专利名称：Jnk信号转导通路的细胞可渗透性肽抑制剂用于治疗慢性或非慢性炎性消化病的应用的制作方法
JNK信号转导通路的细胞可渗透性肽抑制剂用于治疗慢性 或非慢性炎性消化病的应用本发明涉及蛋白激酶抑制剂用于治疗非慢性或慢性炎性消化病的应用，更具体 地涉及蛋白激酶C-Jim氨基末端激酶的抑制剂、JNK抑制剂序列、嵌合肽或者编码它们的 核酸以及包含它们的药物组合物用于治疗非慢性或慢性炎性消化病的应用，所述非慢性 或慢性炎性消化病，诸如结肠炎，包括例如溃疡性结肠炎、克罗恩结肠炎、改道性结肠炎 (diversion colitis)、缺血性结肠炎、传染性结肠炎、暴发性结肠炎、化学性结肠炎、显微 镜性结肠炎(microscopic colitis)、淋巴细胞性结肠炎(lymphocytic colitis)和非典型 结肠炎(atypical colitis)等。消化病的数量，特别是非慢性和慢性消化病的数量在最近数十年中在西方文明 中显著地增加，并对它们的公共保健系统提出了相当大的挑战。消化病是关于胃肠道的 疾病。这包括食道、胃、十二指肠的第一、二、三和四部分、空肠、回肠、回盲肠的复合体 (ileo-cecal complex)、大肠、(升结肠、横结肠和降结肠)乙状结肠和直肠的疾病。慢 性炎性消化病频繁发生并且以结肠的炎症为特征，诸如结肠炎，包括例如溃疡性结肠炎 (Colitis ulcerosa)(溃疡性结肠炎)、克罗氏症(MorbusCrohn)(克罗恩病)、改道性结肠 炎、缺血性结肠炎、传染性结肠炎、暴发性结肠炎、化学性结肠炎、显微镜性结肠炎、淋巴细 胞性结肠炎、胶原性结肠炎(collageneouscolitis)、未定型结肠炎和非典型结肠炎等，其 中溃疡性结肠炎(溃疡性结肠炎)和克罗氏症(克罗恩病)代表两种主要的慢性炎性消化 病和两种主要类型的炎性肠病。克罗氏症和溃疡性结肠炎两者是在最近数十年当中发生快 速增加的疾病。例如，在德国估计约0. 01%至约0. 的人群，即，约100，000中大约10至 100个人，患有克罗氏症或溃疡性结肠炎。此外，克罗氏症或溃疡性结肠炎每年以约1至约 8发生率的增加速度发生。女性稍微更多地受克罗氏症的影响，而溃疡性结肠炎的男性女 性的比例是大约1 1。溃疡性结肠和克罗氏症发作的高峰年龄是在15和30岁之间。第 二高峰出现在60和80岁之间。溃疡性结肠炎是炎性肠病(IBD)的一种形式，作为肠炎的亚型，其是一种肠疾病， 特别是大肠或结肠的疾病。溃疡性结肠炎的症状典型地包括结肠中特有的溃疡或疮口。溃 疡性结肠炎通常在直肠中开始并连续地蔓延进入大肠或直肠的近端部分，其中上胃肠道 通常不受影响。活动性疾病的主要症状通常是逐渐发作的混合有血的腹泻，其中患者典 型地患有痉挛性腹部疼痛(cramplike abdominal pain)。溃疡性结肠炎与多种肠外表现 (extraintestinal manifestations) 夫(dermatologic rheumatology)、目艮禾口胃 它)相关。它是间歇性疾病，具有恶化症状的周期和相对无症状的周期。虽然溃疡性结肠 炎不知道病因，但是有易感性的推测遗传组分。此外，假定该病可以在易感性的人中由环境 因素诱发。然而，溃疡性结肠炎的症状很少自行减小，而是需要治疗以变得好转，特别是当 疾病转化成为慢性病状态的时候。溃疡性结肠炎的治疗取决于疾病的程度和分布，并且通常包括用消炎药、免疫抑 制和靶向免疫反应的特定成分的生物疗法进行治疗。在小的或中等的炎性活性的疾病状 态(轻度和中度末端结肠炎)中，一般地，如果疾病限制于直肠，则普通的治疗通常包括给予5-氨基水杨酸盐类，诸如pentasa 或Salofalk 。可选地，可以运用使用栓剂或灌肠剂的局 部药物。另外，可以使用给予包含类固醇的药物，特别是在急性治疗中，所述药物包括例如 氢化可的松、丁地去炎松(Budenosid)、氯地米松(Beclomethason) (Betnesol )或强的松 (Rectodelt )。在高炎性活性的疾病状态中，一般而言，如果溃疡性结肠炎蔓延进入大肠或 结肠的近端部分，一般使用应用静脉内注射或者直肠或者口服形式给药，给予糖皮质激素 诸如氯地米松(Betnesol )或强的松(Rectodelt )或者它们的衍生物，或者例如给予免疫抑制 剂，诸如，硫唑嘌呤、甲氨喋啉(methothrexat) (MTX)或环孢霉素Α。在少数情况下，可以运 用使用抗体的抗体疗法，例如抗TNF-α (INFLIXIMAB)或抗-⑶4。在严重的慢性病状态—— 其对药物治疗不应答——的情况下，结肠切除术，即通过手术部分或完全去除大肠，有时候 是必须的，并被认为是这种情况下的疾病的治愈手段。这些疗法一般减少由于溃疡性结肠 炎引起的急性发作的症状。然而，这些疗法中没有一种表现对这种疾病有效和持久的治愈。克罗氏症或克罗恩病(也称为局限性肠炎)也是一种重要的慢性炎性消化 病。它是影响整个肠壁和肠的一种慢性、发作性、炎性肠病(IBD)的亚型。与溃疡性结 肠炎相比，克罗氏症可以影响整个胃肠道的任何部分，并且因此，克罗氏症的症状在患 病个体中不同。该疾病的特征为在称为跳跃性病变(skip lesion)的症状中炎症区和 正常区之间存在界限(lining)。主要的肠胃症状是腹部疼痛、腹泻、便秘、呕吐以及重 量减轻或增加。克罗氏症也可以引起胃肠道外的并发症，诸如皮疹、关节炎和眼睛的炎 症。克罗氏症在北美影响400,000和600,000之间的人(Loftus, Ε. V. ；P. Schoenfeld, W. J. Sandborn(January 2002). “ The epidemiology and natural history of Crohn' s disease in population-based patient cohorts from North America -.a systematic review " . Alimentary Pharmacology&Therapeutics 16(1) :51-60.)。北欧的患病 率估计范围为每 100，000 人 27-48 人(Bernstein, Charles N. (July 2006)。“ The Epidemiology of Inflammatory Bowel Disease in Canada:A Population-Based Study" . The American Journal of Gastroenterology 101(7) :1559-1568)。此外，克罗 氏症往往在十多岁和二十多岁中最初出现，另一个高峰发病期在五十多岁到七十多岁，但 是该病可以在任何年龄出现(Hanauer, 乂印1^11 B. (March 1996). “ Inflammatory bowel disease“ . New England Journal of Medicine 334(13) :841-848 ；Gopal,Latha ；Senthil Nachimuthu (2006-05-23). Chrohns Disease, eMedicine)。克罗氏症的原因不清楚，但是相 信为与遗传联系的自身免疫性疾病。最高的相对危险在兄弟姐妹中出现，稍微更加频繁地 影响女性，其中吸烟者更可能患克罗氏症的频率为三倍。出于使疾病缓解和保持缓解的目 标，使用了多种药物治疗。这些药物治疗包括5-氨基水杨酸(5-ASA)制剂(pentasa 胶囊、 Asacol片剂、Lialda片剂、Rowasa保留灌肠剂)、类固醇药物、服用免疫调节剂(诸如，例 如，硫唑嘌呤、巯基嘌呤(6-MP)和甲氨喋啉)以及新的生物药品诸如，抗-TNA-α抗体(例 如，INFLIXIMAB 和ADALIMUMAB )等等。类似于对于溃疡性结肠炎的以上讨论，这些 疗法一般减少由于克罗氏症引起的急性发作的症状。然而，这些疗法中没有一种表现对克 罗恩病有效和持久的治愈(除了抗-TNF-α之外，然而其显示增加的副作用风险)。其它形式的结肠炎包括，例如改道性结肠炎、缺血性结肠炎、传染性结肠炎、暴发 性结肠炎、化学性结肠炎、显微镜性结肠炎、淋巴细胞性结肠炎、胶原性结肠炎、未定型结肠 炎和非典型结肠炎等。然而，对于任一的这些疾病，不存在有效和长时间持久的治愈而没有副作用的风险。因此，在本领域中存在提供替代或者改进的药品的现行紧急需要，其允许以 上疾病的新和优选改进的疗法。因此，本发明的目的是提供替代的或者改进的疗法，其允许非慢性或慢性(炎性) 消化病的新的和优选改进的治愈，所述消化病诸如结肠炎，包括例如溃疡性结肠炎、克罗恩 结肠炎、改道性结肠炎、缺血性结肠炎、传染性结肠炎、暴发性结肠炎、化学性疾病、显微镜 性结肠炎、淋巴细胞性结肠炎和非典型结肠炎等。该目的通过如下进行解决在制备用于治疗对象中的非慢性或慢性炎性消化病的 药物组合物中应用包括长度小于150个氨基酸的JNK抑制剂序列。如本文使用的，术语“非慢性或慢性炎性消化病”一般表示关于胃肠道的非慢性或 慢性炎性疾病。这包括食道、胃、十二指肠的第一、二、三和四部分、空肠、回肠、回盲肠的复 合体、大肠、(升结肠、横结肠和降结肠)乙状结肠和直肠的疾病。在这方面优选地包括慢 性炎性消化病，该病以结肠的炎症为特征，诸如结肠炎，其包括例如溃疡性结肠炎(溃疡性 结肠炎)、克罗氏症(克罗恩病)、改道性结肠炎、缺血性结肠炎、传染性结肠炎、暴发性结肠 炎、化学性结肠炎、显微镜性结肠炎、淋巴细胞性结肠炎、胶原性结肠炎、未定型结肠炎和非 典型结肠炎等。本发明人惊奇地发现这类JNK抑制剂序列适合于治疗对象中的这类慢性或非慢 性炎性消化病。这对于现有技术不是显而易见的，也没有被现有技术暗示，即使一般而言， JNK抑制剂序列根据现有技术是已知的。JNK是“C-Jim氨基末端激酶”的缩写，其是促分裂原活化蛋白(MAP)激酶的应 激激活组的成员。这些激酶涉及控制细胞的生长和分化，更一般地说，涉及细胞对环境 刺激的应答。应答环境应激(environmental stress)和通过若干类别的细胞表面受体 的参与，JNK信号转导通路被激活。这些细胞表面受体可以包括细胞因子受体、蛇形受体 (serpentine)和受体酪氨酸激酶。在哺乳动物细胞中，JNK也涉及生物过程，例如致癌性 转化和调节对环境应激的适应性应答。JNK也与调节免疫应答相关，包括免疫细胞的成熟 和分化，以及影响被免疫系统识别进行破坏的细胞中的程序性细胞死亡。这种特有的性质 使得JNK信号传导成为开发药物干涉的有希望的靶标。然而，直到现在，JNK抑制剂序列的 药理学作用只对有限数量的疾病显示，所述疾病包括若干神经障碍诸如缺血性发作和帕金 森病，其中这些JNK抑制剂序列可以包括上游激酶抑制剂(例如，CEP-1347)、小的化学JNK 抑制剂(SP600125和AS601245)——其例如通过与蛋白激酶的ATP结合位点竞争直接影 响激酶活性、以及JNK与其底物(D-JNKI和I-JIP)之间的相互作用的肽抑制剂(参见，例 如，Kuan 等人，Current Drug Targets-CNS & Neurological Disorders, February 2005, vol. 4，no. 1，pp. 63-67 (5))。在这种情况下，上游激酶抑制剂CEP-1347 (KT7515)是混合谱 系激酶家族的半合成抑制剂。在抑制营养停止后原代胚培养物和分化的PC12细胞中以及 在用1-甲基-4-苯基-四氢吡啶处理的小鼠中的C-Jim氨基末端激酶(JNK)活化的剂量 下，CEP-1347 (KT7515)促进神经元存活。进一步地，观察到CEP-1347 (KT7515)促进培养 的鸡胚背根神经节、交感神经、睫状和运动神经元的长期存活(参见，例如，Borasio等人， Neuroreport. 9 (7) 1435-1439，May IIth 1998)。发现小的化学 JNK 抑制剂 SP600125 降低 C-Jun磷酸化的水平，以防止多巴胺能神经元凋亡，并部分恢复C57BL/6N小鼠中MPTP诱导 的PD中的多巴胺的水平(Wang等人，Neurosci Res. 2004Feb ；48 (2) ；195-202)。这些结果表明JNK通路是MPTP体内的神经毒性作用的主要介体，并且抑制JNK的活性可为治疗PD提 供新的和有效的策略。小的化学抑制剂的进一步实例是前述的JNK-抑制剂AS601245。在 脑缺血后，AS601245抑制了 JNK信号传导通路，并促进细胞的存活。在体内，AS601245对 在暂时性全面缺血的沙鼠模型中的海马CAl神经元的延迟损失提供了重要的保护。这种作 用通过JNK抑制以及因此c-Jim表达和磷酸化作用进行调节(参见，例如Carboni等人，J Pharmacol Exp Ther. 2004 Jul ；310(1) 25-32. Epub 2004Feb 26th)。然而，概括以上所述， 显示的那些JNK抑制剂序列的药理作用只证明对有限数量疾病的可用性，特别是若干神经 障碍诸如缺血性发作和帕金森病。因此，JNK抑制剂序列可以用于治疗非慢性或慢性炎性 消化病是令人惊奇的结果。在本发明的内容中，如以上限定的JNK抑制剂序列可以一般源于人或大鼠IBl序 列，优选地源自于由依照SEQ ID NO 102 (描述大鼠的IBlcDNA序列和其预测的氨基酸序 列)、SEQ ID N0:103(描述由rIBl基因的外显子-内含子边界——剪接供体——编码的大 鼠的IBl蛋白质序列)、SEQ ID NO :104(描述智人(Homo sapiens)的IBl蛋白质序列)或 SEQ ID N0:105(描述智人的IBl cDNA序列)的序列的任一种限定或编码的氨基酸序列，更 优选地来自于由依照SEQ ID NO: 104 (描述智人的IBl蛋白质序列)或SEQ ID NO 105 (描 述智人的IBl cDNA序列)的序列任一种限定或编码的氨基酸序列，或者来自其任何片段或 者变体。换句话说，JNK抑制剂序列包括人或大鼠IBl序列的片段、变体或者这类片段的变 体。人或大鼠 IB 序列分别由依照 SEQ ID NO 102,SEQ ID NO 103,SEQ ID N0:104 或 SEQ IDNO 105的序列限定或编码。优选地，如本文使用的这种JNK抑制剂序列包括小于150个氨基酸残基的总长度， 优选地为5个到150个氨基酸残基的范围，更优选地为10个到100个氨基酸残基，特别更 优选地为10个到75个氨基酸残基，和最优选地为15个到50个氨基酸残基，例如10个至 30个、10个至20个或者10个至15个氨基酸残基。更优选地，这种JNK抑制剂序列和以上的范围可以选自任一的上述序列，特别更 优选地选自根据SEQ ID NO 104限定的或者由SEQ ID NO :105编码的氨基酸序列，特别更 优选地为在SEQ ID NO :105的第420和第980位核苷酸之间的区域中，或者SEQ ID NO 104 的第105和第291位氨基酸之间的区域中，最优选地为在SEQ ID NO 105的第561和647 位核苷酸之间的区域中，或者SEQ ID NO 104的第152和第180位氨基酸之间的区域中。根据具体的实施方式，如本文使用的JNK抑制剂序列一般结合JNK和/或抑制至 少一种JNK活性转录因子的活化，例如c-Jun或ATF2 (分别参见例如SEQ IDNOs 15和16) 或Elkl。同样地，如本文使用的JNK抑制剂序列优选地包括或者由根据SEQ ID NO :1至4、 13至20和33至100、或者其片段、衍生物或者变体的任一个的至少一种氨基酸序列组成。 更优选地，如本文使用的JNK抑制剂序列可以包含根据SEQ IDNO :1至4、13至20和33至 100或者其变体、片段、或衍生物的1个、2个、3个、4个或甚至更多个拷贝的氨基酸序列。如 果以多于一个拷贝存在，那么如本使用的根据SEQ ID NO :1至4、13至20和33至100或者 其变体、片段、或衍生物的这些氨基酸序列可在没有任何连接序列情况下或经过连接序列 直接地彼此连接，所述连接序列包括1至10、优选1至5个氨基酸。形成连接序列的氨基酸 优选地选自甘氨酸或脯氨酸作为氨基酸残基。更优选地，如本使用的，根据SEQ IDNO :1至4、13至20和33至100或者其片段、变体或者衍生物的这些氨基酸序列可通过二个、三个或 更多个的脯氨酸残基的铰合部彼此分开。如本文使用的JNK抑制剂序列可由L-氨基酸、D-氨基酸或两者的组合组成。优 选地，如本文使用的JNK抑制剂序列包括至少1个或者甚至2个D-氨基酸和/或L-氨基 酸，优选至少3、4或5个，更优选至少6、7、8或9个，和甚至更优选至少10个或更多个D-和 /或L-氨基酸，其中，在如本文使用的JNK抑制剂序列中，D-和/或L-氨基酸可以以模块 (blockwise)、非模块或交替的方式排列。根据一个优选的实施方式，如本文使用的JNK抑制剂序列可完全地由L-氨基酸组 成。如本文使用的JNK抑制剂序列然后可包括或由根据SEQ ID NO :1或3的至少一种“天 然的JNK抑制剂序列”组成。在该情况中，术语“天然的”或“天然的JNK抑制剂序列(一 个或多个)”是指如本文使用的根据SEQ ID NO :1或3任一个的未改变的JNK抑制剂序列， 完全地由L-氨基酸组成。因此，如本文使用的JNK抑制剂序列可包括或者由以下组成至少一种(天然的) 氨基酸序列 NH2-Xnb-Xna-RPTTLXLXXXXXXXQD-Xnb-COOH(L-IB 通用的(s)) [SEQ ID NO :3]禾口 / 或 IB 1XRPTTLXLXXXXXXXQDS/TX (L-IB (通用的))[SEQ IDNO 19]的 JNK 结合结构域(JBD)。 在该情况下，每一个X—般表示一个氨基酸残基，优选地选自任何的(天然)氨基酸残基。 Xn3 一般表示一种氨基酸残基，优选地选自除了丝氨酸或苏氨酸之外的任何氨基酸残基，其 中η (X的重复数量)是0或1。此外，每一个Xnb可选自任何的氨基酸残基，其中η (X的重复 数量)是0-5、5-10、10-15、15-20、20-30或更多，条件是如果Xna的η (X的重复数量)是0， 那么Xnb优选地在其C-末端不包括丝氨酸或苏氨酸，以避免丝氨酸或苏氨酸在该位置。优 选地，Xnb代表衍生自SEQ ID NO :1或3的肽残基的连续的一段序列(contiguousstretch)。 Xna和xnb可以表示D或L氨基酸。另外，如本文使用的JNK抑制剂序列可以包括或由选自 以下的至少一种(天然)氨基酸序列组成IB1DTYRPKRPTTLNLFPQVPRSQDT(L-IBl) [SEQ ID NO 17]的JNK结合结构域。更优选地，如本文使用的JNK抑制剂序列进一步可以包括或由 至少一种(天然)氨基酸序列 NH2-RPKRPTTLNLFPQVPRSQD-COOH(L-IB 1(S)) [SEQ ID NO: 1]组成。此外，如本文使用的JNK抑制剂序列可以包括或由选自以下的至少一种(天然) 氨基酸序列组成IBlL-IBl(sl) (NH2-TLNLFPQVPRSQD_C00H，SEQ ID NO 33) ；L-IB1 (s2) (NH2-TTLNLFPQVPRSQ-C00H, SEQ ID NO 34) ；L-IBl(s3) (NH2-PTTLNLFPQVPRS_C00H， SEQ ID NO 35) ；L-IBl(s4) (NH2-RPTTLNLFPQVPR-C00H, SEQ ID NO 36) ；L-IBl(s5) (NH2-KRPTTLNLFPQVP-C00H, SEQ ID NO 37) ；L-IBl(s6) (NH2-PKRPTTLNLFPQV_C00H， SEQ ID NO 38) ；L-IBl (s7) (NH2-RPKRPTTLNLFPQ-C00H，SEQ ID NO 39) ；L-IBl (s8) (NH2-LNLFPQVPRSQD-C00H, SEQ ID NO 40) ；L-IBl (s9) (NH2-TLNLFPQVPRSQ-COOH， SEQ ID NO 41) ；L-IBl(slO) (NH2-TTLNLFPQVPRS_C00H，SEQ ID NO 42) ；L-IBl(sll) (NH2-PTTLNLFPQVPR-C00H, SEQ ID NO 43) ；L-IBl (sl2) (NH2-RPTTLNLFPQVP_C00H， SEQ ID NO 44) ；L-IBl(sl3) (NH2-KRPTTLNLFPQV_C00H，SEQ ID NO 45) ；L-IBl(sl4) (NH2-PKRPTTLNLFPQ-C00H, SEQ ID NO 46) ；L-IBl (sl5) (NH2-RPKRPTTLNLFP_C00H， SEQ ID NO 47) ；L-IBl (sl6) (NH2-NLFPQVPRSQD_C00H，SEQ ID NO 48) ；L-IBl (sl7) (NH2-LNLFPQVPRSQ-C00H, SEQ ID NO 49) ；L-IBl (sl8) (NH2-TLNLFPQVPRS_C00H， SEQ ID NO 50) ；L-IBl (sl9) (NH2-TTLNLFPQVPR-C00H, SEQ ID NO 51) ；L-IBl (s20)(NH2-PTTLNLFPQVP-C00H, SEQ ID NO 52) ；L-IBl (s21) (NH2-RPTTLNLFPQV-C00H， SEQ ID NO 53) ；L-IBl (s22) (NH2-KRPTTLNLFPQ_COOH，SEQ ID NO 54) ；L-IBl (s23) (NH2-PKRPTTLNLFP-COOH, SEQ ID NO 55) ；L-IBl (s24) (NH2-RPKRPTTLNLF-COOH， SEQ ID NO 56) ；L-IBl (s25) (NH2-LFPQVPRSQD_COOH，SEQ ID NO 57) ；L-IBl (s26) (NH2-NLFPQVPRSQ-COOH, SEQ ID NO 58) ；L-IBl (s27) (NH2-LNLFPQVPRS-COOH， SEQ ID NO 59) ；L-IBl (s28) (NH2-TLNLFPQVPR-COOH, SEQ ID NO 60) ；L-IBl (s29) (NH2-TTLNLFPQVP-COOH, SEQ ID NO 61) ；L-IBl (s30) (NH2-PTTLNLFPQV-COOH， SEQ ID NO 62) ；L-IBl(s31) (NH2-RPTTLNLFPQ_COOH，SEQ ID NO 63) ；L-IBl(s32) (NH2-KRPTTLNLFP-COOH, SEQ ID NO 64) ；L-IBl (s33) (NH2-PKRPTTLNLF_COOH，SEQ ID NO 65)；禾口 L-IBl (s34) (NH2-RPKRPTTLNL_COOH，SEQ ID NO 66)的 JNK 结合结构域。另外，如本文使用的JNK抑制剂序列可以包括或者由选自以下的至少一种(天 然)氨基酸序列组成IB1 PGTGC⑶TYRPKRPTTLNLFPQVPRSQDT(IB1-长)[SEQID NO 13]的 (长)JNK 结合结构域(JBD)、IB2IPSPSVEEPHKHRPTTLRLTLGAQDS(IB2-长)[SEQ ID NO 14] 的(长)JNK结合结构域、c-Jun GAYGYSNPKILKQSMTLNLADPVGNLKPH(c-Jun) [SEQ ID NO 15] 的 JNK结合结构域、ATF2TNEDHLAVHKHKHEMTLKFGPARNDSVIV(ATF2) [SEQ ID NO 16]的 JNK结 合结构域(参见，例如，
图1A-1C)。在该内容中，比对显示部分保守的8个氨基酸序列(参 见，例如，图1A)，而IBl和IB2的JBDs的进一步比较显示两个序列之间高度保守的7个和 3个氨基酸的两个区段。根据另一优选实施方式，如本文使用的JNK抑制剂序列可部分地或全部地由D-氨 基酸组成，如上限定的。更优选地，由D-氨基酸组成的这些JNK抑制剂序列是上述(天然 的)JNK抑制剂序列的非天然的D逆反(retro-inverso)序列。术语“逆反序列”是指线性 肽序列的异构体，其中序列的方向是相反并且每一个氨基酸残基的手性颠倒(参见，例如 Jameson 等人，Nature, 368，744-746 (1994) ；Brady 等人，Nature, 368，692-693 (1994))。结 合D-对映体和反向合成的优点是在每一个酰胺键中羰基和氨基的位置被交换，同时在每 一个α碳处的侧链基团的位置被保留。除非另外具体说明，假定通过合成相应的天然L-氨 基酸序列或肽的逆向的序列或肽，根据本发明使用的任何给定L-氨基酸序列或肽可以转 化成为D逆反序列或肽。如本文使用的和如上所定义的D逆反序列具有许多有用的特性。例如，本文使用 的D逆反序列与本文使用的L-氨基酸序列一样有效地进入细胞，然而，本文使用的D-逆反 序列比相应的L-氨基酸序列更稳定。因此，如本文使用的JNK抑制剂序列可以包括或者由至少一种根据氨基酸序列 NH2-Xnb-DQXXXXXXXLXLTTPR-Xna-Xnb-C00H(D-IB1 通用的(s)) [SEQ ID NO 4]和 / 或 XS/ TDQXXXXXXXLXLTTPRX(D-IB(通用))[SEQ ID NO :20]的D逆反序列组成。如在该内容中 使用的，X、乂/和乂^是如上所定义的(优选地，表示D氨基酸)，其中，Xn1Mt选地表示衍生 自SEQ ID NO :2或4的连续一段的残基。另外，如本文使用的JNK抑制剂序列可以包括 或由根据包括 IB1TDQSRPVQPFLNLTTPRKPRYTD (D-IBl) [SEQ ID NO 18]的 JNK 结合结构域 (JBD)的氨基酸序列的至少一种D逆反序列组成。更优选地，如本文使用的JNK抑制剂序 列可以包括或由根据氨基酸序列 NH2-DQSRPVQPFLNLTTPRKra-C00H(D-IBl(S)) [SEQ ID NO 2]的至少一种D逆反序列组成。此外，如本文使用的JNK抑制剂序列可以包括或者由根据如此氨基酸序列的至少一种D逆反序列组成，所述氨基酸序列包括以下序列的JNK结 合结构域(JBDs) JBlD-IBl (si) (NH2-QPFLNLTTPRKPR-C00H, SEQ ID NO 67) ；D-IB1 (s2) (NH2-VQPFLNLTTPRKP-C00H, SEQ ID NO 68) ；D-IBl(s3) (NH2-PVQPFLNLTTPRK-C00H， SEQ ID NO 69) ；D-IBl (s4) (NH2-RPVQPFLNLTTPR-C00H, SEQ ID NO 70) ；D-IBl(s5) (nh2-srpvqpflnlttp-c00h, seq id no 71) ；d-ibl(s6) (nh2-qsrpvqpflnltt-cooh， SEQ ID NO 72) ；D-IBl (s7) (NH2-DQSRPVQPFLNLT_C00H，SEQ ID NO 73) ；D-IBl (s8) (NH2-PFLNLTTPRKPR-C00H, SEQ ID NO 74) ；D-IBl (s9) (NH2-QPFLNLTTPRKP-C00H， SEQ ID NO 75) ；D-IBl(slO) (NH2-VQPFLNLTTPRK_C00H，SEQ ID NO 76) ；D-IBl(sll) (NH2-PVQPFLNLTTPR-C00H, SEQ ID NO 77) ；D-IBl (sl2) (NH2-RPVQPFLNLTTP-C00H， SEQ ID NO 78) ；D-IBl(sl3) (NH2-SRPVQPFLNLTT_C00H，SEQ ID NO 79) ；D-IBl(sl4) (NH2-QSRPVQPFLNLT-C00H, SEQ ID NO 80) ；D-IBl (s15) (NH2-DQSRPVQPFLNL-COOH， SEQ ID NO 81) ；D-IBl (sl6) (NH2-FLNLTTPRKPR_C00H，SEQ ID NO 82) ；D-IBl (sl7) (NH2-PFLNLTTPRKP-C00H, SEQ ID NO 83) ；D-IBl (sl8) (NH2-QPFLNLTTPRK-C00H， SEQ ID NO 84) ；D-IBl (sl9) (NH2-VQPFLNLTTPR-C00H, SEQ ID NO 85) ；D-IBl (s20) (NH2-PVQPFLNLTTP-C00H, SEQ ID NO 86) ；D-IBl (s21) (NH2-RPVQPFLNLTT-C00H， SEQ ID NO 87) ；D-IBl (s22) (NH2-SRPVQPFLNLT_C00H，SEQ ID NO 88) ；D-IBl (s23) (NH2-QSRPVQPFLNL-C00H, SEQ ID NO 89) ；D-IBl (s24) (NH2-DQSRPVQPFLN-C00H， SEQ ID NO 90) ；D-IBl (s25) (NH2-DQSRPVQPFL_C00H，SEQ ID NO 91) ；D-IBl (s26) (NH2-QSRPVQPFLN-C00H, SEQ ID NO 92) ；D-IBl (s27) (NH2-SRPVQPFLNL-C00H， SEQ ID NO 93) ；D-IBl (s28) (NH2-RPVQPFLNLT_C00H，SEQ ID NO 94) ；D-IBl (s29) (NH2-PVQPFLNLTT-C00H, SEQ ID NO 95) ；D-IBl (s30) (NH2-VQPFLNLTTP-C00H， SEQ ID NO 96) ；D-IBl (s31) (NH2-QPFLNLTTPR_C00H，SEQ ID NO 97) ；D-IBl (s32) (NH2-PFLNLTTPRK-C00H, SEQ ID NO 98) ；D-IBl (s33) (NH2-FLNLTTPRKP_C00H，SEQ ID NO 99)；禾口 D-IBl (s34) (NH2-LNLTTPRKPR_C00H，SEQ ID NO 100)。如本文使用的和如以上公开的JNK抑制剂序列在表1中提供(SEQ ID NO :1_4、 13-20和33-100)。该表提供如本文使用的JNK抑制剂序列的名称、以及它们的序列标识号、 它们的长度以及氨基酸序列。此外，表1分别显示序列以及它们的通式，例如SEQ ID NO=U 2、5、6、9和11以及SEQ ID NO :3、4、7、8、10和12。表1进一步地公开嵌合序列SEQ ID N0: 9-12 和 23-32 (参见以下)、L-IBl 序列 SEQ ID NO 33 至 66 以及 D-IBl 序列 SEQ ID NOs 67 至 100。表 权利要求
1.包括长度小于150个氨基酸的JNK抑制剂序列在制备用于治疗对象中慢性或非慢性 炎性消化病的药物组合物中的应用。
2.根据权利要求1所述的JNK抑制剂序列的应用，其中所述JNK抑制剂序列包括范围 为5至150个的氨基酸残基，更优选为10至100个氨基酸残基，甚至更优选为10个至75 个氨基酸残基，和最优选范围为10至50个的氨基酸残基。
3.根据权利要求1或2任一项所述的JNK抑制剂序列的应用，其中所述JNK抑制剂序 列结合c-jim氨基末端激酶(JNK)。
4.根据权利要求1至3任一项所述的JNK抑制剂序列的应用，其中当所述JNK抑制剂 序列存在于JNK表达细胞时，所述JNK抑制剂序列抑制至少一种JNK靶向转录因子的活化。
5.根据权利要求1至4任一项所述的JNK抑制剂序列的应用，其中所述JNK靶向转录 因子选自c-Jun、ATF2和Elkl。
6.根据权利要求1至5任一项所述的JNK抑制剂序列的应用，其中当所述肽存在于JNK 表达细胞时，所述JNK抑制剂序列改变JNK作用。
7.根据权利要求1至6任一项所述的JNK抑制剂序列的应用，其中所述JNK抑制剂序 列由L-氨基酸、D-氨基酸或者两者的组合组成，优选包括至少1个或者甚至2个，优选至 少3、4或5个，更优选至少6、7、8或9个和甚至更优选至少10个或更多个D-和/或L-氨 基酸，其中在所述JNK抑制剂序列中所述D-和/或L-氨基酸可以以模块化、非模块化或交 替的方式排列。
8.根据权利要求1至7任一项所述的应用，其中所述JNK抑制剂序列包括由根据SEQ ID NO :102, SEQ ID NO :103、SEQ ID NO :104 或 SEQ ID NO :105 的任一序列定义或编码的 人或大鼠IBl序列的片段、变体或者这类片段的变体。
9.根据权利要求1至8任一项所述的JNK抑制剂序列的应用，其中所述抑制剂序列包 括或由以下组成根据SEQ ID NO :1至4、13至20和33至100的至少一种氨基酸序列，或 其片段、衍生物或者变体。
10.包括通过共价键连接的至少一个第一结构域和至少一个第二结构域的嵌合肽在制 备用于治疗对象中慢性或非慢性炎性消化病的药物组合物中的应用，所述第一结构域包括 运输序列，和所述第二结构域包括在权利要求1至9任一项中定义的JNK抑制剂序列。
11.根据权利要求10所述的嵌合肽的应用，其中所述嵌合肽由L-氨基酸、D-氨基酸 或者两者的组合组成，优选包括至少1个或者甚至2个，优选至少3、4或5个，更优选至少 6、7、8或9个和甚至更优选至少10个或更多个D-和/或L-氨基酸，其中所述D-和/或 L-氨基酸在所述嵌合肽中可以以模块化、非模块化或交替的方式排列。
12.根据权利要求10或11所述的嵌合肽的应用，其中所述运输序列包括人免疫缺陷病 毒TAT多肽的氨基酸序列。
13.根据权利要求10至12任一项所述的嵌合肽的应用，其中所述运输序列包括或由 SEQ ID NO :5、6、7、8、21或22的氨基酸序列组成。
14.根据权利要求10至13任一项所述的嵌合肽的应用，其中所述运输序列增加所述肽 的细胞摄取。
15.根据权利要求10至14任一项所述的嵌合肽的应用，其中所述运输序列指引所述肽 的核定位。
16.根据权利要求10至15任一项所述的嵌合肽的应用，其中所述嵌合肽包括或由以下 组成SEQ ID NO 9至12和23至32任一的氨基酸序列，或其片段或变体。
17.根据权利要求10至15任一项所述的嵌合肽的应用，其中所述嵌合肽包括或由以下 组成SEQ ID NO :9或11的氨基酸序列。
18.编码权利要求1至9任一项中定义的JNK抑制剂序列或者权利要求10至17任一 项中定义的嵌合肽的分离的核酸在制备用于治疗对象中慢性或非慢性炎性消化病的药物 组合物中的应用。
19.包括权利要求18中定义的所述核酸的载体在制备用于治疗对象中慢性或非慢性 炎性消化病的药物组合物中的应用。
20.包括权利要求19中定义的所述载体的细胞在制备用于治疗对象中慢性或非慢性 炎性消化病的药物组合物中的应用。
21.与根据权利要求1至9任一项所述的JNK抑制剂序列或者根据权利要求10至17 任一项所述的嵌合肽免疫特异性地结合的抗体在制备用于治疗对象中慢性或非慢性炎性 消化病的药物组合物中的应用。
22.根据前述权利要求任一项的应用，其中所述药物组合物通过选自以下给药途径施 用肠胃外途径，包括静脉内的、肌肉内的、皮下的、皮内的或者经皮的；肠途径，包括口服 的或者直肠的；局部途径，包括鼻的或者鼻内的；和其它途径，包括表皮的或者贴剂递送。
23.根据前述权利要求任一项的应用，其中所述非慢性或者慢性炎性疾病选自胃肠 道疾病，所述胃肠道疾病包括食道、胃、十二指肠的第一、二和三部分、空肠、回肠、回盲肠 的复合体、大肠、升结肠、横结肠和降结肠乙状结肠和直肠的疾病；以结肠的炎症为特征的 慢性炎性消化病，包括结肠炎，其选自溃疡性结肠炎(溃疡性结肠炎)、克罗氏症(克罗恩 病)、改道性结肠炎、缺血性结肠炎、传染性结肠炎、暴发性结肠炎、化学性结肠炎、显微镜性 结肠炎、淋巴细胞性结肠炎、胶原性结肠炎、未定型结肠炎和非典型结肠炎。
24.据前述权利要求任一项的应用，其中所述JNK抑制剂序列和/或嵌合肽的剂量(每 千克体重)在以下的范围多至lOmmol/kg、优选多至lmmol/kg、更优选多至lOOymol/kg、 甚至更优选多至10 μ mol/kg、甚至更优选多至1 μ mol/kg、甚至更优选多至lOOnmol/kg、最 优选多至50nmol/kg。
25.据前述权利要求任一项的应用，其中所述JNK抑制剂序列和/或嵌合肽的剂量在以 下的范围约 lpmol/kg 至约 lmmol/kg、约 IOpmol/kg 至约 0. lmmol/kg、约 10pmol/kg 至约 0. 01mmol/kg、约 50pmol/kg 至约 1 μ mol/kg、约 100pmol/kg 至约 500nmol/kg、约 200pmol/ kg 至约 300nmol/kg、约 300pmol/kg 至约 IOOnmol/kg、约 500pmol/kg 至约 50nmol/kg、约 750pmol/kg 至约 30nmol/kg、约 250pmol/kg 至约 5nmol/kg、约 lnmol/kg 至约 1 Onmol/kg> 或者所述值的任两个的组合。
全文摘要
本发明涉及蛋白激酶抑制剂用于治疗非慢性或慢性炎性消化病的应用，更具体地涉及蛋白激酶c-Jun氨基末端激酶、JNK抑制剂序列、嵌合肽或者编码它们的核酸以及包含它们的药物组合物用于治疗非慢性或慢性炎性消化病的应用，所述疾病诸如结肠炎，包括例如溃疡性结肠炎、克罗恩病、改道性结肠炎、缺血性结肠炎、传染性结肠炎、暴发性结肠炎、化学性结肠炎、显微镜性结肠炎、淋巴细胞性结肠炎和非典型结肠炎等。
文档编号A61K38/04GK102112148SQ200980130065
公开日2011年6月29日 申请日期2009年6月2日 优先权日2008年5月30日
发明者C·邦尼 申请人:希根有限责任公司