专利名称：一种抑制实体肿瘤及白血病癌细胞生长的短肽及其应用的制作方法
技术领域：
本发明属于生物技术医药领域，本发明更具体涉及了一种抑制实体肿瘤及白血病癌细胞生长的短肽及 其应用。
背景技术：
在癌症发生与治疗的过程中，化学治疗一直属于主体部分。现有的临床使用的化疗药物，如环磷酰胺、 顺铂、阿糖胞苷、阿霉素和长春新碱等，它们主要是用来破坏细胞的周期的，RNA、 DNA和蛋白质都是此类
药物的耙向目标。近年来，AS203在对于白血病的治疗上取得了很大的进展，但是，该药物和其他化疗药物,
其本身都有自己的毒性，不管是一种化疗药物单独使用还是几种化疗药物结合运用在临床治疗上，其在对 癌症有明显疗效，杀伤杀死癌细胞的同时，也会损害病人的正常细胞。化疗药物的副作用最普遍的就是对 病人的骨髓产生极度抑制，造成病人的极大痛苦，甚至引起死亡。到目前，除了早发现癌症病情并实行手 术切除肿瘤包块外，对于已经扩散的肿瘤和白血病仍没有特效药物去治疗[Cancer Biology癌生物学， R. J.B金著，刘以训主译，科学出版社，2002],现有临床上用于癌症治疗的药物大都是化合物，而短肽 在癌症方面的应用尚无文献报道。
发明内容
本发明目的是针对上述问题，提供一种抑制实体肿瘤及白血病癌细胞生长的短肽及其应用。 本发明的一种抑制实体肿瘤及白血病癌细胞生长的短肽，其特征在于组成短肽的氨基酸主序列〈1〉
和编码短肽的核苷酸主序列〈2〉如下
<1> J-Ala-B-Asn-0-Val-Z其中，J代表氨基酸Pro, Asn或Ala; B代表氨基酸Ser或Leu; 0代
表氨基酸Leu或Thr; Z代表氨基酸Lys， Ala或Arg <2>AHQ GCT或GCA或GCG或GCC IMC AAT或AAC NTG GTG或GTA或GTC或GTT AAA或AAG或GCC
其中，H代表核苷酸G， A或C; Q代表核苷酸G, T或C; M代表核苷酸T或C; N代表核苷酸C
或T;'
核苷酸T k C; N代表核苷酸C或T;
所述短肽的氨基酸主序列为氨基酸位置固定的主序列，其间隔的位置选择排列相对应的氨基酸。
本发明的抑制实体肿瘤及白血病癌细胞生长的短肽片段，其氨基酸主序列具有与该短肽氨基酸主序列
》70%的相同性，》90%的相似性，片段为把所述的7个氨基酸的序列从任意位置截取成3个或4个或5 个或6个氨基酸组成的与所述短肽具有同样生物活性的短肽。
本发明的抑制实体肿瘤及白血病癌细胞生长的短肽类似物具有与所述短肽相同的生物活性，所述类似 物是指在用所述短肽和另一种化合物融合或者用所述短肽的氨基酸序列融合另外的多肽或者蛋白质而形 成具有生物活性的多肽序列或蛋白质。
本发明的抑制实体肿瘤及白血病癌细胞生长的短肽衍生物，其氨基酸序列具有与短肽氨基酸主序列》 70%的相同性，》90%的相似性，该衍生物是指把所述氨基酸的序列中的氨基酸的一个或者几个氨基酸的 某个基团用另外的基团取代后与所述短肽具有同样生物活性的短肽。
本发明的抑制实体肿瘤及白血病癌细胞生长的短肽变体，其氨基酸序列具有与短肽氨基酸主序列》 70%的相同性，》90%的相似性，该变体是指一种具有一个或几个氨基酸或核苷酸改变的氨基酸序列或编 码它的核苷酸序列，所述改变包括在氨基酸序列或核苷酸序列中，在序列中间的任一位置缺失、插入或替 换氮基酸或核苷酸，或在序列两端添加氨基酸或核苷酸。
本发明的短肽、核苷酸、短肽片段、短肽类似物、短肽衍生物和短肽变体用于制备具有治疗非实体肿 瘤人髓系各类病变细胞增生引起的白血病、治疗人实体肿瘤癌细胞增殖的各类癌症如肝癌、肺癌、胃癌、 乳腺癌、肠癌、宫颈癌等由于癌细胞无限增殖引发的一切癌症、诊断与检测癌症的发生以及癌症发生的恶 性程度药物的应用。
本发明的短肽或核苷酸用于制备具有作为蛋白酶抑制剂或者促进剂或者亲和试剂的药物或者检测试 剂的应用。
本发明的显著优点是本发明的短肽来自于运用生物信息学的方法把国际蛋白质数据库的蛋白进行序 列比对，筛选出来的一种新型的具有活性功能的生物活性肽，运用本发明的短肽抑制或杀伤癌细胞的同时 对正常细胞无显著伤害作用，解决了现有癌症药物在抑制或杀死癌细胞的同时对人体正常细胞也有严重伤 害的缺陷。
图l是本发明的短肽对人肝癌细胞的抑制作用的效果试验。图中所示，本发明涉及的短肽明显抑制人肝癌细胞系H印g2生长，但对正常人肝细胞系L02的影响不大。
图2是运用透射电镜检验分析本发明涉及的短肽诱导急性粒系白血病细胞凋亡的超微结构的试验结 果。(a)对照组，Control为未加该短肽的阴性对照照片；(b)试验组，LH为本发明所涉及的短肽诱导白 血病细胞凋亡的照片，图片显示为凋亡小体的出现，线粒体、溶酶体等都出现了显著的凋亡特征。其中， Scale bar为5微米。
具体实施例方式
短肽的制备方法采用化学合成的方法，即本领域熟知的已经非常成熟的固相肽合成方法，既可以采用 Boc方法也可以采用Fmoc方法。具体做法就是将被保护的氨基酸逐个偶眹到惰性固相载体上去，然后利用 强酸将肽链从载体上裂解下来，同时去除侧链保护。
短肽的氨基酸主序列为氨基酸位置固定的主序列，其间隔的位置选择排列相对应的氨基酸，例如，在 J位置的氨基酸有3种Pro, Asn或Ala;，此3种氨基酸都可以单一地安放在〈1〉中J的位置上，不管选择 其中任何一种，该短肽仍具有其原有的生物活性，即抑制恶性肿瘤细胞增长，同样地B和O所代表的位置 的氨基酸也有如此特性。
核苷酸采用人工合成方法制备；编码短肽的核苷酸包含下组中的一种-
(a) 编码具有所述氨基酸序列的短肽或其片段、类似物、衍生物或其变体的核苷酸；
(b) 与(a)所述核苷酸互补的核苷酸；
(c) 与(a)或(b)中所述核苷酸有》75%相同性的核苷酸；
该核苷酸基本由编码具有<1>氨基酸序列短肽的核苷酸组成，本发明的核苷酸序列包括〈2〉中的核苷酸 序列，其形式为DNA形式包括cDNA或人工合成的DNA。 DNA可以是单链的也可以是双链的。编码短肽的编 码区序列可以和〈2〉中的核苷酸相同，也可以不同，称为变异体，其中变异体是指具有编码〈D中的氨基酸 序列的编码，但可以和〈2〉中的核苷酸不同。变异体可以是一个或儿个核苷酸取代、插入、缺失的核苷酸 序列，但不会改变编码〈1〉中氨基酸序列的短肽的活性功能。
该短肽或核苷酸的"变体"是指一种具有一个或几个氨基酸或核苷酸改变的氨基酸序列或编码它的核 苷酸序列。改变可包括氨基酸序列或核苷酸序列中氨基酸或核苷酸的缺失、插入、添加或替换。变体可具 有"保守性"改变，其中替换的氨基酸具有与原氨基酸相类似的结构或化学性质，也可以有"非保守性" 改变，其中替换的氨基酸不具有与原氨基酸相类似的结构或化学性质。"缺失"是指在氨基酸序列或核苷 酸序列中一个或几个氨基酸或核苷酸的缺失；"插入"是指在氨基酸序列或核苷酸序列的中间任意位置插
入一个或几个氨基酸；"添加"是指在氨基酸序列或核苷酸序列的N端或C端添加一个或几个氨基酸"替 换"是指用不同的氨基酸或核苷酸替换一个或几个氨基酸或核昔酸。
该短肽、核苷酸、短肽片段、短肽类似物、短肽衍生物和短肽变体用于制备具有抑制与治疗包括但不 限于下述疾病的药物的用途
1. 非实体肿瘤髓系白血病急性非淋巴细胞白血病(M1:未分化的原粒细胞白血病；M2:部分分 化的原粒细胞白血病；M3:急性早幼粒细胞白血病；M4:急性粒、单核细胞白血病；M5:急性 单核细胞白血病；M6:急性红血病或红白血病；M7:急性巨核细胞白血病)，急性淋巴细胞白血 病，慢性粒细胞白血病，慢性粒-单细胞白血病，慢性单核细胞白血病以及其他特殊类型的细胞恶 性增殖类型的白血病。
2. 实体肿瘤癌症肝癌、肺癌、宫颈癌、乳腺癌、胃癌、肠癌症、胰腺癌以及其他的恶性细胞增殖 类型的癌症疾病。
在计算短肽片段、短肽衍生物和短肽变体的氨基酸主序列具有与短肽氨基酸主序列的相同性和相似性 时，"相同性百分率"是指两种或多种氨基酸或核酸序列比较中序列相同的百分率。根据Cluster法 (HiggingD.G. & Sharp P. M. ， Gene 1988， 73:234-237 )通过检査所有配对之间的距离将各组序列排列 成簇，然后将各簇以成对或成组分配。两个氨基酸序列如序列A和序列B之间的相同性百分率通过下式计 算
_序列A与序列B之间匹配的残基个数X 100%_
序列A的残基个数-序列A中间隔的残基个数-序列B中间隔的残基个数 "相似性"是指在确定两条氨基酸序列比对中相同氨基酸序列位置确定后，在相同氨基酸之间排列的 对应的氨基酸的保守性取代程度。根据生物信息技术领域周知的氨基酸得分PAM 250 scoring matrix (Dayhoff, M. Schwartz, R. M. and Orcutt, B. C. Atlas of Protein Structure 1978， 345-352; DeLisi， C. and Kanehis4 M. Mathematical Biosciences 1984.69: 77-85; Schwartz, R. M. and Dayhoff, M. O. Atlas of Protein Structure, 1979. 353-358)，当相对应的不同氨基酸比较得分》0时，该两个氨基酸相似；当不同氨基酸得分<0时，两个氨基酸不相似。两个氨基酸序列如序列C和序列D之间的相似性百分率通过下式计算
(序列C与序列D之间匹配的残基个数+序列C与序列D之间相似的残基个数)X腿
序列C的残基个数-序列C中间隔的残基个数-序列D中间隔的残基个数
其中，序列C中间隔的残基个数和序列D中间隔的残基个数都不包括相似氨基酸的个数。
下面结合实施例，进一步阐述本发明。这些实施举例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。 下列所有列举实施例所涉及的所有合成短肽都具有本发明涉及的药物功能而不限于所列举功能。
实施例1
抑制肝癌细胞的试验(合成本发明涉及的短肽Pro-Ala-Leu-Asrt-Thr-Val-Lys)
人肝癌细胞系H印g2细胞的培养是用含有10%新生牛血清的RPMI 1640培养基来培养，以5X10V孔 的细胞密度种植入96孔细胞板，24小时后，把本发明涉及的短肽按照不同的浓度加入到细胞培养板中， 以等体积的PBS为对照组，24、 48、 72小时后用MTT方法检验活细胞成活率，给药组和对照组比较，获得 肝癌细胞的抑制率。如图1所示。 实施例2
抑制急性粒细胞白血病(M2)(合成本发明涉及的短肽衍生物，在丝氨酸加磷酸类基团修饰 Pro-A1 a-S er/r"Asn-Thr-Va Hys )
人急性粒细胞白血病细胞系HL60细胞的培养是用含有10%新生牛血清的RPMI 1640培养基来培养， 以107孔的细胞密度种植入24孔细胞板后，立刻把本发明涉及的短肽按照不同的浓度加入到细胞培养板 中，以等体积的PBS为对照组，实验结果表明该种细胞在5天的抑制率达到80%。
实施例3
急性粒细胞白血病细胞凋亡检验(合成本发明涉及的短肽片段，在序列中截取4个或者5个氨基酸 Asri-Leu-Val-Lys或Ala-Ser-Asn-Leu-Val)
急性粒细胞白血病细胞的培养是用含有10%新生牛血清的RPMI 1640培养基来培养，以1(f/孔的细胞 密度种植入24孔细胞板后，立刻把本发明涉及的短肽按照不同的浓度加入到细胞培养板中，以等体积的 PBS为对照组，现有临床药物As203作为阳性对照，24小时后，把细胞离心后去上清，用3%戊二醛-1.5% 多聚甲醛前固定细胞颗粒l天(4'C)以后，1%锇酸-1. 5%亚铁氰化钾后固定1. 5h， PBS漂洗；70%酒精 饱和醋酸铀染液块染，酒精-丙酮梯度脱水，环氧树脂618包埋剂包埋。超薄切片80nm，醋酸铀、柠檬酸 铅各染色5 min;在日立Hu-12A型或飞利浦EM 208型透射电镜下观察，实验结果如图2所示，其中，LH 为凋亡小体；Control为对照组，为一个完整细胞。 实施例4
1抑制肺癌细胞的试验(合成本发明涉及的短肽变体，即在序列的N端增加一个Gla氮基酸 Gl3-Arg-Ala-Ser-Asn-Thr—Val-Lys)
人肺癌细胞系A549细胞的培养是用含有10%新生牛血清的RPMI 1640培养基来培养，以5 X 10'V孔的 细胞密度种植入96孔细胞板，24小时后，把本发明涉及的短肽按照不同的浓度加入到细胞培养板中，以 等体积的PBS为对照组，24、 48小时后分别用细胞计数板计数，给药组和对照组比较，获得肺癌细胞的抑 制率达78%。
5核苷酸或氨基酸序列表
<110〉李昊
〈120〉一种抑制实体肿瘤及白血病癌细胞生长的短肽及其应用
<160> 97
〈210〉 1
〈211〉 7
<212> PRT
〈213>人工序列
<220>
〈223〉 J代表氨基酸Pro, Asn或Ala; B代表氨基酸Ser或Leu; 0代表氨基酸Leu或Thr; Z代表氨基
酸Lys， Ala或Arg <400〉 1
J-Ala-B-Asn-0-Val-Z
〈210〉 2 <211> 21 <212〉 DNA <213〉人工序列 〈220〉
〈223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 2
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<210> 3 <211> 21 <212> DNA <213〉人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G,T或C; ra代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 3
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〈210> 4 〈211〉 21 <212> DNA <213>人工序列 <220>
〈223〉 h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 4
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〈210〉 5 〈211> 21 <212> DNA 〈213〉人工序列
6<220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 5
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<210> 6 〈211> 21 <212〉腿 <213>人工序列 <220>
〈223〉 h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 6
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<210> 7 <211> 21 〈212〉腿 <213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 7
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<210> 8 〈211〉 21 <212> DNA <213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G， T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 8
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<210〉 9 <211> 21 <212> DNA <213>人工序列 〈220〉
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 9
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〈210〉 10 <211> 21 <212> DNA <213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G, A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。<400> 10
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<210> 11 <211〉 21 <212> DNA 〈213〉人工序列 <220〉
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 11
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<210> 12 〈211〉 21 <212〉 DNA <213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 12
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<210> 13 <211> 21 <212> DNA <213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 13
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<210> 14 <211> 21 〈212〉 DNA 〈213〉人工序列 <220>
〈223〉 h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 14
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<210> 15 〈211> 21 <212> DNA <213>人工序列 <220>
<223〉 h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 15
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8〈210〉 16 <211> 21 <212> DNA 〈213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 16
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<210> 17 <211> 21 〈212〉腿 <213>人工序列 〈220>
〈223〉 h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 17
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<210> 18 〈211〉 21 <212> DNA <213>人工序列 <220>
〈223〉 h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 18
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<210〉 19 <211> 21 <212> DNA <213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G， A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 19
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<210> 20 <211> 21 <212>丽 <213〉人工序列 <220>
<223〉 h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 20
ahq gcs tmc sst ntg gt3 ass <210> 21<211〉 21 〈212〉 DNA 〈213〉人工序列 〈220〉
<223〉 h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 21
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〈210〉 22 <211> 21 <212>腿 <213〉人工序列 〈220〉
<223〉 h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 22
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<210> 23 〈211> 21 <212>廳 <213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 23
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<210〉 24 <211> 21 <212>腿 <213>人工序列 <220>
<223〉 h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 24
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〈210〉 25 <211> 21 〈212〉 DNA <213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 25
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<210> 26 〈211〉 21 <212> DNA〈213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 26
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<210〉 27 〈211〉 21 <212>腿 <213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400〉 27
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<210> 28 〈211〉 21 <212>醒 <213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 28
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<210> 29 <211> 21 〈212〉醒 〈213>人工序列 〈220〉
〈223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 29
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<210> 30 〈211> 21 <212>腿 <213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 30
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<210> 31 <211> 21 <212> DNA <213>人工序列 <220>
1〈223〉 h代表核苷酸G,八或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400>31
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<210〉 32 <211〉 21 <212〉 DNA <213〉人工序列 <220〉
<223〉 h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 32
ahq gca tmc ssc ntg gtt 333
<210〉 33 <211〉 21 <212〉 DNA <213〉人工序列 <220〉
<223〉 h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 33
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<210〉 34 <211〉 21 <212〉 DNA <213>人工序列 <220〉
<223〉 h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 34
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<210〉 35 〈211〉 21 <212〉 DNA <213〉人工序列 <220>
<223〉 h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 35
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<210> 36 <211> 21 <212〉 DNA <213>人工序列 <220>
<223〉 h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 36<formula>formula see original document page 13</formula><210> 42 <211> 21 <212>腿 <213>人工序列 〈220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 42
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〈210〉 43 <211> 21 <212> DNA <213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 43
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<210> 44 <211> 21 〈212〉丽 <213〉人工序列 <220>
〈223〉 h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 44
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<210> 45 <211〉 21 <212> DNA <213>人工序列 <220>
<223〉 h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 45
ahq gcg tmc ssc ntg gt3 asg
<210> 46 <211〉 21 <212〉腿 <213〉人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 46
shq g口g tmc aac ntg gtc aaa
<210> 47 <211〉 21
14<212>腿 〈213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 47
ahq gcg tmc aac ntg gtc aag
<210> 48 <211> 21 <212〉腿 <213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 48
ahq gcg tmc asc ntg gtt aaa
<210> 49 <211> 21 <212> DNA <213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 49
ahq gcg tmc 3sc ntg gtt ssg
<210> 50 〈211> 21 <212>靈 〈213〉人工序列 〈220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 50
ahq gcc tmc sst ntg gtg 333
<210> 51 <211> 21 <212> DNA <213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400>51
ahq gcc tmc aat ntg gtg aag
<210> 52 <211〉 21 <212>腿 <213>人工序列<220>
<223> h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 52
ahq gcc tmc sst ntg gts sss
<210〉 53 <211〉 21 <212〉丽 <213>人工序列 <220>
〈223〉 h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 53
ahq gcc tmc sst ntg gts ssg
<210> 54 〈211> 21 <212>腿 <213〉人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 54
ahq gcc tmc 3st ntg gtc 333
<210> 55 <211〉 21 <212>醒 <213〉人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 55
ahq gcc tmc sst ntg gtc 33g
<210> 56 ,
<211> 21
<212>廳
<213>人工序列
<220〉
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 56
ahq gcc tmc aat ntg gtt aag
<210> 57 〈211> 21 〈212〉 DNA 〈213〉人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。
16<400> 57
ahq gcc tmc aat ntg gtt aaa
〈210> 58 <211> 21 <212〉 DNA 〈213〉人工序列 〈220〉
<223> h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 58
ahq gcc tmc sst ntg gtg 333
<210〉 59 〈211〉 21 〈212〉 DNA <213>人工序列 <220〉
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 59
ahq gcc tmc ast ntg gtg sag
<210> 60 <211> 21 〈212>腿 <213>人工序列 <220>
〈223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 60
ahq gcc tmc 33t ntg gts 333
〈210〉 61 〈211〉 21 〈212>腿 <213>人工序列 <220〉
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 61
ahq gcc tmc sst ntg gts ssg
<210〉 62 〈211> 21 <212> DNA <213>人工序列 <220>
〈223〉 h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 62
ahq gcc tmc 33t ntg gtc sss
17<210〉 63 <211> 21 <212> DNA <213>人工序列 <220〉
〈223〉 h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 63
ahq gcc tmc 33t ntg gtc ssg
<210> 64 <211〉 21 <212〉腿 <213>人工序列 <220>
<223〉 h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 64
ahq gcc tmc sst ntg gtt 333
<210> 65 〈211〉 21 〈212>腿 〈213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 65
ahq gcc tmc aat ntg gtt aag
<210〉 66
<211> 21 <212〉謹 <213〉人工序列 〈220〉
<223> h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。
<400> 2
ahq get tmc aat ntg gtg gcc
<210> 67 〈211〉 21 <212>腿 <213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 3
ahq get tmc sst ntg gts gcc 〈210〉 68<211> 21 <212>腿 <213>人工序列 <220>
〈223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 4
ahq get tmc aat ntg gtc gcc
<210> 69 〈211〉 21 〈212〉 DNA <213>人工序列 <220>
<223〉 h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 5
ahq get tmc aac ntg gtg gcc
<210> 70 <21D 21 <212>腿 <213>人工序列 〈220〉
<223〉 h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 6
ahq get 加c ssc ntg gts gcc
<210> 71 <211> 21 <212> DNA <213〉人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 7
ahq get tmc ssc ntg gtc gcc
〈210〉 72 〈211〉 21 <212> DNA <213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; Q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 8
ahq get tmc aac ntg gtt gcc
<210> 73 <211> 21 〈212>腿<213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 9
ahq gc3 tmc ast ntg gtg gcc
<210> 74 〈211> 21 <212>腿 〈213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 10
ahq gc3 tmc sst ntg gts gcc
〈210> 75 <211> 21 〈212〉 DNA <213〉人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 11
ahq gca tmc aat ntg gtc gcc
〈210〉 76 <211> 21 <212> DNA 〈213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 12
ahq gca tmc aat ntg gtt gcc
<210〉 77 〈211> 21 〈212> DNA <213>人工序列 <220>
〈223> h代表核苷酸G, A或C; q代表核苷酸G， T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 13
ahq gca tmc aac ntg gtg gcc
<210> 78 <211> 21 <212> DNA <213〉人工序列 〈220〉<223> h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 14
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<210〉 79 〈211> 21 〈212〉丽 <213>人工序列 <220>
〈223〉 h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 15
ahq gca tmc ssc ntg gtc gcc
〈210〉 80 <211> 21 〈212〉 DNA <213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 16
ahq gca tmc 33C ntg gtt gcc
<210> 81 <211> 21 〈212> DNA <213>人工序列 <220>〈223> h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 17
ahq gcg tmc aat ntg gtg gcc
〈210〉 82 <211> 21 <212〉 DNA <213>人工序列 <220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 18
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<210> 83 <211> 21 <212>薩 <213>人工序列 <220>
<223〉 h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。 <400> 19ahq gcg tmc aat ntg gtc gcc
<210〉 84<211〉 21<212>廳<213>人工序列<220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。<400> 20
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<210> 85〈211〉 21<212>腿〈213>人工序列<220>
<223> h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。<400〉21
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<210> 87<211> 21(212〉丽〈213〉人工序列<220>
<223〉 h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。<400> 22
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<210〉 88<211> 21<212>腿<213>人工序列〈220〉
〈223〉 h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。<400> 23
ahq gcg tmc aac ntg gtc gcc
<210> 89<211> 21<212> DNA〈213>人工序列<220>
<223> h代表核苷酸G, A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。<400> 24
ahq gcg tmc sac ntg gtt gcc<210> 90<211> 21<212> DNA<213>人工序列〈220>
<223> h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。<400〉 25
ahq gcc tmc ssc ntg gtg gcc
<210> 91〈211> 21<212> DNA<213>人工序列〈220〉
<223〉 h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。<400> 26
ahq gcc tmc ssc ntg gts gcc
<210> 92<211> 21<212> DNA〈213〉人工序列<220>
<223> h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。<400> 27
ahq gcc tmc aac ntg gtc gcc
<210> 93<211> 21<212〉 DNA<213>人工序列<220>
<223> h代表核苷酸G， A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。<400> 28
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〈210> 94<211> 21<212>腿<213>人工序列〈220〉
<223> h代表核苷酸G,A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。<400> 29
ahq gcc tmc sst ntg gtg gcc
<210> 95<211> 21
23<212> DNA<213>人工序列〈220〉
〈223〉 h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。<400> 30
ahq gcc tmc sst ntg gts gcc
〈210> 96<211〉 21〈212〉腿〈213〉人工序列<220>
<223> h代表核苷酸G， A或C; q代表核苷酸G,T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。<400>31
ahq gcc tmc aat ntg gtc gcc
〈210> 97〈211〉 21<212> DNA〈213>人工序列<220〉
<223〉 h代表核苷酸G，A或C; q代表核苷酸G，T或C; m代表核苷酸T或C; n代表核苷酸C或T。<400> 32
ahq gcc tmc aat ntg gtt gcc
2权利要求
1. 一种抑制实体肿瘤及白血病癌细胞生长的短肽，其特征在于组成短肽的氨基酸主序列<1>和编码短肽的核苷酸主序列<2>如下<1>J-Ala-B-Asn-O-Val-z其中，J代表氨基酸Pro，Asn或Ala；B代表氨基酸Ser或Leu；O代表氨基酸Leu或Thr；Z代表氨基酸Lys，Ala或Arg；<2>AHQ GCT或GCA或GCG或GCC TMC AAT或AAC NTG GTG或GTA或GTC或GTT AAA或AAG或GCC其中，H代表核苷酸G，A或C；Q代表核苷酸G，T或C；M代表核苷酸T或C；N代表核苷酸C或T；所述短肽的氨基酸主序列为氨基酸位置固定的主序列，其间隔的位置选择排列相对应的氨基酸。
2. —种如权利要求l所述的抑制实体肿瘤及白血病癌细胞生长的短肽片段，其特征在于短肽片段的氨 基酸主序列具有与所述短肽氨基酸主序列》70%的相同性，》90%的相似性，所述片段为把所述的7个 氨基酸的序列从任意位置截取成3个或4个或5个或6个氨基酸组成的与所述短肽具有同样生物活性 的短肽。
3. —种如权利要求l所述的抑制实体肿瘤及白血病癌细胞生长的短肽类似物，其特征在于所述短肽类 似物具有与所述短肽相同的生物活性，所述类似物是指在用所述短肽和另一种化合物融合或者用所述 短肽的氨基酸序列融合另外的多肽或者蛋白质而形成具有生物活性的多肽序列或蛋白质。
4. 一种如权利要求l所述的抑制实体肿瘤及白血病癌细胞生长的短肽衍生物，其特征在于所述短肽衍 生物的氨基酸主序列具有与所述短肽氨基酸主序列》70%的相同性，》90%的相似性，所述衍生物是 指把所述氨基酸的序列中的氨基酸的一个或者几个氨基酸的某个基团用另外的基团取代后与所述短 肽具有同样生物活性的短肽。
5. —种如权利要求l所述的抑制实体肿瘤及白血病癌细胞生长的短肽变体，其特征在于所述短肽变体 的氨基酸主序列具有与所述短肽氨基酸主序列》70%的相同性，》90%的相似性，所述变体是指一种具 有一个或几个氨基酸或核苷酸改变的氨基酸序列或编码它的核苷酸序列，所述改变包括在氨基酸序列 或核苷酸序列中，在序列中间的任一位置缺失、插入或替换氨基酸或核苷酸，或在序列两端添加氨基 酸或核苷酸。
6. 根据权利要求1、 2、 3、 4或5所述的一种抑制实体肿瘤及白血病癌细胞生长的短肽，其特征在于 所述编码短肽的核苷酸包含下组中的一种(a) 编码具有所述氨基酸序列的短肽或其片段、类似物、衍生物或其变体的核苷酸；(b) 与(a)所述核苷酸互补的核苷酸；(c )与(a)或(b)中所述核苷酸有》75%相同性的核苷酸； 所述核苷酸采用人工合成方法制备。
7. 根据权利要求6所述的抑制实体肿瘤及白血病癌细胞生长的短肽，其特征在于所述的短肽采用化学 合成方法制备；所述核苷酸采用人工合成方法制备。
8. —种如权利要求1、 2、 3、 4或5所述的抑制实体肿瘤及白血病癌细胞生长的短肽的应用，其特征在 于所述短肽、核苷酸、短肽片段、短肽类似物、短肽衍生物和短肽变体用于制备具有治疗非实体肿 瘤人髓系各类病变细胞增生引起的白血病、治疗人实体肿瘤癌细胞增殖的各类癌症如肝癌、肺癌、胃 癌、乳腺癌、肠癌、宫颈癌等由于癌细胞无限增殖引发的一切癌症、诊断与检测癌症的发生以及癌症 发生的恶性程度药物的应用。
9. 一种如权利要求6所述的抑制实体肿瘤及白血病癌细胞生长的短肽的应用，其特征在于所述核苷酸用于制备具有治疗非实体肿瘤人髓系各类病变细胞增生引起的白血病、治疗人实体肿瘤癌细胞增殖的 各类癌症如肝癌、肺癌、胃癌、乳腺癌、肠癌、宫颈癌等由于癌细胞无限增殖引发的一切癌症、诊断 与检测癌症的发生以及癌症发生的恶性程度药物的应用。
10. —种如权利要求6所述的抑制实体肿瘤及白血病癌细胞生长的短肽的应用，其特征在于所述短肽或核苷酸用于制备具有作为蛋白酶抑制剂或者促进剂或者亲和试剂的药物或者检测试剂的应用。
全文摘要
本发明提供一种抑制实体肿瘤及白血病癌细胞生长的短肽。该短肽的短肽片段、类似物、衍生物、变体的氨基酸主序列具有与该短肽氨基酸主序列≥70％的相同性，≥90％的相似性；短肽、核苷酸、短肽片段、短肽类似物、短肽衍生物和短肽变体用于制备具有治疗非实体肿瘤人髓系各类病变细胞增生引起的白血病、治疗人实体肿瘤癌细胞增殖的各类癌症、诊断与检测癌症的发生以及癌症发生的恶性程度药物的应用，短肽或核苷酸用于制备具有作为蛋白酶抑制剂或者促进剂或者亲和试剂的药物或者检测试剂的应用。该技术能够解决现有癌症药物在抑制或杀死癌细胞的同时对人体正常细胞也有严重伤害的缺陷。
文档编号A61P35/00GK101497653SQ20081007058
公开日2009年8月5日 申请日期2008年2月1日 优先权日2008年2月1日
发明者昊 李 申请人:昊 李