专利名称：：治疗性功能障碍的选择性多巴胺d4受体激动剂的制作方法
技术领域：
：本发明涉及选择性多巴胺D4受体激动剂的用途和用于治疗性功能障碍的含有选择性多巴胺D4受体激动剂的组合物。
背景技术：
：阴茎的弛緩和勃起由阴茎海绵体平滑肌的张力决定。所述肌张力在外周和中枢神经系统水平上受"f办调的综合生物化学事件控制。交感神经、副交感神经和躯体神经通过神经解剖学的联系控制海绵体张力，所述神经解剖学的联系是下泌尿道神经分布的重要组成部分。阴茎勃起是海绵体平滑肌松弛的最终结果，海绵体平滑肌松弛可通过中枢神经系统(CNS)途径引起。这些途径激活外周神经支配阴茎从而导致一氧化氮(NO)的释放。NO的扩散引起海绵体平滑肌松弛导致阴茎勃起。临床前的证据表明多巴胺(DA)在哺乳动物的阴茎勃起中发挥了重要的作用。在哺乳动物中性刺激可通过感觉(性爱)信息达到大脑皮层引发。大脑皮层与边缘结构如扁桃体，以及中脑结构如水管周围的灰质(PAG)和丘脑下部具有广泛的神经元连接。在丘脑下部的两种重要的核为内侧视交叉前区域(MPOA)和室旁核(PVN)。在性行为中MPOA和PVN核发挥关键作用，因为这些区域的双侧损害完全消除了男性的性行为。使PVN和MPOA核受神经支配的incerto-丘脑下部多巴胺能途径与DA药物的促勃起(pro-erectile)作用有关。在大鼠中，系统给予DA受体激动剂如阿朴吗啡(5，6，6a，7-四氬-6-甲基-4H-二苯并[de,g]喹啉-10,ll-二醇)、喹吡罗和(-)3-(3-羟基苯基)-N-丙基哌啶(3-PPP)促进阴茎勃起，这种作用由中枢DA拮抗剂氟哌啶醇阻断。由于勃起发生的作用可以被外周DA拮抗剂多潘立酮所阻断，人们认为DA激动剂的促勃起作用受中枢介导的(AnderssonK和WagnerG,Physiologyofpenileerection(阴茎勃起的生理学)，PhysiolRev(1995)75:191-236;deGroatW和BoothA，NeuralControlofPenileErection(阴茎勃起的神经控制)，Nervouscontrolofurogenitalsystem(泌尿生殖系统的神经控制)，3巻，(Maggi，C编辑)(1993)467-524页，HardwoodAcademicPublishers,Chur,Switzerland;及MorelandRB，NakaneM，HsiehG和BrioniJD，ProspectivesforPharmacotherapyofMaleErectileDysfimction(男性勃起功能障碍的药物治疗的展望)，CurrOpinionCPNSInvestDrugs(2000)2:283-302)。如L-多巴在帕金森患者中的性刺激作用和阿朴吗啡在人中的促勃起作用所证明的，临床数据也表明在CNS中DA系统对男性的性行为的调节发挥了作用(MoralesA,GeatonJ,JohnstonB和AdamsM，OralandTopicalTreatmentofErectileDysfUnction(勃起功能障石寻的口月良和局吾卩治疗)present和fbture，in:UrologicClinicsofNorthAmerica,(1995)vol.22，879-886页；Padma-NathanH,AuerbachS,LewisR，LewandM和PerdokR，EfficacyandsafetyofapomorphineSLvs.Placeboformaleerectiledysftinction(MED)(安朴吗啡SL对安慰剂用于男性勃起功能障碍(MED)的效果和安全性)，Urology(1999)161:214(abstract821);andDulaE,KeatingW,SiamiP，EdmondsA，O，NeilJ,Efficacyandsafetyoffixed-doseanddose-optimizationregimensofsublingualapomorphineversusplaceboinmenwitherectiledysflmction(在男性勃起功能障碍患者中舌下给予固定剂量和优化剂量方案的安朴吗啡对安慰剂的凌丈果和安全性)，Urology(2000)56:4130-135)。DA受体属于蛋白质受体家族，所述蛋白质受体通过连接细胞内GTP-结合蛋白质从而使信号穿过细胞膜。已经鉴定了几种导致特殊的细胞内事件的G蛋白质(包括Gs、Gq和Gi)(MilliganG和ReesS,ChimaericGProteins:theirpotentialuseindrugdiscovery,TrendsPharmacolSci(1999)20:118-124)。有五种已知的DA受体，它们被分成两组，D广类和D2-类。D广类受体包括Di和D5。02-类受体包括D2、D3和D4(MissaleC,NashS,RobinsonS,JaberM和CaronM,Dopaminereceptors:fromStructuretofimction(多巴胺受体从结构到功能)，PhysiolRev(1998)78:189-225)。D广类家族受体亚型为Gs-偶联的并且可激活腺苷酸环化酶。02-类家族受体亚型为Gi-偶联的并且它们增加细胞内的钙水平并抑制腺香酸环化酶。Dj-类家族膜为可激活腺苦酸环化酶的Gs-偶联的受体。通过mRNA表达和通过免疫组织化学的研究证实，在CNS中受体是最丰富的和分布广泛的DA受体(ValloneD,PicettiRandBorreliE,Structureandfimctionofdopaminereceptors(多巴胺受体的结构和功能)，NeurosciBiobehavRev(2000)24:125-132)。在紋状体、伏隔核和嗅觉的结节以及边缘体系，视丘下部和丘脑中也有发现。已报道Dj受体表达于心脏和肾脏，并且尽管这些外周受体的功能仍需弄清，但其在血液动力学变量控制中的作用已经得到证实。所述D5受体对DA较D!受体具有更高亲合力，其稀少地分布于CNS中，没有表达于CNS外的证据。Dr类家族膜为Gi-偶联的受体，它们抑制腺苷酸环化酶并增加细胞内的4丐水平。D2受体是最丰富的D2-类受体并位于大脑区域如紋状体和黑质，位于外周区域如心脏、腺垂体和肾脏。在腹部层/伏隔核区域、嗅觉的结节、齿状回和紋状体皮层中的具有独特种群丛的Calleja岛中发现丰富的D3受体(SuzukiM，HurdY，SokoloffP,SchwartzJ和SedwallG,D3dopaminereceptormRNAiswidelyexpressinhumanbrain(D3多巴胺受体mRNA广泛表达于人脑中)，BrainRes(1998)779:58-74)。通过现场RNA杂交和免疫^L织化学研究证明D4受体的表达。最近，研究显示在entorhinal皮层、侧隔膜核、海马和下丘脑的中间-f见叶前区域D4表达最高(PrimusR,ThurkaufA,XuJ，YevichE,McinemeyS,ShawK，TallmanJ和GallagherD,LocalizationandcharacterizationofdopamineD4bindingsitesinratandhumanbrainbyuseofthenovelD4receptor-selectiveligand[3H]NGD94-1,JPharmacolExpTher(1997)282:1020-1027)。在大脑中D4的定位不同于D2的分布，因为D2受体在紋状体区域是最丰富的。考虑到视丘下部作为一个在皮层和脊髓束途径之间的结合区域的作用，在视丘下部的MPOA区域D4受体的表达对于促进阴茎的勃起是重要的。在其它的CNS区域、丘脑的、丘脑下的和脊髓的区域D4的参与也不能排除。最近描述两种化合物，N-([4-(2-氰基苯基)-l-哌噪基]曱基H-曱基苯曱酰胺和5-氟-2-([4-(2-吡啶基)-l-哌溱基]曱基HH-吲哚作为选择性多巴胺D4受体激动剂(GlaseSA，AkunneH，GeorgicL,HeffiierT,MacKenzieR,ManleyP，PugsleyT和WiseL，JMedChem(1997)40:1771-1772;及ZornSH,JacksonE,JohnsonC，LewisJ，FliriA,SocNeurosciAbstr23:685(1997))。可是，没有确定为04选择性激动剂的化合物具有明确的治疗效用。本发明确定D4激动剂化合物的治疗用途，它们用于治疗哺乳动物的性功能障碍。更明确地说，为选择性多巴胺D4受体激动剂的化合物用于治疗包括，但不限于，男性勃起功能障碍(MED)的性功能障碍。已知多巴胺受体介导几种其它的生理反应如呕吐和血液动力学的作用。因此，选择性D4激动剂提供一个超过非选择性药物的优点，即在哺乳动物中选择性D4激动剂减少呕吐的发生和/或对血液动力学的影响。
发明内容在主要的实施方案中，本发明涉及一种治疗性功能障碍的方法，该方法包括给予治疗有效量的多巴胺D4受体激动剂或其药学上可接受的盐或药物前体，其中所述化合物不是阿朴吗啡(5，6,6^7-四氲-6-曱基-4H-二苯并[de,g]喹淋-10，ll-二醇)。本发明的另一个实施方案涉及一种治疗男性性功能障碍的方法，所述男性性功能障碍包括，但不限于，勃起功能障碍和早泄，该方法包括给予治疗有效量的选择性多巴胺D4受体激动剂或其药学上可接受的盐或药物前体。本发明的另一个实施方案涉及一种治疗女性性功能障碍的方法，所述女性性功能障碍包括，但不限于，女性性快感缺乏、阴蒂勃起不足、阴道充血、性交困难和阴道痉挛，该方法包括给予治疗有效量的选择性多巴胺D4受体激动剂或其药学上可接受的盐或药物前体。具体实施例方式此中包括的所有参考文献全部通过引用结合到本文中。在其主要的实施方案中，本发明涉及一种治疗性功能障碍的方法，该方法包括给予治疗有效量的多巴胺D4受体激动剂或其药学上可接受的盐或药物前体，其中所述化合物不是阿朴吗啡(5，6,6a,7-四氢-6-曱基-4H-二苯并[de，g]喹啉-10,ll-二醇)。本发明涉及一种治疗男性性功能障碍的方法，所述男性性功能障碍包括，但不限于，勃起功能障碍和早泄，该方法包括给予治疗有效量的多巴胺D4受体激动剂或其药学上可接受的盐或药物前体。本发明也涉及一种治疗女性性功能障碍的方法，所述女性性功能障碍包括，但不限于，女性性快感缺乏、阴蒂勃起不足、阴道充血、性交困难和阴道痉挛，该方法包括给予治疗有效量的多巴胺D4受体激动剂或其药学上可接受的盐或药物前体。在另一个实施方案中，本发明涉及一种治疗性功能障碍的方法，该方法包括给予治疗有效量的选择性多巴胺D4受体激动剂或其药学上可接受的盐或药物前体。本发明涉及一种治疗男性性功能障碍的方法，所述男性性功能障碍包括，^f旦不限于，勃起功能障碍和早泄，该方法包括给予治疗有效量的选择性多巴胺D4受体激动剂或其药学上可接受的盐或药物前体。本发明也涉及一种治疗女性性功能障碍的方法，所迷女性性功能障碍包括，^旦不限于，女性性快感缺乏、阴蒂勃起不足、阴道充血、性交困难和阴道痉挛，该方法包括给予治疗有效量的选择性多巴胺D4受体激动剂或其药学上可接受的盐或药物前体。本发明的优选实施方案涉及一种治疗男性勃起功能障碍的方法，该方法包括给予治疗有效量的选择性多巴胺D4受体激动剂或其药学上可接受的盐或药物前体。应该理解，在本发明的范围内，一种选择性的多巴胺D3受体激动剂或其药学上可接受的盐或药物前体也可用于治疗性功能障碍。本发明的另一个实施方案涉及一种治疗男性性功能障碍的方法，该方法包括给予治疗有效量的N-{[4-(2-氰基苯基)-1-哌嚷基]曱基}-3-曱基苯曱酰胺或其药学上可接受的盐或药物前体。本发明的另一个实施方案涉及一种治疗女性性功能障碍的方法，该方法包括给予治疗有效量的^{[4-(2-氰基苯基)-1-哌。秦基]甲基}-3-曱基苯曱酰胺或其药学上可接受的盐或药物前体。本发明的另一个实施方案涉及一种治疗男性功能勃起障碍的方法，该方法包括给予治疗有效量的N-[[4-(2-氰基苯基)-l-哌嗓基]甲基}-3-甲基苯曱酰胺或其药学上可接受的盐或药物前体。本发明的另一个实施方案涉及一种治疗男性性功能障碍的方法，该方法包括给予治疗有效量的5-氟-2-{[4-(2-吡啶基)-1-哌。秦基]甲基》-lH-吲哚或其药学上可接受的盐或药物前体。本发明的另一个实施方案涉及一种治疗女性性功能障碍的方法，该方法包括给予治疗有效量的5-氟-2-{[4-(2-吡啶基)-1-哌嚷基]甲基)-lH-吲哚或其药学上可接受的盐或药物前体。本发明的另一个实施方案涉及一种治疗男性勃起功能障碍的方法，该方法包括给予治疗有效量的5-氟-2-{[4-(2-吡啶基)-1-哌溱基]曱基卜lH-吲哚或其药学上可接受的盐或药物前体。在本发明的另一个实施方案中，所述选择性多巴胺D4受体激动剂是这样一种化合物，它a)根据对多巴胺D4受体的Ki值与对多巴胺02受体的Ki值之比，具有至少3倍的选择性；和b)在此中所述的任何一种多巴胺D4受体的功能药理学模型中起一种激动剂的作用。在本发明的另一个实施方案中，所述选择性多巴胺D4受体激动剂是这样一种化合物，它a)根据对多巴胺D4受体的Ki值与对多巴胺02受体的Ki值之比，具有至少25倍的选^t奪性；和b)在此中所述的任何一种多巴胺D4受体的功能药理学模型中起一种激动剂的作用。在本发明的另一个实施方案中，所述选择性多巴胺D4受体激动剂是这样一种化合物，它a)根据对多巴胺D4受体的Ki值与对多巴胺D2受体的Ki值之比，具有至少50倍的选择性；和b)在此中所述的任何一种多巴胺D4受体的功能药理学模型中起一种激动剂的作用。在本发明的另一个实施方案中，所述选择性多巴胺D4受体激动剂是这样一种化合物，它a)根据对多巴胺D4受体的Ki值与对多巴胺D2受体的Ki值之比，具有至少100倍的选择性；和b)在此中所述的任何一种多巴胺D4受体的功能药理学模型中起一种激动剂的作用。在本发明的另一个实施方案中，所述选择性多巴胺D4受体激动剂是这样一种化合物，它a)根据对多巴胺D4受体的Ki值与对多巴胺D2受体的Ki值之比，具有至少200倍的选择性；和b)在此中所述的任何一种多巴胺D4受体的功能药理学模型中起一种激动剂的作用。在本发明的另一个实施方案中，所述选择性多巴胺D4受体激动剂是这样一种化合物，它a)根据对多巴胺D4受体的Ki值与对多巴胺D2受体的Ki值之比，具有至少300倍的选择性；和b)在此中所述的任何一种多巴胺D4受体的功能药理学模型中起一种激动剂的作用。在本发明的另一个实施方案中，所述选择性多巴胺D4受体激动剂是这样一种化合物，它a)根据对多巴胺D4受体的Ki值与对多巴胺D2受体的Ki值之比，具有至少500倍的选择性；和b)在此中所述的任何一种多巴胺D4受体的功能药理学模型中起一种激动剂的作用。在本发明的另一个实施方案中，所述选择性多巴胺D4受体激动剂是这样一种化合物，它a)根据对多巴胺D4受体的Ki值与对多巴胺D2受体的Ki值之比，具有至少1000倍的选择性；和b)在此中所述的任何一种多巴胺D4受体的功能药理学模型中起一种激动剂的作用本发明的另一个实施方案涉及一种治疗哺乳动物性功能障碍的方法，该方法包括给予需要此种治疗的哺乳动物治疗有效量的选择性多巴胺D4受体激动剂或其药学上可接受的盐，其中所述激动剂不引起明显的呕吐。本发明的另一个实施方案涉及一种治疗雄性哺乳动物性功能障碍的方法，该方法包括给予需要此种治疗的哺乳动物治疗有效量的选择性多巴胺D4受体激动剂或其药学上可接受的盐，其中所述激动剂不引起明显的呕吐。本发明的另一个实施方案涉及一种治疗雌性哺乳动物性功能障碍的方法，该方法包括给予需要此种治疗的哺乳动物治疗有效量的选择性多巴胺D4受体激动剂或其药学上可接受的盐，其中所述激动剂不引起明显的呕吐。本发明的另一个实施方案涉及一种治疗雄性哺乳动物勃起功能障碍的方法，该方法包括给予需要此种治疗的哺乳动物治疗有效量的选择性多巴胺D4受体激动剂或其药学上可接受的盐，其中所述激动剂不引起明显的呕吐。本发明的另一个实施方案涉及治疗性功能障碍的药用组合物的用途，所述组合物含有与药学上可接受的载体混合的治疗有效量的选10择性多巴胺D4受体激动剂或其药学上可接受的盐或药物前体。本发明的另一个实施方案涉及治疗男性性功能障碍的药用组合物的用途，所述组合物含有与药学上可接受的载体混合的治疗有效量的选择性多巴胺D4受体激动剂或其药学上可接受的盐或药物前体。本发明的另一个实施方案涉及治疗女性性功能障碍的药用组合物的用途，所述组合物含有与药学上可接受的载体混合的治疗有效量的选择性多巴胺D4受体激动剂或其药学上可接受的盐或药物前体。本发明的另一个实施方案涉及治疗男性勃起功能障碍的药用组合物的用途，所述组合物含有与药学上可接受的载体混合的治疗有效量的选择性多巴胺D4受体激动剂或其药学上可接受的盐或药物前体。当在此使用时，术语"选择性"指一种多巴胺激动剂对D4受体的选择性超过D2受体。(一)阿朴吗啡，一种已知的多巴胺激动剂(Altar,C，等，MolPharmacol(1988)33(6)690-695;Moeller，HG等，Psychopharmacology(Berlin)(1987)91(1)50-55;和Fray,PJ等，Psychopharmacology(Berlin)(1980)69(3)253-259)，相对于多巴胺D2受体，Ki=0.7-24nM，没有显示对多巴胺D4受体的选择性，Ki=4nM(ValloneD等，NeuroscienceAndBiobehavioralReviews,(2000)24,125-132)。缺乏选择性的多巴胺能激动剂如阿朴吗啡有助于解释与这些药剂有关的副作用如呕吐和昏厥。对于CNS介导的疾病的治疗使用选择性D4激动剂具有显著的优势，因为选择性D4激动剂促进阴茎勃起而不会引起如呕吐和昏厥的副作用。当在此使用时，术语"明显的呕吐"指在20%或20%以上的临床人群中观察到呕吐反应。优选在临床人群中的呕吐反应低于10%,更优选在临床人群中的呕吐反应低于5%。多巴胺D2和多巴胺D4结合分析描述于表1、用于测定结合亲合力(Ki)的多巴胺D2和多巴胺D4结合分析是按照本领域众所周知的标准程序进行的并在此中进行了概述。列于表1的结合数据由Cerep，86600CelleL，Evescault,France处理。简要地，多巴胺02和D4受体的受体结合分析在来自表达人重组细胞亚型的细胞系的膜中进行。对于D2受体分析，用[3司-螺哌隆(0.3nM)孵育转染了A9L细胞的膜60分钟，用(+)-布他拉莫(10pM)限定非特异性结合(Grandy，等，ProcNatlAcadSciUSA(1989)86:9762-9766)。对于D4受体分析，用[3H]-螺哌隆(0.5nM)孵育转染了CHO细胞的膜60分钟，用(+)-布他拉莫(10jxM)限定非特异性结合(VanTol,等，Nature(1992)358:149-152)。特异性结合定义为总结合与非特异性结合之差。用Cheng-Prusoff方程式确定Ki值并示于表l中。多巴胺D二和D^受体的结合数据表l的数据证明，N-([4-(2-氰基苯基)-l-派"秦基]曱基)-3-曱基苯曱酰胺和5-氟-2-([4-(2-吡咬基)-l-哌溱基]甲基〉-lH-吲哚对多巴胺D4受体比对多巴胺D2受体的选择性>100倍。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>N-{[4-(2-氰基苯基)-1-哌噪基]曱基}-3-曱基苯曱酰胺显示，对多巴胺D4受体的选择性(Ki=8.7nM)比对多巴胺D2受体(Ki=3740nM)>400倍(Glase,SA等，JMedChem(1997)40，1771-1772;和Chio，C等，MolPharmacol(1994)45,51-60)。5-氟-2-([4-(2-吡啶基)-l-哌嗪基]曱基卜lH-吲哚显示，对多巴胺D4受体的选择性(Ki=6.0nM)比对多巴胺02受体>100倍(ZornSH,等,SocNeurosciAbstr23:685(1997))。当在此使用时，术语"激动剂"指与一种受体相互作用并引起一种可观察到的生物化学反应的化学实体。相对于一种已知的激动剂标准测量所述反应。例如，一种多巴胺D4受体激动剂指一种与多巴胺D4受体相互作用并引起可观察到的生物化学反应的化学实体。相对于一种完全激动剂如多巴胺或壹吡罗测量所述反应。多巴胺D4受体激动的测定可通过以下所述的三种分析法中的任意一种确定。在以下所述的三种分析法的任意一种中，与作为100%激动标准的多巴胺或喹吡罗相比较，一种对多巴胺D4受体显示最小25%激动的化合物是一种被认为在本发明的范围内的激动剂。激动百分值是以至少三组独立的观察的平均值为基础。优选，在本发明范围内设计的D4激动剂与多巴胺或喹吡罗标准比较将显示40%或更高的激动。多巴胺D4受体激动的功能性药理学模型1.卩H1胸香分析在用人多巴胺D4受体转染的CHO原-5细胞中多巴胺D4受体的激动剂激活刺激有丝分裂发生。通过测量[3印胸苷的细胞吸收并比较对完全激动剂如喹吡罗的反应(定义为100%)测定所述反应。在[3司胸苷吸收分析中，N-[[4-(2-氰基苯基)-l-哌"秦基]曱基)-3-甲基苯曱酰胺显示引起反应，与喹吡罗比较引起80%的反应，具有17nM的EC50(Glase，SA等，JMedChem(1997)40，1771-1772;和Chio，C等,MolPharmacol(1994)45,51-60)。将用人D4受体转染的CHO原-5细胞置于在具有10%胎牛血清的MEM-Alpha中的96孔平板中，所述胎牛血清含有青霉素(100U/ml)13和链霉素(100g/ml)。48小时后，通过洗涤并维持在无血清的培养基中剥夺细胞的血清。24小时后，加入媒介物、标准品或试验化合物。18小时后，加入I^H]胸苷(5pCi/孔)2小时，然后加入胰蛋白酶(100ial0.25%)1小时，并通过用Brandel或其它的96孔收集器过滤终止该分析。用LKB-平板计算系统或其它的平板计算系统计算该滤器的放射活性。对于每个试验化合物测定十点剂量-反应曲线，并且可从产生的曲线计算对于50。/。刺激(ECs())所需的药物浓度。在每个实验中，通过相对于会吡罗的最大有效浓度所荻得的效果比较每种试验化合物的最大效果评估固有的激动活性。2、cAMP分析所述cAMP分析是一种测定多巴胺D4功能活性的功能分析法，包括在表达人D4受体的CHO细;5包中测量毛喉素-刺激的cAMP聚集的抑制。激动剂抑制毛喉素-刺激的cAMP的聚集。5-氟-2-{[4-(2-吡啶基)-l-哌溱基]曱基)-lH-吲哚显示抑制毛喉素-刺激的cAMP的聚集，EC50=5.8nM(ZornSH，等,SocNe画ciAbstr23:685(1997》。用于测量抑制毛喉素-刺激的cAMP累积的cAMP分析描述于Gazi等，ArchPharmacol,361(2000)555-564中。细胞在24孔平板中生长至融合并用lmlHepes-緩沖盐溶液洗涤。，然后，在37。C、0.5ml的同样緩冲液中，用6^Ci/ml[2-3司腺嘌呤(23Ci/mmol;AnawaTrading,Wangen,Switzerland)标记该细胞2小时。然后将它们用1ml补充了lmM异丁基曱基黄嗓呤的所述緩冲溶液洗涤两次。在37'C、在存在和缺少毛喉素(l0iiM)及试-验化合物下，于1ml相同的溶液中孵育该细胞。15分钟后，移去培养基并用1ml含有cAMP和ATP(皆为0.1mM)的5%三氯乙酸溶液4义替。在4。C下30分钟后，将三氯乙酸提取物直"l妄在DowexAG50W-X4和氧化铝柱上进行连续的层析。计算形成的cAMP，表示为[3H]cAMP/([3H]cAMP+[3H]ATP)的比率。3.荧光成像板读出仪(FLIPR)分析FLIPR分析是一种可在表达人D4受体、用Gq。5蛋白嵌合体共转染的HEK293细胞中进行的功能分析。在激活D4受体后，G-蛋白嵌合体的表达使细胞内的钙转移。通过将该稳定转染的D4-HEK293细胞接种到96孔平皿中的每个孔内制备细胞。培养细胞直到它们达到融合(约48小时)。从平皿中移去培养基并加入含有荧光钙探测染料Fluo-4的培养基。在室温孵育细月包一小时。然后用磷酸緩冲盐溶液洗涤细胞三次并加入150piPBS。在第二个96孔平板中稀释待测化合物。将含有细胞的平板置于荧光板读出仪(FLIPR)中并且通过将50^1的化合物溶液同时加入到所有的孑L中开始反应。60秒:f又样，以l秒的间隔测量荧光信号。来自于10juM多巴胺的信号用作100%并使化合物剂量-反应曲线标准化以确定相对于多巴胺的功效百分率。分析剂量反应曲线以确定ECso(nM)。N-{[4-(2-氰基苯基)-1-哌噪基]曱基}-3-曱基苯曱酰胺和5-氟-2-{[4-(2-吡啶基)-1-哌嗪基]甲基}-1H-吲哚的数据显示于表A中。表A的婆史据证明N-([4-(2-氰基苯基)-l-哌溱基〗曱基}-3-曱基苯甲酰胺和5-氟-2-{[4-(2-吡啶基)-1-哌嗪基]曱基)-lH-吲哚是激动剂。表A<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>大鼠阴茎勃起模型Wistar大鼠用作初步的动物模型以研究体内阴茎勃起。在9:00AM和3:00PM之间、在用红光漫散照明的实验室进行所有的实验。在开始实验前，称量大鼠体重并^f吏其适应实验室60分钟。在皮下注射药物后，将大鼠放置在单独透明的笼子中(20x30x30cm)。在给药后，通过直接观察60分钟的时间记录阴茎勃起的数量。记录出现1次或多次勃起的动物数量并以发生率(％)表示于表2-4。阿朴吗啡引起大鼠阴茎勃起使用盐水中的(L)-抗坏血酸(lmg/ml)作为媒介物。每个剂量使用三十二只动物。表2的数据证明，0.01nmol/kg到0.3|iimol/kg的剂量的阿朴吗啡显著促进大鼠阴茎勃起。相对于媒介物概率或显著性水平用p表示。"p"为统计学实验中的概率或显著性水平。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>N-fr4-(2-氰基苯基Vl-哌嗪基l曱基V3-曱基苯曱酰胺引起大鼠阴茎勃起使用盐水中的(L)-抗坏血酸(lmg/ml)作为媒介物。每个剂量采用14只动物。以0.1nmol/kg剂量的阿朴吗啡作为阳性对照，它引起大鼠阴茎勃起的发生率为86%。表3的数据证实0.1(imol/kg到1.0|Limol/kg剂量的N-([4-(2-氰基苯基)-l-哌嗪基]甲基L3-甲基苯甲酰胺显著促进大鼠阴茎勃起。概率或显著性水平用相对于媒介物的p表示。<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>5-氟-2-f「4-(2-吡咬基)-l-哌嗪基l甲基VlH-吲哚引起大鼠阴茎勃超使用盐水中的(L)-抗坏血酸(lmg/ml)作为媒介物。每个剂量采用十只动物。以0.1pmol/kg剂量的阿朴吗啡作为阳性对照，它引起大鼠阴茎勃起的发生率为90%。表4的数据证实1.0)imol/kg到3.0pmol/kg剂量的5-氟-2-{[4-(2-吡啶基)-1-哌嗪基]甲基}-1H-吲哚显著促进大鼠阴茎勃起。概率或显著性水平用相对于媒介物的p表示。<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>雪貂的呕吐才莫型在实验前使雄性Fitch雪貂(体重1.0-1.5kg)禁食过夜。在皮下给药后将动物分别放置在观察笼中并在注射药物后观察药物引起的恶心和呕吐90分钟。恶心具有如添、作呕、反流、埋头(headburying)和强烈的腹部刷拭动作(grooming)的特征。通常这些行为在呕吐之前并且呕吐具有与呕吐或干呕运动有关的节奏性腹部收缩的特征。记录引起呕吐的雪貂数量并用发生率(％)表示于表5-7中。阿朴吗啡引起大鼠呕吐用盐水作为媒介物。每个剂量使用六到十二只动物。表5的数据证实阿朴吗啡在所有的剂量皆引起呕吐。概率或显著性水平用相对于媒介物的p表示。表5<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>N4「4-(2-氰基苯基)-l-哌嗪基l曱基V3-曱基苯曱酰胺引起大鼠呕吐以3%二甲基亚砜盐水溶液作为媒介物。每个剂量使用六到十二只动物。用0.3fimol/kg剂量的阿朴吗啡作为表6中的阳性对照，导致雪貂呕吐的发生率为83%。>^-{[4-(2-氰基苯基)-1-哌嗪基]曱基}-3-曱基苯曱酰胺在任何剂量皆不引起呕吐。概率或显著性水平用相对于媒介物的p表示。表6<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>5-氟-24「4-(2-吡啶基Vl-旅唤基l曱基)-lH-吲哚引起大鼠呕吐用1%二曱基亚砜盐水溶液作为媒介物。每个剂量使用六到十二只动物。用0.3umol/kg剂量的阿朴吗啡作为表7中的阳性对照，它导致雪貂呕吐的发生率为83%。5-氟-2-{[4-(2-吡啶基)-1-哌溱基]曱基卜lH-卩引哚在任何剂量皆不引起呕吐。概率或显著性水平用相对于媒介物的p表示。表7<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>表2-7的数据显示非选择性和选择性多巴胺D4受体激动剂在大鼠中具有促勃起作用。可是选择性多巴胺D4受体激动剂具有显著减少呕吐的倾向。促勃起作用和减少呕吐的倾向与选择性多巴胺04受体激动剂有关，因此，建议选择性多巴胺D4受体激动剂用于治疗性功能障碍，包括但不限于男性勃起功能障碍。当在此使用时，术语"药学上可接受的载体"意指一种非毒性的、惰性固体、半固体或液体填充剂、稀释剂、形成胶嚢的材料或任何类型的制剂辅料。根据配方人员的判断，在所述组合物中也可以存在一些用作药学上可接受的载体的物质，所述物质为糖如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素和它的衍生物如羧曱基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；粉碎的黄芪胶；麦芽；明胶；滑石；赋形剂如可可油和栓剂蜡；油如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；乙二醇；如丙二醇；酯如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；緩冲剂如氢氧化镁和氢氧化铝；藻酸；无热源的水；等渗的盐水；Ringer's溶液；乙醇，和磷酸盐緩冲溶液，以及其它非毒性的可适配的润滑剂如十二烷基硫酸钠和硬脂酸镁，以及着色剂，释放剂，包衣剂、甜味剂，调味剂和香味剂，防腐剂和抗氧化剂。本发明提供药用组合物，所述药用组合物含有与一种或多种非毒性的药学上可接受的载体一起配制的选择性多巴胺D4受体激动剂。该药用组合物可配制为以固体或液体形式口服给药、胃肠外注射给药或直肠给药。另外在本发明的范围内包"^含有与一种或多种非毒性的药学上可接受的成分制备和配制的一种或多种选择性多巴胺D4受体激动剂的药用组合物。例如，含有一种或多种选择性多巴胺D4受体激动剂的药用组合物可与一种磷酸二酯酶5抑制剂或肾上腺素受体拮抗剂一起配制。所述药用组合物可配制为舌下给药、以固体或液体的形式口服给药、胃肠外注射或直肠给药。本发明的药用组合物可通过口、舌下、直肠、胃肠外、脑池内、尿道内、阴道内、腹膜内、局部(如用粉末、药膏或滴剂)、颊或作为一种口或鼻喷雾剂给予人或其它的哺乳动物。当在此使用时，术语"胃肠外"指包括静脉内、肌内、腹膜内、皮下、关节内注射和输注的给药模式。舌下组合物在治疗性功能障碍中可为一种有效的剂型并且在文献中证明舌下组合物是被充分证明的。传统的舌下片剂通常设计为水溶性的，虽然水溶性较差的片剂也是可能的。定时释放的舌下药物公开于U.S.Pat.No.3,428,728中。本发明的胃肠外注射的药用组合物包括药学上可接受的无菌水溶液或非水溶液、分散液、悬浮液或乳液和重新构成可注射的无菌溶液或分散液的无菌粉末。适宜的水性和非水性载体、稀释剂、溶剂或溶媒的实例包括水、乙醇、多羟基化合物(丙二醇、聚乙二醇、丙三醇等)、它们的适宜混合物、植物油(如橄榄油)和可注射的有机酯如油酸乙酯。例如，通过使用如卵磷脂包衣、在分散液的情况下维持所需的粒径和使用表面活性剂可维持适当的流动性。这些组合物也可含有辅助剂如防腐剂、湿润剂、乳化剂和分散剂。用各种抗菌的和抗真菌的药剂如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸等可确保防止微生物的作用。包含等渗剂如糖、氯化钠等可能也是需要的。延长吸收的可注射药物剂型可通过使用延緩吸收的试剂如单硬脂酸铝和明胶而得到。在一些情况下，为了延长药物的作用，经常需要减緩皮下或肌内注射的药物的吸收。可通过使用水溶性十分低的结晶或无定型原料的液体悬浮液实现这一目的。然后，药物的吸收速率取决于其溶解的速率，溶解速度又依次可取决于结晶大小和晶型。作为选择，通过将所述药物溶解或悬浮在一种油性溶媒中达到延緩胃肠外给药剂型的吸收的目的。除了活性化合物外，悬浮液可含有悬浮剂如乙氧基化的异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、metahydroxide铝、泉土、琼脂、黄蓍胶和它们的混合物。如果需要，并且为了更有效的分布，选择性多巴胺D4受体激动剂可合并到緩释或靶向传递体系中如聚合物基质、脂质体和微球体。它们可以是无菌的，例如，通过细菌-截留过滤器过滤或通过在无菌固体组合物形式中加入灭菌剂，该无菌固体组合物在使用前可立即溶解于无菌水或一些其它无菌的可注射媒介物中。如果适宜，选择性多巴胺D4受体激动剂也可与一种或多种上述的赋形剂形成微嚢形式。片剂、糖衣丸、胶囊、丸剂及颗粒剂的固体剂型可以用包衣料和壳，如肠溶包衣、控释包衣和其它药学制剂领域所熟知的包衣制备。在此类固体剂型中活性化合物可与至少一种如蔗糖、乳糖或淀粉的惰性稀释剂混合。按照一般的惯例，此类剂型除了惰性稀释剂也可包含另外的物质，如制片润滑剂和其它的制片助剂如硬脂酸镁和微晶纤维素。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，剂型也可包含緩冲剂。它们可任选含有不透明剂并且也可为仅仅在或优选在肠道的某部分以延緩的方式释放活性成分的这样的组合物。可以使用的植入(embedding)组合物的实例包括聚合物和蜡。通过在可生物降解的聚合物如聚交酯-聚乙醇酸交酯中形成选择性多巴胺D4受体激动剂的微嚢化基质制备可注射的包埋(depot)制剂。根据选择性多巴胺D4受体激动剂与聚合物的比率和采用的具体聚合物的性质，可控制选择性多巴胺D4受体激动剂释放的速率。其它可生物降解的聚合物的实例包括聚原酸酯和聚酐。可注射的包埋制剂也可通过将药物包裹在与身体组织相容的脂质体或微乳化物中制备。可注射的制剂可以是无菌的，例如，通过细菌-截留过滤器过滤或通过在无菌固体组合物形式中加入灭菌剂，该无菌固体组合物在临用前可立即溶解或分散于无菌水或一些其它无菌的可注射媒介物中。可注射制剂，例如，无菌的可注射水悬浮液或油悬浮液可按照已知技术，使用适宜的分散剂或湿润剂及悬浮剂进行配制。所述无菌注射制剂也可为在无毒的、胃肠外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌注射溶液、悬浮液或乳液如一种在1，3-丁二醇中的溶液。在可应用的可接受的溶媒和溶剂中有水、Ringer's溶液、U.S.P和等渗氯化钠溶液。另外，通常使用无菌的、固定油作为溶剂或悬浮媒介物。为了这个目的，可以使用任何刺激性小的固定油，包括合成的单或双甘油酯。另外，在制备注射剂中可使用脂肪酸如油酸。口服给药的固体剂型包括胶嚢剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在此类固体剂型中，选择性多巴胺D4受体激动剂与至少一种惰性的、药学上可接受的赋形剂或载体混合，所述赋形剂或载体有如柠檬酸钠或磷酸二钙和/或a)填充剂或扩充剂如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；b)粘合剂如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯树胶；c)湿润剂如甘油；d)崩解剂如琼脂、碳酸钓、马铃薯或木薯淀粉、藻酸、某些硅酸盐，及碳酸钠；e)溶液阻滞剂如液体石蜡；f)吸收加速剂如季铵化合物；g)湿润剂如十六醇和甘油单硬脂酸酯；h)吸收剂如高呤土和皂土；和i)润滑剂如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固态聚乙二醇、十二烷基硫酸钠及其混合物。在胶嚢、片剂和丸剂的情况下，所述剂型也可包含緩冲剂。在使用此类赋形剂如乳糖或奶糖以及高分子量的聚乙二醇等的软和硬填充的明胶胶囊中也可应用类似类型的固体成分作为填充剂。片剂、糖衣丸、胶囊、丸剂及颗粒剂的固体剂型可以用包衣料和壳，如肠溶包衣和其它药学制剂领域所熟知的包衣制备。它们可任选含有不透明剂并且也可为仅仅在或优选在肠道的某部分以延緩的方式释放活性成分的组合物。可以使用的植入组合物的实例包括聚合物和蜡。口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳剂、微乳剂、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。除了选择性多巴胺D4受体激动剂，所述液体剂型还可含有本领域通常使用的惰性稀释剂，例如水或其它溶剂、增溶剂和乳化剂如乙醇、异丙醇、>暖酸乙酯、乙酸乙酯、苯曱醇、苯甲酸千酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(详细地说有棉籽油、落花生油、玉米油、胚芽油、橄^览油、荒麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和脱水山梨醇的脂肪酸酯，以及它们的混合物。除了惰性稀释剂之外，所迷口服组合物也可包括辅助剂如湿润剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、调味剂和香味剂。本发明化合物局部给药或透皮给药的剂型包括软膏、糊剂、乳膏、洗剂、凝胶剂、散剂、溶液、喷雾剂、吸入剂或贴剂。在无菌条件下将所述活性成分与药学上可接受的载体混合并且可以在需要时与任何需要的防腐剂或緩冲剂混合。眼科制剂、耳滴剂、眼药膏、散剂和溶液剂也被考虑在本发明的范围内。除了选择性多巴胺D4受体激动剂，软膏、糊剂、乳膏和凝胶剂还可含有赋形剂如动植物脂肪、油、蜡、液体石蜡、淀粉、黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅树脂、皂土、硅酸、滑石和氧化锌，或它们的混合物。除了选择性多巴胺D4受体激动剂，散剂和喷雾剂还可含有赋形剂如乳糖、滑石、硅酸、氢氧化铝、硅酸钓和聚酰胺粉末，或这些物质的混合物。另外喷雾剂可含有常规的抛射剂如氯氟化烃。选择性多巴胺D4受体激动剂可以以衍生自有机或无机酸的药学上可接受的盐的形式使用。"药学上可接受的盐"指在合理的医学判断的范围内适宜用于与人和低级动物的组织接触而没有不适当的毒性、刺激性、过敏反应等的那些盐，并且具有相称的合理的利益/风险比率。药学上可接受的盐是本领域内众所周知的。例如，S.M.Berge等在J.PharmaceuticalSciences,1977，66:1etseq.中详述了药学上可接受的盐。所述盐可在本发明化合物最后分离和纯化期间在原处制备或分别通过使游离碱官能团与适宜的酸反应制备。代表性的酸加成盐包括但不限于乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、柠檬酸盐、天冬氨酸盐、苯曱酸盐、苯磺酸盐、硫酸氩盐、丁酸盐、樟脑盐、樟脑磺酸盐、二葡糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、延胡索酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐(羟乙磺酸盐)、乳酸盐、马来酸盐、曱磺酸盐、烟酸盐、2-萘磺酸盐、草酸盐、朴酸盐、果胶酸盐、过辟u酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、三曱基乙酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、磷酸盐、谷氨酸盐、碳酸氢盐、对曱苯磺酸盐和十一烷酸盐。当在此使用时，术语"药学上可接受的药物前体"或"药物前体"表示选择性多巴胺D4受体激动剂的那些在合理的医学判断范围内的药物前体，它们适宜用于与人和l氐级动物的组织接触而没有不适当的毒性、刺激性、过敏反应等，具有相当合理的利益/风险比率并且对于预期的使用是有效的。选择性多巴胺D4受体激动剂的药物前体在体内可转换为选择性多巴胺D4受体激动剂，例如在血液中通过水解转换。在T.Higuchi和V.Stella,A.C.S.SymposiumSeries的Pro-drugsasNovelDeliverySystems,14巻和在EdwardB.Roche编辑的BioreversibleCarriersinDrugDesign,AmericanPharmaceuticalAssociationandPergamonPress(1987)中提供了充分的讨i仑。选择性多巴'胺D4受体激动剂的局部给药的剂型包括散剂、喷雾剂、软膏和吸入剂。在无菌条件下将所述活性化合物与药学上可接受的载体混合并且还可以在需要时与任何需要的防腐剂、緩冲剂和推进剂混合。眼科制剂、眼药膏、散剂和溶液剂也被考虑在本发明的范围内。对于一个具体的患者，为了获得使选择性多巴胺D4受体激动剂有效实现所需的治疗反应的量，可以改变在本发明的药用组合物中活性成分的实际剂量水平、成分和给药模式。选择的剂量水平将取决于具体化合物的活性、给药途径、所治疗疾病的严重性和所治疗患者的疾病及以往的医疗史。可是，选择性多巴胺D4受体激动剂的起始剂量比达到所需治疗效果所需的剂量水平低并逐渐增加剂量直到达到所需效果，这应该是在本领域技术人员的范围内。本发明构思的选择性多巴胺D4受体激动剂可化学合成或通过在体内生物转化为选择性多巴胺D4受体激动剂。当在上述或其它治疗中使用时，选择性多巴胺D4受体激动剂的治疗有效量可采用纯的形式或以药学上可接受的盐或药物前体形式(当存在此类形式时)使用。作为选择，选择性多巴胺D4受体激动剂可以作为含有本发明的选择性多巴胺D4受体激动剂与一种或多种药学上可接受的赋形剂混合的药用组合物给药。术语"本发明化合物的治疗有效量"指以可适用于任何医疗治疗的合理的利益/风险比治疗性功能障碍的选择性多巴胺D4受体激动剂的足够的量。可是，应该理解，在医学合理的判断范围内，选择性多巴胺D4受体激动剂和其组合物的总的日剂量将由主治医师决定。对于任何具体的患者，具体的治疗有效剂量水平将根据以下因素而变化，所述因素包括所治疗的性功能障碍和性功能障碍的严重性；所用的具体的选择性多巴胺04受体激动剂的活性；采用的具体的组合物；患者的年龄、体重、一般健康、性别和饮食；给药的时间、给药的途径和所用的具体的选择性多巴胺D4受体激动剂的排泄速度；治疗持续时间；在联合用药中或与使用具体选择性多巴胺D4受体激动剂的同时所使用的药物；和医学领域所熟知的因素。例如，选择性多巴胺D4受体激动剂的起始剂量比达到所需治疗效果所需的剂量水平低并逐渐增加剂量直到达到所需效果，这应该是在本领域技术人员的范围内。给予人或低等动物的选择性多巴胺D4受体激动剂的总的日剂量可在大约0.001到30mg/kg/日的范围内。为口服给药的目的，剂量更优选在大约0.01到10mg/kg/日的范围内。如果需要，为了给药的目的可将有效的日剂量分成多剂量；因此，单剂量组合物可含有这样的量量或其约数以便组成日剂量。权利要求1.多巴胺D4受体激动剂或其药学上可接受的盐在制备用于治疗哺乳动物性功能障碍的药物中的用途，条件是所述多巴胺D4受体激动剂不是5，6，6a，7-四氢-6-甲基-4H-二苯并[de，g]喹啉-10，11-二醇。2.多巴胺D4受体激动剂或其药学上可接受的盐在制备用于治疗雄性哺乳动物性功能障碍的药物中的用途，条件是所述多巴胺D4受体激动剂不是5,6，6a,7-四氢-6-甲基-4H-二苯并[de,g]喹啉-10，ll-二醇。3.多巴胺D4受体激动剂或其药学上可接受的盐在制备用于治疗雌性哺乳动物性功能障碍的药物中的用途，条件是所述多巴胺D4受体激动剂不是5,6,6a,7-四氩-6-甲基-4H-二苯并[de,g]会啉-10,ll-二醇。4.多巴胺D4受体激动剂或其药学上可接受的盐在制备用于治疗雄性哺乳动物勃起功能障碍的药物中的用途，条件是所述多巴胺D4受体激动剂不是5,6，6a,7-四氢-6-甲基-4H-二苯并[de,g]喹啉-10，ll-二醇。全文摘要本发明涉及治疗性功能障碍的选择性多巴胺D4受体激动剂。进一步地说，本发明涉及选择性多巴胺D4受体激动剂和含有选择性多巴胺D4受体激动剂的组合物治疗性功能障碍的用途。文档编号A61K45/00GK101524540SQ20081018159公开日2009年9月9日申请日期2001年11月21日优先权日2000年11月22日发明者D·L·多内利-罗伯茨,G·C·希,J·D·布里奥尼,T·科拉萨申请人:艾博特公司