包括金属导向装置的体内微创检查设备的制作方法

专利名称：包括金属导向装置的体内微创检查设备的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种经体壁的检查设备的功能，一种使用本发明的功能化设备在体 外分析底物的方法，以及这种设备用于制造一种用于诊断病人体内癌症、感染、炎症、 神经变性疾病或移植排斥的工具的用途。
背景技术：
检查或体内治疗设备为本领域技术所公知。这样的设备呈内窥镜类型的硬管 形式或者由软管构成的导管形式，这样的导管，特别是通过天然路径或者血管，插入生 物体内，并且使其到达器官或特定组织。这些设备可以专门地消除血凝块，或者当它们 与光纤联合时，可以显现和体内控制一个系统(如消化管)或一个器官(如结肠)的状 态。然后，使由于使用这些设备对患者造成的创伤降至最低，但仍有待改善。然而， 用这些设备分析患者体内的器官或者组织不一定是可能的。这种不可能性可能是由于与 血液循环或者天然路径相比，对所述组织或器官的可接进性降低，或者是由于没有对所 述器官或组织的细胞进行细致地研究而很难做出可靠的诊断。这种情况下，现有技术中 使用至今的，通常是对所述组织或器官的片段进行取样(活组织检查)，从而体外控制这 些组织或器官的形态，或者，特别是通过细针，更加细微地对其组成细胞之一进行取样 (FNA 或《Fine Needle Aspiration》Engelstein 等人，Br.J.Urol.，7 210-213，1994 ； Rodrigues 等人，J.Am.Acad.Dermatol.，42: 735-740，2000 ； Ariga 等人，Am.J.Surg.， 184 410-413，2002 ； P6rez-Guillermo 等人，Diagn.Cytopathol.，32: 315-320，2005 ； Femandez-Esparrach 等人，Arch.Bronconeomol.，43: 219-224，2007)。而且，也可以 分析一定数量标记物的表达状况，该标记物的表达与特定的病理状态(特别是癌症、炎 症、感染、神经变性疾病或者移植排斥)有关。然而，由于活组织检查的取样或者细胞的抽吸，这些不同的方法有时会对所述 组织或器官并且最终对患者造成严重的创伤。由于连续取样的出血或者生成瘢痕，特别 是对特定器官(脑、胰腺、肝脏或者肺脏)，生物体后来可能会遭受痛苦的折磨。所以至今仍需要新的可以进行可靠准确诊断的检查方法，特别是与不同病理 (如癌症、炎症、感染或者神经变性疾病)有关的特异性标记物的表达相比，同时限制对 患者造成的创伤。专利EP 1 358 481描述了一种分析或者体内治疗的设备，其包括⑴不同于通过 分析荧光信号的检查底物的微系统，(ii)柔性铰链(butt)，其一端固定于所述微系统， 而另一端用来控制所述微系统，(iii)医疗器械，其具有内部通路，在该内部通路中所述 柔性铰链可以滑动，(iv)保护微系统的滑动系统，其为可拆卸的并与底物位于同一水平 上，以及(V)在所述微系统的水平上的组织或细胞的撕裂系统，其与选自通过感受器(触 觉、视觉、理化或者数值信息(numerizedinformatic))远距离控制进行监测的设备中的一 个或几个设备相连，来进行活组织检查、治疗、局部注射生物或化学制品。为了可以进入血管以及撕裂组织或细胞，所述微系统因此与另一个刚性更大的系统相连，优选在末端位置相连，来确保这一功能。然而，在体内检查设备的情况中，检查设备时常通过使用血管内或腔内路径直 达目标器官或者组织。微系统与撕裂系统的连接于是会使所述设备一端的直径以不可忽 略的方式增大。后者随后会陷入太复杂的使用中，以至于不能在没有同时改变血液循环 路径的情况下正确直达其目标位点。同时，关于使器官或组织穿孔所需的刚性的获得， 连接多种元件会损害设备的总柔性并因此损害其正确导向。

发明内容
在一些重要的研究之后，发明人现已设法开发出一种包括金属导向装置的设 备，其穿孔一端直接与反应基团(特别是待测底物的特异性抗体或者抗体片段)结合，并 且其另一端用于操纵所述导向装置从插入位点到所述底物的微量分析位点和/或微量取 样位点。所述导向装置可以插入到可拆卸的保护系统(例如柔性导管)中，随后其可以 保护所述导向装置的功能端到达由组织、器官或它们的细胞构成的待测底物的微量分析 位点和/或微量取样位点。本发明构造了导向装置的表面从而使导向装置上具有一些斑点，例如孔 (well),反应基团会在此沉积并在此会发生生物化学相互作用。所述“孔”可以采用不 同的方法得到，如通过聚焦离子束的光刻(FIB或见《Focused Ionbeam》Xie等人， Nuclear Instruments & Methods in Physics research SectionB—beam Interactions with Materials and Atoms, 211(3) 363-368，2003)、激光光刻及其后的电化学攻击和激光。可选地，可以构造金属导向装置从而使所述导向装置上具有一些斑点，例如至 少一个呈线形、圆形或带状形式的沟(furrow)，在其中连带地连接至少一个小型生物芯 片，反应基团会在此沉积并会发生生物化学反应。由导向装置的表面的结构形成的斑点 (例如孔)不会在导向装置的表面形成浮凸，而是形成一些沟或者凹陷(hollow)。因此， 由导向装置的表面的结构形成的斑点不会增大导向装置的直径。有利地，由导向装置的表面的结构形成的斑点位于导向装置的表面，这意味着 这些斑点直接与液体、组织和细胞接触。而且，所述设备可以插入具有内部通路的医疗器械中，所述金属导向装置可以 在其中滑动，且尤其是在经体壁的针穿刺中，特别是经皮的或经粘膜的，或者在内窥镜 中，其包括血管内导航系统。而且，所述设备可以与光纤连接，或者所述设备的金属导向装置可以用光纤替 换，其穿孔一端连接至其上直接结合了反应基团(尤其是待测底物的特异性抗体或者抗 体片段)的金属环，以便于在考虑到诊断和最终预后评价所需的体内捕获的要素的情况 下，进行细微的原位观测。使用光纤的目的是成像以及从原位观测的位置设置所述设备。根据本发明的设备，由于简化，在保持微创的同时，呈现出与现有技术的设备 相比改进的柔性或弹性。于是，其可以更有效地用于通过腔内路径(尤其是血管内路径) 或者通过经体壁的路径(尤其是经皮的或经粘膜的路径)检查。而且，根据本发明的设 备，由于使用金属导向装置，其一端与特异性反应物结合，其功能端具有足够的刚性用 以对组织或器官进行有效穿孔。最后，根据本发明的设备，其端部直径足够小用以在血液循环或自然体腔中可以容易导航，并且特别是将对必须进行穿孔的组织或器官造成的 创伤减至最低。更进一步地，在收回所述设备后，也能够运用标准方法进行体外鉴定，如免疫 酶剂量或者免疫荧光，例如在固体载体上[ELISA技术，蛋白质芯片(ESPINA等人， J.Immunol.Methods, vol.290, p 121-133，2004)],在根据本发明的设备的末端处并因
此在微量分析和/或微量取样(器官或组织)位点水平处存在具有相对浓度的所述特定底 物。最后，由于所述金属导向装置的特性，所述设备呈现的图像信号(动脉造影、 回波描记、扫描、MRI等)得到改善。在无线电导航对目标组织或器官产生干扰的时 候，这一特性使其显著降低。同样，这一特性使得所述设备与用于成像的光纤连接时， 可以进行细微的原位观测。因此，本发明的第一个目的是提供一种用于分析底物的设备，其特征在于，所 述设备包括用于对所述底物进行检测和/或微量取样的微创系统，所述系统由至少一个 金属导向装置构成，其Ea端(extremity Ea)设有至少一组孔并且该孔直接与所述底物的至 少一个特异性反应基团结合，所述Ea功能端用于穿孔，而其另一 Em端用于操纵所述金 属导向装置并最终与抽吸系统相连。有利地，Ea端的表面可以构造成具有至少一组孔，其与所述底物的至少一种特 异性的反应基团直接结合，所述Ea端用于穿孔。由于根据本发明的设备对患者造成的创伤微小，因此可以对患者定期进行几次 微量分析或者微量取样(例如，对前列腺进行分步分析和/或取样)。除诊断外，所述分 析和/或连续取样因此可以用于跟踪患者体内癌症、炎症、感染、神经变性疾病或者移 植器官的良好保持的发展。有利地，Ea功能端(functionalized extremity Ea)可以在约0.5 2cm的长度上
呈现出至少一组1 25个孔，优选2X25个孔，所述孔的平均直径为约30 80 iim， 优选为约40 60 iim，且更优选为约50iim，所述孔的深度为约20 30 y m，优选为 25 um,所述孔彼此相隔约60 120 ym。优选地，所述孔具有光滑或粗糙的壁、卵圆 形或圆形形状、以及平坦或凹面的底部。有利地，功能端可以设有许多尽可能隆起的孔。孔的数量可以为使金属导向装 置具有足够的刚性以对组织或器官进行穿孔。在这一实施方式中，功能端的平均直径可 以为约0.3 3.5mm，优选为约0.35mm。有利地，所述金属导向装置可以构造成0.5 2cm的长度，优选lcm，以形成所述孔。有利地，孔的直径可以为约30 80 y m，优选 为约30 60iim，例如35iim。有利地，所述孔的深度可以为约20 30 y m，优选为 约25 u m。所述孔之间的间隔可以为20 120 u m，优选为25 u m。有利地，所述Ea功能端可以是柱状、平面或者螺旋状形式，或者是改进的形状 从而增加所述孔与液体、组织和细胞接触的表面。根据本发明的设备的一个特定的实施方式，所述设备在Ea功能端进一步包括可 拆卸的保护系统。根据本发明的设备的一个特定的实施方式，所述设备进一步包括具有内部通路 的医疗器械，所述的至少一个金属导向装置可以在其中滑动。
例如，“金属导向装置”，是指实心柔性金属铰链(butt)或者中空的刚性金属铰 链，其直径为0.2 3.5mm，长度为5X 10_2 2m，并且其可以插入血管、小腔中，或者 穿过器官或组织，从而可以从插入位点直接到达原位微量分析和/或微取样位点。特别地，实心柔性金属铰链可以由光纤构成，其Ea端与设有至少一组孔的金属 环相连。所述孔与所述底物的至少一种特异性的反应基团结合，所述Ea功能端用于穿 孔。有利地，所述金属环的宽度为约0.5 2cm，可以呈现出至少一组1 25个孔， 优选2X25个孔，所述孔的平均直径为约30 80 iim，优选为约30 y m或40 60 y m， 且更优选为约50iim或者35iim，所述孔的深度为约20 30 y m，优选为25 y m，所述 孔彼此相隔约20 120 iim，例如约60 120 iim。优选地，所述孔具有光滑或粗糙的 壁、卵圆形或圆形形状、以及平坦或凹面的底部。“金属导向装置”进一步指实心或者中空的、刚性或柔性的铰链，其全部或部 分由合金构成，该合金的柔性、刚性、氧化性以及免疫原性的特性符合其在生物体中特 别是在动物、更特别地是在人体中的使用。本领域技术人员通过其常识可以容易地确认 这种生物相容性合金，并且其主要包括不锈钢、基于钛的合金、镍、钴，或者它们的混 合物。发明人已设法证明了基于钛镍合金的导向装置(镍钛记忆合金(Nitinolalloy))在 其末端处的总柔性和刚性方面呈现出一些特别有益的特性，从而在血管内或腔内路径中 能有效使用，并且也能有效地对组织或器官穿孔，同时将创伤(对所述组织或器官的水 平处的穿孔的尺寸为，例如约0.05 0.5mm2，且优选约0.07mm2)减至最低。有利地，所述金属导向装置为基于钛镍合金的导向装置，优选基于镍钛记忆合 金(金属导向装置由Euroglex society出售)的导向装置。除在Ea功能端处，所述金属导向装置可以被亲水性聚合物(优选水凝胶)或者 被多孔保护性聚合物层覆盖，厚度为约0.1 51 ym。有利地，保护性聚合物由聚对亚苯 基二 甲基、Ti02 或者OptoDex (Arrayon Biotechnology，Switzerland)的膜构成，并且
更优选聚对亚苯基二甲基膜。其中插入有所述金属导向装置的可拆卸的保护系统可以采用多种形式，主要采 用本领域技术人员可以容易地进行测定的柔性导管的形式，例如，可用于血管内、腔 内、经体壁的以及特别是经皮的路径的形式。所述可拆卸的保护系统可以通过血管内的路径插入，特别是插入至心脏、大 脑、肺、胰脏、肾脏以及肝脏的血管。所述可拆卸的保护系统可以通过腔内通道插入，特别是通过内窥镜方式，通过 口腔、肛门、泌尿生殖以及呼吸路径，或者ENT的经粘膜路径，或者也可以通过对皮肤 进行穿刺方式的经皮路径，为了到达例如乳腺、特别是肾脏中，某一关节、椎管中，可 以通过腰椎穿刺或者在肝脏、肺或者肾脏中经体壁的路径，也可以通过经粘膜路径，特 别是用于消化道中。发明人证实了根据本发明的设备通过通常使用的血管内、腔内或经体壁的路 径，特别是经粘膜或经皮的路径，到达通常难以到达的组织或器官。一般地说，发明人证实了根据本发明的设备，由于其末端处的总柔性和刚性的具体特性，可以通过经体壁(经皮的、经粘膜的)、血管内或腔内路径到达并对一些器官 和组织进行穿孔，这些组器官和组织为口咽到直肠的消化系统(包括肝脏和胰脏)、泌 尿生殖系统(包括膀胱、肾脏、前列腺、睾丸、卵巢和乳腺)、气管与支气管系统(包括 肺)、ENT系统(包括耳和鼻咽)、骨关节系统(包括滑液腔)、内分泌系统、脑神经系 统(neurocerebral system)或外被系统中的部分，然后经活组织检查后实现对病理的诊断， 而不是经肝的活检时进行深度攻击性穿刺，包括用细针抽吸(也称为FNA)的细胞取样。有利地，其中插入有金属导向装置的所述可拆卸保护系统采用适用于血管内或 腔内传送的柔性导管形式。根据本发明的设备尤其适用于对如动脉和静脉、心血管、前列腺、乳腺、胰 脏、肾脏、心肌、中枢神经系统以及其体腔或管道，大脑或者肝脏进行检查。根据本发明的设备的第一个特定实施方式，将所述其中插入有金属导向装置的 可拆卸保护系统自身插入内窥镜中。根据本发明的设备便特别适用于腔内传送。根据本发明的设备便特别适用于对例如气管_支气管系统(包括肺脏)、从咽到 直肠的消化系统(包括肝脏和胰脏)、泌尿生殖系统(包括膀胱、肾脏、前列腺、睾丸、 卵巢和乳腺)、眼系统(泪管)、耳鼻喉系统(包括耳和鼻咽)、骨关节系统、或中枢神经 系统进行检查，特别是通过经脊柱内(endo-spinal)传送，或者是通过乳管内传送进行乳 腺的检查。根据本发明的设备的第二个特定实施方式，由经体壁的抽吸细针(且更特别的 是经皮的或经粘膜的抽吸细针)组成的金属导向装置可以插入到可拆卸的保护系统(例如 柔性导管)中。根据本发明的设备便特别的适用于特定的经皮的或经粘膜的传送。根据本发明的设备特别适用于对例如关于外被(皮肤、头皮等)、胸部、肾脏、 肺、肝脏、肌肉、骨骼肌或骨关节系统、中枢或末梢神经系统或者内分泌腺(更优选甲 状腺、甲状旁腺、肾上腺、睾丸、乳腺或卵巢)进行检查。关于根据本发明设备的Ea功能端，其设有至少一组孔，该孔直接与待测底物的 特异性反应基团结合。“特异性反应基团”是指，例如，与待测核酸序列互补的核酸序列[DNA(扩增 产物、基因片段、EST、SNP)或者NRA]，以及待测抗体的特异性抗原或者待测抗原的 特异性抗体或者抗体片段，优选抗体或者抗体片段。有利地，依据增加或减少的范围，将所述特异性反应基团设置于根据本发明的 设备的功能端的微孔(micro-well)中。本领域技术人员使用其常识和惯常经验可以容 易地确定所述范围与反应基团对底物的亲和性的函数关系。例如，反应基团的范围约为 50 500 u g/ml，优选为10 100 u g/ml，对于反应物来说，更优选对其底物具有亲和 性的抗体，更特别的是抗原的数量级为约10_9。“抗体”优选地指活体生物、哺乳动物的免疫球蛋白，更优选人类的免疫球蛋 白并且更优选IgG。“抗体片段”指能够与其抗原保持特异性固定的抗体片段。可以引用Fab、 Fab'、F(ab' )2或Fv片段作为这种抗体片段的例子。结合反应物的方法，特别是将蛋白质一次性结合在金属载体上的方法是本领 域技术人员所公知的。由于氨基酸的低化学反应性，这种方法通常需要通过氧化作用机制或者用至少一个连接分子(最常见的是聚合物(该聚合物通常例如为巯基、 羧酸和/或胺类))层覆盖金属表面来活化金属表面。这种方法的例子有，功能分 子以自组装单层(SAM)的形式吸附于金属载体上，特别是硫醇(alcanethiol)(参照 WITTSTOCK 和 SCHUHMANN，Anal.Chem.，vol.69, p 5059-5066, 1997 ；以及国 际申请 WO 03/006948)或者口比口各(electrochemical polymerization of biotinylated pyrrole ； DUPONT-FILLIARD 等.，Anal.Chim.Acta., vol.449, p 45-50，2001)。将抗体或者抗体片段结合至功能分子层上是指共价键(像硫醇中的游离巯基之 间的二硫键)或者非共价键(像吡咯/生物素复合物的聚合物层的生物素与链酶抗生物素 蛋白/抗体复合物或抗体/链酶抗生物素蛋白片段的链酶抗生物素蛋白之间的链酶抗生物 素蛋白-生物素连接)。依据第一个优选实施方式，根据本发明的设备包括至少一个金属导向装置，其 Ea端与至少一种反应基团结合，所述反应基团优选为对癌(更特别是乳腺癌、卵巢癌、 前列腺癌、结肠癌、腹内肿瘤、肾癌、肝癌、肺癌、胰腺癌、中枢或末梢神经系统或内 分泌腺(更特别是甲状腺、睾丸或卵巢)肿瘤)标记物(抗原)具有特异性的抗体或者抗 体片段。乳腺癌的标记物的例子有标记CA15-3 (Carcinoma-Associated Antigenl5-3 ； Duffy M.J., SheringS., Sherry F., McDermott E., O' HigginsN., Int.J.Biol.Markers, 20000ct-Dec. ； 15(4) 330-3)、CA 27-29 (Carcinoma-AssociatedAntigen 27-29 ; Kaohsiung J., J.Med.Sci., 1999Sept. ； 15(9) 520-8)、CEA (Carcinoembryonic antigen ； Soletormos G.，Nielsen D., Schioler V., MouridsenH., Dombernowsky P., Eur. J.Cancer, 2004Mar. ； 40(4) 481-6)、TPA (TissuePolypeptide Antigen) > TPS (Tissue Polypeptide Specific Antigen ； Given M., ScottM., Mc Grath J.P., Given H.F., Breast, 20000ct. ; 9 (5) : 277-80)、HER2 (FehmT., JagerW.，KramerS.，SohnC.，Solomayer E., Wallwiener D., Gebauer G.，Anticancer Research, 2004May-Jun ; 24 (3b) 1987-92)、ER(Estrogene Receptor ； Platet N., Cathiard A.M., Gleizes M., Garcia M., Crit.Rev.Oncol.Hematol.，2004Jul. ; 51(1) 55—67)、PR (Progesterone Receptor ； Duffy M.J.，Clin.Chem.，2005Mar. ； 51(3) 494_503.Epub 2005Jan.6.)、Ki_67(cell proliferation-associatedantigen of antibody Ki-67 ； Schliiter C.， Duchrow M., Wohlenberg C.，BeckerM.H.，Key G.，Flad H.D., Gerdes J.，J.Cell.Biol.，1993Nov. ; 123(3) 513-22)禾P UPA (Urokinase Plasmogen Activator ； Duffy M.J.，Crit.Rev.Clin丄ab.Sci.， 2001Jun. ； 38(3) 225-62)。卵巢癌标记物的例子有标记CA125 (Carcinom Antigenl25 ； Moss E.L., Hollingworth J.，Reynolds T.M., J.Clin.Pathol., 2005Mar. ； 58(3) 308-12)、CA15-3 和 CEA (Valenzuela P.，MateosS.，Tello E., Lopez-Bueno M.J., GarridoN.，Gaspar M.J., Eur.J.Gyn.Oncol.，2003 ； 24(1) 60-2) 前列腺癌标记物的例子有标记PSA (Prostate-Specific Antigen ； GrayM.A.， Clin丄ab.，2005 ； 51(3—4) 127—33)、PMSA (Prostate—Specific MembraneAntigen)禾口 AR (Androgen Receptor ； Birtle A.J., Freeman A., Masters J.R.，PayneH.A., Harland S.J., BJUInt., 2005Aug. ； 96(3) 303-7)。
结肠癌标记物的例子有标记CEA (Duffy M.J.，Clin.Chem.，2001Apr.； 47 (4) 624-30)、CA 19-9 (Carcinom Antigen 19-9)、CA242 (Carcinom Antigen242)、 CA 72-4 (Carcinom Antigen 72-4)、TPA、TPS (Duffy M.J.，van Dal en A., Haglund C.，Hansson L., Klapdor R., Lamerz R., NilssonO.，Sturgeon C.，Topolcan O.，Eur. J.Cancer, 2003Apr. ; 39(6) 718-27)。腹内肿瘤标记物的例子有标记CEA或CA19-9 (Coban E.，Samur M.，Bozcuk H.，OzdoganM.，Int.J.Biol.Markers, 2003Ju卜Sep ； 18(3) 177-81)。胰腺癌标记物的例子有标记TA90-IC(90kDa的免疫原性肿瘤相关抗原)、 CA-19-9 (Chung M.H., Gupta R.K., Bilchik AJ, Ye W, Yee R.，Morton D丄.，Curr. Surg., 2002March-April ； 59(2) 194-198)、TPS、HCG 3 (hCG beta，Human Chorionic Gonadotropin beta)、CA 72—4、CEA、CA 19-9, CA 242 (Louhimo J.，Alfthan H.， Stenman U.H., Haglund C., Oncology, 2004 ； 66(2) 126-31)。肝癌标记物的例子有a -胎蛋白标记。肺癌标记物的例子有标记Cyfra A41 (细胞角蛋白片段41)、SCC (鳞状细胞癌 抗原)、ACE (血管紧张素转换酶)、CA19-9、CA125、NSE(神经元特异性烯醇酶)、 嗜铬粒蛋白A、CYFRA21-1(细胞角蛋白片段21-1)、CA 15-3。依据第二个优选实施方式，根据本发明的设备包括至少一个金属导向装置，其 Ea端与至少一种反应物结合，优选与对炎症、更特别是类风湿性关节炎的特定标记物具 有特异性的抗体或者抗体片段结合。类风湿性关节炎标记物的例子有IL-10、IL-IRa、IL_2、IL-2R、IL_4、 IL-5、IL-6、IL7、IL8、IL10、IL12p40P70、IL-13、IL-15、IL-17、le TNF a、 IFNa、IFNy > le GM-CSF、leMIP-1、IP-10、MIG、Eotaxine、RANTES 和 MCP_l(COCKRUM 等.，Lab Automation, BTi, October 2005，p 19-21)。依据第三个优选实施方式，根据本发明的设备包括至少一个金属导向装置，其 Ea端结合至少一种反应物，该反应物优选为对感染(更特别是病毒、细菌或寄生虫感染) 的特定标记物具有特异性的抗体或抗体片段。很多感染标记物是本领域技术人员公知的，并且本领域技术人员能够非常容易 地识别特异性标记物或者与假定感染有关的标记物。依据第四个优选实施方式，根据本发明的设备包括至少一个金属导向装置，其 Ea端结合至少一种反应物，优选对移植排斥的特定标记物具有特异性的抗体或者抗体片 段。很多移植排斥的标记物是本领域技术人员公知的。例如，用于心脏移植的 MIP-1 3 和 VE-钙粘蛋白(VE-cadherine) ( ROUSSOULIERES 等.，Circulation, vol.111 (20)，p 2636-2644，2005)。本领域技术人员可以运用其常识，经有限的实验即可容易地鉴别上述特异性标 记物，所述抗体或者抗体的特异性片段可以用于本发明的设备。这种抗体的例子有在 TEBU或AXXORA可得的抗体。本领域技术人员也可以运用已知的免疫法获取这样的抗 体。同样地，本领域技术人员将能鉴定出能用于本发明设备的适合的特异性核酸。
依据第五个优选实施方式，根据本发明的设备包括至少一个金属导向装置，其 Ea端结合至少一种反应物，优选抗体或者抗体片段，所述抗体或者抗体片段对神经变性 疾病的一种特定标记物或者一系列特定标记物具有特异性，所述神经变性疾病例如为阿 尔茨海默病(MA)、帕金森综合症、肌萎缩性侧索硬化(SLA)，该列表为非穷举的。有几种本领域技术人员已知并已用于研究这种病症的标记物。例如，对 于精神失常或有精神失常先兆状态，总蛋白Tau(MAPT_微管相关蛋白Tau)、淀粉 状肽 ABETA1-42、高度磷酸化蛋白 Tau(p.Tau phosphorylated in 128)，由 Waldemar G.等举例描述[Waldemar G.，Dubois B.，Emre M.等，Eur.J.Neurol.，2007，14，pp 1-26 ； Dubois B., Feldmann H.H., Jacova C.，Dekosky S.T.等，LancetNeurol.2007, 6, pp 734-746 ； Krolak—Salmon P.等. "Vers un diagnostiquebiologique de la maladie d' Alzheimer et des syndromes apparentes “，La Revue demedecine interne (2008), doi 10.1016/J.revmed.2008.01.029]o 这些标记物可以由酶联免疫吸附的抗原-抗体技术进 行鉴定(ELISA.INNOTEST B-Amyloid type (1-42), INNOTEST hTAUAg, INNOTEST PHOSPHOTAU(181p) ； Innogenetics, Ghent, Belgium.)。其他标记物也能检测大脑的退化状态，并且更特别的是视锥蛋白样蛋白(VLP6 或 VILIP-1 或 VSNL)，如在文献 Lee J.M.等人，Clin.Chem.，2008，54，ppl617_1623 中
所描述的。在实施本发明时可采用这些标记物。关于帕金森病和多系统(共核蛋白病synucleopathies)萎缩的标记物可为 a -SYNUCLEINE (Mollenhauer B., CullenV ，Khanl.，Experimental Neurology, 2008，
213， pp 315-325)。最后，存在对中枢神经系统(SNC)疾病具有非特异性的标记物，也可以将其在 本发明范围内使用。这些标记物是源于SNC (如GFAP蛋白、髓鞘、神经肽和神经递质) 的蛋白。更特别的是在加州圣地亚哥大学的文献Medicine& health/diseases (2009年2月) 中描述的BNDF蛋白(脑源性神经营养因子)，也引起了特别的关注。而且，在实施本 发明时可以使用免疫应答蛋白(例如IgG、白蛋白、补体蛋白、反应蛋白C)以及炎性蛋 白(如转铁蛋白、结合珠蛋白(haptoglobin)、铜蓝蛋白、溶菌酶、烯醇化酶)。本发明的任何实施方式中，可以将几种不同的标记物(即不同病理标记物)放置 在同一金属导向装置的孔中。即，可以将标记物置于所述孔中以使不同的标记物不相互 反应。有利地，根据本发明的设备或至少是与待分析底物接触的功能末端部分呈约 10-6的无菌确保等级(SAL为无菌确保等级)。可以使用不同的可选的解决方案来达到 这个无菌等级。存在一种可能性，在没有待测底物的特异性反应基团存在的情况下，对 设备灭菌，然后在无菌条件下加入该反应基团。存在另一种可能性，在添加反应基团后 再对设备灭菌，这就需要使用不会显著降低所述反应基团的活性的灭菌技术(例如使用 环氧乙烷或辐射灭菌)。本发明的第二个目的是提供一种体外检测存在于组织或器官中的底物的方法， 其特征在于包括如下步骤a)当根据本发明的设备的功能Ea端与所述待检查的组织或器官接触时，使用包 含至少一种对所述底物具有特异性的检测剂的溶液孵育所述功能Ea端。
b)检测所述底物。孵育步骤需在充裕的时间内进行以便于溶液中的检测剂，特别是抗体，能特异 地固定于所述底物(标记物、抗原、抗体等)，特别是抗原上，并且非必须地存在于设备 末端。本领域技术人员可以运用其常识和例行实验容易地确定该孵育时间与溶液中检测 剂的亲和性的函数关系，特别是抗体对其底物的亲和性，更特别的是抗原。该孵育时间 也取决于孵育期间的溶液温度。例如，在温度为20°C 37°C之间，孵育时间约为1分钟 至2小时，优选5分钟至1小时，并且特别优选10 30分钟。有利地，溶液中的检测剂不同于与根据本发明的设备的功能端结合的特异性反 应物。优选地，所述检测剂为抗体。有利地，溶液中的抗体以及结合至根据本发明的设备的功能端的抗体各为多克 隆抗体，优选所述抗体是相同的。有利地，溶液中的抗体以及结合至根据本发明的设备的功能端的抗体各为单克 隆抗体，优选所述抗体是不同的。有利地，标记溶液中的抗体，并且更特别的是，将其与酶偶联，例如与过氧化 物酶或者碱性磷酸酶偶联。根据本发明方法的第一个特定实施方式，所述方法在步骤a)和b)之间进一步包 括在溶液中孵育所述端的步骤a')，该溶液包含至少一种对步骤a)中的检测剂具有特异 性的检测剂。本领域技术人员能运用其常识，容易地鉴定出适合根据本发明的方法的抗体。 例如，如果在步骤a)中使用特异性针对待识别底物(标记物、抗原、抗体等)的小鼠免 疫球蛋白，则可以在第二个步骤中使用特异性识别该小鼠免疫球蛋白的抗体。根据本发明方法的第二个特定实施方式，根据本发明的方法，在孵育步骤a)和 可选步骤a')之后，包括冲洗步骤，冲洗步骤能消除没有特异性固定于标记物(抗原) 上的抗体。这样的冲洗步骤的程序也属于常识，并能通过例行实验很容易地确定。例如， 该步骤可以使用包括一定浓度的洗涤剂(0.05 1%)(如TRITONX100 或TWEEN20 )的溶液来进行，具有提高溶液中的抗体对其特异性抗原的亲和性的作用。检测步骤根据活性进行，更特别的是根据与步骤a)或可选步骤a')中所用的抗 体结合的酶的活性而进行。该检测步骤所采用的程序取决于所使用的标记物，更特别的是所使用的酶，例 如过氧化物酶和碱性磷酸酶，并且这也属于本领域技术人员的常识。该检测步骤能推导出固定于所述设备功能端的特异性底物(例如抗原)的量，并 且最终推导出存在于器官或组织在进行微量分析和/或微量取样处水平上的特异性底物的量。最后，能用于实施根据本发明的方法的各种反应基团也是本领域技术人员周知 的，并且更特别的是，这些反应基团包括用于免疫酶或免疫荧光剂量技术的反应物，例 如在固体载体上[ELISA技术，蛋白质芯片(ESPINA等.，见上文，2004)]。本发明的第三个目的是使用根据本发明的设备制造一种用于诊断患者体内癌症、炎症、感染、移植排斥或神经变性疾病工具。根据本发明的一个特定实施方式，所述诊断工具可以包括至少一个插入柔性导 管中的金属导向装置，所述柔性管插入于内窥镜中。根据本发明的另一个特定实施方式，所述诊断工具可以包括至少一个金属导向 装置，所述金属导向装置由穿过体壁的(并且更特别的是经皮的或经粘膜的)抽吸细针组 成，其可以插入可拆卸的保护系统(例如柔性导管中)中。此外，可拆卸的保护系统与 金属导向装置配合使用以便于使所述导向装置的功能Ea端与微量分析和/或微取样位点 接触。在这两个本发明的特定实施方式中，所述至少一个金属导向装置可以与用于可 视鉴别和定位的光纤长度的至少一部分相连。有利地，所述诊断仪器通过腔内路径传送。因此，所述工具能够在从咽至直肠的消化系统(包括肝脏和胰脏)、泌尿-生殖 系统(包括膀胱、尿道、肾脏、前列腺)、气管-支气管系统(包括肺)、ORL系统(包 括耳和鼻咽)以及骨关节系统(包括滑液腔)中进行微量分析和/或微量取样。优选地，所述诊断工具通过经体壁的路径传送，更特别的是通过经皮或经粘膜 的路径传送。这种诊断工具也能够对通过常规使用的腔内或血管内路径很难到达的组织或器 官进行分析。这种诊断工具也能通过经体壁的路径，在皮肤、睾丸、前列腺、卵巢、乳 腺以及肾脏和肝脏水平，末梢神经系统和中枢神经系统(更特别的是通过脊柱内的路径) 的水平上以及在内分泌系统(例如甲状腺)水平上，进行微量分析和/或微量取样。在下文中的实施例可以阐明本发明，该实施例作为非限定的实例给出。


图1示出了构造金属导向装置的各种可能性；图2示出了 FIB制成的不同孔的扫描电子显微镜图片(能够观察到由于不均一蚀 刻产生的重要的表面糙度)；图3示出了氟辅助铣削技术的遮蔽效应的图解和观测结果；图4示出了微观成型操作的进步；图5示出了(a)光学显微镜观察到的半球形孔，(b)用扫描电子显微镜在使用镍 钛记忆合金的导向装置上观察到的一组孔，(c)腔的细节，(d)腔内的表面糙度与导向装 置的表面糙度的比较；图6示出了与图5中相同的半球形孔在电化学磨光处理后的扫描电子显微图 片；图7示出了本发明的设备用第一个单克隆抗体(AcM 1)进行免疫捕获和用第二 个单克隆抗体(AcM 2)使抗原ACE显露的图解；图8示出了用捕获抗体5910和用抗体5909显露的ELISA结果(使用抗原ACE
阳性血清获得的吸光度)；图9示出了用捕获抗体5910和用抗体5909显露的ELISA结果(使用抗原ACE
阴性血清获得的吸光度)；
图10示出了用捕获抗体5905和用抗体5909显露的ELISA结果(使用抗原ACE
阳性血清获得的吸光度)；图11示出了用捕获抗体5905和用抗体5909显露的ELISA结果(使用抗原ACE
阴性血清获得的吸光度)；图12示出了用具有捕获抗体5910的刚性塑料铰链和用抗体5909显露的的ELISA 结果(使用抗原ACE阳性血清获得的吸光度)；这些图片用于说明所用方法的敏感性和特异性。
具体实施例方式实施例1 基于镍钛记忆合金的金属导向装置的制造及其活化将基于镍钛记忆合金的金属导向装置(Euroflex)的表面进行构造使其具有特定部 位，例如孔，反应基团会置于其中并会在此发生生物化学反应(图1)；所述“孔”可以使用多种方法获得，例如聚焦离子束光刻(FIB，Xie等， Nuclear Instruments & Methods in Physics research Section B—beam Interactionswith Materials and Atoms, 211(3) 363-368，2003)、通过激光光刻及随后的电化学蚀刻和激光烧蚀。使用FIB技术，机器产生聚焦到必须进行构造的表面上的离子束。在离子束的 机械作用下，表面材料的原子自表面除去。在适合的时间用FIB技术可以通过束流为 20nA的8 y m3s_1的蚀刻写入器(etching reader)形成直径为20 y m的孔。图2示出直径 为5、20和40 y m且深为10和20 y m的孔。在蚀刻期间，由于粉末状材料的再沉积， 所述孔的底部表面粗糙。在200nm miiT1在直径为40 y m且束流为20nA的圆形区域上测 定了蚀刻率。该蚀刻速率的结果为OJiimbC-1 (约SiimY1)，其相当于在20分钟的加工 时间内制造出直径为20i!m且深20i!m的孔。为了改善表面糙度，可使用氟(XeF2)辅 助的铣削技术；随后可以得到非常低的表面糙度，但是由于乂评2并非精确地沿着蚀刻光 束的轴，故产生了遮蔽效应(图3)。激光光刻技术和电化学蚀刻存在于用聚合物层涂覆表面的第一步。第二步中， 使用激光烧蚀对聚合物层进行机械加工。第三步中，用等向性电化学蚀刻穿过置于聚合 物层中的开口，对表面进行蚀刻(图4)。图5示出了在基于镍钛记忆合金的金属导向装 置上的各种结构测试的结果。此外，用于体内的基于镍钛记忆合金的金属导向装置经常通过电化学抛光进行 加工，这使得具有生物相容性的Ti02层取代了本征NiTi氧化层。为了评价这种方法对孔 结构的影响，机械加工的具有孔的导向装置须经历这种方法(图6)。另一种在基于镍钛记忆合金的导向装置表面上制造洞的方法是使用激光烧蚀。 在不会因热的生成而影响周围金属的条件下，使用短激光脉冲使金属局部蒸发。报道的 最小尺寸约为20iim。如果上述的三种方法都能制造出孔，则电化学蚀刻方法的结果最佳。实施例2 连续将金属导向装置体内插入至特定器官所引起的创伤这些实验中使用的是金属微型导向装置(MTI 0.012" Silver speed),并且将所述 金属导向装置插入至微型导管中。在抽吸水平上将所述装置引入全麻状态下的猪体内，随后在股三角(Scarpa)水平通过血管内路径(通过股动脉)向上到达肾脏。该导向装置通过动脉造影由位于股动 脉中的所述设备的追踪观察进行操纵。当所述设备处于肾脏入口时，其可以通过入侵动脉路径到达肾脏。这样穿刺进 入组织几毫米深处，并且所述设备在那里停留约10分钟。最后，移除所述设备。在根据本发明的设备进行穿刺后，处死动物并将其肾脏作为样本来评价它们的 状况。结果显示肾脏中没有与入侵相关的重大出血。观察到的最为严重的损伤是在入 侵位点上3 X 1 mm大小的范围。根据本发明的设备因此能够到达器官并同时产生及其轻微地侵害。实施例3 在肝脏中插入设备伴随的微创与实施例1不同，将所用的金属微型导向装置(MTI 0,012" Silver speed)设置在
纤维镜中。在抽吸水平上将所述装置引入全麻状态的猪体内，随后在股三角水平上通过血 管内路径(通过股动脉)向上到达肝脏。该导向装置由位于股动脉中的所述设备通过动 脉造影进行操纵。当接近肝脏时，将设备引入至该器官。穿刺进入组织几毫米深处，并且所述设 备再次在那里停留约10分钟。最后，移除所述设备。如前所述，该操作中的肝脏样本能用于评价该操作对这一器官的侵害程度。肝脏表面没有肉眼可见的损伤。当切割时，可以看到被膜下薄壁组织内有 1.5X0.4cm和1.8X0.5cm尺寸的两个出血节点。在组织学结构上，肝组织的每一个方向 上的窦状隙、肝门小静脉和中央小叶静脉有一点充血，但并没有任何异常。结论结果显示出血性损伤很小可以在显微镜下看到两个很小的伤口，但没有损坏 薄壁组织细胞，并且毛细血管和中央小叶静脉有一些充血。因此，使用金属导向装置能产生很小的创伤，在任何情况下，这些创伤都远远 小于活组织检查造成的创伤。实施例4 构思和制造确保在固体载体上进行体外免疫捕获和检测抗原ACE的 设备参数的研究所述设备使用ELISA技术的原理使抗原ACE显露。两个识别该抗原上的不同 表位的单克隆抗体用于捕获(AcMl)和显露抗原ACE(AcM2)。这些具有相同的同位素 的单克隆抗体(IgGl)，用单克隆抗体偶联至生物素和链酶抗生物素蛋白_过氧化物酶的 复合物上从而使ACE抗原显露(图7)。使用两种类型的载体，用于ELISA的板或者刚性塑料。用于ELISA 的板(Greiger)将100 u 1的用碳酸盐/碳酸氢盐缓冲液稀释(1/5000和1/128000)的针对ACE 抗原的单克隆抗体(克隆5910或克隆5905，在小鼠中制备并由MedixBiochemical出售) 置于每一个孔中，然后将该板在37°C下放置1小时。用碳酸盐/碳酸氢盐缓溶液代替所述抗体作为阴性对照。用250 ii 1的PBS将每一个孔冲洗三次后，在37 V下，用200ml 3 %的 PBS_BSA(牛血清白蛋白)饱和该板的自由位点(free site)两小时。然后用250 ii 10.5%的PBS-吐温对每个孔冲洗三次，之后在每个孔中加入用 PBS-吐温按1/10、1/100、1/1,000范围内稀释的100 iU的抗原ACE阳性血清，并在 37 °C下孵育该板1小时。然后用250 iU的PBS-吐温对每个孔冲洗三次，随后再添加100 ii 1的用PBS-吐 温按1/500范围内稀释的生物素化的针对ACE抗原的单克隆抗体(小鼠中制备的克隆 5909并且由Medix Biochemical出售，由于恒定的亲和力和识别表位，故不同于之前使用 的捕获抗体)，并在37°C下再次孵育该板1小时。用PBS-吐温冲洗三次后，在每个孔中加入100 u 1的按1/2000范围内稀释的偶 联至过氧化物酶的链酶抗生物素蛋白复合物，并在37°C下孵育1小时。用PBS-吐温冲洗三次后，在每个孔中加入200 u 1底物(H202)和色原(OPD， Sigma)的混合物，该底物和色原于柠檬酸-磷酸盐对照溶液中(pH5)。平行地，使用“正常”患者的血清作为抗原(阴性对照，ACE剂量<5Ul/ml) 进行同样的操作。然后，通过在每个孔中加入50 iU 1M的硫酸终止反应。在492nm下用酶标仪 (参考ELX.800UV)测定吸光度。图8示出了对于抗原ACE阳性血清以及图9中示出了对于抗原ACE阴性血清， 用单克隆抗体5910 (稀释范围在1/500内然后一半一半(halftyhalf)稀释至1/128000)进 行免疫捕获以及用生物素化的单克隆抗体5909显露的结果。图10示出了对于抗原ACE阳性血清以及图11示出了对于抗原ACE阴性血清， 用单克隆抗体5905 (稀释范围在1/100、1/200、1/500内然后一半一半稀释至1/32000) 进行免疫捕获以及用生物素化的单克隆抗体5909显露的结果。图8 11说明纵坐标492nm处的吸光度(DO)，横坐标捕获抗体(5909或5905)的稀释， 1/10范围内稀释的ACE阳性血清，■ 1/100范围内稀释的ACE阳性血清，A 1/1000范围内稀释的ACE阳性血清，x=无血 i青。结果显示，当所使用的捕获单克隆抗体在1/500的稀释范围内时，1/10稀释范 围内的抗原ACE阳性血清的吸光度(DO)在0.5以上(图8)。在同样条件下，抗原ACE 阴性血清的DO低于0.15 (图9)。然而，应当注意到，用捕获单克隆抗体5905以及检测单克隆抗体5909的组合得 到的结果(图10和11)优于用捕获单克隆抗体5910以及检测单克隆抗体5909的组合得 到的结果(图8和9)。事实上，1/10范围内稀释的抗原ACE阳性血清的吸光度为1时 (图10)，而在同样条件下抗原ACE阴性血清的吸光度为0.1 (图11)。这些结果由使用 不同稀释条件的捕获单克隆抗体5910证实(数据未显示)。
刚件标准载体在第一步中，将以长为2 3cm且直径为0.5 1mm的铰链形式的刚性塑料载 体活化。第二步中，将由此活化的载体置于1ml溶血(haemolyse)的微型管(Fisher)
中，并在37°C下用针对ACE抗原的单克隆抗体(克隆5910在小鼠中制备并由Medix Biochemical出售)使其功能化1小时，所述抗体用碳酸盐/碳酸氢盐对照液(250 y 1/管) 在1/50、1/100、1/250、1/500范围内稀释。用碳酸盐/碳酸氢盐对照液代替单克隆抗体 作为阴性对照。在固定和冲洗后，使用500iU3%的PBS-BSA在+4°C下过夜使其饱和。然后，将载体用250iU的经PBS在1/10、1/100范围内稀释的抗原ACE阳性血 清或者使用同样稀释范围内的“健康”被试者的血清(抗原ACE阴性对照)在37°C下孵 育1小时。lmg/ml范围内的针对ACE抗原的单克隆抗体(克隆5909在小鼠中制备并由 Medix Biochemical出售，由于其固有亲和性和识别表位，与纯化的克隆5910不同)在 0.1M pH 8.8的硼酸盐对照液中4°C过夜透析。然后以50 ii g/mg抗体的量加入10mg/ml 的DMSO生物素溶液。室温下孵育4小时后，在搅拌条件下以2(^1/25(^8生物素的量 加入1M的氯化铵，并将所得溶液在室温下再次孵育1分钟。终止反应后，有标记的抗 体在PBS中+4°C透析24小时，然后将该标记抗体等分并在-20°C下保存。用PBS-吐温冲洗3次后，将所述载体用250 u 1的经PBS-吐温按1/500范围内 稀释的生物素化的抗体5909在37°C下孵育1小时。37°C下，使用在PBS中按1/2000范围内稀释的链酶抗生物素蛋白-过氧化物复 合物(Amersham Biosciences) 1小时证实了生物素(6-生物素酰胺基己酰基酰胺基己酸(6 -biotinamidocaproylamido-caproic acid)与 N_ 羟基琥珀酰亚胺的酯，Sigma)的检测。通过在柠檬酸盐-磷酸盐对照液(pH 5)中每管加入750 u 1底物(H202)和色原 (OPD, Sigma)混合物，来使酶活性显露。然后，加入1M的硫酸终止反应。吸光度在492nm下读取。在塑料铰链上的ELISA结果如图12所示。图12说明纵坐标492nm处的吸光度(DO)，横坐标捕获抗体5910的稀释， 1/10范围内稀释的抗原ACE，■ 1/100范围内稀释的抗原ACE，A 1/10范围内稀释的阴性对照，xl/100范围内稀释的阴性对照。总之，结果显示使用抗原ACE阳性血清的DO值比使用抗原ACE阴性血清的OD 值高7 10倍。使用刚性塑料载体所得的最佳结果是其上固定有按1/50或1/100范围内稀释的 捕获单克隆抗体5910。检测的最佳抗原ACE浓度相当于按1/100范围内稀释的患者的血清，SP6UI/ ml(与“正常”比例相近<5UI/ml)，以及相当于检测单克隆抗体5909按1/500范围内稀释时。使用塑料载体能够证实在根据上述步骤的功能化金属铰链上的免疫捕获过程的 特异性和敏感性。结论通过体外免疫捕获和显露技术测定抗原ACE的结果较佳，其证实了 “功能化铰 链”设备可以在体内捕获抗原ACE以及随后离体显露的有效性。实施例5:例如在成像技术以及更特别的放射线技术控制下，乳腺肿瘤标记 ACE的表达鉴定根据PCT申请WO 03/006948描述的实验步骤，在第一步中，硫醇层被吸附在基 于镍钛记忆合金的金属导向装置(Euroflex)的其中一端上。第二步中，该层中的游离巯 基的作用是能与针对ACE抗原的单克隆抗体形成二硫键。将得到的金属导向装置随后引入适用于动物或人的活检穿刺针中。在从乳腺癌患者体内移除肿瘤(乳房肿瘤)后，使用该设备对所要操作的肿瘤 进行临时的解剖-病理检查。依据一个可选的解决方案，在允许的医疗道德条件下，在 局部或全身麻醉条件下，对乳腺癌患者的乳房上进行微切口。将其内插入有与针对ACE 抗原的抗体结合的金属导向装置的细针，引入至肿瘤，或者在通过成像追踪其进展的同 时，通过微切口然后引导到达肿瘤，更特别的是模仿书写。然后，所述微创导向系统可以去掉与针对ACE抗原的抗体结合的金属导向装置 的末端。金属导向装置的末端随后被引入至肿瘤(通过穿孔)约几毫米深处。在约10 分钟的短暂等待后，在这期间确保了肿瘤任选表达的抗原ACE的免疫捕获，移除设备。微量取样限于体内免疫捕获的分析物，并且也不要求任何活组织检查。最后，移除设备，然后用针对标记物ACE的单克隆抗体，在设备末端上进行标 记物ACE的ELISA剂量，该单克隆抗体由于对抗原ACE的固有亲和性和识别表位而与捕 获抗体不同，并且其与生物素结合。用链酶抗生物素蛋白-过氧化物酶复合物显露酶活性能够推导出肿瘤标记物 ACE的表达，并由此调整对患者施用的最佳的治疗方案。实施例6:皮肤癌根据PCT申请WO 03/006948描述的实验步骤，在第一步中，硫醇层被吸附在 基于镍钛合金的金属导向装置(Euroflex)的末端上。第二步中，该层中的游离巯基的作 用是可以与针对FAP标记物(成纤维细胞激活蛋白；RETTIG等人，Proc.Natl.Acad.Sci. USA, vol.85, p 3110，1988)的单克隆抗体形成二硫键。在允许的医疗道德条件下，将得到的金属导向装置随后引入至动物或人的皮 肤肿瘤水平，或者引入至皮肤癌患者切除后的皮肤肿瘤水平，来进行常规或临时的解 剖-病理检查。微量取样限于体内免疫捕获，并且也不要求特定的活组织检查。最后，移除设备，然后用针对标记物FAB的单克隆抗体，在设备末端上进行标 记物FAB的ELISA剂量，所述标记物FAB与过氧化物酶结合。过氧化物酶活性的显露，能够推导出肿瘤标记物FAP的表达，并由此调整对患 者施用的最佳的治疗方案。
权利要求
1.一种分析设备，其特征在于，所述设备包括用于底物的微创和/或微量取样检查的 系统，所述系统由至少一个金属导向装置构成，该装置包括Ea端，其表面被构造成具有至少一组孔，该孔直接与至少一种对所述底物具有特异 性的反应基团结合，所述Ea端用于穿孔，以及 另一 Em端，其用于操纵所述金属导向装置。
2.根据权利要求1所述的设备，其进一步包括与Ea端齐平的可拆卸的保护系统。
3.根据权利要求2所述的设备，其中，所述可拆卸的保护系统为柔性导管。
4.根据权利要求1 3中任一项所述的设备，其进一步包括具有内部通路的医疗器 械，所述至少一个金属导向装置能够在其中滑动。
5.根据权利要求4所述的设备，其中，所述医疗器械选自包括经体壁的抽吸针和/或 包括血管内导航系统在内的内窥镜的组中。
6.根据权利要求5所述的设备，其中，所述经体壁的抽吸针为经皮的或经粘膜的抽吸针。
7.根据权利要求1 6中任一项所述的设备，其中，所述至少一个金属导向装置选自 包括一个或多个实心柔性金属铰链和/或一个或多个中空的刚性金属铰链的组中，所述 铰链的直径为0.3 3.5mm，长度为5X 10_2 2m。
8.根据权利要求1 7中任一项所述的设备，其中，所述至少一个金属导向装置与可 视显示系统在其长度的至少一部分上相连。
9.根据权利要求8所述的设备，其中，所述可视显示系统为光纤。
10.根据权利要求7所述的设备，其中，所述至少一个实心柔性金属铰链为光纤，其 Ea端与设有至少一组孔的金属环相连，该孔直接与对所述底物具有特异性的反应基团结 合，所述Ea端用于穿孔。
11.根据权利要求1 10中任一项所述的设备，其中，所述至少一个金属导向装置 全部或部分由金属合金构成，该金属合金选自包括不锈钢、基于钛的合金、基于镍的合 金、基于钴的合金或其混合物的组中。
12.根据权利要求11所述的设备，其中，所述金属导向装置全部或部分由钛镍合金构成。
13.根据权利要求1 12中任一项所述的设备，其中，除Ea端以外，所述至少一个 金属导向装置由厚度为2X 10_3 1 μ m的保护性聚合物层涂覆。
14.根据权利要求1 13中任一项所述的设备，其中，所述至少一种反应基团对癌 症、炎症、感染、移植排斥或神经变性疾病的特异性底物或抗原具有特异性。
15.根据权利要求1 14中任一项所述的设备，其中，所述至少一种对底物具有特异 性的反应基团为抗体或抗体片段，该抗体或抗体片段选自由片段Fab、Fab'、F(ab' )2 和Fv组成的组中。
16.根据权利要求1 15中任一项所述的设备在制造一种用于诊断癌症、炎症、感 染、移植排斥或如阿尔茨海默病、帕金森病或肌萎缩侧索硬化症的神经变性疾病的工具 中的用途。
17.根据权利要求16所述的用途，其中，所述工具包括至少一个插入至柔性导管中的 金属导向装置，所述导管插入至内窥镜中，并且所述工具用于诊断癌症、炎症、感染、移植排斥或神经变性疾病。
18.根据权利要求16所述的用途，其中，所述工具包括至少一个金属导向装置，所述 金属导向装置由经体壁的抽吸针构成并且插入至柔性导管中，并且所述工具用于诊断癌 症、炎症、感染、移植排斥或神经变性疾病。
19.根据权利要求18所述的用途，其中，所述至少一个金属导向装置与柔性导管配合 使用，以便于使功能Ea端接触微量分析和/或微量取样位点。
20.根据权利要求17 19中任一项所述的用途，其中，经体壁的路径选自由经皮的 和经粘膜的路径组成的组中。
21.根据权利要求17 20中任一项所述的用途，其中，所述至少一个金属导向装置 与光纤在其长度的至少一部分上相连。
22.—种用于体外检测存在于组织或器官中的底物方法，其特征在于，所述方法包括 如下步骤a)当根据权利要求1 15中任一项所述的设备的功能Ea端与所述待检查的组织或 器官接触时，使用包含至少一种对所述底物具有特异性的检测剂的溶液孵育所述功能Ea 端；b)检测所述底物。
23.根据权利要求22所述的方法，其中，所述步骤a)中的至少一种检测剂为对所述 底物具有特异性的可能标记抗体。
24.根据权利要求22或23所述的方法，其中，在步骤a)和b)之间进一步包括在溶 液中孵育所述端的步骤a')，该溶液包含至少一种对步骤a)中的检测剂具有特异性的检 测剂。
25.根据权利要求24所述的方法，其中，所述步骤a')中的至少一种检测剂为对步 骤a)中的检测剂具有特异性的标记抗体。
26.根据权利要求22或23所述的方法，其中，跟在步骤a)之后还有冲洗步骤。
27.根据权利要求24或25所述的方法，其中，跟在步骤a)和/或步骤a')之后还 有冲洗步骤。
全文摘要
本发明涉及一种分析设备，其中，所述系统包括至少一个金属导向装置，其一端设有至少一组孔，该孔直接与对底物具有特异性的反应物结合，所述端为穿孔端，而其另一端用于控制所述导向装置，并且非必须地与抽吸系统相连。所述导向装置可以插入到与功能端齐平的可拆卸的保护系统中，一直到微量分析和/或微量取样位点，和/或所述导向装置可以插入至具有内部通路的医疗器械中，所述导向装置可以在其中滑动。本发明也涉及这种设备在制造一种用于诊断患者体内的癌症、炎症、感染、神经变性疾病或移植排斥的工具中的用途，优选通过经体壁的路径。本发明还涉及一种使用这种设备在体外分析底物的方法。
文档编号A61B5/00GK102014734SQ200980112079
公开日2011年4月13日 申请日期2009年2月24日 优先权日2008年2月26日
发明者阿兰·蓬皮杜, 阿尔贝-克洛德·贝纳姆欧 申请人:博尔斯特姆斯有限公司