专利名称：：一种抗病毒提取物及其制备方法
技术领域：
：本发明涉及一种抗病毒提取物及其制备方法，具体涉及一种经典中药复方"翘荷汤"的提取物及其制备方法，以及该提取物在制备预防和/或治疗流感病毒药物中的应用。
背景技术：
：流行性感冒病毒，简称流感病毒，是一种造成人类及动物患流行性感冒的RNA病毒，在分类学上，流感病毒属于正黏液病毒科，它会造成急性上呼吸道感染，并借由空气迅速的传播，在世界各地常会有周期性的大流行。流行性感冒病毒在免疫力较弱的老人或小孩及一些免疫失调的病人会弓I起较严重的症状，如肺炎或是心肺衰竭等。中医药治疗流感具备显著优势，从传统方剂的现代药理广泛筛选中，翘荷汤具备显著的抗流感效果。翘荷汤来源于《温病条辨》(清代著名温病四大名家"之一的吴鞠通所著著)巻一。主要组分为薄荷4.5克、连翘4.5克、生甘草3克、黑栀皮4.5克、桔梗9克、绿豆皮6克；主要功用为清上宣肺。主治燥气化火、清窍不利、耳鸣目赤、龈胀咽痛。传统上主要治疗当以轻清宣透清解上焦燥热为主。是主要治疗咽炎类为主的方剂。《四川中医》2002，20(12):46发表了《翘荷汤治疗小儿外感高热154例》秦亮著，文献中表明翘荷栀豉汤治疗小儿外感发热154例，总有效率达94.8%，疗效满意。可见该方剂对治疗外感发热有明显的效果。传统上，该方剂的制备工艺及服用方法"上药以水400毫升，煮取200毫升，顿服之。日服二剂，甚者日三服"。可见，传统上其工艺粗糙，且服用、携带不方便，服用量大，也不适宜加工成其他剂型。复方中薄荷主要为薄荷醇、薄荷酮、胡薄荷酮等为主的萜类成分；连翘中主要含连翘苷等为主的挥发油成分；甘草主要含甘草黄酮及甘草皂苷类成分；桔梗也主要含桔梗皂苷类成分；原复方制备工艺通过直接水提方法，可提取部分水溶性成分，如桔梗皂苷类等，而对脂溶性成分难以提出来，使薄荷及连翘等大部分有效成分的挥发性成分损失。因此，传统工艺对有效成分的保留很不合理，有必要进行深入研究，对其工艺进行革新。有关该方剂的现代制备及相关工艺研究均为空白，在临床应用中，《四川中医》2002，20(12):46发表的《翘荷汤治疗小儿外感高热154例》中，一方面作者对古方"翘荷汤"做了适当调整，如增加了大黄，同时，也均是传统水提方法，因此，对于该方剂的新的制备工艺等研究均是空白，限制了该方剂的扩大应用。
发明内容本发明的目的在于提供一种抗病毒提取物。本发明的进一步目的在于提供该抗病毒提取物的制备方法。解决直接水提方法的挥发性有效成分损失大的问题，有效地富集了各药材的主要成分。3本发明的再一个目的在于提供该提取物在制备预防和/或治疗痔流感病毒药物中的应用。本发明解决其技术问题所采用的技术方案是一种抗病毒提取物，先按重量组分薄荷4.5份、连翘4.5份、生甘草3份、黑栀皮4.5份、桔梗9份、绿豆皮6份准备药材；通过超临界制备工艺富集总黄酮、总皂苷、总萜类成分；其特征在于所述的抗病毒提取物中成分重量比总黄酮含量大于6%，皂苷含量大于15%，连翘苷含量大于0.3%，总挥发油含量大于2%。上述抗病毒提取物的制备方法，先按重量组分薄荷4.5份、连翘4.5份、生甘草3份、黑栀皮4.5份、桔梗9份、绿豆皮6份准备药材；并包括下述方法步骤1)药材烘干，干燥温度为50°C±l(TC，干燥时间34h;2)药材粉碎成粗粉；3)药材装进超临界萃取罐中，加入夹带剂，萃取条件一级减压分离压力为510Mpa，温度为4060°C，流量1520L/h的条件下进行萃取34h;二级减压分离压力为510Mpa，温度为3550°C;4)提取物进行脱水，干燥。即得"翘荷汤"提取物。进一步的，所述的步骤2)中粗粉粉碎粒度在60200目之间。更进一步的，所述的夹带剂选自甲醇、乙醇等有机溶剂；夹带剂与粗粉质量比为250:100。试验实施例l是各提取物的主成分含量分析，表明本发明所述的提取物，是指采用超临界制备方法，按传统药物复方组成比例进行制备而成，以黄酮类、皂苷、萜类成分为主要组分的提取物。本发明的原理是，复方中薄荷主要为薄荷醇、薄荷酮、胡薄荷酮等为主的萜类成分；连翘中主要含连翘苷等为主的挥发油成分；甘草主要含甘草黄酮及甘草皂苷类成分；桔梗也主要含桔梗皂苷类成分；原复方制备工艺通过直接水提方法，可提取部分水溶性成分，如桔梗皂苷类等，而对脂溶性成分难以提出来，使薄荷及连翘等大部分有效成分的挥发性成分损失。因此，本发明通过超临界制备工艺，有效地富集了各药材的主要成分，体现了该复方的综合物质基础，同时，提取物很容易加成工各种剂型，同时使其实用性大大提高，改变了原方剂直接水提的单一用药的限制，扩大了其使用范围。试验实施例2是提取物的抗炎实验研究，对超临界所制备的提取物，和原水提方剂进行比较，对抗炎、镇痛效果，均优于原方剂，表明提取物具有显著的抗炎作用。实施例3是提取物的抗流感病毒实验研究，表明提取物均有显著抑制肺病变程度，显示均有较好的抗流感病毒效果。扩大了原方剂的治疗作用。根据本发明的再一个目的，本发明所述的提取物在制备预防和/或治疗流感病毒中药物的应用，包括上述药物的组合物均可以进一步包含药学上可接受的载体和/或赋形剂。例如，一种药物组合物可以是总黄酮提取物和药学上可接受的载体和/或赋形剂按照一定的配比混合而成；还可以是将总黄酮提取物、其它中药提取物和药学上可接受的载体和/或赋形剂按照一定的配比混合而成。上述药物组合物可进一步按照常规制剂方法配制成可供给药的形式，包括经口或胃肠外给药形式。在可供给药的形式中，应包含治疗有效量的预防及治疗流感病毒提取物。所谓"治疗有效量"是指在该剂量下，本发明的提取物能够改善或减轻疾病症状，或能够抑制或阻断疾病的发展。可供给药的组合物可以为片剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、锭剂、栓剂、贴剂、凝胶剂、粉剂或液体制剂(如口服或无菌胃肠外溶液或悬浮液)。这些可供给药的组合物还可以根据需要制备成缓控释制剂或靶向制剂。口服给药的形式可以为片剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂等，它们可以含有常规赋形剂如粘合剂像糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨醇、黄蓍胶、羟丙基甲基纤维素或聚乙烯吡咯烷酮；填充剂如乳糖、蔗糖、玉米淀粉、磷酸钙、山梨醇或甘氨酸；压片润滑剂如硬脂酸镁；崩解剂如淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、交聚维酮、羟乙酸淀粉钠或微晶纤维素或药学上可接受的润湿剂如十二烷基硫酸钠。液体组合物(如口服液体组合物)可以制备为乳液、糖浆剂或酏剂形式，或者将它们制备为干燥产物形式，在使用前，用水或其它适当的溶媒溶解。此类液体制剂可以含有常规的添加剂，如悬浮剂像山梨醇、糖浆、甲基纤维素、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶、氢化可食用脂肪；乳化剂如卵磷脂、脱水山梨醇单油酸酯或阿拉伯胶；非水溶性溶媒(可以包括食用油)如杏仁油、分馏椰子油、油性酯如甘油、丙二醇或乙醇的酯；防腐剂如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯或山梨醇；并且如果需要可以含有常规的矫味剂或着色剂。胃肠外组合物(如胃肠外给药组合物)可以含有所述活性化合物和无菌溶媒，根据使用的浓度，所述活性化合物可以悬浮于或溶解于该溶媒中。制备胃肠外给药的溶液时，可以将本发明的组合物溶于注射用水中，过滤除菌，然后灌装于适当的管制瓶或安瓿中并密封。最好将辅助剂如局部麻醉剂、防腐剂和缓冲剂溶解于所述溶媒中。为增加稳定性，可以将该组合物灌装于管制瓶中后冷冻并真空去除水分。以基本相同的方法可以制备胃肠外悬浮液，但是所述活性化合物是悬浮于溶媒中而不是溶解于溶媒中，并且除菌不能通过过滤进行。可以将所述化合物通过暴露于环氧乙烷中灭菌，然后将其悬浮于无菌溶媒中。最好该组合物中含有表面活性剂或润湿剂以有助于活性组分的均匀分布。本发明的有益效果本发明通过超临界制备工艺，能有效地富集总黄酮、总皂苷、总萜类成分。体现了原复方的综合物质基础。主要有效成分显著高于古方传统工艺所制备所得的成分，该总黄酮提取物具有明显的抗流感病毒的作用，其提取物与原汤剂相比，抗炎、抗流感病毒作用更显著。同时，提取物很容易加成工各种剂型，可直接应用于抗流感病毒药物的开发。其实用性大大提高，改变了原方剂直接水提的单一用药的限制，扩大了其使用范围。具有制备工艺简单、提取率高、成本低等特点。以下将结合实施例，对本发明进行较为详细的说明。具体实施例方式实施例l"翘荷汤"提取物的制备取中药材薄荷4.5公斤、连翘4.5公斤、生甘草3公斤、黑栀皮4.5公斤、桔梗9公斤、绿豆皮6公斤，在温度为5(TC干燥3h;粉碎药材，粒度在200目之间。再加入5夹带剂甲醇0.6公斤，超临界二氧化碳萃取的分离罐中进行萃取，萃取条件一级减压分离压力为5Mpa，温度为4(TC，流量为1520L/h，萃取34h;二级减压分离压力为5Mpa，温度为35t:。收集提取物所得为样品l。该工艺技术突出优点是(l)提取效率高；(2)有效地富集了主要活性成分，特别是对于萜类成分等，得到有效地富集，而原汤剂在直接煎煮基础上，基本损失了大量的该类成分，使主药连翘，薄荷的应用效果，受到限制，且提取物体积小，提高了中药的内在质量；(3)充分祛除了其多糖类等杂质等；(4)减少了产品的吸潮性；(5)去除了大量的无机盐、粘液质等，从而增强了产品的稳定性；(6)容易制备成外观美观的各种剂型；(7)工艺成本低。实施例2"翘荷汤"提取物的制备取中药材薄荷4.5公斤、连翘4.5公斤、生甘草3公斤、黑栀皮4.5公斤、桔梗9公斤、绿豆皮6公斤，在温度为6(TC干燥3h;药材粉碎，粒度在60目之间。将干粉放置于提取罐中，加入夹带剂乙醇15公斤，超临界二氧化碳萃取的分离罐中进行一级减压分离压力为10Mpa，温度为60°C;二级减压分离压力为10Mpa，温度为50°C。收集提取物所得为样品2实施例3"翘荷汤"按古方记载的传统方法制备取中药材薄荷4.5公斤、连翘4.5公斤、生甘草3公斤、黑栀皮4.5公斤、桔梗9公斤、绿豆皮6公斤，按传统制备方法加水，加热回流提取2次，提取液浓縮成干燥浸膏，作为样品3。供样品1，2比较使用。实施例4片剂(胶囊)剂制备将本发明制备实施例中样品1或样品2加入淀粉、微结晶纤维素，乳糖，糊精等辅料的一种或几种混合物，混匀，制粒，压片(填胶囊)，即为片剂或胶囊剂。作为治疗及预防流行性感冒药物。试验实施例1各提取物的主成分含量分析下列质量分析中所用样品包括按实施例1的方法制备的样品1，按实施例2的方法制备的样品2，按实施例3的方法制备的样品3。各样品均低温干燥至提取物，按生药比折算计算含量。测定方法总黄酮以甘草苷为对照品，紫外分光光度法测定；挥发油含量按中国药典所规定的挥发油测定方法；皂苷是按中国药典中桔梗皂苷的测定方法，连翘苷是以中国药典连翘药材的高效液相分析方法测定的。结果见表1。表1.各样品的含量测定结果<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>可见，样品l，2中各成分均高于样品3，有效地富集了各成分的含量。由此可见，与传统制备工艺比较，该抗病毒提取物，主要有效成分显著高于古方传统工艺所制备所得的成分，其成分特征重量比为总黄酮含量大于6%，；皂苷含量大于15%，连翘苷含量大于0.3%，总挥发油含量大于2%。试验实施例2提取物的抗炎实验研究昆明小鼠50只，分为模型组、消炎痛(吲哚美辛)、样品l、样品2、样品3共五组。每组动物各10只，各组小鼠连续灌胃给药10天，末次给药后于小鼠右耳涂布二甲苯0.02ml/只致炎。间隔3h后颈椎脱臼法处死小鼠，沿耳廓基线剪下双耳，用直径8mm打孔器在两耳同一部位打下耳片并称重。结果见表2。与模型组相比，阳性对照组、样品l，2，3对小鼠耳肿胀度与阴性对照组有极显著差异(p〈0.01);说明各样品显著的抗炎作用，同时，样品l和2抗炎效果均强于样口Q口口do表2.对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响(x士s，n=10)组别剂量(g/kg)肿胀度(mg)模型组-8.05±2.12消炎通2.測03.45±1，60***样品l0,453.46±1,70***样品20.454,62±1.12**样品30.905.08±1.04*与模型组相比，*p<0.05;**p<0.01;***p<0.001实施例3提取物的抗流感病毒实验研究采用A3型流感病毒液(H3N2)感染小鼠为模型，观察三种样品及阳性对照药(病毒唑)对感染小鼠肺指数、肺病变程度的影响，结果见表3，表明三个样品均有显著抑制肺病变程度，显示该方剂的三个样品均有较好的抗流感病毒效果。表3.对流感病毒的作用(x±s，n=10)组别剂量(mg/kg)肿胀度(mg)模型组1.35士0.12病毒唑组801.能±1.60**净羊？JJ160L05±1.70**才羊品2601.02±1.12**样品360L38±1,04*与模型组相比，*p<0.05;**p<0.01;***p<0.001。权利要求一种抗病毒提取物，先按重量组分薄荷4.5份、连翘4.5份、生甘草3份、黑栀皮4.5份、桔梗9份、绿豆皮6份准备药材；通过超临界制备工艺富集总黄酮、总皂苷、总萜类成分；其特征在于所述的抗病毒提取物中成分重量比总黄酮含量大于6％，皂苷含量大于15％，连翘苷含量大于0.3％，总挥发油含量大于2％。2.权利要求1所述的提取物的制备方法，先按重量组分薄荷4.5份、连翘4.5份、生甘草3份、黑栀皮4.5份、桔梗9份、绿豆皮6份准备药材；并包括下述方法步骤1)药材烘干，干燥温度为50°C±10°C，干燥时间34h;2)药材粉碎成粗粉；3)药材装进超临界萃取罐中，加入夹带剂，萃取条件一级减压分离压力为510Mpa，温度为4060。C，流量1520L/h的条件下进行萃取34h;二级减压分离压力为510Mpa，温度为3550°C;4)提取物进行脱水，干燥。3.如权利要求2所述的提取物的制备方法，其特征在于所述的步骤2)中粗粉粉碎粒度在60200目之间。4.如权利要求2所述的提取物的制备方法，其特征在于所述的夹带剂选自甲醇、乙醇等有机溶剂；夹带剂与粗粉质量比为250:100。5.权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，进一步包含药学上可接受的载体和/或赋形剂。6.权利要求1所述的提取物在制备预防和/或治疗流感病毒药物中的应用。全文摘要一种抗病毒提取物，先按重量组分薄荷4.5份、连翘4.5份、生甘草3份、黑栀皮4.5份、桔梗9份、绿豆皮6份准备药材；通过下述方法步骤制备得到1)药材烘干，干燥温度为50℃±10℃，干燥时间3～4h；2)药材粉碎成粗粉；3)药材装进超临界萃取罐中，加入夹带剂乙醇或甲醇，萃取条件一级减压分离压力为5～10Mpa，温度为40～60℃，流量15～20L/h的条件下进行萃取3～4h；二级减压分离压力为5～10Mpa，温度为35～50℃；4)提取物进行脱水，干燥。通过该超临界制备工艺，能有效地富集总黄酮、总皂苷、总萜类成分。该抗病毒提取物，其成分特征重量比总黄酮含量大于6％，皂苷含量大于15％，连翘苷含量大于0.3％，总挥发油含量大于2％。具有抗炎、抗流感病毒作用更显著，制备工艺简单，提取率高，成本低等特点。文档编号A61P31/16GK101690755SQ20091019022公开日2010年4月7日申请日期2009年9月25日优先权日2009年9月25日发明者严启新,李勇,李姿,高媛申请人:深圳海王药业有限公司