专利名称：：含有苏云金芽孢杆菌的有害菌防除剂的制作方法
技术领域：
：本发明涉及含有苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis)的有害菌防除剂、以及含有其的药品、食品以及饲料。
背景技术：
：胃肠的微生物菌群对于维持胃肠道的功能以及全身的生理健康起到许多极其重要的作用。益生菌疗法显示出了积极使用对健康有益的微生物。益生菌会存活着到达宿主的肠，增强肠内的微生物菌群，有助于消化活动。此外，这些益生菌的"细菌拮抗作用"、"细菌干扰"、"屏障作用"、"阻碍停留"、"竞争排除(競合的排除)"等的作用和性质，改善肠道的微生物菌群的平衡，抑制有害的系统微生物的增殖。由于此种益生菌无法恒定地在宿主的消化道内形成菌群，因此，要维持益生菌的效果，必须定期进行摄取。近年来，乳酸菌以及双歧杆菌被作为益生菌广泛使用，这些细菌被广泛使用于酸奶及其他乳制品中。此外，在畜牧业、宠物产业等领域，为了通过辅助动物的消化活动、增强肠内细菌、抑制肠内有毒细菌的增殖，从而促进动物的生长，益生菌细菌的使用也得到了扩大。要将细菌作为益生菌使用，需要达到以下要求对于胃液、胆汁酸等有耐受性、具有存活着到达肠的能力；不仅在需氧的小肠上部、还在厌氧的小肠下部和大肠中也具有增殖能力；对于宿主带来有益的作用；在药品或食品形态中可维持一定以上的菌数；安全。此种技术背景下，人们在研究除乳酸菌以及双歧杆菌以外的可用作益生菌的细菌。例如，有报告(专利文献1)提出添加对于哺乳动物具备胆汁酸耐受性的凝结芽孢杆菌(Bacilluscoagulans)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtillis)、克劳氏芽孢杆菌(Bacillusclausii)。j乍为人用的益生菌，iJ用的有B.coagulans,B.subtills,B.clausii,B.cereus,B.licheniformis,B.pumilus,B.polymyxa,B.vietnami,B.polyfermenticus(非专利文献l)。此夕卜，所矢口的还有具备胆汁酸耐受性的芽孢杆菌属细菌(专利文献2、专利文献3、非专利文献2)和乳杆菌属细菌(专利文献4)等。另一方面，对于肠内感染症和皮肤损伤部位引起的感染症也存在问题。引起此种感染症的病原菌，随时寻求用于停留在动物体内的合适位置。一般，即使是在病原菌侵入体内4的情况下，也会被宿主的生物防御组织排除，或被其他的细菌抑制增殖。另一方面，也存在例如，如幽门螺杆菌和绿脓杆菌一样增殖到一定菌数、停留在动物肠内，在宿主中引起慢性疾病的细菌。此种细菌在附着至皮肤、粘膜、侵入肠内等初期增殖过程中不被宿主的生态防御组织感知，直到细菌密度充分高涨之后，一举生成各种病原性因子，破坏组织。实现这些的构造是通过细菌自身产生的自体诱导因子的信号传递组织(cdl-to-cellsignaling),即细菌自体诱导组织(菌体密度感知组织)。该组织在弧菌属细菌(Vibriofischeri)的培养中，通过发现随着细菌的增殖而产生荧光物质的现象而被发现(非专利文献3)，之后，在以绿脓杆菌(Pseudomonas)为首的许多病原菌中也发现了此组织，事实表明，病原因子的表达(発現)得到了控制。此外，除了假单胞菌属以外，也有报告提出伯克霍尔德菌(Burkholderia)属、肠杆菌(Enterobacter)属、弧菌(Vibrio)属、沙雷氏菌(Serratia)属、沙门氏菌(Salmonella)属等许多临床上重要的细菌具备有自体诱导组织(日文自己誘発機構)(非专利文献4)。担当此种细菌自体诱导组织的信号传递的是细菌自体诱导因子，作为革兰氏阴性细菌的细菌自体诱导因子，酰基高丝氨酸内酯被广泛保存。细菌自体诱导因子是可以自由通过细菌外膜的分子，当环境中的细菌密度较低时，自体诱导因子浓度较低，不显示出生物活性。但是，随着细菌的增殖、环境中的细菌密度增高，细菌内外的自体诱导因子浓度也增高，当其到达一定的阈值时，会促进各种病原因子等的目的基因的表达。作为预防和治疗此种病原菌引起的感染症，有报告提出了通过向动物经口喂食细菌自体诱导因子失活蛋白质、或向动物细胞中导入编码细菌自体诱导因子失活蛋白质的核酸序列，表达该核酸序列，令病原菌的细菌自体诱导因子失活，抑制病原因子产生的方法(专利文献5)。但是，向动物经口喂食细菌自体诱导因子失活蛋白质的方法存在该蛋白质在通过胃的过程中被消化分解、无法到达肠道的问题。此外，核酸序列的导入很难适用于人类和已经成年的人类以外的动物。此外，产气荚膜梭菌(Clostridiumperfringens)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)作为引起人类食物中毒、家禽和家畜腹泻症的病原菌；蜡状芽孢杆菌(Bacilluscereus)作为引起人类食物中毒的病原菌；猪链球菌(Streptococcussuis)作为引起人类神经症状、引起家禽和家畜腹泻症和神经症状的病原菌而成为问题。这样的细菌为属于革兰氏阳性细菌的病原菌，人们在寻求由此种病原菌引发的感染症的对策。此外，作为对于革兰氏阳性细菌有拮抗性的细菌，有报告提出，可有效治疗与艰难梭菌关联的腹泻的双歧杆菌(专利文献6)和对于葡萄球菌属和梭菌属的有害菌有抗菌作用的B.subtilis(专利文献7)。但是，这些细菌无足以预防、治疗上述的感染症。在这样的技术背景下，人们探求作为益生菌、在消化道内具有优异的增殖能力、且有预防、治疗大范围的属于革兰氏阳性细菌的病原菌引起的感染症的新菌种。另外，也有报告提出，苏云金芽胞杆菌(Bacillusthuringiensis)抑制依存于属于植物病原菌的软腐欧文氏菌(Erwiniacarotovora)的菌体密度感知组织(quorum-sensingdependent)的病原性(非专利文献5)。具体地，苏云金芽胞杆菌会产生分解菌体密度感知信号因子(酰基高丝氨酸内酯(AHL))的酶一AHL-内酯酶(lactonase)，抑制AHL的积蓄。此种苏云金芽胞杆菌作为安全的微生物杀虫剂广泛地被农业生产的场所接受，但尚未对向人类等动物投与进行研究。此外，有报告提出，对于寄生于植物或动物宿主的线虫、吸虫和原虫，苏云金芽胞杆菌生成的结晶蛋白质具有杀虫活性(专利文献8、专利文献9)。但是，在这里仅显示出了苏云金芽胞杆菌对于从动物肠内分离出来的线虫等具有杀虫性，没有确认实际向人类等动物经口喂食时的效果和安全性。艮卩，截至目前，完全没有研究过用含有苏云金芽胞杆菌的药品来预防、治疗病原菌引起的感染症，或通过摄取含有苏云金芽胞杆菌的食品、使动物摄取含有苏云金芽胞杆菌的词料，来抑制肠道内存在的有害菌的增殖，改善肠内菌群的平衡，预防、治疗感染症。专利文献h特表2005-507670号公报专利文献2:特开平5-268944号公报专利文献3:国际公开第96/024659号公报专利文献4:特表2004-523241号公报专利文献5:特表2003-504028号公报专利文献6:特开2005-508617号公报专利文献7:特开平11-285378号公报专利文献8:特开2002-34582号公报专利文献9:美国专利第5468483号公报非专利文献1:Senesi,S.,BacillusSporesasProbioticProductsforHumanUse,Bacterialsporeformers,2004,pp.131-141,Rica,E.,Henriques,A.O.,andCutting,S.M.(eds),HorizonBioscience,WymondhamNorfolkNR18OJAU.K.非专禾U文献2:Hyronimus,B.etal.，InternationalJournalofFoodMicrobiology,2000,61,pp.193-197非专利文献3:Kaplan,H.etal"JournalofBacteriology,1985，163,pp.1210-1214非专利文献4:Tateda，k..，TheLungPerspectives,2005，13，pp.261-265非专禾廿文献5:Yi-Hu-Dongetal.，AppliedandEnvironmentalMicrobiology,2004,70，pp.954-960
发明内容本发明的目的在于提供一种用于通过抑制有害菌的增殖，改善肠内菌群的平衡，促进整肠，预防、治疗感染症的方法，是对于以人类为首的动物可安全且简便地使用方法。具体的，本发明的课题在于提供一种通过向人类和家禽、家畜等喂食来预防、治疗病原菌引起的感染症的药品；此外，提供一种通过定期的摄取，抑制有害菌的增殖，改善肠内菌群的平衡，用于进一步预防、治疗感染症的食品以及词料。本发明人为了完成上述课题，探求具有防除有害菌能力的细菌种，对于其有效性以及对于动物的安全进行了研究，结果发现苏云金芽胞杆菌具有抑制有害菌的增殖的能力，具备作为益生菌的有用特性。此外，通过经口喂食苏云金芽胞杆菌的细菌孢子，细菌孢子可存活着通过胃，不会被胆汁酸杀灭，并在肠内发芽、增殖，从而抑制病原菌的增殖，改善肠内菌群的平衡，预防、治疗肠内感染症。艮P，本发明如下。(1)一种含有苏云金芽胞杆菌(Bacillusthuringiensis)的有害菌防除剂。(2)如(1)所述的有害菌防除剂，其特征在于，上述苏云金芽胞杆菌具备胆汁酸耐受性。(3)如(1)或(2)所述的有害菌防除剂，其特征在于，上述苏云金芽胞杆菌还具有细菌自体诱导因子失活能力。(4)如(1)~(3)任意一项所述的有害菌防除剂，苏云金芽胞杆菌包括苏云金芽胞杆菌苏云金亚种(Bacillusthuringiensissubsp.thuringiensis)BGSC4A3株、苏云金芽胞杆菌库斯塔克亚种(Bacillusthuringiensissubsp.kurstaki)BGSC4D1株、苏云金芽胞杆菌鲇泽亚种(Bacillusthuringiensissubsp.aizawai)BGSC4J4株、苏云金芽胞杆菌以色列亚种(Bacillusthuringiensissubsp.israelensis)BGSC4Q7株、或它们的变异株。(5)如(1)~(4)任意一项所述的有害菌防除剂，其特征在于，上述有害菌为引起感染症的病原菌。(6)如(1)~(5)任意一项所述的有害菌防除剂，上述病原菌为属于革兰氏阴性细菌的病原菌。(7)如(6)所述的有害菌防除剂，上述属于革兰氏阴性细菌的病原菌至少是沙门氏菌(Salmonella)属菌、弯曲杆菌(Campylobacter)属菌、弧菌(Vibro)属细菌、耶尔森(Yersinia)属细菌、气单胞菌(Aeromonas)属细菌、假单胞菌(Pseudomonas)属细菌、大肠杆菌、志贺氏菌的l种。(8)如(1)~(5)任意一项所述的有害菌防除剂，上述病原菌为属于革兰氏阳性细菌的病原菌。(9)如(8)所述的病原菌防除剂，其特征在于，属于上述革兰氏阳性细菌的病原菌至少是梭菌(Clostridium)属细菌、芽孢杆菌(Bacillus)属细菌、葡萄球菌(St叩hylococcus)属细菌、链球菌(Streptococcus)属细菌、李斯特菌(Listeria)属细菌中的1种。(10)—种药品，含有如(1)~(9)的任意一项所述的有害菌防除剂。(11)如(10)所述的药品，其特征在于，所述药品用于预防、治疗病原菌引起的感染症。(12)如(10)或(11)所述的药品，其特征在于，所述药品用于人。(13)如(10)或(11)所述的药品，其特征在于，所述药品用于人以外的动物。(14)一种食品，其特征在于，含有(1)~(9)任意一项所述的有害菌防除剂。(15)—种饲料，其特征在于，含有(1)~(9)任意一项所述的有害菌防除剂。(16)如(15)所述的饲料，其特征在于，所述饲料用于预防、治疗动物的肠内感染症。(17)—种动物的词养方法，其特征在于，工序为使动物摄取(15)或(16)所述的饲料。此外，本发明提供一种有害菌的防除方法，该方法包含在有害菌的防除剂制造中使用苏云金芽胞杆菌、以及向需要防除有害菌的动物喂食苏云金芽胞杆菌。另外，上述使用以及方法中的优选方式与有害菌的防除剂相同。具体实施例方式本发明的有害菌防除剂的特征是含有苏云芽胞金杆菌(Bacillusthuringiensis)。本发明中，有害菌指的是，通过在动物的肠内等消化器官内增殖，对动物造成不好影响的菌和细菌。例如，可举出的有，通过在肠内增殖，引起消化不良、腹泻、软便、便秘等的细菌;通过在肠内产生病原因子，引起肠内感染症的病原菌等。所谓抑制有害菌的增殖，是例如8通过苏云金芽胞杆菌的细菌拮抗作用、细菌干扰、屏障作用、苏云金芽胞杆菌细菌的阻碍有害菌在肠道细胞停留、竞争排除等，抑制有害菌在动物体内停留和增殖。用于本发明的有害菌防除剂的苏云金芽胞杆菌是在Bergey'sManualofDeterminativeBacteriology的第9版(1994)中被分类为"苏云金芽胞杆菌(Bacillusthuringiensis)"的细菌。用于本发明的有害菌防除剂的苏云金芽胞杆菌的亚种并无特别限制。可以优选使用例如，苏云金芽胞杆菌苏云金亚种(Bacillusthuringiensissubsp.thuringiensis)、苏云金芽胞杆菌库斯塔克亚种(Bacillusthuringiensissubsp.kurstaki)、苏云金芽胞杆菌鲇泽亚种(Bacillusthuringiensissubsp.aizawai)、苏云金芽胞杆菌以色歹ll亚禾中(Bacillusthuringiensissubsp.israelensis)等。其中，优选使用例如，苏云金芽胞杆菌苏云金亚种BGSC4A3株、苏云金芽胞杆菌库斯塔克亚种BGSC4D1株、苏云金芽胞杆菌鲇泽亚种BGSC4J4株、苏云金芽胞杆菌以色列亚种BGSC4Q7株等。BGSC4A3、BGSC4D1、BGSC4J4、BGSC4Q7为登记在BacillusGeneticStockCenter(BGSC)(TheDepartmentofBiochemist)的菌株。此外，本发明的有害菌防除剂中可以使用BGSC4A3、BGSC4D1、BGSC4J4、BGSC4Q7的变异株。作为变异株，可以使用上述各菌株自然变异所得或各菌株通过化学变异剂或紫外线等进行变异处理所得的物质。本发明中，优选从这样的变异株中使用至少具备与上述各菌株相同的胆汁酸耐受性、细菌自体诱导因子失活能力、杀菌活性、兼性厌氧性、耐酸性中的一种的变异株。对于它们的菌学性质，将在后文叙述。此外，也可优选使用上述以外的菌学性质也与上述各菌株相同的变异株。另外，也可优选使用显示出与上述各菌株相同的有害菌防除能力的上述各菌株的变异株。本发明的有害菌防除剂所使用的苏云金芽胞杆菌优选具备胆汁酸耐受性。所谓"胆汁酸耐受性"，是指在含有高浓度胆汁酸的培养基中，形成具有发芽、增殖能力的孢子。作为胆汁酸，是指哺乳类、鸟类、爬虫类、两栖类、鱼类的胆汁中被广泛发现的4环结构的类固醇，包含胆酸、鹅脱氧胆酸、脱氧胆酸、石胆酸以及熊去氧胆酸。一般，在动物体内，胆汁酸以胆汁中甘氨酸或牛磺酸与酰胺结合的结合型存在，为钠盐。本说明书中简单称为"胆汁酸"时，包含上述胆汁酸以及它们的盐和它们的结合体。含有高浓度胆汁酸的培养基是指，可举例的有，含有将新鲜胆汁10倍浓縮、干固的胆汁末(Oxgall、Difco制)的培养基，胆汁末的浓度在0.3质量％以上，优选1质量％以上，更优选3质量％以上。此外，"具备发芽、增殖能力"指是指，在含有如上述的高浓度胆汁酸的培养基中接种孢子，除胆汁酸浓度以外，其他条件均为适宜培养苏云金芽胞杆菌的条件下，细菌发芽、再次开始增殖分裂、形成菌落。具备胆汁酸耐受性的苏云金芽胞杆菌可通过例如下述而得到。在适宜形成孢子的条件下培养含有苏云金芽胞杆菌的分离源，使之形成孢子。将得到的孢子接种到添加上述高浓度胆汁酸的培养基，培养后，分离所形成的菌落。从该菌落中，选拔具有苏云金芽胞杆菌的菌学性质的。本发明的有害菌防除剂中使用的苏云金芽胞杆菌优选使用具备细菌自体诱导因子失活能力的细菌。"细菌自体诱导因子"是指，担当细胞自体诱导组织的细胞间传递的信号分子，在细菌增殖时促进产生特定物质的基因的表达的信号分子。作为细菌自体诱导因子，可举出的有，例如，N-丁酰基-L-高丝氨酸内酯(BHL)、N-(3-羟基丁酰基)-L-高丝氨酸内酯(HBHL)、N-(3-氧代丁酰基)-L-高丝氨酸内酯(OBHL)、N-己酰基-L-高丝氨酸内酯(HHL)、N-(3-氧代己酰基)-L-高丝氨酸内酯(OHHL)、N-辛酰基-L-高丝氨酸内酯(OHL)、N-(3-氧代辛酰基)-L-高丝氨酸内酯(OOHL)、N-(3-氧代癸酰基)-L-高丝氨酸内酯(ODHL)、N-(3-氧代十二垸酰基)-L-高丝氨酸内酯(OdDHL)。"具备细菌自体诱导因子失活能力"指的是，例如具有产生细菌自体诱导因子的分解酶的能力。"产生酶"指的是，在培养菌体时，以可从培养基中检测出酶活性的程度产生酶。此外，"具备细菌自体诱导因子失活能力"指的是，抑制由细菌自体诱导因子诱导的病原性因子等的特定物质产生。细菌自体诱导因子失活能力可通过例如下述方法确认。将苏云金芽胞杆菌检体在含有细菌自体诱导因子的培养液中培养，将该培养液添加至接种了具有细菌自体诱导组织的细菌的培养基，培养了一定时间时，用适当的标记物确认含有细菌自体诱导组织的细菌是否受到细菌自体诱导因子的影响而产生特定物质。检测出特定物质时，表明细菌自体诱导因子未失活，另一方面，未测出特定物质时，表明细菌自体诱导因子失活，未诱导细菌自体诱导组织。作为含有细菌自体诱导组织的细菌，可使用例如，细菌自体诱导因子达到一定浓度时产生色素物质的细菌种。例如可举出的试验方法有，将苏云金芽胞杆菌检体在含有OHHL的培养液中培养一定时间后，将培养液添加到生长有利用细菌自体诱导组织而合成紫色色素(紫色杆菌素、violacdn)的紫色色杆菌(Chromobacteriumviolaceum)的细菌自体诱导因子生合成基因缺损株的培养基中，试验有无紫色杆菌素的诱导(McClean,K.etal,Microbiology,1997,143,pp.3073-3711)。本发明的有害菌防除剂所使用的苏云金芽胞杆菌更优选可在厌氧条件下增殖的兼性厌氧性者。所谓厌氧条件指的是，例如，动物肠内所含气体中的氧浓度以下的条件。实验室中指的是，例如，20'C下测定的氧化还原电位通常在-10mV以下，优选-50mV以下的条件。氧化还原电位可使用一般的市售的氧化还原电位计测定。由于人类的消化道是微需氧条件或厌氧条件，因此通过使用此种细菌，在肠道环境下细菌也可充分增殖。本发明的有害菌防除剂所使用的苏云金芽胞杆菌更优选耐酸性者。通过使用此种细菌，即使是在胃的内部，细菌也不会杀灭，可到达肠。"耐酸性"指的是，将细菌喂食给动物时，可维持在胃内部条件下(摄取了食物的状态下通常为pH3.56)也不会被杀灭、到达肠后维持可增殖的程度的菌数。由于苏云金芽胞杆菌的孢子通常为耐酸性，因此使用孢子时一般不会产生问题。苏云金芽胞杆菌细菌在胃的内部也不会杀灭、可到达肠，可以通过例如测定排泄物中的菌体浓度来确认。本发明的有害菌防除剂所使用的苏云金芽胞杆菌的培养方法并无特别限制，可根据细菌的性质在适当条件下以一般的方法进行。例如，培养温度可以在1545X:下培养，但优选2042'C，更优选25'C38'C。此外，培养方法也可以使用静置培养、往复式振荡培养、旋转式振动培养、发酵罐培养等液体培养法或固体培养法。培养所使用的培养基成分也无特别限制，作为碳源可使用葡萄糖、半乳糖、乳糖、阿拉伯糖、甘露糖、蔗糖、淀粉、淀粉水解物、蜜糖等糖类、柠檬酸等有机酸类、甘油等醇类，作为氮源可使用氨、硫酸铵、氯化铵、硝酸铵等铵盐类和硝酸盐类，此外，可使用氯化钠、氯化钾、磷酸钾、硫酸镁、氯化钙、硝酸钙、氯化锰、硫酸亚铁等的无机盐类、胨、大豆粉、脱脂大豆粕、肉汁、酵母汁等。本发明的有害菌防除剂所使用的苏云金芽胞杆菌，从保存稳定性、耐酸性观点来看，优选孢子状态。孢子状态下，耐热、耐干燥，因此可在制造药品、食品以及饲料时进行充分干燥，提高保存稳定性。为了令细菌形成孢子，在培养周期中，可调整培养基的组成、培养基的pH、培养温度、培养湿度、培养时的氧浓度等培养条件，令其适于孢子形成条件。作为此种方法，可举出例如，Schaeffer,R,J.Millet,J.P.Aubert,ProceedingsoftheNationalAcademyofScience,US,1965,54,pp.704-711记载的方法。此外，通过上述方法得到的培养物或菌体，从保存性的观点来看，优选呈干燥粉末。干燥可以通过，例如，优选令有害菌防除剂的水分含量在20质量％以下来进行。干燥方法并无特别限制，可举出的有，自然干燥、通风干燥、喷雾干燥、冻结干燥等，但其中优选使用喷雾干燥以及通风干燥。干燥时，可以使用脱脂粉乳、谷氨酸钠以及糖类等保护剂。使用糖类时，可使用葡萄糖或海藻糖。此外，干燥后，优选在得到的干燥物中加入脱氧剂、脱水剂，放入阻气性的铝袋密封，在室温至低温下储藏。这样，可以令细菌长期存活保存。本发明的有害菌防除剂可以理想地用于有害菌中的特别是引起感染症的病原菌的防除。作为此种病原菌，可举出的有，属于革兰氏阴性细菌的病原菌的引起肠内感染症的弧菌(Vibrio)属、沙门氏菌(Salmonella)属、弯曲杆菌(Campylobacter)属、耶尔森菌(Yersinia)属、气单胞菌(Aeromonas)属的细菌、大肠杆菌(Escherichiacoli)、志贺氏菌(Shigella)。作为属于弧菌属的细菌，可举出的有，副溶血弧菌、霍乱弧菌等。作为属于沙门氏菌属的细菌，可举出的有，鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌、鸡沙门氏菌、猪伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、德贝沙门氏菌、都柏林沙门氏菌等。作为属于弯曲杆菌属的细菌，可举出的有，空肠弯曲杆菌、结肠弯曲杆菌、胎儿弯曲杆菌等。作为属于耶尔森菌属的细菌，可举出的有，小肠结肠炎耶尔森菌(Y.enterocolitica)、假结核耶尔森菌等。作为属于气单胞菌属的细菌，可举出的有，嗜水气单胞菌、豚鼠气单胞菌、维罗纳气单胞菌(A.veronii)、简达气单胞菌、舒伯特气单胞菌(A.schubertii)等。作为大肠杆菌，可举出的有，肠侵袭性大肠埃希菌(enteroinvasiveE.coli:EIEC)、肠产毒性大肠杆菌(enterotoxigenicE.coli:ETEC)、肠致病性大肠杆菌(enteropathogenicE.coli:EPEC)、产志贺毒素大肠埃希菌(ShigatoxinproducingE.coli:STEC)、肠聚集性大肠杆菌(EnteroaggregativeE.coli:EAEC)等。作为志贺氏菌，可举出的有，痢疾志贺氏菌、福氏志贺氏菌、鲍氏志贺氏菌、宋内志贺氏菌等。此外，作为在皮肤、角皮、粘膜等处增殖、引起感染症的病原菌，可举出的有，属于假单胞菌(Pseudmonas)属的细菌。作为此种细菌，可举出例如绿脓杆菌。此外，本发明的有害菌防除剂也可以理想地用于属于革兰氏阳性细菌的病原菌。作为此种病原菌，可举出例如，属于梭菌(Clostridium)属、芽孢杆菌(Bacillus)属、葡萄球菌(Staphylococcus)属、链球菌(Streptococcus)属、李斯特菌(Listeria)属的细菌。作为属于梭菌属的细菌，可举出的有，产气荚膜梭菌(C.perfringens)、艰难梭菌(C.difficile)、肉毒梭菌(C.botulinum)等。作为属于芽孢杆菌属的细菌，可举出蜡状芽孢杆菌等。作为属于葡萄球菌属的细菌，可举出金黄色葡萄球菌等。作为属于链球菌属的细菌，可举出的有，猪链球菌、化脓性链球菌(S.pyogenes)等。本发明的有害菌防除剂，可以通过适当添加一般药品所使用的载体和增量剂等任意成分，制成制剂，作为用于防除有害菌的药品。本发明的药品特别理想地用于预防、治疗病原菌引起的感染症。药品的剂形可根据投药的部位、作为预防治疗对象的疾病等适当选择使用。以下对于具体的医药的用途、剂形进行说明。本发明的药品可用作改善肠内菌群平衡的整肠剂，用于预防、治疗病原菌引起的肠内感染症。作为此时的药品的剂形，可举出的有，经口喂食用的片剂、颗粒剂、粉剂、胶囊剂等固体制剂以及水溶剂、浆剂、或用于非经口投与的注射剂、栓剂、经皮吸收剂等。此外，用于结肠清洗的也可以是用于通过灌肠投与的水溶剂。此时，可以通过将苏云金芽胞杆菌与生理盐水混合而制造。此外，本发明的药品可以抑制皮肤和粘膜的有害菌的增殖，可用于预防、治疗皮肤和粘膜的感染症。具体地，本发明的药品可以抑制口腔细菌的增殖，可用于预防蛀牙、牙龈炎等牙周部疾病和口臭。作为此时的药品的剂形，可优选举出的有，可咀嚼的片剂、磨牙剂、漱口药、口腔滴剂等。另外，本发明的药品可用于防除皮肤和角皮的病原菌。特别适用于促进皮肤损伤的治愈。作为此时的药品的剂形，可举出的有，软膏剂、膏、喷雾、洗剂、凝胶、粘贴剂等。此外，本发明的药品可用于改善阴道内菌群，预防、治疗病原菌对阴道的感染。通过改善阴道内菌群，可期望预防阴道的酵母菌感染和细菌性阴道疾病。作为此时的药品的剂形，可举出的有，膏、洗剂、凝胶等。此外，本发明的药品也可用于眼、鼻腔、耳的炎症，此时也可适当选择剂形。本发明的药品除了苏云金芽胞杆菌，还可以含有具有抑制其它有害菌增殖的作用的成分。这些成分只要不会杀灭苏云金芽胞杆菌，确认其对动物的安全性，则无特别限制。本发明的药品中的苏云金芽胞杆菌的菌体浓度可根据药品的用途和剂形，使用与投药有效量适应的浓度。一般为lX104~lX1012CFU/g，优选lXl()5lX10"CFU/g，更优选1X106~lX101()CFU/g的范围。本发明的药品可投药于人类及人类以外的动物。此时的投与方法也只要根据药品的剂形、用途、投与对象的年龄、性别、体重、健康状况、适用部位的病患的状态等，用适当的方法进行即可，以便可以投与有效量的苏云金芽胞杆菌。例如，以促进整肠和预防、治疗肠内感染症为目的经口投与时，一般优选1X105~1X10mCFU/kg体重/日的范围内喂食苏云金芽胞杆菌。此外，在皮肤、角皮、粘膜中处于防除病原菌的目的而外用时，可根据涂抹范围适当调节，但一般优选1X10SlX10"CFU/101000mg/日的范围内投与苏云金芽胞杆菌。13本发明的有害菌防除剂可通过添加、混合至饮料食品，或适当添加一般饮料食品所使用的任意成分并加工，制成具备改善肠内菌群平衡的效果、整肠效果的食品或具备预防、治疗肠内感染症的效果的食品。任意成分和食品的形态只要不会杀灭苏云金芽胞杆菌菌体，则无特别限制，只要是一般食品中所使用的，则无特别限制。例如，可以可加工为健康饮料或粉末、片剂、胶囊等的增补剂。此外，也可使用于面包类、面类、饼干、巧克力、糖果等的点心类、袋泡茶类、麦片粥等的热谷物、汤类、热饮料、甜味料、调味料、香味料、速溶咖啡、干奶油等干燥制品或冻结干燥制品、火腿、香肠等的畜肉加工品、鱼糕、鱼肉山芋饼等水产加工品。本发明的食品，从保存稳定性的观点来看，特别优选增补剂的形态。本发明的食品中的苏云金芽胞杆菌的菌体浓度只要是适于摄取有效量的范围即可，可根据食品的形态进行选择。例如，通常优选将苏云金芽胞杆菌设为lX105~lX101QCFU/kg体重/日的范围的适于摄取的范围。作为此种浓度，例如可举出，苏云金芽胞杆菌的菌体浓度为1X104~1X1012CFU/g，优选1X105~1X10nCFU/g，更优选1X106~1X1010CFU/g的范围。此外，本发明的食品的制造，除了混合本发明的有害菌防除剂以外，也可根据一般的食品加工的方法进行。例如，本发明的有害菌防除剂为粉末状、固体状时，为了易与食品成分混合，可以作为液状或凝胶状形态使用。此时，可将水、大豆油、菜籽油、玉米油等植物油、液体动物油、聚乙烯醇或聚乙烯吡咯垸酮、聚丙烯酸等的水溶性高分子化合物作为液体载体使用。另外，为了保持食品中的菌体浓度的均一性，也可添加藻酸、藻酸钠、苍耳烷胶、酪蛋白钠、阿拉伯胶、瓜尔胶、罗望子种子多糖类等水溶性多糖类。此外，为了防止杂菌繁殖，也可添加丙酸、抗坏血酸、柠檬酸等有机酸，令液体生菌剂为酸性。本发明的有害菌防除剂可作为添加、混合至饲料的饲料添加剂。该饲料添加剂可以添加、混合至词料中使用。此外，本发明的有害菌防除剂，通过与一般饲料中所使用的任意成分共同加工，可用于改善肠内菌群平衡、促进整肠、促进生长(增加体重)的饲料和用于预防、治疗肠内感染症的饲料。此时的任意成分和词料形态只要不会杀灭苏云金芽胞杆菌的菌体，则无特别限制，可使用作为普通家畜饲料或宠物食品、动物用增补剂等动物饲料所使用的成分和形态。本发明的饲料中的有害菌防除剂的含量为摄取有效量所适宜的范围，可以根据投与动物的种类、体重、年龄、性别、使用目的、健康状态、词料成分等进行适当调节。例如，一般优选lX105lX10^CFU/kg体重/日的范围内摄取苏云金芽胞杆菌。作为此种浓度，例如可举出，苏云金芽胞杆菌的菌体浓度为lX104~lX1012CFU/g，优选1X105~1X10"CFU/g，更优选1X106~1X101GCFU/g的范围。此外，本发明的饲料可直接通过混合本发明的有害菌防除剂而制造，但添加、混合粉末状、固体状的有害菌防除剂时，也可与食品加工相同地使用液状或凝胶状的形态。摄取本发明的饲料的动物种类并无特别限制，可举出例如，哺乳类、鸟类、爬虫类、两栖类、鱼类等。其中特别优选用于选自鸡、鸭、鹌鹑以及火鸡(于乂y千3々)的家禽、选自猪、牛、羊以及兔的家畜。动物摄取的饲料量可根据动物的种类、根据体重、年龄、性别、使用目的、健康状态、词料成分等进行适当调节。此外，作为预防、治疗动物的肠内感染症的方法，只要使动物摄取在饲料成分内添加了本发明的有害菌防除剂的饲料即可，该投与方法和动物的饲养方法可通过一般动物的饲养所使用的方法进行。实施例U)胆汁酸耐受性以及厌氧性的试验在脱离子水1,000ml中加入35g普通琼脂培养基"二'7^^"(日水制药株式会社制造)，用高压锅灭菌。灭菌后冷却至45'C后，加入用纤维素混合酯式膜滤器(孔径0.45um、7卜"o于7夕东洋株式会社制造)过滤灭菌的胆汁末(Oxgall、Difco制造)，制作添加了胆汁末浓度为0.3质量％、1质量％以及3质量％的的普通琼脂平板培养基。将属于苏云金芽胞杆菌的BGSC4A3、BGSC4D1、BGSC4J4以及BGSC4Q7各自接种到未添加胆汁末的普通琼脂平板培养基(去离子水l，OOOml、"二'7^4"35g)，37°C下培养一夜。培养后，从形成于平板培养基的菌落中分离菌体，用经过灭菌的接种环接种至上述制作的添加胆汁末的平板培养基。37'C下培养2天，确认有无形成菌落(实施例14)。此外，为了确认BGSC4A3、BGSC4D1、BGSC4J4以及BGSC4Q7在厌氧条件下的增殖能力，在上述制作的未添加胆汁末的平板培养基中接种各菌株，使用7氺口八"、乂夕少>年(三菱gas化学株式会社制造)，在厌氧条件下37。C培养2天，确认有无形成菌落。另一方面，将凝结芽孢杆菌(Bacilluscoagulans)ATCC8038株、凝结芽孢杆菌NBRC12583株、凝结芽孢杆菌DSM2312株、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)NBRC3009株、枯草芽孢杆菌NBRC3025株、枯草芽孢杆菌NBRC3108株、枯草芽孢杆菌NBRC3336株、克劳氏芽孢杆菌(Bacillusclausii)DSM2512株、克劳氏芽孢杆菌DSM2515株、克劳氏芽孢杆菌DSM2525株、以及克劳氏芽孢杆菌DSM8716株各自相同地接种至未添加胆汁末的培养基，37。C培养2天。此外，相同地进行厌氧条件下的增殖试验(比较例1~11)。ATCC8038为登记在AmericanTypeCultureCollection(ATCC);NBRC12583、NBRC3009、NBRC3025、NBRC3108、以及NBRC3336为登记在独立行政法人产品评价技术基础机构的生物遗传资源部门(NBRC);DSM2312、DSM2512、DSM2515、DSM2525、以及DSM8716为登记在DeutscheSammlungvonMikroorganismenundZellkulturenGmbH(DSMZ)的株。结果如表1所示。[表l]表l<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>+:确认形成有菌落。±:确认形成有微量菌落。-:确认未形成菌落。已确认，实施例1~4的苏云金芽胞杆菌在胆汁末浓度为0.3质量％、1质量％以及3质量％的普通琼脂平板培养基中全部形成了菌落，在厌氧条件下也可以增殖。另一方面，已确认，比较例1~3的凝结芽孢杆菌虽然可以在厌氧条件下增殖，但在胆汁末浓度为0.3质量％的普通琼脂培养基平板中仅生成微量的菌落，在胆汁末浓度为1质量％以及3质量％下完全没有形成菌落，显示出低于实施例1~4的苏云金芽胞杆菌的胆汁酸耐受性。此外，比较例47的枯草芽孢杆菌虽然对胆汁酸显示出耐受性，但在厌氧条件下不能增殖。此外，比较例8~11的克劳氏芽孢杆菌DSM2512、DSM2515、DSM2525、DSM8716虽然对胆汁酸显示出耐受性，但在厌氧条件下不能增殖。(2)细菌自体诱导因子失活能力的试验使用破坏了细菌自体诱导因子产生基因的紫色色杆菌(Chromobacteriumviolaceum)CV026株，进行确认有无细菌自体诱导组织的诱导的试验(McClean,K.etal.,Microbiology,143,3703-3711(1997))。CV026株是作为细菌自体诱导因子的N-己酰基-L-高丝氨酸内酯(HHL)的生物合成基因被破坏的菌株，若不从外部添加HHL等的酰基高丝氨酸内酯(AHL)，则无法表达细菌自体诱导组织，因此无法合成紫色的色素(紫色杆菌素、violacein)。作为AHL，除HHL以外，添加N-(3-氧代己酰基)-L-高丝氨酸内酯(OHHL)，也可以表达细菌自体诱导组织。本试验的具体方法如下。将紫色色杆菌(Chromobacteriumviolaceum)CV026株接种至Luria-Bertani(LB)培养基，28'C中振荡培养一夜。接着，在高压锅灭菌后冷却至45'C的半流动LB琼脂培养基(0.3%)5ml中，加入上述得到的CV026的培养液5(Hd、经过过滤灭菌的卡那霉素2%水溶液5(^1,将该半流动LB琼脂培养基5ml与事先准备在直径的9cm的平皿上的LB琼脂培养基重叠。令琼脂固化后，用穿孔器(3》夕求一，一)在LB琼脂培养基上打开直径6mm的孔。此外，CV026是作为NCTC13278登记在NationalCollectionofTypeCultures(NCTC)中的菌株。在LB培养基10ml中加入500pM的OHHL(Sigma制造)0.5ml，28'C放置4小时制成阳性质控品。此外，将未添加任何物质的LB培养基相同地处理，制成阴性质控品。将各质控品50pl各自添加到上述制作的含有CV026的LB培养基的孔内，28'C培养24小时。结果是，添加了添加有OHHL的阳性质控品的培养基的孔的周围确认有紫色杆菌素的诱导，添加了未添加有OHHL的阴性质控品的培养基中确认没有紫色杆菌素的诱导。这样，经确认，若在存在有OHHL下培养CV026,则表达细菌自体诱导组织、诱导紫色杆菌素，另一方面，在没有OHHL下即使培养，也不表达细菌自体诱导组织，不会诱导紫色杆菌素。接着，为了调査芽孢杆菌属细菌的OHHL失活能力，用以下顺序使芽孢杆菌属细菌与OHHL反应。将苏云金芽孢杆菌BGSC4A3、BGSC4D1、BGSC4J4、BGSC4Q7(实施例1~4)、以及表2所示的凝结芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌各自接种到LB培养基，37。C振荡培养一夜(比较例1~11)。接着，在吸光度(660nm)调制为1.0的培养液10ml中，加入OHHL0.5ml，28'C反应4小时。将各反应液5(Hil各自添加到上述制作的含有CV026的LB培养基的孔内，28'C培养24小时。培养后，观察各自的培养基的孔周围有无紫色杆菌素的诱导。结果如表2所示。[表2〗表2<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>+:确认有紫色杆菌素的诱导。-:确认没有紫色杆菌素的诱导。实施例14的苏云金芽胞杆菌的所有菌株均确认没有紫色杆菌素的诱导。另一方面，比较例1~3的凝结芽孢杆菌、比较例4~7的枯草芽孢杆菌、比较例8~11的克劳氏芽孢杆菌的所有菌株均确认有紫色杆菌素的诱导。从结果可知，这些苏云金芽胞杆菌通过产生OHHL的分解酶使OHHL失活，抑制CV026的细菌自体诱导组织的表达，另一方面，比较例1~11的芽孢杆菌属细菌没有使OHHL失活。(3)有害菌防除剂的制造使用下述组成的孢子形成培养基，将BGSC4A3、BGSC4D1、BGSC4J4以及BGSC4Q7各自在37。C下液体培养72小时(ProceedingsoftheNationalAcademyofSciences,US，1965,54，pp.704-711)。将得到的培养液离心分离，收集菌体。将得到的菌体冻结干燥后粉碎，加入乳糖，令孢子密度为5X108CFU/g，制造有害菌防除剂，各自制成制造例1~4。孢子密度通过将制造的有害菌防除剂用灭菌水稀释至适当的浓度，通过70'C中加热30分钟仅杀灭营养细胞，然后接种至普通琼脂培养基，通过计数所形成的菌落而测定。(孢子形成培养基成分)nutrientbroth(Difco制造)8.0gKC1l.OgMgS047H200.25gMnCl24H200.002gpH调整为7.0，总量1,000ml将上述成分用高压锅灭菌后，添加经过灭菌的CaCl2溶液以及FeS04溶液，使之各自成为5X10^M以及1X10-6M。另一方面，将使用凝结芽孢杆菌(Bacilluscoagulans)NBRC12583株以及枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)NBRC3009株进行上述相同的制造的组合物各自作为比较制造例1和2。(4)雏鸡成长试验将混合有相对于雏鸡的饲料(SDBroiler前后期用，日本配合饲料株式会社制造，未添加抗菌性物质的饲料)总质量为0.2质量％制造例1~4的有害菌防除剂的词料，分别作为实施例5~8。将12只源自Broiler种鸡(品牌千^)的鸡蛋孵化的雏鸡作为一组，各组喂食实施例58的饲料56天，进行成长试验。另一方面，将混合有0.2%的比较制造例1以及2的组合物的饲料作为比较例12以及13。将混合有0.2。/。的乳糖以替代有害菌防除剂的饲料作为对照例，相同地进行成长试验。19测定56天后的各组的雏鸡的体重，算出各组的平均值。此外，测定饲养期中的粪中的添加菌的菌体浓度，算出各自的平均浓度。结果如表3所示。[表3]表3<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>喂食了实施例58的词料的雏鸡，较之于喂食了比较例12以及13的饲料的雏鸡，体重增加较大。此外，从喂食了实施例58的饲料的雏鸡的粪中，测出了11.3Xl()SCFU/g(克生鸡粪)以上的添加菌，较之于喂食了比较例12以及13的饲料的雏鸡的粪，菌数明显增加。据此显示，含有本发明的苏云金芽胞杆菌孢子的有害菌防除剂，不会在胃和消化道内杀灭，在肠内形成菌落，促进动物的体重增加。(5)猪饲养试验将混合有制造例1和3的有害菌防除剂和养猪用标准词料(7'^$7"7—，昭和产业株式会社制造)的饲料分别作为实施例9和10，将30只仔猪作为一组进行喂饲。同样地，将混合有比较制造例1的组合物和养猪用标准饲料的词料作为比较例14，喂饲仔猪。将混合有乳糖以替代有害菌防除剂的饲料作为对照例，喂饲仔猪。测定21天后的各组的仔猪的体重，算出各组的平均值。此外，观察期间内腹泻、软便的发生情况，将l头仔猪腹泻或软便的天数以l天l分计算，其结果作为腹泻、软便评分进行评估。结果如表4所示。[表4]表4<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>喂食了实施例9和10的饲料的仔猪，较之于喂食了比较例14的词料的仔猪，体重增加较大。此外，喂食了实施例9和IO的饲料的仔猪，较之于喂食了比较例14的饲料的仔猪，腹泻、软便评分明显较低。据此显示，含有本发明的苏云金芽胞杆菌孢子的有害菌防除剂，可以促进仔猪的体重增加，具有预防、改善腹泻、软便的效果。(6)仔牛饲养试验将6头出生1周的公仔牛(Holstein种)作为一组进行饲养。对于各组仔牛，在下述所示的代用乳中分别添加2质量％的制造例1和3的有害菌防除剂，作为实施例11和12,将添加2质量。/。的比较制造例1的组合物作为比较例15。对照例中添加等量的乳糖。喂食、词养这些代用乳以及哺乳期仔牛饲养饲料(》^，，雪印种苗株式会社制造)至35天大，调査饲养期间的腹泻、软便的发生情况。(代用乳组成)蹈脱脂粉乳69乳清10牛脂12.2软磷脂0.8维他命、矿物质、其他添加物8(腹泻、软便的发生情况的评价标准)多试验期中腹泻产生总头数在10头以上少试验期中腹泻产生总头数在不足10头、在5头以上明显很少试验期中腹泻产生总头数不足5头结果如表5所示。[表5]表5<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>喂食了实施例11和12的代用乳的仔牛，较之于喂食了比较例15的代用乳的仔牛，体重增加较大。此外，喂食了实施例11和12的代用乳的仔牛，较之于喂食了比较例15的代用乳的仔牛，腹泻、软便情况明显较低。据此显示，含有本发明的苏云金芽胞杆菌孢子的有害菌防除剂，可以促进仔牛的体重增加，具有预防、改善腹泻、软便的效果。从雏鸡、仔猪、仔牛的成长饲养试验结果可知，喂食含有本发明的有害菌防除剂的饲料，苏云金芽胞杆菌高几率停留在肠内，提高了饲料的消化吸收、促进生长，还可预防、改善腹泻、软便等不理想的症状。(7)乳质提升作用试验将混合有制造例1和3的有害菌防除剂和奶牛用饲料(玉米4.5kg、大麦2.5kg、甜菜U1.8kg、绵籽1.8kg、脱脂大豆1.4~1.6kg、大豆0.6kg1.2kg、干草10~12kg、水160~220L)的词料各自作为实施例13和14，以30头奶牛(Holstein)为一组令其各自摄取。混合了比较制造例1的组合物和奶牛用饲料的饲料为比较例16，同样令其摄取。此外，混合有乳糖以替代有害菌防除剂的词料作为对照例，同样令其摄取。从各组奶牛间隔10天进行17次挤奶，测定牛奶的乳脂率、乳蛋白质率以及无脂乳固体分率，算出平均值。结果如表6所示。[表6]表6<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>喂食了实施例13和14的饲料的奶牛生产的牛奶的乳脂率、乳蛋白质率以及无脂乳固体分率均大于喂食了比较例16的饲料的奶牛生产的牛奶。据此显示，含有本发明的苏云金芽胞杆菌孢子的有害菌防除剂具有提升奶牛乳质的效果。(8)对于雏鸡的沙门氏菌攻击试验。将混合有相对于雏鸡的饲料(SDBroiler前期用，日本配合饲料株式会社制造，未添加抗菌性物质的词料)总质量为0.2质量％的制造例1~4的有害菌防除剂的饲料，分别作为实施例15~18。将12只源自Broiler种鸡(品牌*X>*—)的鸡蛋孵化的雏鸡作为一组，各组喂食实施例15~18的饲料12天。另一方面，将混合有0.2质量％的比较制造例1以及2的组合物的饲料制成比较例17以及18。将混合有0.2质量％的乳糖以替代有害菌防除剂的饲料作为对照例，相同地进行喂食。7天大时每只经口喂食1.2X107CFU的Salmonellaenteritidis(SE)，12天大时用棉棒擦拭盲肠内容物和总排泄腔采粪。SE使用从群马县的养鸡农场死亡的鸡的盲肠内容物中分离的菌株。通过以下方法测定盲肠内容物的SE生菌数，算出感染指数以及防御指数。在盲肠内容物lg加入灭菌磷酸缓冲生理盐水稀释至10倍，充分混合得到试料原液。接着，用灭菌生理盐水将试料原液阶段稀释至10倍，得到阶段稀释液。将试料原液和阶段稀释液各自涂抹O.lml在SS琼脂平板培养基"二'74"(日水制药株式会社制造)以及亮绿琼脂平板培养基(DifcoLaboratories制造)上，37'C培养24小时，测定各平板培养基生长的典型的SE的菌落数。接着，用该菌落钓菌，接种至赖氨酸脱碳酸试验用SIM琼脂培养基"二'7^<"(R水制药柱式会社制造)以及TSI琼脂培养基"二'7^〗"(日水制药株式会社制造)，37'C培养24小时，确认性状。将其中确认为SE的菌落数乘以稀释液的稀释倍率，算出每lg盲肠内容物的SE生菌数。以此结果为基础，如下算出感染指数以及防御指数。感染指数是显示病原菌的感染率高低的数值，防御指数是显示与喂食不含芽孢杆菌属细菌的饲料相比的各饲料防御病原菌感染的能力的数值。感染指数各个体的盲肠内SE生菌数的对数的平均值(bgCFU/g的平均数)防御指数对照群的感染指数/各试验群的感染指数关于采自总排泄腔的粪，通过以下方法，通过每个个体进行定性培养，观察SE的性状。即，将棉棒上附着的粪悬浊于10ml的灭菌磷酸缓冲生理盐水，作为试料原液后，将其各自涂抹0.1ml在SS琼脂培养基以及亮绿琼脂平板培养基上，37'C培养24小时，确认各个体是否检测出SE的菌落。此外，调查上述采取的各组的盲肠内容物中有无高丝氨酸内酯。首先，为了调査高丝氨酸内酯的浓度与细菌自体诱导组织的诱导的关系，进行以下试验。将紫色色杆菌CV026株接种至LB培养基，28'C振荡培养一夜。接着，在高压锅灭菌后冷却至45'C的半流动LB琼脂培养基(0.3%)5m冲，加入上述得到的CV026的培养液50W、经过过滤灭菌的卡那霉素2%水溶液5(^1，将该半流动LB琼脂培养基5ml与事先准备在9cm平皿上的LB琼脂培养基重叠。令琼脂固化后，将500nM、5(VM、5pM的OHHL(Sigma制造)各5(^1滴在重叠有CV026株的LB琼脂培养基的表面，30分钟干燥后，28'C培养24小时。结果确认了滴下500nM、5(HiM的OHHL的培养基中，滴下的周边有紫色杆菌素的诱导，在滴下5pM的OHHL的培养基中，滴下的周边没有紫色杆菌素的诱导。接着，将上述得到的盲肠内容物的灭菌磷酸缓冲生理盐水原液以4'C、20，000Xg进行30分钟离心分离，在得到的上清中加入2倍量的二氯甲烷(试剂特级、和光纯药工业株式会社制造)，通过l小时振荡进行萃取。萃取进行2次。收集有机层，用无水硫酸钠(试剂特级、和光纯药工业株式会社制造)除去水分，蒸发除去溶剂后，加入50^il的灭菌水。将这样得到的各组的50pl的盲肠内容物溶液各自滴到重叠了CV026的LB培养基的表面上，30分钟干燥后，28'C培养24小时。培养后，观察上述溶液滴下的周边是否有紫色杆菌素的诱导。此外，测定饲养期间的粪中的添加苏云金芽胞杆菌的菌体浓度，算出各自的平均浓度。结果如表7所示。表7<table>tableseeoriginaldocumentpage0</column></row><table>+:确认有紫色杆菌素的诱导。-:确认没有紫色杆菌素的诱导。喂食了含有实施例15~18的苏云金芽胞杆菌的词料的雏鸡，盲肠内容物的SE的菌体浓度极低，沙门氏菌的感染指数极低。此外，肉眼检测尸检(部検Lf二)的鸡内脏，结果几乎没有在盲肠发现出血病变。从防御指数可知，感染指数与对照例相比为约1/41/10。喂食了比较例17和18的饲料的雏鸡，与对照例相比，仅微量抑制了SE的增殖。此外，肉眼检测尸检的鸡内脏，结果盲肠出血病变较高。此外，从喂食了实施例15~18的有害菌防除剂的雏鸡的粪中，检测出了9.9X106CFU/g(克生鸡粪)以上的添加菌，较之于比较例生菌数明显增加。据此显示，本发明的含有苏云金芽胞杆菌孢子的动物用有害菌防除剂，不会在胃和肠的消化道内杀灭，在肠内形成菌落，抑制SE的增殖，抑制细菌自体诱导因子的表达。艮卩，通过在饲料中添加本发明的苏云金芽胞杆菌的孢子，具备预防、治疗SE引起的肠内感染症的效果。(9)对于猪的大肠菌攻击试验在养猪用饲料(7'^S7〉U—x'，昭和产业株式会社制造)中分别混合相对于养猪用饲料总质量为0.5质量％的制造例1和3的有害菌防除剂，将混合得到的饲料分别作为实施例19和20，将30头35天大的猪作为一组，喂食19天。同样地，将混合有0.5质量%的比较制造例1的有害菌防除剂的饲料作为比较例19，给猪喂食。此外，将混合有0.5%质量的乳糖以替代有害菌防除剂的词料作为对照例，给猪喂食。40天大时令每1头经口感染1.8X1()SCFU的浮肿病菌(Escherichiacoli)。浮肿病菌使用从北九州的养猪场浮肿病发病死亡的猪的肠内容物中分离的菌株。饲养至54天大，算出各组的猪的死亡率。此外，小肠内容物的E.coli的生菌数以下述方法测定。在小肠内容物lg加入灭菌磷酸缓冲生理盐水稀释至10倍，充分混合得到试料原液。接着，用灭菌生理盐水将试料原液阶段稀释至10倍，得到阶段稀释液。将试料原液和阶段稀释液各自涂抹O.lml在DHL琼脂平板培养基(颗粒)"二'7^4"(日水制药株式会社制造)，37'C培养24小时，测定各平板培养基中生长的典型的E.coli的菌落数。接着，将其中确认为E.coli的菌落数乘以稀释液的稀释倍率，算出每lg小肠内容物的E.coli的生菌数，通过如下方法算出感染指数。感染指数各个体的小肠内E.coli的生菌数的对数的平均值(1ogCFU/g的平均数)此外，为了调査小肠内容物中有无高丝氨酸内酯，使用与(8)相同的方法，使用CV026株观察有无紫色杆菌素的诱导。结果如表8所示。表8<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>+:确认有紫色杆菌素的诱导。-:确认没有紫色杆菌素的诱导。对照例的死亡率为60%，比较例19的试验组的死亡率为43%，死亡的猪可观察到眼睑浮肿和斜颈等浮肿病的病相。未死亡的猪也呈现出没有精神、皮毛粗硬。实施例19和20的喂食了含有苏云金芽胞杆菌的有害菌防除剂的猪的死亡率在10%以下。此外，实施例19和20的猪的小肠内容物中E.coli的增殖被抑制。此外，细菌自体诱导因子的诱导也被抑制。据此可知，通过向猪喂食本发明的含有苏云金芽胞杆菌孢子的有害菌防除剂，可以预防、治疗浮肿病感染。(10)对于仔牛的沙门氏菌攻击试验将8头出生1周的公仔牛(Holstein种)作为一组进行饲养。在仔牛用混合饲料($，夕&乂4卜，(株式会社)科学饲料研究所制造)中分别添加2.0质量％制造例1及3的有害菌防除剂，作为实施例21和22，将添加有2.0质量。/。的比较制造例1的组合物作为比较例20。喂食这些仔牛用混合饲料至4周大。2周大时，对所有牛每1头投经口喂食8.9X105的鼠伤寒沙门氏菌(Salmonellatyphimurium，ST)。ST使用从北九州的酪农家的农场腹泻发病的牛的新鲜粪便中分离的菌株。词养至4周大，算出各组仔牛的死亡率。此外，采取小肠内容物，以如下方法测定ST的生菌数。在小肠内容物lg加入灭菌磷酸缓冲生理盐水稀释至10倍，充分混合得到试料原液。接着，用灭菌生理盐水将试料原液阶段稀释至10倍。将试料原液和阶段稀释液各自涂抹0.1ml在SS琼脂平板培养基"二'7^4"(日水制药株式会社制造)以及亮绿琼脂平板培养基(DifcoLaboratories制造)上，37'C培养24小时，测定各平板培养基中生育的典型的ST的菌落数。接着，由菌落钓菌，接种至赖氨酸脱碳酸试验用SIM琼脂培养基"二'7》4"(日水制药株式会社制造)以及TSI琼脂培养基"二'74"(日水制药株式会社制造)，37'C培养24小时，确认性状。接着，将菌落数乘以稀释液的稀释倍率，算出每lg小肠内容物的ST生菌数。此外，为了调査小肠内容物中有无高丝氨酸内酯，使用与(8)相同的方法，使用CV026株观察有无紫色杆菌素的诱导。结果如表9所示。表9<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>对照例的死亡率为50%，比较例20的试验组的死亡率为50%，死亡的牛可观察到黄褐色泥状便、粘血便至脱水、无法哺乳起立等病相。未死亡的牛也出现腹泻。喂食了实施例21和22的有害菌防除剂的牛的死亡率较低，在12.5%以下，特别是喂食了实施例22的有害菌防除剂的牛的死亡率为0%。此外，实施例21和22的仔牛的小肠内容物中ST的增殖被抑审U。此外，细菌自体诱导因子的诱导也被抑制。据此可知，通过给牛喂食本发明的含有苏云金芽胞杆菌孢子的有害菌防除剂，可以预防、治疗ST感染。(11)对于雏鸡的梭菌攻击试验。将混合有相对于雏鸡的饲料(SDBroiler前期用，日本配合词料株式会社制造，未添加抗菌性物质的饲料)总质量为0.2质量％的制造例1~4的有害菌防除剂的词料，分别作为实施例23~26。将12只雌的源自Broiler种鸡(品牌f^>*一)的鸡蛋孵化的鸡的雏鸡作为一组，对12组喂食实施例23~26的饲料14天。另一方面，将混合有0.2质量％的比较制造例1以及2的组合物的饲料作为比较例21以及22，相同地喂食6组。此外，将混合有0.2质量％的乳糖以替代有害菌防除剂的饲料作为对照例，相同地喂食3组。对于7天大的各组，每只经口喂食1.0X106CFU、1.0X107CFU、1.0X1()8CFU的产气荚膜梭菌(CP)，14天大时用棉棒擦拭盲肠内容物和总排泄腔采粪。通过以下方法测定盲肠内容物的CP生菌数，算出感染指数以及防御指数。在盲肠内容物lg加入灭菌磷酸缓冲生理盐水稀释至10倍，充分混合得到试料原液。接着，用灭菌生理盐水将试料原液阶段稀释至10倍，得到阶段稀释液。将试料原液和阶段稀释液各自涂抹O.lml在测定梭菌用培养基(日水制药株式会社制造)，用7卑口A、;/夕亇乂年35'C厌氧培养24小时，测定各平板培养基中生育的黑色菌落数。接着，由菌落钓菌，接种至加蛋黄CW琼脂培养基(日水制药柱式会社制造)，35'C下需氧培养和厌氧培养2448小时，确认性状。将其中确认为CP的菌落数乘以稀释液的稀释倍率，算出每lg盲肠内容物的CP生菌数。以此结果为基础，如下算出感染指数以及防御指数。感染指数各个体的盲肠内CP生菌数的对数的平均值(1ogCFU/g的平均数)防御指数对照组的感染指数/各试验组的感染指数关于采自总排泄腔的粪，通过以下方法，通过每个个体进行定性培养，观察CP的性状。即，将棉棒上附着的粪悬浊于10ml的灭菌磷酸缓冲生理盐水，作为试料原液后，将其各自涂抹0.1ml在测定梭菌用培养基上，用7氺口八°、乂夕少35'C厌氧培养24小时，判断各平板培养基有无形成生育的黑色菌落，由菌落钓菌，接种至加蛋黄CW琼脂培养基，35°C需氧培养和厌氧培养24~48小时，确认性状，确认各个体的总排泄腔是否检测出CP的菌落。此外，测定饲养期间的粪中的添加芽孢杆菌的菌体浓度，算出各自的平均浓度。喂食1.0X106CFU的结果如表10、喂食1.0X107CFU的结果如表11、喂食1.0X108CFU的结果如表12所示。[表10]表10<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>[表12]表12<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>从喂食了含有实施例23~26的苏云金芽胞杆菌的本发明饲料的雏鸡的粪便，检测出了1.5X107CFU/g(克生鸡粪)以上的添加芽胞杆菌，较之于比较例生菌数明显增加。此外，CP的喂食菌数为1.0Xl(^CFU/g时，CP的感染指数极低，可得到较高的防御指数，但CP的喂食菌数为1.0X10kFU/g时，增殖抑制效果下降。另夕卜，CP的喂食菌数为1.0X108CFU/g时，增殖抑制效果不够充分。喂食了比较例21和22的饲料的雏鸡，CP的喂食菌数较少时，与对照例相比，仅微量抑制CP增殖。据此显示，摄取含有本发明的有害菌防除剂的饲料时，苏云金芽胞杆菌不会在胃和肠的消化道内杀灭，在肠内形成菌落。此外，CP的喂食菌数少于苏云金芽胞杆菌的盲肠内容物每lg的生菌数时，特别是抑制CP增殖的效果优异。这样，苏云金芽胞杆菌可在肠内形成菌落，竞争排除CP。(12)对于仔牛的梭菌攻击试验将8头出生1周的公仔牛(Holstein种)作为一群进行饲养。在仔牛用混合词料($，夕A乂<卜，(株式会社)科学饲料研究所制造)中分别添加2.0质量％制造例2及3的有害菌防除剂，作为实施例27和28，将添加有2.0质量％的比较制造例1的组合物作为比较例23。此外，将添加有等量的乳糖代替有害菌防除剂的作为对照例。喂食这些仔牛用混合饲料至4周大。2周大时，所有牛每头经口喂食3.1X107的Clostridiumperfringens(CP)。词养至4周大，算出各组仔牛的死亡率。此外，采取小肠内容物，以上述相同方法测定CP的生菌数，算出感染指数以及防御指数。结果如表13所示。[表13]表13<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>-对照例的死亡率为38%，比较例23的试验组的死亡率为25%,但喂食了实施例27和28的饲料的试验群的死亡率为0%。此外，喂食了实施例27和28的牛的CP感染指数低、防御指数高。据此可知，通过摄取含有本发明的有害菌防除剂的饲料，可以预防、治疗牛的CP感染症。(13)对于仔猪的梭菌攻击试验将25头出生3周的公仔猪(大约克夏种)作为一组进行饲养。将混合有相对于仔猪用混合饲料(SD仔猪人工乳前期用，日本配合词料株式会社制造，未添加抗菌性物质的饲料)总质量为0.5质量％的制造例2及3的有害菌防除剂的饲料，分别作为实施例29和30，喂食至6周大。此外，将混合有比较制造例1的组合物的词料作为比较例24，将混合有乳糖代替有害菌防除剂的饲料作为对照例，相同地喂食仔猪。4周大时，所有猪每头经口喂食1.8X107的Clostridiumperfringens(CP)。饲养至6周大，算出各组仔猪的死亡率。此外，采取小肠内容物，以上述相同方法测定小肠内容物的生菌数，算出感染指数以及防御指数。结果如表14所示。表14<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>对照例的死亡率为60%，喂食了比较例24的饲料的试验组的死亡率为48%,但喂食了实施例29的饲料的试验组的死亡率为12%，喂食了实施例30的饲料的试验组的死亡率为8%。喂食了实施例29和30的饲料的试验组的CP感染指数极低、防御指数较高。据此可知，通过摄取含有本发明的有害菌防除剂的词料，可以预防、治疗猪的CP感染症。(14)有害菌防除剂的制造使用与(3)相同的孢子形成培养基，将BGSC4A3、BGSC4D1、BGSC4J4以及BGSC4Q7各自在37r下液体培养72小时。将得到的培养液离心分离，收集菌体。加入灭菌水，令孢子密度为lX109CFU/ml，制造有害菌防除剂，分别作为实施例3134。孢子密度通过将制造的有害菌防除剂用灭菌水稀释至适当的浓度，通过70'C中加热30分钟仅杀灭营养细胞，然后接种至普通琼脂培养基，通过计数所形成的菌落而测定。另一方面，使用凝结芽孢杆菌(Bacilluscoagulans)NBRC12583株以及枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)NBRC3009株，与上述相同制造的组合物，各自作为比较例25和26。(15)大鼠饲养试验将SD大鼠(Oriental酵母工业株式会社、雄性、导入时120g)以饲养温度23'C、自由给水、自由喂食实验动物用饲料MF(Oriental酵母工业株式会社产品)，进行1周的预备饲养，确认外观和行为无异常。接着，用灭菌水稀释实施例31的孢子悬浊液，调制有害菌防除剂，令孢子浓度分别为1X106CFU/ml、lX107CFU/ml、以及1X108CFU/ml。将10只大鼠作为一组，使用胃探针，以1天1次、每只lml经口喂食实施例31的各浓度的有害菌防除剂。同样地，对于含有实施例32~34的孢子悬浊液的有害菌防除剂、含有比较例25和26的孢子悬浊液的组合物也进行试验。此外，以含有灭菌水替代孢子悬浊液的组合物作为对照例，相同地进行试验。3周后测定各组的大鼠的体重，算出各组的增加体重的平均值。此外，采取l天的粪便，测定添加菌的菌体浓度，算出各自的平均浓度。结果如表15和16所示。<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>[表16]表16<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>试验期中，所有喂食组均未出现死亡、生病、腹泻等异常变化。此外，喂食了含有实施例31~34的苏云金芽胞杆菌孢子的有害菌防除剂的大鼠，较之于喂食了比较例25和26的组合物的大鼠，体重增加大。此外，从喂食了实施例3134的有害菌防除剂的大鼠的粪便检测出了，6.5X10kFU/只/日以上的添加菌，较之于比较例，菌数明显增加。另外，通过提高喂食的菌体浓度，大鼠的体重增加变大。据此显示，本发明的苏云金芽胞杆菌的孢子没有在大鼠的胃和肠的消化道内杀灭，在肠内形成菌落，促进大鼠的体重增加。(16)对于沙门氏菌的感染的防御试验将7周大的SPF小鼠(BALB/c，Oriental酵母工业株式会社、雄性)以词养温度23'C、自由给水、自由喂食实验动物用饲料MF(Oriental酵母工业株式会社产品)，进行1周的预备词养，确认外观和行为无异常。将10只小鼠作为一组，使用胃探针，以1天1次、每只100W经口喂食含有实施例31的孢子悬浊液的有害菌防除剂。同样地，对于含有实施例32~34的孢子悬浊液的有害菌防除剂、含有比较例25和26的孢子悬浊液的组合物也进行试验。此外，以含有灭菌水替代孢子悬浊液的组合物作为对照例，相同地进行试验。在喂食孢子悬浊液开始后第7天使用胃探针，以每只1.4X104经口喂食SalmonellaTyphimurium(ST)。在ST经口喂食的第14天采取盲肠内容物。ST的生菌数以如下方法测定。在盲肠内容物lg加入灭菌磷酸缓冲生理盐水稀释至10倍，充分混合得到试料原液。接着，用灭菌生理盐水将试料原液阶段稀释至10倍。将试料原液和阶段稀释液各自涂抹0.1ml在SS琼脂平板培养基"二'爿》^"(日水制药株式会社制造)以及亮绿琼脂平板培养基(DifcoLabomtories制造)上，37'C培养24小时，测定各平板培养基中生长的典型的ST的菌落数。接着，由菌落钓菌，接种至赖氨酸脱碳酸试验用SIM琼脂培养基"二'7^<"(日水制药柱式会社制造)以及TSI琼脂培养基"二'7》4"(日水制药株式会社制造)，37'C培养24小时，确认性状。将确认为ST的菌落数乘以稀释液的稀释倍率，算出每lg粪便的ST生菌数。此外，调査盲肠内容物中有无高丝氨酸内酯。使用与上述(8)相同的方法，将盲肠内容物的萃取物滴在重叠有CV026的LB培养基的表面，培养后观察滴下的周边有无紫色杆菌素的诱导。结果如表17所示。[表17]表17<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table>+:确认有紫色杆菌素的诱导。-:确认没有紫色杆菌素的诱导。喂食了含有实施例31-34的苏云金芽胞杆菌的孢子的本发明的有害菌防除剂的小鼠，较之于喂食了比较例25和26的组合物的小鼠，盲肠内容物的ST的生菌数极低，脾脏、肠间膜淋巴结完全没有形成小肉芽肿、盲肠的炎症性变。喂食了比较例的组合物的小鼠，较之于对照例，仅微量抑制了ST的增殖，脾脏、肠间膜淋巴结出现了形成小肉芽肿、盲肠的炎症性变。据此显示，通过喂食苏云金芽胞杆菌的孢子，抑制了ST的增殖，抑制了细菌自体诱导因子的发现。即，通过喂食苏云金芽胞杆菌的孢子，可以得到预防、治疗ST引起的肠内感染症的效果。(17)对于弧菌的感染的防御试验与上述(16)的试验相同，将7周大的SPF小鼠(ICR，Oriental酵母工业株式会社、雄性)进行预备饲养，确认外观和行为无异常。将10只小鼠作为一群，使用胃探针，以l天1次、每只100pl经口喂食含有实施例31的孢子悬浊液的有害菌防除剂。同样地，对于含有实施例32~34的孢子悬浊液的有害菌防除剂、含有比较例25和26的孢子悬浊液的组合物也进行试验。此外，以含有灭菌水替代孢子悬浊液的组合物作为对照例，相同地进行试验。在孢子悬浊液喂食开始后第7天使用胃探针，以每只2.1乂107经口喂食副溶血弧菌(VP)。在VP经口喂食的第14天采取小肠内容物。VP的生菌数以如下方法测定。在小肠内容物lg加入食盐多粘菌素肉汤"二'7^4"(日水制药株式会社制造)稀释至10倍，充分混合得到试料原液。接着，用食盐多粘菌素细菌培养基将试料原液阶段稀释至10倍。将试料原液和阶段稀释液各自涂抹0.1ml在TCBS琼脂培养基"二'7^<"(日水制药株式会社制造)，37'C培养18小时，测定各平板培养基生长的典型的VP的菌落数。将菌落数乘以稀释液的稀释倍率，算出每lg小肠内容物的VP生菌数。此外，调査小肠内容物中有无高丝氨酸内酯。使用与上述(8)相同的方法，将小肠内容物的萃取物滴在重叠有CV026的LB培养基的表面，培养后观察滴下的周边有无紫色杆菌素的诱导。<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>+，确认有紫色杆菌素的诱导。-:确认没有紫色杆菌素的诱导。喂食了含有实施例31~34的苏云金芽胞杆菌的孢子的本发明的有害菌防除剂的小鼠，小肠内容物的VP的生菌数极低，几乎没有出现小肠胀满和肠内容物充满。另一方面，喂食了比较例25和26的细菌的小鼠，较之于对照例，仅微量抑制了VP的增殖，小肠变红胀满，肠内容物充满。此外，对照例中，小肠变红胀满，肠内容物充满。据此显示，通过喂食苏云金芽胞杆菌的孢子，抑制了VP的增殖，抑制了细菌自体诱导因子的表达。B卩，通过喂食苏云金芽胞杆菌的孢子，可以得到预防、治疗VP引起的肠内感染症的效果。(18)对于空肠弯曲杆菌的感染的防御试验与上述(16)的试验相同，将7周大的SPF小鼠(BALB/c，Oriental酵母工业株式会社、雄性)进行预备饲养，确认外观和行为无异常。将10只小鼠作为一组，使用胃探针，以l天1次、每只100pl经口喂食含有实施例31的孢子悬浊液的有害菌防除剂。同样地，对于含有实施例32~34的孢子悬浊液的有害菌防除剂、含有比较例25和26的孢子悬浊液的组合物也进行试验。此外，以含有灭菌水替代孢子悬浊液的组合物作为对照例，相同地进行试验o在孢子悬浊液喂食开始后第7天使用胃探针，以每只1.7X10经口喂食Campylobacterjejuni(CJ)。在CJ经口喂食的第14天采取小肠内容物。CJ的生菌数以如下方法测定。在小肠内容物lg中加入灭菌磷酸缓冲生理盐水稀释至10倍，充分混合得到试料原液。接着，用灭菌生理盐水将试料原液阶段稀释至10倍。将试料原液和阶段稀释液各自涂抹0.1ml在改良Skirrow氏培养基(日水制药株式会社制造)，使用7木口/^;/夕*、>匕°口(三菱gas化学株式会社制造)，在微需氧条件下42"C培养23天，测定各平板培养基生长的典型的CJ的菌落数。将认定为CJ的菌落数乘以稀释液的稀释倍率，算出每lg小肠内容物的CJ生菌数。此外，调査小肠内容物中有无高丝氨酸内酯。使用与上述(8)相同的方法，将小肠内容物的萃取物滴在重叠有CV026的LB培养基的表面，培养后观察滴下的周边有无紫色杆菌素的诱导。结果如表19所示。[表19]表19<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>+:确认有紫色杆菌素的诱导。-:确认没有紫色杆菌素的诱导。喂食了含有实施例31~34的苏云金芽孢杆菌的孢子的本发明的有害菌防除剂的小鼠，小肠内容物的VP的生菌数极低，没有在小肠的肠粘膜发现浮肿和出血性病变。另一方面，喂食了比较例25和26的细菌的小鼠，较之于对照例，仅微量抑制了CJ的增殖，小肠的肠粘膜出现了浮肿和出血性病变。此外，对照例中在小肠的肠粘膜出现了浮肿和出血性病变。据此显示，通过喂食苏云金芽孢杆菌的孢子，抑制了CJ的增殖，抑制了细菌自体诱导因子的表达。g卩，通过喂食苏云金芽孢杆菌的孢子，可以得到预防、治疗CJ引起的肠内感染症的效果。(19)对于小鼠的芽孢杆菌攻击试验将7周大的SPF小鼠(ICR，Oriental酵母工业株式会社、雄性)以饲养温度23'C、自由给水、自由喂食实验动物用饲料MF(Oriental酵母工业株式会社产品)，进行1周的预备饲养，确认外观和行为无异常。将10只作为一组，使用胃探针，以1天1次、每只100pl经口喂食含有实施例31的有害菌防除剂，喂食21天。同样地，对于含有实施例32~34的有害菌防除剂、含有比较例25和26的组合物也进行试验。此外，以含有灭菌水替代孢子悬浊液的组合物作为对照例，相同地进行试验。在孢子悬浊液喂食开始后第7天使用胃探针，以每只100nl、经口喂食1.0X108CFU的Bacilluscereus(BC)的卡那霉素耐受性变异株(BCKm株)。BCKm株通过如下方法制作。SP，使用肉汤培养基(日水制药株式会社制造)37。C下培养BC16小时。4'C离心集菌后，用灭菌水洗净一次后再悬浊于灭菌水。距离UV灯20cm照射紫外线后，悬浊于肉汤培养基中37'C培养4小时。在普通琼脂培养基(日水制药株式会社制造)中添加了200ppm的卡那霉素硫酸盐(和光纯药工业株式会社制造)的培养基(NAKm)中涂抹培养液0.1^1，37'C培养。培养后，萃取形成于NAKm的菌落，作为BCKm株。在BCKm(以下称为BC)经口喂食的第14天算出各组的死亡率。此外，采取大肠内容物，以如下方法测定大肠内容物中的BC生菌数。在大肠内容物lg中加入灭菌磷酸缓冲生理盐水稀释至10倍，充分混合得到试料原液。接着，用灭菌生理盐水将试料原液阶段稀释至10倍，作为阶段稀释液。将试料原液和阶段稀释液各自涂抹O.lml在添加了200ppm的卡那霉素硫酸盐(和光纯药工业株式会社制造)的加蛋黄NGKG琼脂培养基(日水制药株式会社制造)，30'C培养18小时，测定各平板培养基生长的典型的BC的菌落数。将确认为BC的菌落数乘以稀释液的稀释倍率，算出每lg大肠内容物的BC生菌数。以此结果为基础，如下算出感染指数以及防御指数。感染指数各个体的大肠内BC生菌数的对数的平均值UogCFU/g的平均数)防御指数对照组的感染指数/各试验群的感染指数结果如表20所示。表20<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>实施例、比较例、对照例的试验组中，死亡率均为0%。喂食了实施例3134的有害菌防除剂的试验组，较之于喂食了比较例的组合物的试验群，BC的感染指数低，防御指数高。据此显示，本发明的有害菌防除剂具备预防、治疗BC引起的肠内感染症的效果。(20)对于小鼠的葡萄球菌攻击试验与上述(19)相同地，将7周大的SPF小鼠(ICR，Oriental酵母工业株式会社、雄性)进行预备饲养，确认外观和行为无异常。以井田等的下述方法，令金黄色葡萄球菌(SA)停留在小鼠的肠道(井田孝志、田村淳、河原条胜己、嶋田甚五郎、Chemother叩y、42、pp.923-930(1994))。首先，对所有的小鼠，使用胃探针，以1天1次、每只100pl经口喂食氨苄青霉素钠(和光纯药工业株式会社制造)的10mg/ml水溶液，在3天前喂食。氨苄青霉素钠喂食结束的翌日，将10只作为一组，使用胃探针，以每只100pl经口喂食在实施例31的有害菌防除剂中加入了5.0X1(fCFU的SA的组合物。氨苄青霉素钠喂食结束的第2天起，使用胃探针，以1天1次、100pl经口喂食实施例31的有害菌防除剂，喂食13天。此外，同样经口喂食实施例3234的有害菌防除剂、比较例25和26的组合物、以及灭菌水替代孢子悬浊液制造的对照例的组合物，进行试验。在SA经口喂食的第14天算出各组的死亡率。此外，采取大肠内容物，以如下方法测定大肠内容物中的SA生菌数。在大肠内容物lg中加入灭菌磷酸缓冲生理盐水稀释至10倍，充分混合得到试料原液。接着，用灭菌生理盐水将试料原液阶段稀释至10倍，作为阶段稀释液。将试料原液和阶段稀释液各自涂抹O.lml在食盐蛋琼脂培养基"二'7^4"(日水制药株式会社制造)，37'C培养48小时，测定各平板培养基生长的典型的SA的菌落数。将确认为SA的菌落数乘以稀释液的稀释倍率，算出每lg大肠内容物的SA生菌数。以此结果为基础，如下算出感染指数以及防御指数。感染指数各个体的大肠内SA生菌数的对数的平均值(1ogCFU/g的平均数)防御指数对照组的感染指数/各试验群的感染指数结果如表21所示。表21<table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table>实施例、比较例、对照例的试验组中，死亡率均为0%。喂食了实施例3134的有害菌防除剂的试验组，较之于喂食了比较例的组合物的试验组，SA的感染指数低，防御指数高。据此显示，本发明的有害菌防除剂具备预防、治疗SA引起的肠内感染症的效果。(21)对于小鼠的链球菌攻击试验与上述(19)相同地，将7周大的SPF小鼠(ICR，Oriental酵母工业株式会社、雄性)进行预备饲养，确认外观和行为无异常。将实施例31的有害菌防除剂装入给水器，以10只为一组，自由给水饲养21天。每天更换给水器，同时更换新鲜的有害菌防除剂(孢子悬浊液)。同样喂食实施例32~34的有害菌防除剂、比较例25和26的组合物。此外，用含有灭菌水的组合物替代孢子悬浊液作为对照例，同样进行喂食。在开始喂食孢子悬浊液的第7天，用棉棒沾lO(Hd的已灭菌的1.1X1()SCFU的猪链球菌(SS)，在小鼠的口腔内慢慢转动30秒，以此经口喂食。喂食SS后，每天观察，算出确认有斜颈、旋转运动等神经症状的个体以及死亡个体的比例。此外，从死亡个体立即进行无菌心脏采血，同时无菌采取肺、肝脏、脾脏、肾脏、以及脑髓液。再使用灭菌棉棒采取咽喉部组织。同样从喂食SS后第14天生存着的剩余小鼠采取各组织。对于这些组织，在采取后立即用Todd—Hweitt肉汤培养基(Oxoid制造)，37'C培养24小时。将确认己增殖的培养基再接种到添加了5体积％羊血的心浸液肉汤(八一卜,y匕乂)琼脂培养基(日水制药株式会社制造)，37'C培养2448小时，确认性状。将确认了SS的组织判定为阳性，算出每个组织判断为阳性的个体的比例，作为SS阳性率。此外，将脑用10%缓冲福尔马林液固定后，根据一般的方法，制作石蜡切片，进行苏木素伊红染色，通过研究组织所见，算出髓膜炎的发病率。结果如表22所示。表22<table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table>实施例31和33的试验组的死亡率低至20%。此外，实施例32和34的试验组的死亡率为30%。各组的SS阳性率根据组织不同而不同，但实施例31和33的试验组的所有组织的SS阳性率均低至20。/。。此外，实施例32的试验组中的肝脏及脾脏的SS阳性率低至20n/。，其他为30%。此外，实施例34的试验组中，各组织的SS阳性率稍高，为30%。另一方面，比较例的试验组中，各组织的SS阳性率高达40~50%，与对照例相比，仅微量抑制了SS感染。此外，实施例3134的试验组中，髓膜炎的发病率为20~30%，低于比较例的试验组。据此可知，通过喂食本发明的有害菌防除剂，可以预防，治疗SS引起的感染症，降低神经障碍和髓膜炎的发病率。(22)含有苏云金芽胞杆菌的药品(A)软膏剂使用(3)记载的孢子形成培养基，将苏云金芽胞杆菌BGSC4A3、BGSC4D1、BGSC4J4以及BGSC4Q7在37'C下液体培养72小时。将得到的培养液离心分离，收集菌体。将得到的菌体冻结干燥后粉碎，加入D(+)海藻糖二水合物(试剂特级、和光纯药工业株式会社产品)，令孢子密度为lX109CFU/g。加入lg如此得到的含有苏云金芽胞杆菌细菌孢子的海藻糖与5g加温至60。C的聚乙烯树脂'流动石蜡软膏(产品名7'，》千《一^、大正制药制造)，充分混合，再加入聚乙烯树脂*流动石蜡软膏，合成总量100g后，均匀揉合得到软膏剂，分别作为实施例35~38。实施例35~38的软膏剂的孢子密度各自为1.1X107CFU/g、1.2X107CFU/g、1.0X107CFU/g、以及1.1X107CFU/g。孢子密度通过将软膏用含有0.1质量％Tween80(Tween80、注册商标)的灭菌水稀释至适当的浓度，通过70'C加热30分钟仅杀灭营养细胞，然后接种至普通琼脂培养基，计数所形成的菌落而测定。另一方面，使用凝结芽孢杆菌(Bacilluscoagulans)NBRC12583株以及枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)NBRC3009株，与上述相同地制造软膏剂，各自作为比较例27和28。得到的比较例27和28的软膏剂的孢子密度各自为1.0Xl(^CFU/g以及l.lXl(^CFU/g。此外，使用未添加芽孢杆菌的D(+)海藻糖二水合物，与上述相同地制造软膏剂，作为对照例。将SD大鼠(Oriental酵母工业株式会社、雄性、导入时120g)10只作为1组，对7组，以饲养温度23。C、自由给水、自由喂食实验动物用饲料MF(Oriental酵母工业株式会社产品)，进行l周的预备饲养，确认外观和行为无异常。用戊巴比妥对大鼠进行麻醉，对右大腿除毛后固定在固定台上，在一次性注射器的底部(直径16mm)连续进行6天、每天6小时的压迫(压力1.0kg/cm2)。在注射器底部和大鼠的大腿之间加入硅的薄垫片。压迫试验结束后，以每天100mg将上述得到的实施例、比较例和对照例的软膏剂涂至各组的褥疮部位，对各个软膏剂进行药效评价。药效评价通过肉眼观察和病理组织学观察进行。肉眼观察通过用游尺测定褥疮部分的长径和短径，测定经过天数的褥疮部分的面积变化和治疗天数而进行。首先，以褥疮制作第2天的褥疮部分的长径和短径的积作为100%，用下式算出与此相对的第3天以后的长径和短径的积的比率(面积比)。面积比(％)=(褥疮部分的长径X短径[观测日])X100/(褥疮部分的长径X短径[褥疮制作第2天])将该面积比y与经过天数x进行绘图，得到曲线f(x)，通过下式求得<formula>formulaseeoriginaldocumentpage43</formula>所表示区域的大致面积，作为治愈经过的指标。即，在褥疮部分变小为止，天数越多，治愈经过的指数越大。[数l]is面积比[第n天]+面积比[第n+1天]治愈经过指标<formula>formulaseeoriginaldocumentpage43</formula>此外，将褥疮部分形成上皮、完成治愈所需天数作为治愈天数。结果如表23所示。表23<table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table>根据表23，涂抹了实施例3538的软膏剂，较之于涂抹比较例27和28的软膏剂，治愈天数短。此外，治愈经过指数也小，可尽早得到较高的治愈率。此外，开始涂抹软膏剂第5天和第10天摘取褥疮部位的皮肤，用10%中性缓冲福尔马林液固定后，根据一般方法制作石蜡切片，进行苏木素伊红染色，进行病理组织学观察。病理组织学观察的结果发现，涂抹了实施例35~38的软膏剂的组，在开始涂抹第5天，残存的毛囊细胞长出上皮组织，从边缘出现痂皮剥离。再生上皮的下层，肉芽组织形成显著，较之于比较例27和28，组织修复明显。此外，在开始涂抹第10天，从边缘显著出现上皮伸长，细胞湿润局限于上层，再生上皮也形成了纤维，逐渐治愈。另一方面，涂抹了比较例27和28的软膏剂的褥疮部分的边缘，可确认再生上皮覆盖，缺损部分覆盖有厚痂皮，上皮伸长被抑制。其结果显示，含有实施例35~38的苏云金芽胞杆菌的软膏剂具有促进损伤治愈的效果。(B)整肠剂使用上述孢子形成培养基将苏云金芽胞杆菌BGSC4D1在37'C下液体培养72小时。将得到的培养液离心分离，收集菌体。将得到的菌体冻结干燥后粉碎，加入D(+)海藻糖二水合物(试剂特级、和光纯药工业株式会社产品)，令孢子密度为2X107CFU/g。将如此得到的含有苏云金芽胞杆菌细菌孢子的50质量份海藻糖与50质量份的马铃薯淀粉混合，制成每片350mg的片剂，制造整肠剂，作为实施例39。实施例39的整肠剂的孢子密度为l.lX107CFU/g。孢子密度通过将整肠剂用灭菌水稀释至适当的浓度，通过7(TC加热30分钟仅杀灭营养细胞，然后接种至普通琼脂培养基，计数所形成的菌落而测定。另一方面，使用凝结芽孢杆菌NBRC12583株，与上述相同地制造整肠剂，作为比较例29。比较例29的整肠剂的孢子密度为1.2X107CFU/g。此外，使用未添加芽孢杆菌的D(+)海藻糖二水合物，与上述相同地制造组合组作为对照例。(a)软便的改善试验以出现软便的成人为对象，研究含有苏云金芽胞杆菌的整肠剂对便性的影响。使11名40多岁的男性、以及7名50多岁的男性在早饭、午饭、以及晚饭后各摄取3片上述实施例39的整肠剂，摄取2周。接下来的2周摄取对照例的组合物。再接下来的2周摄取比较例29的整肠剂。摄取期开始前的2周为非摄取期，对于非摄取期以及各摄取期的便性进行问巻调查。即根据下述评价记录便的形状和硬度。便的形状1.水状2.泥状3.半捏合状4.香蕉状5.硬梆梆状6.圆粒状便的硬度1.非常软2.软3.—般4.硬5.非常硬结果如表24所示。表25<table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table>摄取实施例39的整肠剂，对于排便次数、便的形状、畅快感，得到了改善。另一方面，摄取了比较例29的整肠剂时，排便次数、便的形状、畅快感与对照例几乎相同。以上结果表明，含有苏云金芽胞杆菌的孢子的整肠剂可改善通便、便性。(23)含有苏云金芽胞杆菌的食品使用上述孢子形成培养基将苏云金芽胞杆菌BGSC4D1在37'C下液体培养24小时。用自来水以4'C浸渍极小大豆1晚，用压力蒸煮锅以121'C、30分钟灭菌。对于如此调制的灭菌大豆，以上述芽孢杆菌培养液的1000倍稀释液以每100g灭菌大豆植菌2ml，37°C下培养48小时。再进行4'C、72小时的冷藏熟成，制成实施例40。孢子密度为2.9X109CFU/g。孢子密度通过在10g大豆培养物中加入90ml灭菌水，用高速搅拌器((株式会社)日本精机制作所制造)以10，000rpm进行2分钟高速搅拌后，再用灭菌水稀释至适当的浓度，通过7(TC加热30分钟仅杀灭营养细胞，然后接种至普通琼脂培养基，计数所形成的菌落而测定。使用枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)NBRC3009株，与上述相同地制造，作为比较例30。孢子密度为1.0X109CFU/g。此外，将未添加芽孢杆菌的灭菌大豆作为对照例。(a)软便的改善试验以出现软便的成人为对象，研究含有苏云金芽胞杆菌的食品对便性的影响。使11名40多岁的男性、以及7名50多岁以每天100g摄取上述实施例40的食品，摄取2周。接下来的2周摄取对照例的食品。再接下来的2周摄取比较例30的食品。摄取期开始前的2周为非摄取期，对便性进行问巻调査。即根据下述评价记录便的形状和硬度。便的形状1.水状2.泥状3.半捏合状4.香蕉状5.硬梆梆状6.圆粒状便的硬度1.非常软2.软3.—般4.硬5.非常硬结果如表26所示。表26<table>tableseeoriginaldocumentpage46</column></row><table>摄取实施例40的食品，对于便的形状及硬度，保形性得到了改善。另一方面，摄取了比较例30的食品时，便的形状及硬度与对照例几乎相同。(b)便秘的改善试验以有便秘倾向的成人为对象，研究含有苏云金芽胞杆菌的食品对便性的影响。使17名30多岁的女性、以及5名40多岁的女性以每天100g摄取上述实施例40的食品，摄取2周。接下来的2周摄取对照例的食品。再接下来的2周摄取比较例30的食品。摄取期开始前的2周为非摄取期，对便性进行问巻调査。即根据下述评价记录排便次数、便的形状和畅快感。排便次数次/一周便的形状1.水状2.泥状3.半捏合状4.香蕉状5.硬梆梆状6.圆粒状畅快感1.非常差2.差3.—般4.好5.非常好结果如表27所示。表27<table>tableseeoriginaldocumentpage47</column></row><table>摄取实施例40的食品，对于排便次数、便的形状及畅快感得到了改善。另一方面，摄取了比较例30的食品时，排便次数、便的形状及畅快感与对照例几乎相同。以上结果表明，含有苏云金芽胞杆菌的孢子的食品对通便、便性的改善有用。产业上利用的可能性通过向动物投与本发明的有害菌防除剂，使苏云金芽胞杆菌在肠内增殖，抑制有害菌的增殖、令细菌自体诱导因子失活，以此改善肠内菌群的平衡，预防、治疗感染症。特别是，本发明的有害菌防除剂所含的苏云金芽胞杆菌对于有害菌具有拮抗作用、细菌干扰、屏障作用、阻碍停留在肠道细胞、竞争排除的作用。本发明的有害菌防除剂可适用于预防、治疗感染症的药品、用于改善肠内菌群平衡的食品、促进家畜生长的词料。权利要求1.一种有害菌防除剂，其特征在于，含有苏云金芽胞杆菌(Bacillusthuringiensis)。2.如权利要求1所述的有害菌防除剂，其特征在于，上述苏云金芽胞杆菌具备胆汁酸耐受性。3.如权利要求1或2所述的有害菌防除剂，其特征在于，上述苏云金芽胞杆菌还具有细菌自体诱导因子失活能力。4.如权利要求13任意一项所述的有害菌防除剂，其特征在于，苏云金芽胞杆菌含有苏云金芽胞杆菌苏云金亚种(Bacillusthuringiensissubsp.thuringiensis)BGSC4A3株、苏云金芽胞杆菌库斯塔克亚种(Bacillusthuringiensissubsp.kurstaki)BGSC4D1株、苏云金芽胞杆菌鲇泽亚种(Bacillusthuringiensissubsp.aizawai)BGSC4J4株、苏云金芽胞杆菌以色列亚种(Bacillusthuringiensissubsp.israelensis)BGSC4Q7株、或它们的变异株。5.如权利要求14任意一项所述的有害菌防除剂，其特征在于，上述有害菌为引起感染症的病原菌。6.如权利要求15任意一项所述的有害菌防除剂，其特征在于，上述病原菌为属于革兰氏阴性细菌的病原菌引起的感染症。7.如权利要求6所述的有害菌防除剂，其特征在于，上述属于革兰氏阴性细菌的病原菌至少是沙门氏菌属菌、弯曲杆菌属菌、弧菌属细菌、耶尔森属细菌、气单胞菌属细菌、假单胞菌属细菌、大肠杆菌、志贺氏菌的l种。8.如权利要求15任意一项所述的有害菌防除剂，其特征在于，上述病原菌为属于革兰氏阳性细菌的病原菌引起的感染症。9.如权利要求8所述的病原菌防除剂，其特征在于，上述属于革兰氏阳性细菌的病原菌至少是梭菌(Clostridium)属细菌、芽孢杆菌(Bacillus)属细菌、葡萄球菌(Staphylococcus)属细菌、链球菌(Streptococcus)属细菌、李斯特菌(Listeria)属细菌的1种。10.—种药品，其特征在于，含有如权利要求19任意一项所述的有害菌防除剂。11.如权利要求10所述的药品，其特征在于，用于预防、治疗病原菌引起的感染症。12.如权利要求10或11所述的药品，其特征在于，所述药品用于人。13.如权利要求10或11所述的药品，其特征在于，所述药品用于人以外的动物。14.一种食品，其特征在于，含有权利要求19任意一项所述的有害菌防除剂。15.—种饲料，其特征在于，含有权利要求19任意一项所述的有害菌防除剂。16.如权利要求15所述的词料，其特征在于，所述饲料用于预防、治疗动物的肠内感染症。17.—种动物的饲养方法，其特征在于，工序为令动物摄取权利要求15或16所述的饲料。全文摘要为了通过抑制病原菌的增殖、令细菌自体诱导因子失活，从而改善肠内菌群的平衡，促进动物的整肠，预防、治疗这些病原菌引起的感染症，因此向动物投与含有苏云金芽胞杆菌的药物，令动物摄取含有苏云金芽胞杆菌的食物或饲料。文档编号A61K35/74GK101309696SQ20068004278公开日2008年11月19日申请日期2006年10月5日优先权日2005年11月18日发明者望月正己申请人:出光兴产株式会社