一种冻干粉针剂及其制备方法

专利名称：：一种冻干粉针剂及其制备方法
技术领域：
：本发明涉及一种醒脑静冻干粉针剂及其制备方法，属于中药制剂领域。
背景技术：
：缺血性中风，占中风病的53.6％，主要是脑动脉粥样硬化基础上的血栓形成所致(即脑梗塞)。随着对缺血性中风病理生理过程的深入理解及新的治疗方法的改进和发展，“脑病发作”(Brainattack)这一概念已经日益受到重视。最初的缺血与脑组织损伤的每个小时都将迅速增加不可逆脑损害的程度，有越来越多的人认识到中风是一种与心肌梗塞相似的、同样需要给以急救的疾病。近年来根据“治疗时间窗”概念，制定出缺血性中风发生后在一定时间内给予相应的合理治疗方案，以达到脑组织损伤最少和获得最佳的预后。而其中超早期治疗(中风症状发作后6小时内行可能有效的治疗)，尤为重要。中医药在治疗缺血性中风的临床和基础研究方面取得了可喜的成绩，如能够介入缺血性中风超早期治疗并深入进行研究，有着广阔的前景和重要的意义。历代医家均认为中风不仅为四大重症之首，亦为中医急症之首，在理论探索、临床辨证论治、急救等方面有极为丰富的成果和经验。近20年来，不少医家为提高本病的疗效，致力于研制开发使用方便、疗效确实的新药，取得了不少成果。如将具有活血化瘀作用的中成药精制纯化成注射剂，如复方丹参注射液，复方川芎注射液，红花液、脉络宁、冠心II号注射液等，无论对缺血性中风还是出血性中风均可应用。近年来，随着对缺血性脑中风机理研究的深入，已证实脑缺血后再灌注继发性损伤对脑神经的损伤是缺血性中风后脑损伤的重要机制，因此，临床上治疗重点已经逐渐转移到如何预防和减轻缺血后再灌注引起的脑神经损伤，研制和开发有效的具有脑神经保护作用的缺血性脑中风治疗药物已经成为新药研究领域的一个热点。中风分闭、脱证，首见于李中梓，中风神昏窍闭当以开窍法救急，这是共识，但如何开窍历代认识并未统一。有人主张芳香开窍，有主张豁痰开窍，有的认为勿需单用开窍药，应以活血化瘀为主。中医界对中风的认识，自1964年上海中医学院主编《中医内科学》教材开始，将闭证分为为阴闭和阳闭，并提出阴闭治以苏合香丸，阳闭治以至宝丹，此后安宫牛黄丸治疗阳闭应用更为普遍。现在安宫牛黄丸已成为治疗中风闭证的主要用药，并对其治疗中风的剂型改革、作用机理、给药途径等几方面进行了探索，取得了较大进展。第三军医大学根据安宫牛黄丸研制的醒脑静注射液近年来常用于中风的治疗。北京中医药大学的制药和临床学家根据原安宫牛黄丸研制成功清开灵注射液，现也广泛应用于中风的临床治疗，并成为国家中医药管理局推荐的中风急症必备中成药。还有人制成安脑丸、安宫牛黄散、牛黄至宝丹、牛黄清热散等治疗中风急症者。近年来，由于开窍药的剂型改进，静脉滴注醒脑静注射液和清开灵注射液等在临床上的应用越来越多，扩大了中药给药途径，提高了临床疗效。但近年来，中药尤其是中药注射剂的临床安全性问题日益引起社会各界的广泛关注。特别是目前临床上某些常用的中药注射液品种，由于各种原因导致药品稳定性较差，屡有不良反应的报道，有进一步研制开发的必要。
发明内容本发明的目的在于提供一种中药“醒脑静”冻干粉针制剂。本发明的另一目的在于提供一种中药“醒脑静”冻干粉针剂的制备方法。本发明醒脑静冻干粉针，其特征在于，醒脑静冻干粉针中麝香酮含量为0.1mg～3mg/瓶、龙脑含量为1.0mg～5.6mg/瓶、栀子苷含量为1.0mg～6.0mg/瓶、郁金挥发油含量为0.000005ml～0.002245ml/瓶。优选的醒脑静冻干粉针，其特征在于，醒脑静冻干粉针中麝香酮含量为0.15mg～1.8mg/瓶、龙脑含量为1.4mg～4.7mg/瓶、栀子苷含量为1.5mg～5.6mg/瓶、郁金挥发油含量为0.000055ml～0.001845ml/瓶。最佳的醒脑静冻干粉针，其特征在于，醒脑静冻干粉针中麝香酮含量为0.2mg～1.8mg/瓶、龙脑含量为1.8mg～4.7mg/瓶、栀子苷含量为1.8mg～5.6mg/瓶、郁金挥发油含量为0.000075ml～0.001245ml/瓶。本发明醒脑静冻干粉针，其特征在于，炽灼残渣≤1.5％(g/ml)，重金属含量≤10ppm，砷盐≤2ppm。本发明醒脑静冻干粉针，其特征在于，蛋白质、鞣质、草酸盐、树脂、不溶性微粒、钾离子符合中国药典2000年版一部粉针剂项下有关规定。本发明醒脑静冻干粉针药物可以将原料药麝香、郁金、栀子、冰片采用中药制剂常规方法制备。对原料药有效成分可以采用以下方法水提法、水提醇沉法、醇提水沉、萃取法、浸渍法、渗漉法、回流提取法、连续回流提取法、大孔树脂吸附法制备。也可将这些原料药粉碎成粉末混合均匀制成散剂冲服；也可以将这些药物一起水煎，然后浓缩水煎液，制成口服液；也可以将本发明药物所用原料药粉碎，将原料药粉碎成分与辅料混合均匀，直接压片。本发明可以采用上述提取方法、制成任何一种药剂学上所说的剂型；如片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、溶液剂、软膏剂、硬膏剂、喷雾剂、滴丸、软胶囊、注射液、冻干粉针剂等制剂形式，但优选采用下述方法提取原料药，并制备成冻干粉针剂。本发明所述的醒脑静冻干粉针的制备方法，包括如下步骤a.取如下重量份原料药组分麝香15～90、郁金60～300、栀子60～300、冰片1～6；b.以上四味，郁金粉碎成粗颗粒，提取挥发油备用；栀子乙醇回流提取，滤过，合并提取液，回收乙醇，浓缩成浸膏，浸膏用HCl调pH值，煮沸，冷却，冷藏后离心，离心液用正丁醇萃取，合并正丁醇萃取液，减压回收正丁醇，浓缩，干燥得栀子提取物；麝香用乙醇连续回流提取，提取液备用；冰片粉碎备用；按照冻干粉针剂的制备方法，将上述物质制备成冻干粉针剂。优选的醒脑静冻干粉针制剂的制备方法，步骤b中，郁金粉碎成粗颗粒，提取挥发油备用；栀子用3～14倍量50～99.5％乙醇回流提取1～5次，每次1～10小时，滤过，合并提取液，滤液减压回收乙醇，并浓缩至50℃时相对密度为1.10～1.25左右的浸膏，浸膏用HCl调pH值为1～4，煮沸0.5～3小时，冷却，冷藏12～36小时后离心，离心液用正丁醇萃取2～8次，合并正丁醇萃取液，减压回收正丁醇，并浓缩至相对密度为1.10～1.35(50℃)左右的浸膏，干燥得栀子提取物；麝香用1～8倍量70～99.5％乙醇回流提取1～6小时，提取液备用。更优选的醒脑静冻干粉针制剂的制备方法，步骤b中，郁金粉碎成粗颗粒，提取挥发油备用；栀子用5～10倍量60～85％乙醇回流提取2～3次，每次1～2小时，滤过，合并提取液，滤液减压回收乙醇，并浓缩至50℃时相对密度为1.12～1.20左右的浸膏，浸膏用HCl调pH值为2～4，煮沸0.5～2小时，冷却，冷藏18～30小时后离心，离心液用正丁醇萃取3～5次，合并正丁醇萃取液，减压回收正丁醇，并浓缩至相对密度为1.15～1.30(50℃)左右的浸膏，干燥得栀子提取物；麝香用1～4倍量80～99.5％乙醇回流提取2～4小时。本发明醒脑静冻干粉针的制备方法过程中，可以将上述有效成分完全混合或者对挥发油、麝香提取物、冰片粉碎物中的一种或几种进行包合，制备成醒脑静冻干粉针的有效成分；将上述成分按照冻干粉针剂的制备方法，制备成冻干粉针剂。优选的醒脑静冻干粉针制剂的制备方法，其特征在于，步骤b中，取羟丙基-β-环糊精，加水使溶解，取郁金挥发油滴加入羟丙基-β-环糊精水溶液中密闭超声，得郁金挥发油HP-β-CD包合物；取羟丙基-β-环糊精，加水使溶解，搅拌，保温备用；取处方量冰片，加入到上述麝香提取液中，搅拌使溶解，得挥发油-冰片-麝香醇溶液；将挥发油-冰片-麝香醇溶液缓慢滴加至羟丙基-β-环糊精水溶液中，搅拌，回收乙醇至尽后，滤过，得冰片麝香HP-β-CD包合物；将栀子提取物粉碎，加注射用水使溶解，用NaOH调pH，煮沸，冷藏，滤过，滤过液与郁金挥发油HP-β-CD包合物及冰片麝香HP-β-CD包合物混合，加甘露醇，用注射用水补足体积；用NaOH调pH值，煮沸，加入活性炭，保温，粗滤脱炭，用注射用水调节体积，冻干，即得冻干粉针剂。本发明所述的冻干粉针剂，每瓶固形物重量为0.43～0.45g。优选每瓶固形物重量为0.44g。本发明醒脑静冻干粉针中，栀子苷含量照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VID)测定。色谱条件和系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.1％磷酸(15∶85)为流动相；检测波长为238nm。理论板数按栀子苷峰计算应不低于3000。对照品溶液的制备精密称取栀子苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.04mg的溶液，摇匀，即得。供试品溶液的制备精密称取本品0.2g，置25ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。本发明醒脑静冻干粉针产品中，栀子以栀子苷(C17H24O10)计，含量为1.0mg～6.0mg/瓶。本发明醒脑静冻干粉针中，龙脑和麝香酮含量照气相色谱法(中国药典2000年版一部附录VIE)测定。色谱条件与系统适用性试验色谱柱INNOWAX(30m×0.53mm)，柱温100℃，保持2分钟，开始以每分钟15℃的速度升至200℃，保持15分钟。汽化室温度250℃；检测器温度250℃；检测器FID氢火焰离子化检测器，氢气流量30ml/min；空气流量300ml/min；载气高纯度氮气；载气流量20ml/min；进样方式分流比5∶1。理论板数按龙脑峰计算应不低于2000。对照品溶液的制备分别精密称取龙脑、麝香酮对照品适量，分别加二甲基甲酰胺制成每1ml各含0.05mg、0.005mg的溶液，摇匀，即得。供试品溶液的制备取本品2瓶内容物，研碎，精密称取0.1g，置10ml量瓶中，先加蒸馏水1ml，振摇使溶解后，静置半小时，再加二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，即得。测定法精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μl，注入气相色谱仪，测定，即得。本发明醒脑静冻干粉针产品中，以龙脑(C10H18O)计，含量为1.0mg～5.6mg/瓶。本发明醒脑静冻干粉针产品中，以麝香酮(C16H30O)计，含量为0.1mg～3mg/瓶。本发明醒脑静冻干粉针中，药物有效成分的含量，栀子以栀子苷(C17H24O10)计、冰片以龙脑(C10H18O)计、麝香以麝香酮(C16H30O)计、郁金以郁金挥发油计，其有效成分含量最低不能低于各有效成分最低含量。优选的本发明醒脑静冻干粉针中，药物有效成分的含量，栀子以栀子苷(C17H24O10)计、冰片以龙脑(C10H18O)计、麝香以麝香酮(C16H30O)计、郁金以郁金挥发油计，含量在本发明规定的范围内。最佳的本发明醒脑静冻干粉针中，药物有效成分的含量，栀子以栀子苷(C17H24O10)计，不得少于1.8mg/瓶；含冰片以龙脑(C10H18O)计，不得少于1.8mg/瓶；含麝香以麝香酮(C16H30O)计，不得少于0.2mg/瓶；郁金以郁金挥发油计，郁金挥发油含量为0.000075ml～0.001245ml/瓶。以上组成在生产时可按照相应的比例增大或减少，如大规模生产可以以公斤或以吨为单位，小规模生产也可以以克为单位，重量可以增大或减小，但各组成之间的生药材料重量配比比例不变。以上各组成中的单味中药，可以单独或同时被适当的具有相同药性、功效的中药替换，替换后中药制剂及其药物作用不变。本发明为醒脑静注射液二次开发的品种，克服了主含挥发油的溶液型注射剂醒脑静注射液因挥发油在水溶液中的微量过饱和，或因外界条件(如光、空气)的影响而使挥发油氧化，从而出现乳光现象，造成制剂的澄明度不合格，质量不稳定的缺点；再则克服了醒脑静注射液中有效成分含量或者是有效成分含量配比不确定的缺点。本发明冻干粉针可有效保证其贮藏质量。为了更好的理解本发明，以下通过本发明药物稳定性试验的实验例和药效学试验例来进一步阐述发明药物的有益效果，下面试验旨在进一步说明药物的作用，而非对本发明的限制。实验例1醒脑静冻干粉针与醒脑静注射液对比试验试验样品醒脑静冻干粉针(天津天士力制药集团生产批号030806、030816)；醒脑静注射液(无锡山禾药业有限公司生产生产批号030202、030803)方法将醒脑静注射液和醒脑静冻干粉针同置于37℃恒温湿箱中，进行加速破坏试验，每隔1个月抽样检查一次(水针检查澄明度)，共放置3个月，按外形、色泽、澄明度、PH值检查，冰片以龙脑计(C10H18O)的检查，其结果如表1、表2。表1醒脑静注射液37℃加速破坏试验结果表2醒脑静冻干粉针37℃加速破坏试验结果注速溶指20秒内溶解，溶液澄明；结果表明醒脑静冻干粉针具有成型好，质量稳定，速溶，澄明，使用方便等特点。本发明中冰片以龙脑计(C10H18O)(mg/瓶)的含量在规定范围内。醒脑静粉针每瓶固形物含量约0.44g。实验例2醒脑静冻干粉针稳定性试验资料取本发明注射用醒脑静冻干粉两批次检查项目和检查方法如下澄明度照《澄明度检查细则和判断标准》的规定检查，每瓶内容物加注射用水20ml使溶解，应符合规定。pH值取本品2瓶内容物，加注射用水5ml使溶解，依法测定(中国药典2000年版一部附录VIIG)，pH值应为4.5～6.5。水分取本品，依法测定(中国药典2000年版一部附录IXH水分测定法第三法)，含水量不得过5.0％。蛋白质取本品1瓶，加注射用水2.5ml使溶解，量取1ml，加鞣酸试液1～3滴，不得出现混浊。鞣质取本品1瓶，加注射用水2.5ml使溶解，量取1ml，加稀醋酸1滴，再加氯化钠的明胶试液4～5滴，不得出现浑浊或沉淀。炽灼残渣取本品2瓶内容物，精密加水5ml使溶解，精密量取4ml，置已炽灼至恒重的坩埚中，蒸干，依法检查(《中国药典》2000年版一部附录IXJ)。遗留残渣不得过1.5％(g/ml)。重金属取本品1g，照炽灼残渣测定法(《中国药典》2000年版一部附录IXJ)操作所得的遗留残渣，依法检查(《中国药典》2000年版一部附录IXE第二法)，含重金属不得过百万分之十。砷盐取本品1g，照炽灼残渣测定法(《中国药典》2000年版一部附录IXJ)操作所得的遗留残渣，依法检查(《中国药典》2000年版一部附录IXF第一法)，含砷量不得过百万分之草酸盐取本品一瓶，加注射用水2.5ml使溶解，依法检查《中国药典》2000年版一部附录IXS)，不得出现浑浊或沉淀。树脂取本品2瓶内容物，加注射用水5ml使溶解，加盐酸1滴，放置30分钟，应无絮状物析出。不溶性微粒取本品1瓶内容物，加注射用水250ml使溶解，用注射用水做空白，照显微计数法(中国药典2000年一部附录IXR)，每1ml中含10μm以上微粒不得过20粒，含25μm以上微粒不得过2粒。无菌取本品1瓶，加注射用水2.5ml使溶解，取1ml，依法检查(中国药典2000年版一部附录XIIIB)，应符合规定。热原取本品1瓶内容物，用生理盐水注射液20ml使溶解，按家兔体重每1kg注射3ml，依法检查(中国药典2000年版一部附录XIIIA)，应符合规定。异常毒性取本品1瓶内容物，加生理盐水注射液20ml使溶解，依法检查(《中国药典》2000年版二部附录XIC)。按静脉注射法给药，应符合规定。钾离子取本品1瓶内容物，加注射用水2.5ml使溶解，依法检查(《中国药典》2000年版一部附录IXS)，应符合规定。有机溶媒残留量测定按中国药典2000年版一部附录气相色谱法和乙醇测定法测定。药品稳定性试验报告一样品名称注射用醒脑静冻干粉批号030813生产日期2003年8月13日药品稳定性试验报告二样品名称注射用醒脑静冻干粉批号030819生产日期2003年8月19日实验例3注射用醒脑静冻干粉的安全性试验家兔静脉注射给药血管刺激性试验试验目的测定家兔连续静脉注射给药后局部血管的刺激反应。受试药物注射用醒脑静冻干粉(浓缩原料药)为淡黄色液体，可溶于水，250ml/瓶、含生药量250g，由北京神农坛医药科技有限公司提供，生产批号030806。本实验室室温保存。根据临床人拟用浓度(0.76g生药/250ml)，试验时取0.5ml原液(0.5g)加入36.0ml生理盐水注射液稀释成13.7mg/ml，大于临床人拟用浓度(3.04mg生药/ml)。4号注射针头和5ml无菌注射器直接抽取药液用于试验。动物新西兰种白色大耳家兔，雄、雌兼用，体重2.2-2.4kg，由中国药品生物制品检定所实验动物中心提供，动物质量合格证号京动许字(2000)第017号。家兔在二级实验动物室饲养观察2天，选4只健康、无稀便的用于试验。实验动物室三级空气过滤送风，温度22-24℃，相对湿度40-45％，日光灯12小时照明。家兔专用无菌颗粒饲料和去离子水每天给予2次。不锈钢丝笼具体积为40×30×30cm。试验方法家兔在兔夹上固定后，双侧耳缘静脉用75％乙醇涂抹消毒，用4号注射针头刺入，给药组缓慢给予注射用醒脑静冻干粉10ml(5ml/耳)，对照组注射等容积生理盐水注射液。干棉球压迫止血5分钟。每天注射1次，在耳缘同一条静脉血管的远心端上连续给药3天，每天大体观察局部血管情况。在第4天即注射给药后的24小时，棒击家兔头颅枕部处死，死亡2小时待血液完全凝固后，剪取注射静脉血管近心端的双耳廓面积2×4cm各一块，浸泡在10％甲醛固定液中，经脱水、石蜡包埋、切片后制成标本玻片，再经H.E染色，显微镜下进行病理组织学观察。结果对照组和给药组家兔在静脉注射后无全身性不良反应。第2天静脉注射给药时，肉眼观察局部血管皮下组织有少量出血引起的青紫色瘀斑，连续3天给药未见其它异常。病理组织学切片观察给药组静脉血管轻度扩张，充有多量血细胞，内皮细胞未见损伤；血管壁及周围软组织未见变性、水肿和增生，慢性炎细胞浸润不十分明显。其余组织未见异常。结论注射用醒脑静冻干粉家兔耳缘静脉缓慢注射给药，其局部血管肉眼未见明显异常变化，病理组织学也未见血管出现明显刺激反应。和凝聚反应。实验例4注射用醒脑静冻干粉的主要药效学试验研究试验目的观察醒脑静冻干粉对实验性脑缺血和昏迷动物模型的影响，并进行相关实验研究以判定其疗效，为该药的临床应用提供药效学依据。实验材料1.实验药品受试药物注射用醒脑静冻干粉，由北京神农坛医药科技有限公司提供，规格342.5mg/瓶，批号030807。使用时用生理盐水配制成所需浓度。对照药醒脑静注射液，云南大理药业有限公司产品，批号030421，国药准字Z53021639；香丹注射液，江苏康怡制药有限公司产品，批号030710-1，国药准字Z32020159；尼莫地平注射液，德国拜耳公司产品，批号BH20020394，国药准字J20020102。安定注射液(地西泮注射液)，江西济川制药有限公司产品，批号001123，国药准字H32021652。氯化钠注射液，江西制药有限责任公司产品，批号030710-1。2.实验试剂氯代三苯基四氮唑(红四氮唑或TTC)，Fluka产品，瑞士分装，批号RA11881，规格10g/瓶，白色粉末，用生理盐水配置成2％溶液备用；多聚甲醛，天津市化学试剂研究所生产，批号20020308，规格10g/瓶；水合氯醛，五联化工厂(中国上海)，批号w20021122，规格250g/瓶；磷酸氢二钠，广州新成化工厂提供，批号20020308，规格500g/瓶；磷酸二氢钠，北京益利精细化学品有限公司，批号20020308，规格500g/瓶；氨基甲酸乙酯(乌来糖)，上海三浦化工有限公司，批号20030812；戊巴比妥钠，上海化学试剂公司产品，批号F20020915；ADP，Sigma公司产品，终浓度为35μmol/L；SOD、MDA试剂盒均有南京建成生物生物工程公司产品，批号20040521、20040528；士的宁，Sigma公司产品，批号44H0910；红星二锅头，北京酿酒总厂，56度。3.实验仪器DH-150人工动物呼吸机，浙江大学仪器厂产品；电热恒温干燥箱，长沙医疗器械厂；BI2000医学图象系统，四川省成都泰盟科技有限公司；RM-6000型四道生理多导仪为日本光电公司产品，所用插件分别为浮地式生物电放大器(AT-601G)、载波放大器(AP-621G)、血压记录器(AP-611G)、心率计数器(AT-601G)、MF-1200型电磁流量计为日本光电公司产品；TYXN-91型智能血小板聚集仪，上海伯奥生物科技有限公司；YSD-4G药理生理实验多用仪，安徽蚌埠医学院仪器厂研制；LDZ5-2离心机，北京医用离心机厂；SystemCA-530血凝仪(日本)；尼龙线，活力牌，直径为0.205或0.235mm，由台湾产；微型动脉夹等。4.实验动物清洁级昆明种小鼠，体重18～22g，雌雄各半，合格证号2001A030；清洁级SD大鼠，雄性体重240～280g，合格证号2001A029；新西兰大白兔，体重1.5～2.5kg，雌雄不限，合格证号2001A033；杂种犬，11～14kg，雌雄兼有；以上均由中山大学实验动物中心提供。沙土鼠，体重60～80g，雌雄各半，浙江省实验动物中心提供，合格证号SCXK(浙)2003-0002。饲养条件动物进入动物饲养房后，小鼠每笼放养10只，大鼠每笼放养5只，兔每笼1只，饲养3天后启用，由专人饲养管理。动物室灯光12小时照明，通风和空调设备良好，室温控制在25±1℃，相对湿度为40～50％。实验室按常规定期消毒。剂量设置通过醒脑静冻干粉对小鼠对自发活动、戊巴比妥钠睡眠时间及小鼠凝血时间的影响等试验得出144mg/kg为较佳有效剂量，正式试验取其1/2为低剂量，2倍为高剂量，低、中、高剂量分别为72、144、288mg/kg。通过体表面积折算得，大鼠低、中、高剂量分别为50、100、200mg/kg；沙土鼠低、中、高剂量分别为50、100、200mg/kg；犬低、中、高剂量分别为15、30、60mg/kg。醒脑静注射液，人用量为10-20ml/天，取中间剂量15ml/天，通过体表面积换算，小鼠约为1.95ml/kg，大鼠或沙土鼠约为1.35ml/kg，犬为0.40ml/kg。香丹注射液香丹注射液，人用量为20ml/天，通过体表面积换算，小鼠约为2.6ml/kg，大鼠或沙土鼠约为1.8ml/kg，犬为0.53ml/kg。尼莫地平注射液，大鼠或沙土鼠约为0.3mg/kg/次，犬为0.1mg/kg/次。药物稀释方法、给药途径及体积取同一批号的各实验所用药品，用生理盐水配制，每日现配制现用。给药途径静脉注射或腹腔注射。各种单位给药容积分别为小鼠为0.15ml/10g体重沙土鼠为1.0ml/100g体重；大鼠为0.4ml/100g；犬为3.0ml/kg体重。所有实验数据以表示。计量数据由SPSS11.0统计软件进行方差分析及组间检验。1.对大鼠大脑中动脉栓线法局灶性脑缺血(MCAO)模型的影响1.1方法分组及给药取雄性SD大鼠，按随机分组原则分成7组，分别为假手术组(生理盐水)、模型组(生理盐水)、醒脑静冻干粉低(50mg/kg)、中(100mg/kg)、高(200mg/kg)剂量组、醒脑静注射液(1.35ml/kg)组和尼莫地平注射液(0.3mg/kg)组。药物用生理盐水配制成相应的浓度，使给药体积均为0.2ml/100g大鼠。造模前0.5h先静脉注射给药1次；造模后6h和12h分别进行第2、3次给药，即总共给药3次。模型组和假手术组大鼠给予生理盐水，给药时间及体积同上。造模方法将大鼠用10％水合氯醛3.5ml/kg腹腔注射(ip)麻醉后，颈正中切口，分离、结扎右侧颈总动脉、颈外动脉及其分支动脉。在颈内动脉近端备线、远端放置动脉夹，颈总动脉分叉处切口，插入4～0尼龙线，其深度为17～20mm，栓线进入颈内动脉，入颅至大脑前动脉，阻断大脑中动脉所有血流来源。撤掉动脉夹，扎紧备线，剪去多余线头，伤口以碘伏消毒，最后缝合皮肤，手术完毕回笼饲养。假手术组除不插线外，其余步骤同上。其余各组大鼠按上述手术方法造模。造模成功的标准术后动物清醒后有明显手术侧(即左侧)Horner症(左侧眼睑下垂，眼球凹陷)及手术侧(即左侧)偏瘫体症(不能完全伸展左前肢，行走时向左侧倾倒或转圈)。依上述标准将能够存活24h的大鼠确定为最后的实验对象，并进行行为学评分及快速断头取脑。观察指标(1)行为学评分对造模成功存活24h的大鼠，观察其行为学变化，然后参照ZeaLonga的5分制评分标准(见下)进行神经病学评分。0分无神经损伤症状；1分不能完全伸展对侧前爪；2分向外侧转圈；3分向对侧倾倒；4分不能自发行走，意识丧失。(2)脑含水量测定神经病学评分后，快速断头取鼠大脑。取左侧半脑后半部分分别称湿重，置120℃烤箱烘干至恒重，按以下公式计算脑组织含水量。脑组织含水量(％)＝(湿重-干重)/湿重×100％。(3)脑组织匀浆测定生化指标迅速断头取脑，取左侧半脑前半部分放于液氮中保存待测。从液氮中取出半脑称取100mg，后置于9倍的生理盐水中，用研磨器于冰块上研磨，制成100％(W/V)脑匀浆液，3500rpm/min，离心10min。检测脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的水平或含量。检测方法MDA测定采用硫代巴比妥酸法，SOD活力检测采用黄嘌呤氧化法。(4)脑梗塞范围的测定造模后24h每组取8只大鼠，快速取全脑，去掉嗅球、小脑和低位脑干，冰冻25分钟。然后冠状切四刀，将全脑切成五片。第一刀位于脑前极与视交叉连线中点处，第二刀位于视交叉，第三到在漏斗部，第四到在漏斗柄与叶尾极之间。接着迅速将脑片置2％红四氮唑(TTC)中，避光，37℃温孵30分钟，其间每隔7～8min翻动一次，染色后以4％多聚甲醛固定。染色结果正常组织呈红色，梗塞组织呈白色。拍照并用BI2000医学图象分析系统计算脑梗塞面积百分比。1.2结果1.2.1行为学评分结果经过脑梗塞的大鼠麻醉清醒后即有偏瘫样症状出现。主要表现为不同程度的手术对侧前肢内收，肩内旋，肌张力降低，推右肩向对侧移动，抵抗阻力降低，还出现不停地向一侧转圈，甚至有些动物出现向对侧倾倒或不能自主活动现象。由表1结果可见，与模型组比较，术后24h的行为评分醒脑静冻干粉50、100、200mg/kg三组、醒脑静注射液(1.35ml/kg)组和尼莫地平注射液(0.3mg/kg)组均有明显降低MCAO大鼠的行为学评分，统计分析有显著差异(P＜0.05或P＜0.01)。术后模型组动物的一般状态较差，活动减少，大多数动物体重有所下降，而各药物治疗组动物一般状况均有明显的改善。表1对MCAO大鼠神经行为学的影响与模型组比较*P＜0.05；**P＜0.011.2.2对脑组织含水量的影响由表2可见，假手术组大鼠脑含水量较低，模型组大鼠脑含水量显著高于假手术组(P＜0.01)；醒脑静冻干粉50mg组的脑含水量有所降低，但与模型组相比无统计学意义(P＞0.05)；醒脑静冻干粉100mg/kg组和200mg/kg组则显著低于模型对照组(P＜0.01)，醒脑静注射液组及尼莫地平注射液组大鼠脑含水量也显著低于模型组大鼠(P＜0.05或P＜0.01)。表2对MCAO大鼠脑含水量的影响与模型组比较*P＜0.05；**P＜0.011.2.3对脑组织中SOD和MDA含量的影响见表3，模型组脑组织SOD活性明显降低，MDA含量明显提高，与假手术相比较均有显著性差异(P＜0.01)。醒脑静冻干粉各剂量组与模型对照组比较，SOD活性明显升高，MDA含量显著下降(P＜0.05或P＜0.01)；两个阳性对照组也使损伤脑组织中SOD明显升高，MDA显著下降。表3对MCAO大鼠脑组织中SOD和MDA含量的影响(，n＝8)与模型组比较*P＜0.05；**P＜0.011.2.4对大鼠脑梗塞范围的影响由于TTC染色适合于脑缺血24～48h内检测脑梗塞情况，故本实验是大鼠发生脑梗塞后24h利用TTC染色技术检查脑梗塞程度(见附图一)。由表4可以看出，模型组大鼠脑缺血再灌注24h后脑组织梗塞面积占脑总面积的33.39±8.51％。与模型组大鼠相比，醒脑静冻干粉50mg/kg、100mg/kg及200mg/kg大鼠脑梗塞面积分别缩小12.1％(P＞0.05)、30.5％(P＜0.05)及37.7％(P＜0.01)、醒脑静注射液组和尼莫地平注射液组大鼠脑梗塞面积亦较模型组大鼠分别缩小32.6％(P＜0.05)及38.9％(P＜0.01)。假手术组动物未见脑梗塞发生。表4对MCAO大鼠脑梗死面的影响与模型组比较*P＜0.05；**P＜0.012醒脑静冻干粉对犬脑循环的影响2.1方法取健康合格杂种犬36条，雌雄兼用，随机分成6组。即空白对照组、醒脑静冻干粉低(15mg/kg)、中(30mg/kg)、高(60mg/kg)剂量组，醒脑静注射液(0.40ml/kg)组，尼莫地平(100μg/kg)。用戊巴比妥钠(30mg/kg)腹腔注射麻醉后，切开气管，插入气管套管，以保证呼吸通畅。分离左侧颈总动脉、颈内动脉和颈外静脉，结扎颈外静脉，套上4mm探头以MFV-1200型电磁血流量计(日本光电产)记录颈内动脉血流量。分离一侧股动脉和股静脉并插管，动脉插管与压力换能器相连，经AP-601G放大器测量股动脉血压，静脉插管为滴注给药备用。标准II导程导联与AB-601G生物电放大器相连，记录心电图。用心电R波触发AT-601G心率计测量心率。以RM-6000型四导生理记录仪(日本光电公司)记录上述各项指标。在各项指标稳定后记录5分钟作对照，然后按各组剂量静脉滴注给药，对照组给予等容积的生理盐水，给药后分别在5、10、15、30、45、60、90、120以及180min测定收缩压(SAP)、舒张压(DAP)、平均动脉血压(MAP)、心率(HR)、心电图的P-R间期(s)、Q-T间期(s)、T波幅值(mv)、颈内动脉流量(ml/min)、脑血流量(CBF)和脑血管阻力(mmHg.ml/min.100g)等指标。2.2结果从表5、表6及表7结果可见，给醒脑静冻干粉15mg/kg、30mg/kg及60mg/kg对犬SAP、DAP、MAP、HR都无明显影响，但在给药30分钟内，这三个组犬的颈内动脉流量及CBF均升高，CVR则降低，以给药15分钟变化最明显，其中颈内动脉流量分别升高21.5％(P＞0.05)、34.2％(P＜0.05)及65.7％(P＜0.01)，CBF分别升高21.5％(P＞0.05)、32.3％(P＜0.05)及64.9％(P＜0.01)，CVR则分别降低16.7％(P＞0.05)、25.2％(P＜0.05)及39.6％(P＜0.01)。尼莫地平0.1mg/kg后5～180分钟内实验犬的SAP、DAP、MAP、HR都明显降低，一般于给药10～15分钟降至最低，较给药前分别降低17.0％(P＜0.01)、36.7％(P＜0.01)及26.0％(P＜0.01)；在5～30分钟内犬颈内动脉血流量、CBF显著增加，给药10～15分钟达最大值，分别较给药前升高65.7％(P＜0.01)及84.5％(P＜0.01)，脑血管阻力则下降57.1％(P＜0.01)。给醒脑净注射液后15～30分钟，犬的SAP、DAP、MAP均有所降低，分别降低19.6％(P＜0.05)、31.3％(P＜0.05)及26.0％(P＜0.05)，于给药15分钟后颈内颈内动脉血流量及CBF分别升高55.9％(P＜0.05)及55.7％(P＜0.05)，CVR则降低52.0％(P＜0.01)。醒脑静冻干粉、尼莫地平及醒脑净对犬正常心率及二导联心电图无明显影响。表5对犬动脉收缩压(SAP)、舒张压(DAP)、平均压(MBP)的影响(，n＝6)与给药前比较，*P＜0.05，**P＜0.01表6对犬心率(HR，次/min)、心电图P-R间期(s)和Q-T间期(s)的影响(，n＝6)与给药前比较，*P＜0.05，**P＜0.01表7对犬颈内动脉血流量、脑血流量(CBF)和脑血管阻力(CVR)的影响(，n＝6)<tablesid="table10"num="010"><tablewidth="1264">检测指组别给药前给药后(min)510153060120180颈内动脉血流量(ml/min)对照组醒脑静冻干低醒脑静冻干中醒脑静冻干高醒脑静注射液尼莫地平组47.8±9.750.2±13.248.2±1053.3±9.045.4±12.452.5±9.450.2±9.057.0±15.758.3±8.364.5±7.452.2±12.980.0±22.4*180±10.059.3±15.058.3±8.376.2±12.4**57.8±14.187.3±21.7**53.3±11.361.0±17.264.7±11.088.3±20.8**70.8±18.0*84.0±19.8**51.2±11.555.2±14.455.2±5.877.3±17.2*46.2±12.963.0±10.951.0±13.847.5±12.547.3±8.048.2±9.939.6±16.761.0±10.245.2±12.245.5±12.941.8±8.745.0±14.345.8±15.159.8±8.940.8±10.745.5±11.240.8±8.952.3±7.645.0±13.959.0±10.0CBF(ml/100g/min)对照组醒脑静冻干低醒脑静冻干中醒脑静冻干高醒脑静注射液尼莫地平组135.9±29.5133.5±31.8135.8±25.8146.9±31.0130.6±35.8148.2±20.1142.5±27.5151.5±37.5162.6±21.1177.3±28.4149.8±35.5225.7±57.7147.3±30.6157.39±36.1162.6±21.1208.8±36.9*165.4±36.2246.1±51.6**151.4±33.8162.0±41.2179.6±31.2242.2±59.3**203.3±47.7273.4±49.2**145.6±35.3146.6±33.8157.9±16210.3±40.5131.5±33.4177.5±21.9*145.5±42.7126.2±29.4133.2±20.7132.1±29.0112.9±46.1171.8±19.6128.9±37.4121.1±31.7119.3±27.0124.1±42.8132.1±45.6168.8±16.2116.5±33.5121.3±27.6114.2±27.6143.6±24.6130.2±42.8166.4±20.4CVR(mmHg.ml/100g/min)对照组醒脑静冻干低醒脑静冻干中醒脑静冻干高醒脑静注射液尼莫地平组0.90±0.481.08±0.241.07±0.260.91±0.241.02±0.260.84±0.090.86±0.540.96±0.250.87±0.170.74±0.130.81±0.170.45±0.09**0.83±0.510.91±0.210.87±0.170.63±0.10*0.67±0.22*0.36±0.07**0.81±0.540.90±0.260.80±0.190.55±0.14**0.49±0.19**0.40±0.13**0.85±0.480.97±0.230.86±0.110.57±0.170.71±0.240.61±0.09**0.84±0.401.13±0.281.04±0.220.96±0.221.14±0.560.67±0.07**0.95±0.481.19±0.291.21±0.281.09±0.360.97±0.340.70±0.06*1.04±0.551.17±0.261.27±0.290.85±0.131.02±0.360.73±0.08*</table></tables>与给药前比较，*P＜0.05，**P＜0.013.醒脑静冻干粉对凝血时间、血小板聚集和血栓形成的影响3.1.对小鼠凝血时间的影响方法昆明种小鼠60只，体重18～22g，雌雄兼用，按体重和性别随机分成5组，给药容积为0.15ml/10g体重。分别给予静脉注射生理盐水溶液，醒脑静冻干粉低(72mg/kg)、中(144mg/kg)、高(288mg/kg)，香丹注射液(2.6ml/kg)，醒脑静注射液1.95ml/kg。给药后20min，用毛细玻璃管自眼球取血，每15秒截断一节毛细管，观察记录毛细管内出现凝血丝的时间，此即为凝血时间。结果由表8可见，醒脑静冻干粉72mg/kg、144mg/kg、288mg/kg均可明显的延长小鼠凝血的时间，与生理盐水组相比，醒脑静冻干144mg/kg、288mg/kg均有有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01)。表8醒脑静冻干粉对小鼠凝血时间的影响(n＝10)3.2对体外血小板聚集的影响家兔颈总动脉放血，用硅化试管取血，以3.8％枸橼酸钠(1/10血量)抗凝，800rpm/min离心10分钟，吸出上层富血小板血浆(PRP)，再以3000rpm/min离心，取出贫血小板血浆(PPP)。用PPP将透光度调到100，然后以PRP调零，加搅拌棒、加生理盐水或醒脑静冻干粉(0.5mg、1.0mg、2.0mg/ml)及阳性对照药香丹注射液(0.12ml/ml)和醒脑静注射液(0.05ml/ml)，37℃温育。将PRP移至测定孔，加入ADP(终浓度为35μmol/L)，观察5min最大聚集程度，仪器为TYXN-91型智能血小板聚集仪。计算血小板聚集百分率(Plateletaggregation，PAG)或抑制聚集百分率。由下表9可见，醒脑静冻干粉0.5mg/ml、1.0mg/ml、2.0mg/ml对ADP诱导的家兔血小板聚集均有明显的抑制作用，且呈一定的剂量依赖性。表9对ADP诱导的体外家兔血小板聚集(PAG)的影响(n＝10)与缓冲液对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.013.3对大鼠动-静脉旁路血栓形成的影响SD大鼠50只，随机分为5组，每组10只，10％水合氯醛3.5ml/kg腹腔注射(ip)麻醉固定，分别从舌下静脉给予醒脑静冻干粉200、100、50mg/kg，阳性对照药给予香丹注射液(2.6ml/kg)和醒脑静注射液(1.95ml/kg)，对照组给予等容积的生理盐水。给药后20min，分离右侧颈总动脉和左侧颈外静脉。在聚乙烯管中段放入一根长6cm4号丝线，用肝素生理盐水溶液(50μl/ml)充满聚乙烯管。当聚乙烯管的一端插入左颈外静脉后，另一端塑料管注入肝素(50μl/ml)0.2ml抗凝，然后再将此端插入右侧颈总动脉。打开动脉夹，让血液从右侧颈总动脉流入管内，返回左侧颈外静脉，开放血液15min后，中断血流，迅速取出聚乙烯管中的血栓在分析天平上称重，求出血栓抑制率。血栓抑制率＝(对照组血栓湿重-给药组血栓湿重)/对照组血栓湿重×100％表10醒脑静冻干粉对大鼠颈总动-静脉搭桥形成血栓影响(n＝10)与对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01由上表10可见，醒脑静冻干粉200mg/kg和100mg/kg组均能明显抑制大鼠血栓形成(与对照组比较，P＜0.01或P＜0.05)。具体实施例方式下面结合实施例对本发明做进一步说明，下述各实施例仅用于说明本发明而并非对本发明的限制。实施例1冻干粉针的制备a.取如下重量份原料药组分麝香15g、郁金60g、栀子60g、冰片1g；b.以上四味，郁金粉碎成粗颗粒，提取挥发油备用；栀子乙醇回流提取，滤过，合并提取液，回收乙醇，浓缩成浸膏，浸膏用HCl调pH值，煮沸，冷却，冷藏后离心，离心液用正丁醇萃取，合并正丁醇萃取液，减压回收正丁醇，浓缩，干燥得栀子提取物；麝香用乙醇连续回流提取，提取液备用；冰片粉碎备用；按照冻干粉针剂的制备方法，将上述物质制备成冻干粉针剂。实施例2冻干粉针的制备a.取如下重量份原料药组分麝香90g、郁金300g、栀子300g、冰片6g；b.以上四味，郁金粉碎成粗颗粒，提取挥发油备用；栀子乙醇回流提取，滤过，合并提取液，回收乙醇，浓缩成浸膏，浸膏用HCl调pH值，煮沸，冷却，冷藏后离心，离心液用正丁醇萃取，合并正丁醇萃取液，减压回收正丁醇，浓缩，干燥得栀子提取物；麝香用乙醇连续回流提取，提取液备用；冰片粉碎备用；取羟丙基-β-环糊精，加水使溶解，取郁金挥发油滴加入羟丙基-β-环糊精水溶液中密闭超声，得郁金挥发油HP-β-CD包合物；取羟丙基-β-环糊精，加水使溶解，搅拌，保温备用；取处方量冰片，加入到上述麝香提取液中，搅拌使溶解，得挥发油-冰片-麝香醇溶液；将挥发油-冰片-麝香醇溶液缓慢滴加至羟丙基-β-环糊精水溶液中，搅拌，回收乙醇至尽后，滤过，得冰片麝香HP-β-CD包合物；将栀子提取物粉碎，加注射用水使溶解，用NaOH调pH，煮沸，冷藏，滤过，滤过液与郁金挥发油HP-β-CD包合物及冰片麝香HP-β-CD包合物混合，加甘露醇，用注射用水补足体积；用NaOH调pH值，煮沸，加入活性炭，保温，粗滤脱炭，用注射用水调节体积，冻干，即得冻干粉针剂。实施例3冻干粉针的制备a.取麝香37.5g、郁金150g、栀子150g、冰片5g；b.以上四味，郁金粉碎成粗颗粒，提取挥发油备用；栀子用14倍量99.5％乙醇回流提取5次，每次1小时，滤过，合并提取液，滤液减压回收乙醇，并浓缩至50℃时相对密度为1.10～1.25左右的浸膏，浸膏用HCl调pH值为1～4，煮沸3小时，冷却，冷藏36小时后离心，离心液用正丁醇萃取8次，合并正丁醇萃取液，减压回收正丁醇，并浓缩至相对密度为1.10～1.35(50℃)左右的浸膏，干燥得栀子提取物；麝香用8倍量99.5％乙醇回流提取6小时，提取液备用；取羟丙基-β-环糊精70g，加85ml水使溶解，取郁金挥发油滴加入羟丙基-β-环糊精水溶液中密闭超声3小时，得郁金挥发油HP-β-CD包合物；取羟丙基-β-环糊精200g，加700ml水使溶解，搅拌，50℃保温备用；取处方量冰片，加入到上述麝香提取液中，搅拌使溶解，得挥发油-冰片-麝香醇溶液；将挥发油-冰片-麝香醇溶液缓慢滴加至羟丙基-β-环糊精水溶液中，40℃下搅拌4小时，室温下继续搅拌4小时，减压回收乙醇至尽后，滤过，得冰片麝香HP-β-CD包合物；将栀子提取物粉碎，加注射用水500ml使溶解，用NaOH调pH为4～6，煮沸10～20分钟，冷藏30小时，滤过，滤过液与郁金挥发油HP-β-CD包合物及冰片麝香HP-β-CD包合物混合，加甘露醇80g，用注射用水补足体积至2500ml；用8％NaOH调pH值至6.0～6.5，煮沸，加入0.2％活性炭，70℃保温10分钟，粗滤脱炭，用注射用水调节体积至2500ml，除菌滤过，冻干，即得冻干粉针剂。实施例4冻干粉针的制备a.取麝香麝香60、郁金200、栀子100、冰片2g；b.以上四味，郁金粉碎成粗颗粒，提取挥发油备用；栀子用3倍量50％乙醇回流提取2次，第一次3小时，第二次2小时，滤过，合并提取液，滤液减压回收乙醇，并浓缩至40℃时相对密度为1.10～1.25左右的浸膏，浸膏用HCl调pH值为1～4，煮沸0.5小时，冷却，冷藏12小时后离心，离心液用正丁醇萃取2次，合并正丁醇萃取液，减压回收正丁醇，并浓缩至相对密度为1.10～1.35(50℃)左右的浸膏，干燥得栀子提取物；麝香用2倍量70％乙醇回流提取1小时，提取液备用；取羟丙基-β-环糊精75.4g，加100ml水使溶解，取郁金挥发油滴加入羟丙基-β-环糊精水溶液中密闭超声2小时，得郁金挥发油HP-β-CD包合物；取羟丙基-β-环糊精150g，加1200ml水使溶解，搅拌，70℃保温备用；取处方量冰片，加入到上述麝香提取液中，搅拌使溶解，得挥发油-冰片-麝香醇溶液；将挥发油-冰片-麝香醇溶液缓慢滴加至羟丙基-β-环糊精水溶液中，70℃下搅拌4小时，室温下继续搅拌1小时，减压回收乙醇至尽后，滤过，得冰片麝香HP-β-CD包合物；将栀子提取物粉碎，加注射用水1000ml使溶解，用NaOH调pH为5～6，煮沸35分钟，冷藏24小时，滤过，滤过液与郁金挥发油HP-β-CD包合物及冰片麝香HP-β-CD包合物混合，加甘露醇50g，用注射用水补足体积至2500ml；用12％NaOH调pH值至6.0～6.5，煮沸，加入0.1％活性炭，75℃保温20分钟，粗滤脱炭，用注射用水调节体积至2500ml，除菌滤过，灌封至10ml西林瓶中，每瓶2.5ml，加丁基橡胶塞，冻干，包装，即得冻干粉针剂。实施例5冻干粉针的制备a.取麝香46.5g、郁金120g、栀子120g、冰片1g；b.以上四味，郁金粉碎成粗颗粒，提取挥发油备用；栀子用9倍量85％乙醇回流提取3次，第一次3小时，第二次2小时，第三次1小时，滤过，合并提取液，滤液减压回收乙醇，并浓缩至65℃时相对密度为1.10～1.25左右的浸膏，浸膏用HCl调pH值为1～4，煮沸2.5小时，冷却，冷藏18小时后离心，离心液用正丁醇萃取3次，合并正丁醇萃取液，减压回收正丁醇，并浓缩至相对密度为1.10～1.35(50℃)左右的浸膏，干燥得栀子提取物；麝香用5倍量85％乙醇回流提取1～6小时，提取液备用；取羟丙基-β-环糊精62.5g，加100ml水使溶解，取郁金挥发油滴加入羟丙基-β-环糊精水溶液中密闭超声5小时，得郁金挥发油HP-β-CD包合物；取羟丙基-β-环糊精250g，加1000ml水使溶解，搅拌，60℃保温备用；取处方量冰片，加入到上述麝香提取液中，搅拌使溶解，得挥发油-冰片-麝香醇溶液；将挥发油-冰片-麝香醇溶液缓慢滴加至羟丙基-β-环糊精水溶液中，60℃下搅拌3小时，室温下继续搅拌5小时，减压回收乙醇至尽后，滤过，得冰片麝香HP-β-CD包合物；将栀子提取物粉碎，加注射用水1000ml使溶解，用NaOH调pH为5～6，煮沸15分钟，冷藏24小时，滤过，滤过液与郁金挥发油HP-β-CD包合物及冰片麝香HP-β-CD包合物混合，加甘露醇100g，用注射用水补足体积至2500ml；用10％NaOH调pH值至6.0～6.5，煮沸，加入0.1％活性炭，80℃保温10分钟，粗滤脱炭，用注射用水调节体积至2500ml，除菌滤过，灌封至10ml西林瓶中，每瓶2.5ml，加丁基橡胶塞，冻干，包装，即得冻干粉针剂。实施例6冻干粉针的制备a.取麝香15.5g、郁金250g、栀子180g、冰片5g；b.以上四味，郁金粉碎成粗颗粒，提取挥发油备用；栀子用5倍量85％乙醇回流提取3次，每次2小时，滤过，合并提取液，滤液减压回收乙醇，并浓缩至50℃时相对密度为1.12～1.20左右的浸膏，浸膏用HCl调pH值为2～4，煮沸2小时，冷却，冷藏30小时后离心，离心液用正丁醇萃取5次，合并正丁醇萃取液，减压回收正丁醇，并浓缩至相对密度为1.15～1.30(50℃)左右的浸膏，干燥得栀子提取物；麝香用4倍量80％乙醇回流提取4小时；取羟丙基-β-环糊精，加水使溶解，取郁金挥发油滴加入羟丙基-β-环糊精水溶液中密闭超声，得郁金挥发油HP-β-CD包合物；取羟丙基-β-环糊精，加水使溶解，搅拌，保温备用；取处方量冰片，加入到上述麝香提取液中，搅拌使溶解，得挥发油-冰片-麝香醇溶液；将挥发油-冰片-麝香醇溶液缓慢滴加至羟丙基-β-环糊精水溶液中，搅拌，回收乙醇至尽后，滤过，得冰片麝香HP-β-CD包合物；将栀子提取物粉碎，加注射用水使溶解，用NaOH调pH，煮沸，冷藏，滤过，滤过液与郁金挥发油HP-β-CD包合物及冰片麝香HP-β-CD包合物混合，加甘露醇，用注射用水补足体积；用NaOH调pH值，煮沸，加入活性炭，保温，粗滤脱炭，用注射用水调节体积，冻干，即得冻干粉针剂。实施例7冻干粉针的制备a.取麝香16.5g、郁金60g、栀子300g、冰片3g；b.郁金粉碎成粗颗粒，提取挥发油备用；栀子用10倍量60％乙醇回流提取2次，第一次2小时，第二次1小时，滤过，合并提取液，滤液减压回收乙醇，并浓缩至50℃时相对密度为1.12～1.20左右的浸膏，浸膏用HCl调pH值为2～4，煮沸1小时，冷却，冷藏18小时后离心，离心液用正丁醇萃取2次，合并正丁醇萃取液，减压回收正丁醇，并浓缩至相对密度为1.15～1.30(50℃)左右的浸膏，干燥得栀子提取物；麝香用2倍量90％乙醇回流提取3小时；取羟丙基-β-环糊精42.5g，加90ml水使溶解，取郁金挥发油滴加入羟丙基-β-环糊精水溶液中密闭超声2.5小时，得郁金挥发油HP-β-CD包合物；取羟丙基-β-环糊精150g，加1500ml水使溶解，搅拌，80℃保温备用；取处方量冰片，加入到上述麝香提取液中，搅拌使溶解，得挥发油-冰片-麝香醇溶液；将挥发油-冰片-麝香醇溶液缓慢滴加至羟丙基-β-环糊精水溶液中，80℃下搅拌1.5小时，室温下继续搅拌2.5小时，减压回收乙醇至尽后，滤过，得冰片麝香HP-β-CD包合物；将栀子提取物粉碎，加注射用水1200ml使溶解，用NaOH调pH为5～6，煮沸12分钟，冷藏20小时，滤过，滤过液与郁金挥发油HP-β-CD包合物及冰片麝香HP-β-CD包合物混合，加甘露醇120g，用注射用水补足体积至2500ml；用4％NaOH调pH值至6.0～6.5，煮沸，加入0.2％活性炭，40℃保温13分钟，粗滤脱炭，用注射用水调节体积至2500ml，除菌滤过，灌封至10ml西林瓶中，每瓶2.5ml，加丁基橡胶塞，冻干，即得冻干粉针剂。实施例8冻干粉针的制备a.取麝香60g、郁金180g、栀子180g、冰片3.5g；b.郁金粉碎成粗颗粒，提取挥发油备用；栀子用7倍量75％乙醇回流提取2次，每次2小时，滤过，合并提取液，滤液减压回收乙醇，并浓缩至50℃时相对密度为1.12～1.20左右的浸膏，浸膏用HCl调pH值为2～4，煮沸1.5小时，冷却，冷藏25小时后离心，离心液用正丁醇萃取4次，合并正丁醇萃取液，减压回收正丁醇，并浓缩至相对密度为1.15～1.30(50℃)左右的浸膏，干燥得栀子提取物；麝香用3.5倍量85％乙醇回流提取2.5小时；取羟丙基-β-环糊精62.5g，加100ml水使溶解，取郁金挥发油滴加入羟丙基-β-环糊精水溶液中密闭超声5小时，得郁金挥发油HP-β-CD包合物；取羟丙基-β-环糊精250g，加1000ml水使溶解，搅拌，60℃保温备用；取处方量冰片，加入到上述麝香提取液中，搅拌使溶解，得挥发油-冰片-麝香醇溶液；将挥发油-冰片-麝香醇溶液缓慢滴加至羟丙基-β-环糊精水溶液中，60℃下搅拌3小时，室温下继续搅拌5小时，减压回收乙醇至尽后，滤过，得冰片麝香HP-β-CD包合物；将栀子提取物粉碎，加注射用水1000ml使溶解，用NaOH调pH为5～6，煮沸15分钟，冷藏24小时，滤过，滤过液与郁金挥发油HP-β-CD包合物及冰片麝香HP-β-CD包合物混合，加甘露醇100g，用注射用水补足体积至2500ml；用10％NaOH调pH值至6.0～6.5，煮沸，加入0.1％活性炭，80℃保温10分钟，粗滤脱炭，用注射用水调节体积至2500ml，除菌滤过，灌封至10ml西林瓶中，每瓶2.5ml，加丁基橡胶塞，冻干，包装，即得冻干粉针剂。实施例9冻干粉针的制备a.取麝香37.5g、郁金150g、栀子150g、冰片5g；b.以上四味，郁金粉碎成粗颗粒，提取挥发油备用；栀子破壳后用8倍量75％乙醇回流提取两次，第一次2小时，第二次1小时，滤过，合并提取液，滤液减压回收乙醇，并浓缩至50℃时相对密度为1.15左右的浸膏，浸膏用HCl调pH值为2～3，煮沸1小时，自然放冷，冷藏24小时后离心，离心液用等量水饱和的正丁醇萃取4次，合并正丁醇萃取液，减压回收正丁醇，并浓缩至相对密度为1.25(50℃)左右的浸膏，真空干燥得栀子提取物；麝香用3倍量95％乙醇连续回流提取3小时，提取液备用；取羟丙基-β-环糊精62.5g，加100ml水使溶解，取郁金挥发油滴加入羟丙基-β-环糊精水溶液中密闭超声5小时，得郁金挥发油HP-β-CD包合物；取羟丙基-β-环糊精250g，加1000ml水使溶解，搅拌，60℃保温备用；取处方量冰片，加入到上述麝香提取液中，搅拌使溶解，得挥发油-冰片-麝香醇溶液；将挥发油-冰片-麝香醇溶液缓慢滴加至羟丙基-β-环糊精水溶液中，60℃下搅拌3小时，室温下继续搅拌5小时，减压回收乙醇至尽后，滤过，得冰片麝香HP-β-CD包合物；将栀子提取物粉碎，加注射用水1000ml使溶解，用NaOH调pH为5～6，煮沸15分钟，冷藏24小时，滤过，滤过液与郁金挥发油HP-β-CD包合物及冰片麝香HP-β-CD包合物混合，加甘露醇100g，用注射用水补足体积至2500ml；用10％NaOH调pH值至6.0～6.5，煮沸，加入0.1％活性炭，80℃保温10分钟，粗滤脱炭，用注射用水调节体积至2500ml，除菌滤过，灌封至10ml西林瓶中，每瓶2.5ml，加丁基橡胶塞，冻干，包装，即得冻干粉针剂。实施例10冻干粉针的制备a.取麝香37.5g、郁金150g、栀子150g、冰片5g；b.郁金粉碎成粗颗粒，提取挥发油备用；栀子用6倍量75％乙醇回流提取2次，每次1.5小时，滤过，合并提取液，滤液减压回收乙醇，并浓缩至50℃时相对密度为1.12～1.20左右的浸膏，浸膏用HCl调pH值为2～4，煮沸1.5小时，冷却，冷藏25小时后离心，离心液用正丁醇萃取4次，合并正丁醇萃取液，减压回收正丁醇，并浓缩至相对密度为1.15～1.30(50℃)左右的浸膏，干燥得栀子提取物；麝香用4.5倍量85％乙醇回流提取2.5小时；取羟丙基-β-环糊精55.5g，加100ml水使溶解，取郁金挥发油滴加入羟丙基-β-环糊精水溶液中密闭超声4小时，得郁金挥发油HP-β-CD包合物；取羟丙基-β-环糊精250g，加1000ml水使溶解，搅拌，60℃保温备用；取处方量冰片，加入到上述麝香提取液中，搅拌使溶解，得挥发油-冰片-麝香醇溶液；将挥发油-冰片-麝香醇溶液缓慢滴加至羟丙基-β-环糊精水溶液中，60℃下搅拌3小时，室温下继续搅拌5小时，减压回收乙醇至尽后，滤过，得冰片麝香HP-β-CD包合物；将栀子提取物粉碎，加注射用水1000ml使溶解，用NaOH调pH为5～6，煮沸15分钟，冷藏24小时，滤过，滤过液与郁金挥发油HP-β-CD包合物及冰片麝香HP-β-CD包合物混合，加甘露醇100g，用注射用水补足体积至2500ml；用10％NaOH调pH值至6.0～6.5，煮沸，加入0.1％活性炭，80℃保温10分钟，粗滤脱炭，用注射用水调节体积至2500ml，除菌滤过，灌封至10ml西林瓶中，每瓶2.5ml，加丁基橡胶塞，冻干，包装，即得冻干粉针剂。实施例11取按照实施例9方式获得的冻干粉针，对每瓶冻干粉针剂中含栀子以栀子苷(C17H24O10)计，进行含量测定；测定方法照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VID)测定；色谱条件和系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.1％磷酸(15∶85)为流动相；检测波长为238nm。理论板数按栀子苷峰计算应不低于3000；对照品溶液的制备精密称取栀子苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.04mg的溶液，摇匀，即得；供试品溶液的制备精密称取本品0.2g，置25ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，得每瓶含栀子以栀子苷(C17H24O10)计，不得少于1.8mg。本发明产品合格。实施例12取按照实施例9方式获得的冻干粉针，对每瓶冻干粉针剂中含冰片以龙脑(C10H18O)计，进行含量测定；测定方法照气相色谱法(中国药典2000年版一部附录VIE)测定；色谱条件与系统适用性试验色谱柱INNOWAX(30m×0.53mm)，柱温100℃，保持2分钟，开始以每分钟15℃的速度升至200℃，保持15分钟。汽化室温度250℃；检测器温度250℃；检测器FID氢火焰离子化检测器，氢气流量30ml/min；空气流量300ml/min；载气高纯度氮气；载气流量20ml/min；进样方式分流比5∶1；理论板数按龙脑峰计算应不低于2000；对照品溶液的制备分别精密称取龙脑、麝香酮对照品适量，分别加二甲基甲酰胺制成每1ml各含0.05mg、0.005mg的溶液，摇匀，即得；供试品溶液的制备取本品2瓶内容物，研碎，精密称取0.1g，置10ml量瓶中，先加蒸馏水1ml，振摇使溶解后，静置半小时，再加二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，即得；测定法精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μl，注入气相色谱仪，测定，得本品每瓶含冰片以龙脑(C10H18O)计，不得少于1.8mg。本发明产品合格。实施例13取按照实施例9方式获得的冻干粉针，对每瓶冻干粉针剂中含麝香以麝香酮(C16H30O)计，进行含量测定；测定方法照气相色谱法(中国药典2000年版一部附录VIE)测定；色谱条件与系统适用性试验色谱柱INNOWAX(30m×0.53mm)，柱温100℃，保持2分钟，开始以每分钟15℃的速度升至200℃，保持15分钟。汽化室温度250℃；检测器温度250℃；检测器FID氢火焰离子化检测器，氢气流量30ml/min；空气流量300ml/min；载气高纯度氮气；载气流量20ml/min；进样方式分流比5∶1；理论板数按龙脑峰计算应不低于2000；对照品溶液的制备分别精密称取龙脑、麝香酮对照品适量，分别加二甲基甲酰胺制成每1ml各含0.05mg、0.005mg的溶液，摇匀，即得；供试品溶液的制备取本品2瓶内容物，研碎，精密称取0.1g，置10ml量瓶中，先加蒸馏水1ml，振摇使溶解后，静置半小时，再加二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，即得；测定法精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μl，注入气相色谱仪，测定，得本品每瓶含麝香以麝香酮(C16H30O)计，不得少于0.2mg。本发明产品合格。权利要求1.一种醒脑静冻干粉针，其特征在于，醒脑静冻干粉针中麝香酮含量为0.1mg～3.0mg/瓶、龙脑含量为1.0mg～5.6mg/瓶、栀子苷含量为1.0mg～6.0mg/瓶、郁金挥发油含量为0.000005ml～0.002245ml/瓶。2.如权利要求1所述醒脑静冻干粉针，其特征在于，醒脑静冻干粉针中麝香酮含量为0.15mg～1.8mg/瓶、龙脑含量为1.4mg～4.7mg/瓶、栀子苷含量为1.5mg～5.6mg/瓶、郁金挥发油含量为0.000055ml～0.001845ml/瓶。3.如权利要求2所述醒脑静冻干粉针，其特征在于，醒脑静冻干粉针中麝香酮含量为0.2mg～1.8mg/瓶、龙脑含量为1.8mg～4.7mg/瓶、栀子苷含量为1.8mg～5.6mg/瓶、郁金挥发油含量为0.000075ml～0.001245ml/瓶。4.如权利要求1～3任一所述醒脑静冻干粉针，其特征在于，冻干粉针剂中，每瓶固形物重量为0.43～0.45g。5.如权利要求4所述醒脑静冻干粉针，其特征在于，冻干粉针剂中，每瓶固形物重量为0.44g。6.一种醒脑静冻干粉针制剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤a.取如下重量份原料药组分麝香15～90、郁金60～300、栀子60～300、冰片1～6；b.以上四味，郁金粉碎成粗颗粒，提取挥发油备用；栀子乙醇回流提取，滤过，合并提取液，回收乙醇，浓缩成浸膏，浸膏用HCl调pH值，煮沸，冷却，冷藏后离心，离心液用正丁醇萃取，合并正丁醇萃取液，减压回收正丁醇，浓缩，干燥得栀子提取物；麝香用乙醇连续回流提取，提取液备用；冰片粉碎备用；按照冻干粉针剂的制备方法，将上述物质制备成冻干粉针剂。7.如权利要求6所述醒脑静冻干粉针制剂的制备方法，其特征在于，步骤b中，郁金粉碎成粗颗粒，提取挥发油备用；栀子用3～14倍量50～99.5％乙醇回流提取1～5次，每次1～10小时，滤过，合并提取液，滤液减压回收乙醇，并浓缩至50℃时相对密度为1.10～1.25左右的浸膏，浸膏用HCl调pH值为1～4，煮沸0.5～3小时，冷却，冷藏12～36小时后离心，离心液用正丁醇萃取2～8次，合并正丁醇萃取液，减压回收正丁醇，并浓缩至相对密度为1.10～1.35(50℃)左右的浸膏，干燥得栀子提取物；麝香用1～8倍量70～99.5％乙醇回流提取1～6小时，提取液备用。8.如权利要求7所述醒脑静冻干粉针制剂的制备方法，其特征在于，步骤b中，郁金粉碎成粗颗粒，提取挥发油备用；栀子用5～10倍量60～85％乙醇回流提取2～3次，每次1～2小时，滤过，合并提取液，滤液减压回收乙醇，并浓缩至50℃时相对密度为1.12～1.20左右的浸膏，浸膏用HCl调pH值为2～4，煮沸0.5～2小时，冷却，冷藏18～30小时后离心，离心液用正丁醇萃取3～5次，合并正丁醇萃取液，减压回收正丁醇，并浓缩至相对密度为1.15～1.30(50℃)左右的浸膏，干燥得栀子提取物；麝香用1～4倍量80～99.5％乙醇回流提取2～4小时。9.如权利要求8所述醒脑静冻干粉针制剂的制备方法，其特征在于，步骤b中，取羟丙基-β-环糊精，加水使溶解，取郁金挥发油滴加入羟丙基-β-环糊精水溶液中密闭超声，得郁金挥发油HP-β-CD包合物；取羟丙基-β-环糊精，加水使溶解，搅拌，保温备用；取处方量冰片，加入到上述麝香提取液中，搅拌使溶解，得挥发油-冰片-麝香醇溶液；将挥发油-冰片-麝香醇溶液缓慢滴加至羟丙基-β-环糊精水溶液中，搅拌，回收乙醇至尽后，滤过，得冰片麝香HP-β-CD包合物；将栀子提取物粉碎，加注射用水使溶解，用NaOH调pH，煮沸，冷藏，滤过，滤过液与郁金挥发油HP-β-CD包合物及冰片麝香HP-β-CD包合物混合，加甘露醇，用注射用水补足体积；用NaOH调pH值，煮沸，加入活性炭，保温，粗滤脱炭，用注射用水调节体积，冻干，即得冻干粉针剂。全文摘要本发明药物涉及一种醒脑静冻于粉针剂及其制备方法，属于中药制药领域。本发明药物由麝香、郁金、栀子、冰片经过一定的提取工艺后制成的有效成分组成。本发明药物具有很好的稳定性，且方法工艺简单。本发明药物具有清热泻火，凉血解毒的功效。主要用于中医辨证属于中风(风痰火亢证)，见半身不遂，口舌呙斜，言语謇涩或不语，感觉减退或消失，头晕目眩，发病突然，心烦易怒，肢强急，痰多而粘；舌红，苔黄腻，脉弦滑的症状。文档编号A61K31/7042GK101085296SQ200610014220公开日2007年12月12日申请日期2006年6月8日优先权日2006年6月8日发明者叶正良,李永强,郑永锋,李瑞明申请人:天津天士力之骄药业有限公司