。将该混合物浓缩并通过PTLC纯化(5％MeOH/CH2Cl2)，得该产物(36mg，86％)。MS m/e 600(M+H)+步骤4
在RT下将步骤3产物(36mg，0.060mmol)和TFA(0.3ml)在CH2Cl2(2ml)中的溶液搅拌1.5h。将该混合物浓缩并通过PTLC纯化(5％2M NH3/MeOH-95％CH2Cl2)，得该产物(19mg，62％)。1H-NMR(CDCl3)δ＝7.15-7.35(m，5H)，6.59(s，1H)，6.52(m，1H)，6.40(m，1H)，6.09(d，1H，J＝9.2Hz)，4.70(d，1H，J＝14.8Hz)，4.43(m，1H)，4.32(d，1H，J＝14.8Hz)，4.04(m，1H)，3.85(m，2H)，3.40(m，1H)，3.26(m，1H)，3.01(m，3H)，2.75(m，2H)，1.96(b，2H)，1.82(s，3H)，1.68(m，2H)，1.2-1.5(m，6H)，0.85(m，3H)。LCMS tR＝3.69min m/e 500(M+H)+通过制备实施例8中所述的基本相同的操作，制备了如下实施例。
制备实施例9
步骤1 在H2(1大气压)下，将制备实施例5，步骤6产物(1.50g，2.29mmol)、20％Pd(OH)2/C(0.70g)和乙酸(1ml)在EtOH(50ml)中的混合物搅拌4h。将该混合物过滤并浓缩，得该化合物(1.04g，96％)。MS m/e474(M+H)+步骤2 在65℃下，将步骤1产物(1.04g，2.20mmol)和2M BH3-SMe2(8.0ml)在THF(100ml)中的混合物加热18h。缓缓加入MeOH(10ml)，并连续加热1h。将该混合物蒸发至干，残余物溶于MeOH(50ml)中。所得溶液浓缩，并向在CH2Cl2(60ml)中的该残余物中加入NEt3(833mg，8.25mmol)和乙酸酐(281mg，2.75mmol)。在RT下将该混合物搅拌30min并浓缩。加入在MeOH(50ml)中的7N NH3，所得溶液搅拌1h。将该混合物浓缩并通过柱色谱法纯化(梯度MeOH/CH2Cl20-3％)，得该产物(680mg，62％)。MS m/e 502(M+H)+
步骤3 在H2(1大气压)下，将步骤2产物(300mg，0.600mmol)、20％Pd(OH)2/C(200mg)和乙酸(0.2ml)在EtOH(15ml)中的混合物搅拌1.25h。将该混合物过滤并浓缩。将残余物溶于CH2Cl2(20ml)中，并在冰-水浴中冷却。加入三乙胺(182mg，1.80mmol)和m-甲苯磺酰氯(115mg，0603mmol)。将该混合物搅拌30min，用CH2Cl2(150ml)稀释，用5％枸橼酸和饱和碳酸氢钠洗涤，并通过柱色谱法纯化(梯度MeOH/CH2Cl20-4％)，得该产物(170mg，50％)。MS m/e 566(M+H)+步骤4 在RT下将步骤3产物(28mg，0.050mmol)、哒嗪甲醇(17mg，0.15mmol)、三苯膦(39mg，0.15mmol)和DIAD(31mg，0.15mmol)的溶液搅拌1h。将该混合物浓缩并通过PTLC(5％MeOH/CH2Cl2)纯化，得该产物(32mg，97％)。MS m/e 658(M+H)+
步骤5
在RT下，将步骤4产物(32mg，0.048mmol)和TFA(1ml)在CH2Cl2(5ml)中的溶液搅拌1h。将该混合物浓缩，并通过PTLC(5％2MNHa/MeOH在CH2Cl2中)纯化，得该产物(21mg，77％)。％).1H-NMR(CDCl3)δ＝9.21(s，1H)，9.14(m，1H)，7.49(m，3H)，7.38(m，2H)，6.63(s，1H)，6.56(m，1H)，6.48(m，1H)，6.39(m，1H)，4.24(m，1H)，3.65(m，2H)，3.32(m，1H)，2.7-3.1(m，5H)，2.44(m，2H)，2.37(s，3H)，1.80(s，3H)。LCMS tR＝2.62 min m/e558(M+H)+通过制备实施例9中所述的基本相同的操作，制备了如下实施例。
制备实施例10
步骤1
在60℃下，将制备实施例9，步骤2产物(50mg，0.10mmol)、1-溴-2-戊烯(33mg，0.22mmol)和碳酸钾(138mg，0.100mmol)在丙酮(5ml)中的混合物加热18h。将该混合物过滤并浓缩，得该化合物(50mg，88％)。MSm/e 570(M+H)+步骤2
在H2(1大气压)下，将步骤1产物(50mg，0.088mmol)、20％Pd(OH)2/C(50mg)和乙酸(0.1ml)在EtOH(5ml)中的混合物搅拌16h。将该混合物过滤并浓缩，得该化合物(35mg，83％)。MS m/e 482(M+H)+步骤3 在冰-水浴中，将步骤2产物(35mg，0.072mmol)、m-甲苯磺酰氯(14mg，0.072mmol)和三乙胺(35mg，0.35mmol)在CH2Cl2(5ml)中的混合物搅拌30min。将该混合物浓缩并通过PTLC纯化(5％MeOH/CH2Cl2)，得该产物(30mg，66％)。MS m/e 636(M+H)+步骤4 在RT下，将步骤3产物(30mg，0.047mmol)和TFA(1ml)在CH2Cl2(5ml)中的溶液搅拌1h。将该混合物浓缩并通过PTLC纯化(5％2M NH3在MeOH中/95％CH2Cl2)，得该产物(22mg，89％)。1H-NMR(CDCl3)δ＝7.50(m，2H)，7.36(m，2H)，6.43(m，3H)，5.93(m，1H)，4.15(m，1H)，3.84(m，2H)，3.65(m，2H)，3.39(m，1H)，3.02(m，1H)，2.83(m，4H)，2.39(m，5H)，1.85(s，3H)，1.70(m，2H)，1.33(m，4H)，0.88(m，3H)。LCMS tR＝3.52 min m/e 536(M+H)+
制备实施例11 步骤1 将制备实施例1，步骤6产物(142mg，0.203mmol)、苯基硼酸(32mg，0.25mmol)、PS-PPh3-Pd(160mg，0.016mmol)和1M碳酸钾水溶液(0.25ml)在EtOH(3ml)中的混合物除气，密封，并在微波反应器中在100℃下加热15min。将该混合物用MeOH(40ml)稀释，过滤，浓缩并通过PTLC纯化(20％EtOAc/己烷)，得该产物(96mg，68％)。MS m/e 696(M+H)+步骤2 在H2(1大气压)下，将步骤1产物(96mg，0.14mmol)、催化量的乙酸和20％Pd(OH)2/C(150mg)中MeOH(12ml)中的混合物搅拌6h。将该混合通过Celite垫过滤并浓缩。将残余物在CH2Cl2(40ml)和NH4OH(15ml)之间分配。该有机层经MgSO4干燥，浓缩得该产物(57mg，80％)。MS m/e 516(M+H)+
步骤3 在冰-水浴中，将步骤2产物(57mg，0.11mmol)、乙酸酐(13mg，0.12mmol)和三乙胺(20μl，0.14mmol)在CH2Cl2(10ml)中的混合物搅拌1h，然后在RT下搅拌3h。将该混合物用CH2Cl2(40ml)稀释，并用1NNaOH(15ml)萃取。将该有机层干燥(MgSO4)，浓缩并通过PTLC纯化(4％MeOH/CH2Cl2)，得该产物(63mg，100％)。MS m/e 558(M+H)+步骤4 在RT下，将步骤3产物(63mg，0.11mmol)和TFA(0.9ml)在CH2Cl2(4ml)中的溶液搅拌3h。将该混合物用CH2Cl2(40ml)稀释，并用NH4OH(15ml)萃取。将该有机层干燥(MgSO4)，浓缩并通过PTLC纯化(5％MeOH/CH2Cl2)，得该产物(39mg，77％)。1H-NMR(CDCl3)δ＝7.1-7.6(m，14H)，6.28(m，1H)，4.69(m，1H)，4.48(m，1H)，4.30(m，1H)，4.05(m，1H)，3.39(m，1H)，3.24(m，1H)，2.8-3.2(m，4H)，2.67(m，1H)，1.80(s，3H)。LCMS tR＝3.16min m/e 458(M+H)+通过制备实施例11中所述的基本相同的操作，制备了如下实施例。
制备实施例12
步骤1 在95℃下，将制备实施例1，步骤6产物(191mg，0.273mmol)、N-叔丁氧基羰基哌嗪(78mg，0.42mmol)、碳酸铯(345mg，1.06mmol)、BINAP(70mg，0.11mmol)和乙酸钯(32mg，0.14mmol)在干甲苯(8ml)中的混合物加热16h。将该混合过滤，浓缩并通过PTLC纯化(2％MeOH/CH2Cl2)，得该产物(96mg，44％)。MS m/e 804(M+H)+步骤2 在H2(1大气压)下，将步骤1产物(96mg，0.12mmol)、催化量的乙酸和20％Pd(OH)2/C(140mg)在MeOH(10ml)中的混合物搅拌4h。将该混合物过滤并蒸发至干。将残余物溶于CH2Cl2(40ml)中并用NH4OH(10ml)萃取。将该有机层干燥(MgSO4)并浓缩得该产物(56mg，74％)。MSm/e624(M+H)+步骤3
在冰-水浴中，将步骤2产物(56mg，0.089mmol)、乙酸酐(9.5mg，0.093mmol)和三乙胺(25μl，0.18mmol)在CH2Cl2(10ml)中的混合物搅拌1h，然后在RT下搅拌16h。将该混合物浓缩并通过PTLC纯化(3％MeOH/CH2Cl2)，得该产物(51mg，86％)。MS m/e 666(M+H)+步骤4 在RT下，将步骤3产物(51mg，0.077mmol)和TFA(1ml)在CH2Cl2(5ml)中的溶液搅拌4h。将该混合物用CH2Cl2(40ml)稀释，并用NH4OH(15ml)萃取。将该有机层干燥(MgSO4)，浓缩并通过PTLC纯化(15％MeOH/CH2Cl2)，得该产物(24mg，68％)。1H-NMR(CDCl3)δ＝7.1-7.3(m，6H)，6.85(s，1H)，6.72(m，2H)，6.18(m，1H)，4.67(m，1H)，4.42(m，1H)，4.31(m，1H)，4.00(m，1H)，3.36(m，1H)，3.23(m，1H)，2.6-3.1(m，14H)，1.82(s，3H)。LCMS tR＝2.16 min m/e 466(M+H)+BACE-1克隆、蛋白表达和纯化通过使用优势-GC cDNA PCR试剂合(Clontech，Palo Alto，CA)经PCR，从全长BACE1 cDNA(在pCDNA4/mycHisA中的全长人类BACE1 cDNA多伦多大学)中产生预期可溶型的人类BACE1(sBACE1，相应于氨基酸1-454)。使用Klenow将来自pCDNA4-sBACE1myc/His的Hindlll/Pmel片段平端，并亚克隆成pFASTBACI(A)(Invitrogen)的Stu I位。通过转移至DH10Bac细胞(GIBCO/BRL)中而产生sBACE1 mycHis重组杆粒。随后，为了产生重组杆状病毒，使用CellFectin(Invitrogen，San Diego，CA)将该sBACE1 mycHis杆粒结构转移至sf9细胞中。sf9细胞培养于SF 900-11介质(Invitrogen)中，其中添加了3％热灭活的FBS和0.5X青霉素/链霉素溶液(Invitrogen)。使用5ml的高滴度斑块纯化的sBACEmyc/His病毒以感染1L的对数生长的sf9细胞达72小时。将未受损的细胞通过3000xg经15分钟离心形成片状。收集含有分泌的sBACE1的上清液，并用100mM HEPES，pH8.0稀释50％v/v。将稀释的介质加载到Q-琼脂糖柱。Q-琼脂糖柱用缓冲溶液A(20mM HEPES，pH8.0，50mM NaCl)洗脱。
在Q-琼脂糖柱上用缓冲溶液B(20mM HEPES，pH8.0，500mMNaCl)将蛋白质洗脱。将Q-琼脂糖柱上的蛋白质峰混合并加载在Ni-NTA琼脂糖柱上。然后将该Ni-NTA柱用缓冲溶液C(20mM HEPES，pH8.0，500mM NaCl)洗脱。再用缓冲溶液D(缓冲溶液C+250mM咪唑)将结合的蛋白质洗脱。通过Bradford分析法(Biorad，CA)测定的峰蛋白质部分使用Centricon 30浓缩器(Millipore)浓缩。sBACE1纯度通过SDS-PAGE和Commassie蓝染色法评价，sBACE1纯度估计～90％。N-末端序列显示，90％以上的纯化的sBACE1含有前结构域(prodomain)；因此这一蛋白质为sproBACE1。
肽水解分析将25nM EuK-生物素标记的底物(EuK-KTEEISEVNLDAEFRHDKC-生物素；CIS-Bio International，法国)抑制剂、5μM未标记的APPsw肽(KTEEISEVNLDAEFRHDK；American Peptide Company，Sunnyvale，CA)、7nM sproBACE1、20mM PIPES pH5.0、0.1％Brij-35(蛋白级，Calbiochem，San Diego，CA)和10％丙三醇在30℃下预孵育30min。通过以5μl整份的底物加入至总体积25μl而开始反应。在30℃下3hr后，通过加入等体积的2x终止缓冲液而将反应终止，该终止缓冲液含有50mM Tris-HCl pH8.0、0.5MKF、0.001％Brij-35、20μg/ml SA-XL665(与抗生物素蛋白链菌素配对的交联别藻蓝蛋白；CIS-BioInternational，法国)(0.5μg/孔)。在孵育前，将平皿短暂摇动，将在1200xg下旋转10秒以使所有液体沉积于平皿底部。在PackardDiscoveryHTRF平皿读数计上测量HTRF，使用337nm激光激发样品，接着延迟50μs，并在620nm和665nm发射光处同时测量400μs。
通过测量665nm处相对荧光值除以620nm处相对荧光值(665/620比)的百分率变化，在不同浓度的I和固定尝试的酶和底物存在下，对抑制剂(I)的IC50进行了测定。使用GraphPad Prism 3.0软件，选择具有可变斜率的4参数逻辑方程，对该数据进行了非线性回归分析。Y＝最低值+(最高值-最低值)/(1+10^((LogEC50-X)*斜坡斜率))；X是I的浓度的对数，Y是百分变化比率，并且Y从最低值到最高值呈S形。
本发明化合物的IC50为约100至约10,000nM，优选约100至约1000nM，更优选约100至约500nM。优选的立体化学的化合物的IC50值为约2至约500nM，优选约2至约100nM。
下式化合物 IC50为186nM。
虽然本发明已结合上述具体实施方式
作了描述，其多种备选方案、修饰和变化对于本领域普通技术人员将变得明显。所有这些备选方案、修饰和变化将落入本发明的精神和范围之内。
权利要求
1.一种化合物，其具有结构式 或其药学可接受的盐，其中R1是 R2是氢、烷基或环烷基；R3是亚芳基、杂亚芳基、杂环烯基或环烯基；R4是氢、-C(O)-烷基、烷基、环烷基、环烷基烷基、芳基、芳烷基、烷氧基烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳烷基或杂芳基；R5和R7是1～4部分，各部分独立地选自氢、-OH、烷基、环烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、芳烷氧基、杂芳烷氧基和烷氧基，条件是当R5和R7是-OH、芳烷氧基、杂芳烷氧基和烷氧基时，R5和R7不与邻近于环氮的环碳连接；R6是氢、烷基、环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、杂环基、杂环基烷基、-C(O)R8、-C(O)OR11、-S(O)R8、-S(O2)R8或-CN；条件是当Y是＝O时，R6不是-C(O)R8、-C(O)OR11、-S(O)R8、-S(O2)R8或-CN；R8是氢、烷基、环烷基、芳基、杂芳基、环烷基烷基、芳烷基、杂芳烷基、杂环基、杂环基烷基、链烯基、炔基或-N(R9)(R10)；R9和R10各自独立地选自氢、烷基、环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、杂环基、芳烷基、杂芳烷基、杂环基烷基、链烯基和炔基；或者R9和R10与它们所连接的氮一起形成3-7元杂环基环；R11是烷基、环烷基、芳基、杂芳基、环烷基烷基、芳烷基、杂芳烷基、杂环基、杂环基烷基、链烯基或炔基；X是连接R3和R4的键、-O-、-S-、烯基、-烯基NH-、-烯基NHC(O)-、-烯基NHSO2-、-NH-、-NHC(O)-、或-NHSO2-；Y是＝O或(H，H)；m是0、1、2或3；并且n是1、2或3；其中各烷基任选的被1～3个选自以下的部分取代卤代、烷基、芳基、环烷基、氰基、羟基、烷氧基、烷硫基、氨基、-NH(烷基)、-NH(环烷基)、-N(烷基)2、羧基和-C(O)O-烷基；并且其中各亚芳基、杂亚芳基、杂环基烷基、杂环烯基、环烯基、环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基、杂环基、芳烷基、杂芳烷基、芳烷氧基或杂芳烷氧基任选的被1～4个选自以下的部分取代-CF3、烷基、链烯基、炔基、芳基、杂芳基、芳烷基、烷基芳基、杂芳烷基、芳基链烯基、杂芳基链烯基、芳基炔基、杂芳基炔基、烷基杂芳基、羟基、羟基烷基、烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、酰基、芳酰基、卤代、硝基、氰基、羧基、烷氧基羰基、芳氧基羰基、芳烷氧基羰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、杂芳基磺酰基、烷硫基、芳基硫基、杂芳基硫基、芳烷基硫基、杂芳烷基硫基、环烷基、杂环基、-C(＝N-CN)-NH2、-C(＝NH)-NH2、-C(＝NH)-NH(烷基)、Y1Y2N-、Y1Y2N-烷基-、Y1Y2NC(O)-、Y1Y2NSO2-和-SO2N Y1Y2，其中Y1和Y2可以相同或不同并且独立地选自氢、烷基、芳基、环烷基、-C(O)烷基和芳烷基，条件是环烷基、环烯基、杂环基和杂环烯基可被＝O取代。
2.权利要求1的化合物，其中R1为 并且n为2。
3.权利要求1的化合物，其中R2是烷基。
4.权利要求3的化合物，其中R2是甲基。
5.权利要求1的化合物，其中R3是亚芳基或卤素-取代的亚芳基。
6.权利要求5的化合物，其中R3是亚苯基或氟取代的亚苯基。
7.权利要求1的化合物，其中R4是氢、-C(O)-烷基、烷基、芳基、芳烷基、取代的芳基、取代的芳烷基、烷氧基烷基、杂芳烷基、取代的杂芳基、取代的杂芳烷基、烷氧基烷基、杂环基、杂环基烷基、取代的杂环基、取代的杂环基烷基或杂芳基。
8.权利要求7的化合物，其中R4是氢、甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、-C(O)O乙基、
9.权利要求1的化合物，其中R5和R7是氢、被环烷基取代的烷基、被芳基或杂芳基取代的烷基。
10.权利要求1的化合物，其中R6是芳烷基或-S(O)2-R8。
11.权利要求1的化合物，其中R6是
12.权利要求1的化合物，其中X是连接R3和R4的键、O、烯基、-烷基-NHSO2-或-烷基-NHC(O)-；Y是O并且n是2。
13.权利要求1的化合物，其中R1是 R2是烷基；R3是亚苯基或卤素-取代的亚苯基；R4是氢、-C(O)-烷基、烷基、芳基、芳烷基、取代的芳基、取代的芳烷基、烷氧基烷基、杂芳烷基、取代的杂芳基、取代的杂芳烷基、烷氧基烷基、杂环基、杂环基烷基、取代的杂环基、取代的杂环基烷基或杂芳基；R5和R7是氢、被环烷基取代的烷基、被芳基或杂芳基取代的烷基；R6是芳烷基或-S(O)2R8；R8是 X是连接R3和R4的键、O、烯基、-烷基-NHSO2-或-烷基-NHC(O)-；并且Y是O。
14.权利要求13的化合物，其中R2是甲基。
15.权利要求13的化合物，其中R3是
16.权利要求13的化合物，其中R4是氢、甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、-C(O)O乙基、
17.权利要求13的化合物，其中R6是
18.权利要求13的化合物，其中R7是氢。
19.权利要求13的化合物，其中X是连接R3和R4的键、O、烯基、-烷基-NHSO2-或-烷基-NHC(O)-；Y是O并且n是2。
20.权利要求1的化合物，其具有立体化学结构
21.权利要求1的化合物，其选自
22.药物组合物，其包括治疗有效量的权利要求1的化合物和药学可接受的载体。
23.纯化形式的权利要求1的化合物。
24.分离形式的权利要求1的化合物。
25.抑制β-淀粉样蛋白斑在神经组织内、上或周围的形成或形成和沉积的方法，其包括向需要该治疗的患者施用有效量的权利要求1化合物。
26.治疗认知或神经变性疾病的方法，其包括向需要该治疗的患者施用有效量的权利要求1化合物。
27.权利要求26的方法，其治疗阿耳茨海默氏病。
28.药物组合物，其包括在药学有效载体中的有效量的权利要求1化合物和有效量的胆碱酯酶抑制剂。
29.治疗认知或神经变性疾病的方法，其包括向需要该治疗的患者施用与有效量的胆碱酯酶抑制剂组合的有效量的权利要求1化合物。
30.权利要求29的方法，其中所述胆碱酯酶抑制剂是乙酰胆碱酯酶或丁酰胆碱酯酶。
31.权利要求29的方法，其中所述胆碱酯酶抑制剂选自他克林、多奈哌齐、利伐斯的明、加兰他敏、吡啶斯的明和新斯的明。
32.治疗认知或神经变性疾病的方法，其包括向需要该治疗的患者施用与有效量的抗炎化合物组合的有效量的权利要求1化合物。
33.权利要求32的方法，其中所述抗炎化合物是非甾体抗炎药。
34.权利要求33的方法，其中所述非甾体抗炎药是双氯芬酸、双氟尼酸、依托度酸、氟比洛芬、布洛芬、吲哚美辛、酮洛芬、酮咯酸、萘丁美酮、萘普生、奥沙普秦、吡罗昔康、舒林酸、托美丁、塞来考昔或罗非考昔。
35.治疗认知或神经变性疾病的方法，其包括向需要该治疗的患者施用与有效量的γ分泌酶抑制剂组合的有效量的权利要求1化合物。
36.治疗认知或神经变性疾病的方法，其包括向需要该治疗的患者施用与有效量的HMG-CoA还原酶抑制剂化合物组合的有效量的权利要求1化合物。
37.权利要求36的方法，其中所述HMG-CoA还原酶抑制剂化合物是阿托伐他汀、洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀或罗苏伐他汀。
38.治疗认知或神经变性疾病的方法，其包括向需要该治疗的患者施用与有效量的N-甲基-D-天冬氨酸盐受体拮抗剂组合的有效量的权利要求1化合物。
39.权利要求38的方法，其中所述N-甲基-D-天冬氨酸盐受体拮抗剂是美金刚。
40.治疗认知或神经变性疾病的方法，其包括向需要该治疗的患者施用与有效量的抗淀粉状蛋白抗体组合的有效量的权利要求1化合物。
全文摘要
公开了新型的式(I)化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物，其中R
文档编号A61K31/495GK101014577SQ200580030034
公开日2007年8月8日 申请日期2005年7月20日 优先权日2004年7月22日
发明者黄颖, 李国昆, A·W·史丹佛 申请人:先灵公司