白介素-13抗体组合物的制作方法

专利名称：白介素-13抗体组合物的制作方法
白介素-13抗体组合物本申请是申请日为2006年09月四日、申请号为200680044973.9(国际申请号为 PCT/GB2006/003650)、发明名称为“白介素-13抗体组合物”的发明申请的分案申请。本发明涉及一种药物组合物，其包含白介素-13抗体，更具体的说是白介素-13单 克隆抗体，尤其是人白介素-13单克隆抗体。本发明还涉及纯化所述抗体的方法和使用所 述组合物来治疗白介素-13相关病症诸如哮喘的用途。白介素(IL)-13是114个氨基酸的细胞因子，未修饰时的分子量是大约12kDa。 IL-13与IL-4最密切相关，二者在氨基酸水平具有30 %的序列同源性。人IL-13基因 位于染色体 5q31，与 IL-4 基因邻近[McKenzie, A. N. et al.，JImmunol，1993. 150(12)， 5436-5444 ；Minty, A. et al.，Nature,1993. 362(6417)，248-50]。尽管最初将IL-13鉴定为Th2⑶4+淋巴细胞衍生细胞因子，Thl⑶4+T细胞、⑶8+T 淋巴细胞、NK细胞、及非T细胞群诸如肥大细胞、嗜碱细胞、嗜曙红细胞、巨噬细胞、单核细 胞和气道平滑肌细胞也生成IL-13。已经将IL-13与许多疾病联系起来，具体有由炎性应答引起的疾病。例如，对 未曾接受治疗的(nai've)、未被致敏的(non-sensitised)啮齿类动物的气道施用重组
IL-13显示出引起哮喘表型的许多方面，包括气道炎症、粘液生成和气道高应答性(AHR) [ffills-Karp, Μ. et al. ， Science,1998.282 (5397)，2258-2261 ；Grunig, G. et al.， Science,1998. 282(5397),2261-2263 ；Venkayya, R. , et al., AmJ Respir Cell Mol Biol,2002. 26(2),202-208 ；Morse, B. et al.，Am J PhysiolL ung Cell Mol Physiol, 2002.282(1)，L44-49]。在肺中特异性过表达IL-13的转基因小鼠中观察到类似的表型。 在该模型中，更长时间的暴露于IL-13还导致纤维化[Zhu，Z. et al. , J Clin Invest, 1999.103(6),779-788]。已经将IL-13基因的许多遗传多态性与变应性疾病联系起来。具体而言，已经将 IL-13基因第130位精氨酸残基被谷氨酰胺替代的的变体(Q130R)与支气管哮喘、特应性 皮炎(atopic dermatitis)和血清 IgE/K平升高联系起来[Heinzmann, A. et al.，Hum Mol Genet,2000. 9(4)，549-559 ；Howard, Τ.D.et al.，Am J Hum Genet,2002. 70(1)，230-236 ； Kauppi, P.et al. , Genomics,2001. 77(1~2), 35-42；Graves, P.Ε. et al. ,J Allergy Clin Immunol, 2000. 105 (3)，506-513]。有些小组还将这种IL-13变体称为Ql 10R变体(第110 位精氨酸残基用谷氨酰胺替代)，因为它们从氨基酸计数中排除了 20个氨基酸的信号序 列。还已经将IL-13生成与变应性哮喘联系起来[van der Pouw Kraan, Τ. C. etal.， Genes Immun, 1999. 1 (1)，61-65]，而且在患有特应性鼻炎(atopic rhinitis)(干草热(hay fever))、变应性皮炎(湿疹)和慢性(鼻)窦炎的人类受试者中测量到升高的IL-13水平。在哮喘外，已经将IL-13与其它纤维变性疾患联系起来。已经在患有系统性硬化 的患者的血清中和患有其它形式肺纤维化的患者的支气管-肺泡灌洗(BAL)样品中测量到 升高的 IL-13 水平，达到比 IL-4 高 1000 倍[Hasegawa,M. etal.，J Rheumatol, 1997. 24(2)， 328-332 ；Hancock, A. et al. , Am J Respir Cell MolBiol,1998. 18(1)，60—65]。
已经证明了 IL-13在小鼠肺中的过表达引起肺气肿、粘液生成增加和炎症，这 些症状反映了人慢性阻塞性肺病(COPD)的各个方面[Zheng, Τ. et al.，JClin Invest, 2000.106(9)，1081-1093]。有人提出IL-13可能在炎性肠病的发病机理中发挥作用[Heller，F. et al.， Immunity，2002. 17 (5)，629-38]，而且在有些何杰金氏病(Hodgkin' s disease)患者的血 清中检测到与正常对照相比升高的IL-13水平[Fiumara, P. et al.，Blood, 2001. 98(9)， 2877-2878]。还认为IL-13抑制剂在治疗上可用于预防肿瘤复发或转移[Terabe，M. etal. ,Nat Immunol，2000. 1(6)，515-520]。在动物模型中对IL-13的抑制还显示出增强抗病毒疫苗， 而且对于HIV和其它感染性疾病的治疗可能是有益的[Ahlcrs，J. D. et al. , Proc Natl Acad Sci U S A,2002. 99(20),13020-13025] 致力于IL-13抑制的抗体法已有记载。例如，WO 2005/007699 (CambridgeAntibody Technology Limited)记载了一系列显示出中和IL-13活性的人抗IL-13抗体分子，而且宣 称它们可在治疗IL-13相关病症方面可能有用。依照本发明的第一个方面，提供了一种药用组合物，其包含IL-13抗体及一种或 多种制药学可接受赋形剂，并用乙酸盐缓冲剂缓冲至PH 4. 5-6. 0。普遍知道抗体纯化规程通常需要多种分离技术，诸如层析分离(例如蛋白A层析、 离子交换层析、诸如此类)。这种分离方式的后果是需要使用多种不同缓冲液。例如，WO 2004/076485中所记载的抗体纯化规程需要50mM甘氨酸/甘氨酸盐pH8. 0用于蛋白A层 析、50mM Tris-HCl pH8. 0 和 20mM磷酸钠 pH 6. 5 用于 Q-kpharose 层析、及 25mM Tris-HCl pH8. 6 用于 DEAE-sepharose 层析。相反，本发明只需要使用一种以固定浓度和预定pH存在于本发明组合物中的乙 酸盐缓冲剂，其优点在于这种缓冲剂存在于所有IL-13抗体纯化步骤中。如此，这种缓冲剂 不仅用于纯化过程开始时，而且用于整个纯化过程，因此缩短了操作时间、降低了成本并提
高了产量。应当领会，“抗体”的术语包括免疫球蛋白，无论是天然的或者是部分或完全合成 的。该术语还覆盖任何包含抗原结合结构域的多肽或蛋白质。包含抗原结合结构域的抗体片段有诸如Fab、scFv、Fv、dAb、Fd和双抗体等分子。有可能采用单克隆抗体和其它抗体，并且采用重组DNA技术来生成保留最初抗体 特异性的其它抗体或嵌合分子。这样的技术可涉及将编码免疫球蛋白可变区或互补决定区 (OTR)的DNA导入不同免疫球蛋白的恒定区或恒定区加框架区。参见例如EP-A-184187 ； GB2188638A或EP-A-239400 ；及大量后续文献。或者，可以生成携带⑶R衍生序列的新VH或VL区，即通过一种或多种选定VH和 /或VL基因的随机诱变而在整个可变域中生成突变。Gram et al.，PNAS USA, 1992. 89, 3576-3580记载了这样一种技术，他们采用错误倾向PCR。可使用的另一种方法是针对VH和 VL 基因 CDR 区的诱变。Barbas et al. ,PNAS USA 1994. 91，3809-3813 和 khier et al.， J. Mol. Biol. 1996. 263，551-567 披露这样的技术。因为可以以多种方法修饰抗体，术语“抗体”应解释为覆盖任何包含具有所需特异 性的抗原结合结构域的特定结合成员或物质。如此，该术语覆盖抗体片段和衍生物，包括任何包含免疫球蛋白结合结构域的多肽，无论是天然的或者是完全或部分合成的。因此还包 括包含免疫球蛋白结合结构域或等同物且其与另一多肽相融合的嵌合分子。P-A-0120694 和EP-A-0125023及大量后续文献中披露了嵌合抗体的克隆和表达。抗体工程领域可利用的其它技术使之有可能分离人抗体和人源化抗体。例如，可 以如 Kontermann et al. , [2001 ；Antibody Engineering, SpringerLaboratory Manuals] 所述来生成人杂交瘤。许多出版物，诸如Kontermann et al. (supra)and W092/01047中 详细记载了为生成特定结合成员而建立的另一种技术，噬菌体展示。小鼠抗体基因遭到灭 活并用人抗体基因功能性替换同时小鼠免疫系统的其它成分保持完整的转基因小鼠可用 于分离针对人抗原的人抗体。核糖体展示，一种将突变导入已知基因序列的无细胞翻译 技术也可用于生成和/或优化特定结合成员[Hanes and Pluckthun PNAS USA，1994. 94， 4937-4942 ；He and Taussig Nucleic Acids Res.1997. 25,5132-5134 ；Schaffitzelet al.，J. Immunol. Methods,1999. 231，119—135 ；He et al.，J. Immunol. Methods,1999. 231， 105-117 ；He et al.，Methods Mol.Biol. 2004. 248,177-189] 通过合成寡核苷酸并在合适的表达载体中进行装配，再用所得基因进行表达，可 以制备合成的抗体分子，参见例如 Knappik et al.，J. Mol. Biol. 2000. 296, 57-86 ；Krebs et al. , Journal of Immunological Methods 2001.254,67-84。已经显示了完整抗体的片段可发挥结合抗原的功能。结合片段的例子有(i)由 VL、VH、CL和CHl结构域组成的Fab片段；(ii)由VH和CHl结构域组成的Fd片段；(iii) 由单一抗体的VL和VH结构域组成的Fv片段；(iv)由VH或VL结构域组成的dAb片段 [Ward, Ε.S. et al.，Nature,1989. 341,544-546 ；McCafferty et al.，Nature,1990. 348， 552-554 ；Holt et al. , Trends Biotechnol. 2003. 21 (11)，484-490] ； (ν)分离的 CDR 区; (vi)F(ab' )2片段，包含两个相连Fab片段的二价片段；(vii)单链Fv分子(scFv)，其 中VH结构域与VL结构域通过肽接头相连接，该肽接头容许这两个结构域相结合而形成 抗原结合位点[Bird etal. , Science, 1988. 242,423-426 ；Huston et al.，PNAS USA, 1988. 85,5879-5883] ； (viii)双特异性单链 Fv 二聚体(PCT/US92/09965)；和(ix) “双抗 体(diabody)”，通过基因融合构建的多价或多特异性片段[W0 94/13804 ；P. Holliger et al.，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1993. 90,6444-6448]。Fv、scFv 或双抗体分子可以通过掺 入连接VH与VL结构域的二硫键而加以稳定[Y. Reiter etal.，Nature Biotech.，1996. 14， 1239-1245]。还可以生成包含scFv相连的CH3结构域的微型抗体(minibody) [S. Hu et al.，Cancer Res.，1996. 56，3055-3061]。若使用双特异性抗体，则可以是常规双特异性抗体，其可以以多种方式来制备 [Holliger and Winter Current Opinion Biotechnol. 1993. 4，446-449]，例如以化学方法 或从杂合杂交瘤制备，或者可以是任何上文所述双特异性抗体片段。双特异性抗体的例子 包括那些BiTE技术的双特异性抗体，其中可以使用两个具有不同特异性的抗体的结合结 构域并经柔性短接头直接相连。这在一条短多肽链上联合两个/种抗体。双抗体和scFv 可以构建成不含Fc区而只使用可变域，从而有可能降低抗独特型反应的效应。与双特异性完整抗体不同，双特异性抗体也可能是特别有用的，因为它们易于构 建并在大肠杆菌中表达。具有适宜结合特异性的双抗体(和许多其它多肽诸如抗体片段) 易于通过噬菌体展示(W0 94/13804)从文库中选择。若双抗体的一条臂保持不变，例如具
5有针对IL-13的特异性，则可以将文库构建成另一条臂进行变化并选择具有适宜特异性的 抗体。双特异性完整抗体可以通过隆起入空腔(knobs-into-holes)工程来构建[Ridgeway et al.，Protein Eng.，1996. 9，616-621]。应当领会，“ IL-13抗体”术语包括根据WO 2005/007699实施例2_10和25所列测 定法，能够在低于500nM的浓度中和天然存在IL-13的完整抗体或抗体片段。优选的是，IL-13抗体以等于或优于由BAK502G9VH结构域(W02005/007699中的 SEQ ID NO 15)和 BAK502G9VL 结构域(W0 2005/007699 中的 SEQ ID NO 16)形成的 IL-13 抗原结合位点的效力中和天然存在的IL-13。优选的是，IL-13抗体是单克隆IL-13抗体，更优选人IL-13单克隆抗体。特别优选的IL-13 抗体是选自 WO 2003/035847,WO 2003/08645UW02005/007699 或WO 2005/081873中所述的IL-13抗体。例如，在一个特别优选的实施方案中，IL-13抗体包含BAK278D6H⑶R1-3和 LCDR1-3 (分别是 WO 2005/007699 中的 SEQ ID NOS :1_6)。将具有 BAK278D6 的 CDR 组的 CDR，BAK278D6HCDR或BAK278D6LCDR，或其一处或多处经过替代的CDR都称为BAK278D6谱系的。 在另一个特别优选的实施方案中，IL-13抗体包含BAK502G9HCDR1-3和 LCDRl-3(分别是 WO 2005/007699 中的 SEQ ID NOS :7_12)。在另一个特别优选的实施方案中，IL-13抗体包含BAK1111D10HCDR1-3和 LCDRl-3(分别是 WO 2005/007699 中的 SEQ ID NOS :91-96)。在另一个特别优选的实施方案中，IL-13抗体包含BAKl 167F2HCDR1-3和 LCDRl-3(分别是 WO 2005/007699 中的 SEQ ID NOS :61-66)。在另一个特别优选的实施方案中，IL-13抗体包含BAKl 183H4HCDR1-3和 LCDRl-3(分别是 WO 2005/007699 中的 SEQ ID NOS :97-102)。可以在抗体框架区或其它蛋白支架例如纤连蛋白或细胞色素B中提供相关CDR 组[Koide et al.，J. Mol. Biol. 1998. 284，1141—1151；Nygren et al.，Current Opinion in Structural Biology, 1997. 7，463-469]。优选采用抗体框架区，而且在采用它们时， 它们优选是种系的，更优选的是，重链的抗体框架区可以是来自VHl家族的DP14。轻链 的优选框架区可以是λ3-3Η。对于BAK502G9⑶R组，优选的是，VH FR1-3的抗体框架 区分别是W02005/007699中的SEQ ID NOS :27-29，而VL FR1-3的抗体框架区分别是 W02005/007699中的SEQ ID NOS :30-32。在一个优选的实施方案中，所提供的VH结构域 具有WO 2005/007699中SEQ ID NO :15的氨基酸序列，这称为“BAK502G9VH结构域”。在另 一个高度优选的实施方案中，所提供的VL结构域具有WO 2005/007699中SEQ ID NO :16的 氨基酸序列，这称为“BAK502G9VL结构域”。在一个优选的实施方案中，IL-13抗体与猕猴(cynomologous) IL-13和/或IL-13 变体Q130R发生交叉反应。优选的是，IL-13抗体以l_200mg/ml、更优选50_100mg/ml、尤其是50mg/ml的量 存在于药物组合物中。优选的是，将药物组合物缓冲至pH 5. 2-5. 7，最优选5. 5士0. 1。选择这样一种pH 赋予药物组合物以显著稳定性。在此范围内控制PH的备选缓冲剂的例子包括琥珀酸盐、葡萄糖酸盐、组氨酸、柠檬酸盐、磷酸盐、戊二酸盐、卡可基酸盐、马来酸氢钠、三(羟甲基)氨 基甲烷(Tris)、2-(N-吗啉代)乙磺酸(MES)、咪唑和其它有机酸缓冲剂。优选的是，缓冲剂是乙酸盐缓冲剂，更优选乙酸钠。优选的是，乙酸盐缓冲剂以Ι-lOOmM、更优选30_70mM、尤其是50mM的量存在于药
物组合物中。应当领会，提及的“制药学可接受赋形剂”包括药物组合物中常规使用的任何赋形 剂。这样的赋形剂通常可以包括一种或多种表面活性剂、无机或有机盐、稳定剂、稀释剂、增 溶剂、还原剂、抗氧化剂、螯合剂、防腐剂、诸如此类。典型的表面活性剂的例子包括非离子表面活性剂(HLB 6-18)，诸如山梨聚糖脂 肪酸酯(sorbitan fatty acid ester)(例如山梨聚糖单辛酸酯、山梨聚糖单月桂酸酯、山 梨聚糖单棕榈酸酯)、甘油脂肪酸酯(例如甘油单辛酸酯、甘油单肉豆蔻酸酯、甘油单硬脂 酸酯)、聚甘油脂肪酸酯(例如聚甘油(十)单硬脂酸酯、聚甘油(十)双硬脂酸酯、聚甘 油(十)单亚油酸酯)、聚氧乙烯山梨聚糖脂肪酸酯(例如聚氧乙烯山梨聚糖单月桂酸酯、 聚氧乙烯山梨聚糖单油酸酯、聚氧乙烯山梨聚糖单硬脂酸酯、聚氧乙烯山梨聚糖单棕榈酸 酯、聚氧乙烯山梨聚糖三油酸酯、聚氧乙烯山梨聚糖三硬脂酸酯)、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸 酯(例如聚氧乙烯山梨醇四硬脂酸酯、聚氧乙烯山梨醇四油酸酯)、聚氧乙烯甘油脂肪酸酯 (例如聚氧乙烯甘油基单硬脂酸酯)、聚乙二醇脂肪酸酯(例如聚乙二醇双硬脂酸酯)、聚氧 乙烯烷基醚(例如聚氧乙烯月桂醚)、聚氧乙烯聚氧丙烯烷基醚(例如聚氧乙烯聚氧丙二 醇醚、聚氧乙烯聚氧丙烯丙基醚、聚氧乙烯聚氧丙烯鲸蜡基醚)、聚氧乙烯烷基苯基醚(例 如聚氧乙烯壬基苯基醚)、聚氧乙烯氢化蓖麻油(例如聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氢化蓖麻 油)、聚氧乙烯蜂蜡(bees wax)衍生物(例如聚氧乙烯山梨醇蜂蜡)、聚氧乙烯羊毛脂衍 生物(例如聚氧乙烯羊毛脂)、和聚氧乙烯脂肪酸酰胺(例如聚氧乙烯硬脂酸酰胺)；阴离 子表面活性剂，诸如C10-C18烷基硫酸酯盐(例如十六烷基硫酸钠、十二烷基硫酸钠、油酰 硫酸钠(oleyl sulfate))、具有平均2-4摩尔环氧乙烷的聚氧乙烯C10-C18烷基醚硫酸酯 盐(例如聚氧乙烯十二烷基硫酸钠)、和C8-C18烷基磺基琥珀酸酯盐(例如十二烷基磺基 琥珀酸酯钠)；和天然表面活性剂，诸如卵磷脂、甘油磷脂、鞘磷脂(sphingophospholipid) (例如鞘磷脂(sphingomyelin))、和C12-C18脂肪酸的蔗糖酯。优选的是，表面活性剂选自聚氧乙烯山梨聚糖脂肪酸酯。特别优选的是，表面活性 剂是聚山梨醇酯20、21、40、60、65、80、81和85，最优选聚山梨醇酯20和80，尤其聚山梨醇 酯80。优选的是，表面活性剂以0. 001-0. 1% (w/w)、更优选0. 005-0. 05% (w/w)、尤其是 0.01% (w/w)的量存在于药物组合物中。典型的无机盐的例子包括氯化钠、氯化钾、氯化钙、磷酸钠、硫酸钠、硫酸铵、磷酸 钾和碳酸氢钠，或者任何其它钠盐、钾盐或钙盐。优选的是，无机盐是氯化钠。优选的是，无机盐以10-200mM、更优选60_130mM、尤其是85mM的量存在于药物组 合物中。还原剂的例子包括N-乙酰基半胱氨酸、N-乙酰基高半胱氨酸、硫辛酸、硫代二 甘醇、硫代乙醇胺、硫代甘油、硫代山梨醇、硫代乙醇酸及其盐、硫代硫酸钠、谷胱甘肽、和 C1-C7硫代链烷酸。
抗氧化剂的例子包括异抗坏血酸(erythorbic acid)、二丁基羟基甲苯、丁基羟基 苯甲醚、α -生育酚、乙酸生育酚、L-抗坏血酸及其盐、L-抗坏血酸棕榈酸酯、L-抗坏血酸 硬脂酸酯、亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、没食子酸三戊酯、和没食子酸丙酯。螯合剂的例子包括乙二胺四乙酸(EDTA) 二钠、焦磷酸钠、和偏磷酸钠。稳定剂的例子包括肌酸酐、选自组氨酸、丙氨酸、谷氨酸、甘氨酸、亮氨酸、苯丙 氨酸、甲硫氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、天冬氨酸、精氨酸、赖氨酸和苏氨酸的氨基酸、选自蔗 糖、海藻糖、山梨醇、木糖醇和甘露糖的碳水化合物、选自聚乙二醇(PEG ；例如PEG3350或 PEG4000)或聚氧乙烯山梨聚糖脂肪酸酯(例如聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80)的表面活 性剂、或其任意组合。在一个优选实施方案中，稳定剂包含上文定义的单一的碳水化合物(例如海藻 糖)。在另一个优选实施方案中，稳定剂包含氨基酸及碳水化合物(例如海藻糖及丙氨 酸，或者海藻糖、丙氨酸及甘氨酸)。在又一个优选实施方案中，稳定剂包含氨基酸及碳水化合物和表面活性剂(例如 海藻糖、丙氨酸及PEG3350，或者海藻糖、脯氨酸及PEG3350，或者海藻糖、丙氨酸及聚山梨 醇酯80，或者海藻糖、脯氨酸及聚山梨醇酯80，或者海藻糖、丙氨酸、甘氨酸及PEG3350，或 者海藻糖、丙氨酸、甘氨酸及聚山梨醇酯80)。在又一个优选实施方案中，稳定剂包含氨基酸及表面活性剂(例如丙氨酸及 PEG3350,或者丙氨酸、甘氨酸及PEG3!350)。在又一个优选实施方案中，稳定剂包含碳水化合物及表面活性剂(例如海藻糖及 PEG3350，或者海藻糖及聚山梨醇酯80)。防腐剂的例子包括氯化十八烷基二甲基苄基铵(octadecyldimethylbenzyla mmonium chloride)、氯己双胺(hexamethonium chloride)、苯扎氯铵(benzalkonium chlorideM氯化烷基苄基二甲基铵混合物，其中烷基是长链化合物)、苄索氯铵 (benzethonium chloride)，芳香醇诸如酚、丁醇和苯甲醇，烷基对羟基苯甲酸酯(alkyl paraben)诸如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯，邻苯二酚、间苯二酚、环己醇、3_戊醇、和间甲酚。在本发明的一个优选实施方案中，药物组合物包含IL-13抗体、表面活性剂和无 机盐，并用乙酸盐缓冲剂缓冲至PH 5. 5 士0. 1。在本发明的另一个优选实施方案中，药物组合物包含IL-13抗体、氯化钠和聚山 梨醇酯80，并用乙酸钠缓冲剂缓冲至pH 5.5 士 0. 1。在本发明的又一个优选实施方案中，药物组合物包含50mg/ml IL-13抗体、85mM 氯化钠和0.01% (w/w)聚山梨醇酯80，并用50mM乙酸钠缓冲剂缓冲至pH 5. 5 士0. 1。依照本发明的第二个方面，提供了用于纯化IL-13抗体的方法，其包括一个或多 个层析分离步骤，其中每个分离步骤包括用包含一种或多种制药学可接受赋形剂并用乙酸 盐缓冲剂缓冲至PH 3. 5-7. 0的洗脱缓冲液进行洗脱。优选的是，一个或多个层析分离步骤选自亲和层析(例如蛋白A或蛋白G亲和层 析)、离子交换层析(例如阳离子和阴离子交换层析)、疏水相互作用层析(例如苯基层 析)、羟磷灰石层析、大小排阻层析、固定化金属亲和层析、亲水相互作用层析、亲硫吸附层 析、优球蛋白吸附层析、染料配体层析、或固定化硼酸盐层析。最优选的是，层析分离通过蛋7/29
白A亲和层析，之后是阳离子交换层析(例如使用SP-sepharose基质)，再之后是阴离子交 换层析(例如使用Q-s印harose基质)来进行。优选的是，所述一种或多种制药学可接受赋形剂包含无机盐，诸如氯化钠。优选的是，无机盐以10-200mM、更优选60_130mM、尤其是85mM的量存在于洗脱缓 冲液中。控制pH在3. 5-7. 0范围内的备选缓冲剂的例子包括琥珀酸盐、葡萄糖酸盐、组氨 酸、柠檬酸盐、磷酸盐和其它有机酸缓冲剂。优选的是，缓冲剂是乙酸盐缓冲剂，更优选乙酸钠缓冲剂。优选的是，乙酸盐缓冲液以Ι-lOOmM、更优选30_70mM、尤其是50mM的量存在于洗 脱缓冲液中。最优选的是，洗脱缓冲液包含50mM乙酸钠和85mM氯化钠，并缓冲至pH 5. 5 士0. 1。可以通过在适宜条件下培养包含下述核酸的重组宿主细胞来表达编码任何本发 明IL-13抗体(例如CDR或CDR组或VH结构域或VL结构域或抗原结合位点或抗体分子， 例如scFv或IgG4，像所提供的那样)的核酸。在通过表达而生成后，可以使用任何合适技 术来分离和/或纯化VH或VL结构域或者特定结合成员，然后根据需要使用。所提供的特定结合成员、VH和/或VL结构域、及编码核酸分子和载体可以分离和 /或纯化自例如它们的天然环境，它们处于基本纯的或同质的形式，或者在核酸的情况中不 含或基本上不含具有所需功能的多肽的编码序列以外的核酸或基因源。核酸可以包含DNA 或RNA，而且可以整个或部分是合成的。本文中在提及核苷酸序列时涵盖具有具体序列的DNA分子，且涵盖具有具体序 列、其中用U替代T的RNA分子，除非另有说明。用于在多种不同宿主细胞中克隆和表达多肽的系统是众所周知的。合适的宿主细 胞包括细菌、哺乳动物细胞、植物细胞、酵母、杆状病毒系统、及转基因植物和动物。本领域可用于表达异源多肽的哺乳动物细胞系包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、 HeLa细胞、幼仓鼠肾细胞、NSO小鼠黑素瘤细胞、YB2/0大鼠骨髓瘤细胞、人胚肾细胞、人胚 视网膜细胞等。优选的是，所述哺乳动物细胞系是骨髓瘤细胞培养物，诸如例如NSO细胞IGalfre and Milstein，Methods Enzymology，1981. 73 :3]。骨髓瘤细胞有浆细胞瘤细胞，即淋巴 样细胞谱系的细胞。一种例示性的NSO细胞系有例如细胞系ECACC No. 85110503，可以从 供应用微生物学和研究之用的欧洲细胞培养物收藏中心(European Collection of Cell Cultures (ECACC), Centre for AppliedMicrobiology &Research, Salisbury, Wiltshire, SP40JG,United Kingdom)免费获得。已发现NSO能够产生极高产量的产物，特别是在用于 生成重组抗体时。另一种优选的哺乳动物细胞系是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。它可以是二氢叶酸还 原酶(dhfr)缺陷的，因而其生长依赖于胸苷和次黄嘌呤[PNAS，1990，77 :4216-4220]。用 抗体基因和dhfr基因转染亲本dhfr-CHO细胞系，从而能够选择具有dhfr阳性表型的CHO 细胞转化体。通过在缺少胸苷和次黄嘌呤的培养基上培养集落来进行选择，胸苷和次黄嘌 呤的缺乏阻止了未转化细胞的生长，而转化细胞恢复了叶酸途径，从而规避了选择系统。由 于两种转染基因的共整合，这些转化体通常表达低水平的基因产物。可以通过使用甲氨蝶
9呤(MTX)的扩增来提高抗体基因的表达水平。这种药物是dhfr酶的直接抑制剂，从而能够 分离扩增其dhfr基因拷贝数并足以在这些条件下存活的抗性集落。由于dhff与抗体基因 在最初的转化体中最密切相连，所以通常存在相伴扩增，从而提高所需抗体基因的表达。与CHO或骨髓瘤细胞一起使用的另一种选择系统是WO 87/04462中记载的谷氨酸 合成酶(GQ扩增系统。该系统牵涉用编码GS酶的基因和所需抗体基因转染细胞。然后选 择在不含谷氨酰胺的培养基中生长的细胞。然后对所选择的这些克隆用甲硫氨酸砜亚胺 (methionine sulphoximine, MSX)抑制GS酶。细胞为了存活将扩增GS基因，相伴扩增编 码抗体的基因。本领域已完全建立了抗体和抗体片段在原核细胞诸如大肠杆菌中的表达。综述参 见例如Pluckthun A. , Bio/Technology 1991.9:545-551。本领域技术人员还可利用真核 细胞培养物中的表达作为生成例如特定结合成员的选项IChadd，H. Ε. and Chamow, S. Μ.， Current Opinion in Biotechnology 2001. 12 :188-194 ；Andersen, D.C. and Krummen, L, Current Opinion in Biotechnology2002. 13 117 ；Larrick, J. W. and Thomas, D. W.， Current opinion inBiotechnology 2001.12:411-418]。可以选择或构建合适的载体，其包含适宜的调控序列，包括启动子序列、终止 子序列、聚腺苷酸化序列、增强子序列、标志基因、和需要的其它序列。根据需要，载体 可以是质粒、病毒例如噬菌体、或噬菌粒。更多细节参见例如Molecular Cloning :a Laboratory Manual :3rd edition, Sambrook and Russell,2001. Cold Spring Harbor Laboratory Press.用于操作核酸的许多已知技术和方案，例如制备核酸构建物、诱变、 测序、将DNA导入细胞、表达基因、和分析蛋白质，详细描述于Current Protocols in Molecular Biology,2nd Edition, Ausubel et al. eds. , John ffiley&Sons, 1988 ；Short Protocols in MolecularBiology :A Compendium of Methods from Current Protocols in MolecularBiology, Ausubel et al. eds. , John Wiley&Sons,4th edition 1999。将 Sambrook等人和Ausubel等人的公开内容收入本文作为参考。将核酸导入宿主细胞可采用任何可利用的技术。对于真核细胞，合适的技术可包 括磷酸钙转染、DEAE-右旋糖苷、电穿孔、脂质体介导的转染、及使用逆转录病毒或其它病毒 例如痘苗病毒的转导，对于昆虫细胞，使用杆状病毒。将核酸导入宿主细胞，特别是真核细 胞可使用基于病毒或质粒的系统。质粒系统可作为附加体(印isomally)来操作，或者可掺 入宿主细胞或掺入人工染色体[Csonka，Ε. et al.，Journal of Cell Science, 200. 113 3207-3216 ；Vanderbyl, S. et al. , Molecular Therapy, 2002. 5 (5) :10]。掺入可以是单个 或多个基因座处一个或多个拷贝的随机或靶向整合。对于细菌细胞，合适的技术可包括氯 化钙转化、电穿孔、及使用噬菌体的感染。导入之后可通过例如在适于表达基因的条件下培养宿主细胞来引起或容许核酸 表达。在一个实施方案中，本发明的核酸整合入宿主细胞的基因组(例如染色体)。依照标准技术，可通过包含促进与基因组重组的序列来促进整合。依照本发明的第三方面，提供了本文定义的药物抗体组合物在制备用于治疗 IL-13相关病症的药物中的用途。优选的是，所述IL-13相关病症选自哮喘、特应性皮炎、变应性鼻炎、纤维化(fibrosis)、慢性阻塞性肺病、硬皮病、炎性肠病(inflammatory bowel disease)和何杰金 氏淋巴瘤。本发明的组合物还可用于治疗肿瘤和病毒感染，因为IL-13抗体能抑制IL-13 介导的免疫抑制。最优选的是，IL-13相关病症是哮喘。本发明进一步提供了治疗或预防IL-13相关病症的方法，其包括对患者施用治疗 有效量的本文定义的药物抗体组合物。本发明进一步提供了本文定义的药物抗体组合物，其用于治疗IL-13相关病症。本发明的药物组合物可以是液体剂型或在使用前重建的冻干剂型。可以使用冻干 剂型的赋形剂，例如糖醇或糖(例如甘露醇或葡萄糖)。在液体剂型的情况中，本发明的药 物组合物通常以具有确定体积的容器的形式提供，包括密封和已灭菌的塑料或玻璃管、安 瓿和注射器，以及大体积容器的形式，像瓶子。优选的是，本发明的组合物是液体剂型。本发明的药物组合物可以通过口服、通过注射(例如皮下、静脉内、腹膜内或肌肉 内)、通过吸入、或局部的(例如眼内、鼻内、直肠、伤口、皮肤)来施用。施用路径可以根据 治疗的物理化学特征、关于疾病的特殊考虑、或者优化功效或降低副作用的要求来决定。优选的是，本发明的组合物通过皮下注射来施用。设想了治疗不限于临床使用。因 此，使用无针头装置的皮下注射也可以是优选的。依照本发明，可将所提供的组合物施用于个人。施用优选是“治疗有效量”的， 这足以显示出对患者的益处。所述益处可以至少是至少一种症状的缓解。所施用的实际 量、及施用的速率和时程取决于所治疗病症的本质和严重程度。治疗的处方，例如关于剂 量的决定等，在普通开业医师和其它医生的职责之内。抗体的适宜剂量在本领域是众所周 知的[Ledermann, J. A. et al. , Int. J. Cancer, 1999. 47 :659-664 ；Bagshawe, K. D. et al., Antibody, Immunoconjugates and Radiopharmaceuticals, 1991. 4 :915-922]。精确剂量取决于许多因素，包括待治疗区域的大小和位置、抗体的确切本质(例 如完整抗体、片段或双抗体)、及附着于抗体的任何可检测标记物或其它分子的本质。典型 的抗体剂量对于系统应用为IOOpg-IOg和用于局部应用为Iyg-IOOmg的范围内。通常，抗体是完整抗体，优选IgG4同种型。成人患者的单次治疗剂量在按比例调 整后可用于儿童和婴幼儿，并且对其它抗体形式根据分子量按比例进行调整。可以以每日 一次、每周两次、每周一次、或每月一次的间隔重复进行治疗，这由医师决定。在本发明的优 选实施方案中，治疗是定期的，而且两次施用之间的间隔为大约2周或更长，优选大约3周 或更长，更优选大约4周或更长，或者大约每月一次施用。本发明还涉及1. 一种药物组合物，其包含IL-13抗体及一种或多种制药学可接受赋形剂，并用 乙酸盐缓冲剂缓冲至PH 4. 5-6. 0。2.依照项1的药物组合物，其中所述IL-13抗体是人IL-13单克隆抗体。3.依照项1或2的药物组合物，其中所述IL-13抗体以l-200mg/ml的量存在于所 述药物组合物中。4.依照前述项任一项的药物组合物，其缓冲至pH 5. 2-5. 7。5.依照前述项任一项的药物组合物，其包含乙酸钠，所述乙酸钠以I-IOOmM的量 存在于所述药物组合物中。6.依照前述项任一项的药物组合物，其中所述制药学可接受赋形剂包括一种或多种表面活性剂、无机或有机盐、稳定剂、稀释剂、增溶剂、还原剂、抗氧化剂、螯合剂和/或防 腐剂。 7.依照项6的药物组合物，其中所述表面活性剂选自聚氧乙烯山梨聚糖脂肪酸8.依照项7的药物组合物，其中所述表面活性剂是聚山梨醇酯80，所述聚山梨醇 酯80以0. 001-0. 1% (w/w)的量存在于所述药物组合物中。9.依照项6-8任一项的药物组合物，其中所述无机盐包括氯化钠、氯化钾、氯化 钙、磷酸钠、磷酸钾和碳酸氢钠。10.依照项9的药物组合物，其中所述无机盐是氯化钠，所述氯化钠以10_200mM的
量存在于所述药物组合物中。11.依照项1的药物组合物，其包含IL-13抗体、表面活性剂和无机盐，并用乙酸盐 缓冲剂缓冲至PH 5. 5 士0. 1。12.依照项1的药物组合物，其包含IL-13抗体、氯化钠和聚山梨醇酯80，并用乙 酸盐缓冲剂缓冲至PH 5. 5 士0. 1。13.依照项1的药物组合物，其包含50mg/ml IL-13抗体、85mM氯化钠和0. 01 % (w/w)聚山梨醇酯80，并用50mM乙酸钠缓冲剂缓冲至pH 5. 5 士0. 1。14.用于纯化IL-13抗体的方法，其包括一个或多个层析分离步骤，其中每一个 所述分离步骤包括用含有一种或多种制药学可接受赋形剂并用乙酸盐缓冲剂缓冲至PH 3. 5-7. 0的洗脱缓冲液进行洗脱。15.依照项14的方法，其中所述层析分离步骤选自亲和层析和离子交换层析。16.依照项15的方法，其中所述层析分离是通过蛋白A亲和层析接着阳离子交换 层析再接着阴离子交换层析而进行的。17.依照项14-16任一项的方法，其中所述一种或多种制药学可接受赋形剂包括 无机盐。18.依照项17的方法，其中所述无机盐是氯化钠，所述氯化钠以10_200mM的量存 在于所述洗脱缓冲液中。19.依照项14-18任一项的方法，其中所述乙酸盐缓冲剂是乙酸钠，所述乙酸钠以 I-IOOmM的量存在于所述洗脱缓冲液中。20.依照项14-19任一项的方法，其中所述洗脱缓冲液含有50mM乙酸钠和85mM氯 化钠，并缓冲至PH 5. 5 士0. 1。21.依照项1-13任一项的药物组合物在制备用于治疗IL-13相关病症的药物中的 用途。22.依照项21的用途，其中所述IL-13相关病症选自哮喘、特应性皮炎、变应性鼻 炎、纤维化、慢性阻塞性肺病、硬皮病、炎性肠病和何杰金氏淋巴瘤。23.依照项22的用途，其中所述IL-13相关病症是哮喘。24.治疗或预防IL-13相关病症的方法，其包括对患者施用治疗有效量的依照项 1-13任一项的药用抗体组合物。25.依照项1-13任一项的药用抗体组合物，其是用于治疗IL-13相关病症的药用 抗体组合物。
附图简述

图1显示了各样品在本发明组合物28天稳定性评估的第1天的SDS-PAGE分析结^ ο图2显示了各样品在本发明组合物28天稳定性评估的第21天的SDS-PAGE分析结果。图3显示了各样品在本发明组合物观天稳定性评估的第1天的GP-HPLC分析结^ ο图4显示了各样品在本发明组合物2-8 °C 28天稳定性评估期间的GP-HPLC分析结 果的层析图。图5显示了各样品在本发明组合物25°C 28天稳定性评估期间的GP-HPLC分析结 果的层析图。图6显示了各样品在本发明组合物用不同缓冲液中和的观天稳定性评估期间的 GP-HPLC分析结果的层析图。图7显示了各样品在本发明组合物洲天稳定性评估的第观天的IEF分析结果。图8显示了不同制剂于-70°C存储的12个月稳定性评估的凝胶过滤HPLC分析结果。图9显示了不同制剂于+5°C存储的12个月稳定性评估的凝胶过滤HPLC分析结果。图10显示了不同制剂于+25°C存储的12个月稳定性评估的凝胶过滤HPLC分析结果。图11显示了不同制剂于+37°C存储的8周稳定性评估的凝胶过滤HPLC分析结果。图12显示了不同制剂于+45°C存储的5天稳定性评估的凝胶过滤HPLC分析结果。图13显示了不同制剂于-70°C存储的12个月稳定性评估期间第0、6和12个月的 还原性SDS-PAGE分析结果。图14显示了于_70°C存储的图13中还原性SDS-PAGE分析之后BAK502G9重链和 轻链的百分比丰度。图15显示了不同制剂于+5°C存储的12个月稳定性评估期间第0、6和12个月的 还原性SDS-PAGE分析结果。图16显示了于+5°C存储的图15中还原性SDS-PAGE分析之后BAK502G9重链和轻 链的百分比丰度。图17显示了不同制剂于+25°C存储的12个月稳定性评估期间第0、6和12个月的 还原性SDS-PAGE分析结果。图18显示了于+25°C存储的图17中还原性SDS-PAGE分析之后BAK502G9重链和 轻链的百分比丰度。图19显示了不同制剂于+37°C存储的8周稳定性评估期间第0和8周的还原性 SDS-PAGE分析结果。图20显示了于+37°C存储的图19中还原性SDS-PAGE分析之后BAK502G9重链和 轻链的百分比丰度。图21显示了不同制剂于+45°C存储的5天稳定性评估期间第0和5天的还原性SDS-PAGE分析结果。图22显示了于+45°C存储的图21中还原性SDS-PAGE分析之后BAK502G9重链和 轻链的百分比丰度。图23显示了不同制剂于-70°C存储的12个月稳定性评估期间第0、6和12个月的 非还原性SDS-PAGE分析结果。图M显示了于_70°C存储的图23中非还原性SDS-PAGE分析之后完整BAK502G9 单体的百分比丰度。图25显示了不同制剂于+5°C存储的12个月稳定性评估期间第0、6和12个月的 非还原性SDS-PAGE分析结果。图沈显示了于+5°C存储的图25中非还原性SDS-PAGE分析之后完整BAK502G9单 体的百分比丰度。图27显示了不同制剂于+25°C存储的12个月稳定性评估期间第0、6和12个月的 非还原性SDS-PAGE分析结果。图28显示了于+25°C存储的图27中非还原性SDS-PAGE分析之后完整BAK502G9 单体的百分比丰度。图四显示了不同制剂于+37°C存储的8周稳定性评估期间第0和8周的非还原性 SDS-PAGE分析结果。图30显示了于+37°C存储的图四中非还原性SDS-PAGE分析之后完整BAK502G9 单体的百分比丰度。图31显示了不同制剂于+45°C存储的5天稳定性评估期间第0和5天的非还原性 SDS-PAGE分析结果。图32显示了于+45°C存储的图31中非还原性SDS-PAGE分析之后完整BAK502G9 单体的百分比丰度。
实施例下面参照以下方法和实施例来阐述本发明，仅作为例示。实施例1 :BAK502G9的表达以与WO 87/04462和WO 2004/076485中所述规程类似的方式在GS NSO细胞系中 表达BAK502G9，所得培养物上清液含598mg/l BAK502G9抗体。实施例2 :BAK502G9的纯化(a)rmp 蛋白 A Sepharose 纯化rmp蛋白A Sepharose fast flow层析步骤所使用的柱为2. 6cm直径，在0. 9% w/v 氯化钠中装柱，床高14. 5cm，柱体积77ml。树月旨来自GE Healthcare/Amersham Biosciences 17-5138。层析使用 Amersham Biosciences P-50 泵、UVl 检测仪和流动室(flow cell)进 行。将柱在使用前用6M盐酸胍清洁。用水清洗和清洁后，随后将rmp蛋白A Sepharose fast flow柱用350ml磷酸盐 缓冲盐水PH7. 2平衡。将2. 6升培养物上清液直接于室温以200cm/小时加载到柱上。然后用567ml磷酸盐缓冲盐水pH7. 2，接着用568ml 50mM乙酸钠pH5. 55清洗柱。 通过用380ml 50mM乙酸钠pH3. 75进行清洗，从柱上洗脱BAK502G9抗体。洗脱后，用50mM乙酸PH3.0清洗柱。在峰的上下坡最大UV偏差2%之间收集洗脱峰。在217ml中回收了 1. 5gBAK502G9 抗体。(b)低DH病毒灭活将rmp 蛋白 A Sepharose fast flow 洗出液用 173mlIOOmM 乙酸调整至 pH 3. 70。 然后将调整后的洗出液静置60分钟以灭活病毒。然后将调整后的洗出液用437ml 50mM氢 氧化钠中和至ρΗ5· 50，并使用Millipore stericup (产品号SCGPUl 1RE)进行0. 22 μ m过 滤。在823ml中回收了 1. 4g BAK502G9抗体。(c) SP Sepharose 纯化SP Sepharose fast flow层析步骤所使用的柱为1. 6cm直径，在磷酸盐缓冲盐水 ρΗ7· 2 中装柱,床高 15. 5cm，柱体积 31ml。树脂来自 GE Healthcare/Amersham Biosciences 17-0729。层析使用 Amersham Biosciences P-50 泵、UVl 检测仪和流动室(flow cell)进 行。将柱在使用前用0. 5M氢氧化钠清洁。用水清洗和清洁后，随后将SP Sepharose fast flow柱用145ml 50mM乙酸钠 ρΗ5· 50 平衡。将400ml BAK502G9抗体(作为中和后的rmp蛋白A洗出液)直接于室温以200cm/ 小时加载到柱上。然后用30&ι1 50mM乙酸钠+30mM氯化钠pH5. 50清洗柱。通过用150ml 50mM乙酸钠+85mM氯化钠pH5. 50进行清洗，从柱上洗脱BAK502G9 抗体。洗脱后，用50mM乙酸钠+2M氯化钠pH5. 50清洗柱。在峰的上坡最大UV偏差2%与下坡最大UV偏差30%之间收集洗脱峰。将洗出液 用 Millipore sterif lip (产品号 SCGP00525)进行 0. 22 μ m 过滤。在 54ml 中回收了 0. 67g BAK502G9 抗体。对剩余的39&ι1 BAK502G9抗体(作为中和后的rmp蛋白A洗出液)重复此加工步 骤。又在5細1中回收了 0. 67g BAK502G9抗体。在下一步前合并两份过滤后的SP Sepharose 洗出液。(d)Q Sepharose Fast Flow 层析Q Sepharose fast flow层析步骤所使用的柱为1. 6cm直径，在磷酸盐缓冲盐水 ρΗ7· 2 中装柱，床高 13. 3cm，柱体积 27ml。树脂来自 GE Heal thcare/Amer sham Biosciences 17-0510。层析使用 Amersham Biosciences P-50 泵、UVl 检测仪和流动室(flow cell)进 行。将柱在使用前用0. 5M氢氧化钠清洁。用水清洗和清洁后，随后将Q Sepharose fast flow柱用138ml 50mM乙酸钠 +85mM氯化钠pH5. 50平衡。将Mml BAK502G9抗体(作为SP Sepharose洗出液)直接于室温以200cm/小时 加载到柱上。通过用12細1 50mM乙酸钠+85mM氯化钠pH5. 50清洗柱，进行BAK502G9抗体的等 度洗脱(isocratic elution)。洗脱后，用50mM乙酸钠+2M氯化钠pH5. 50清洗柱。在峰的上下坡最大UV偏差2 %之间收集洗脱峰。将洗出液用 Milliporesteriflip (产品号 SCGPU01RE)进行 0. 22 μ m 过滤。在 88ml 中回收了
150. 52gBAK502G9抗体。对剩余的44ml BAK502G9抗体(作为SP Sepharose洗出液)重复此 加工步骤。又在51ml中回收了 0. Mg BAK502G9抗体。然后合并两份过滤后的Q Sepharose 洗出液。(e)浓缩产品是在50mM乙酸钠+85mM氯化钠pH5. 50中获得的，不需要渗滤。将17. 5升中的95. 31g BAK502G9抗体(作为Q Sepharose滤出液)浓缩至1. 5 升。使用 Millipore Pellicon 2TFF 系统和 0. lM230KDa 膜(MilliporeP2B030A01)来进行 浓缩。然后从该器材中回收BAK502G9抗体，然后用50mM乙酸钠+85mM氯化钠pH5. 50缓冲 冲洗该器材。然后将浓缩后的抗体与缓冲冲洗液(buffer flush)合并。将1. 67ml 10% w/v聚山梨醇酯80添加至合并液，聚山梨醇酯80的终浓度为0.01% w/v。然后将合并液进 行0.22 μ m过滤。在1.67升中回收了 91. 6克BAK502G9抗体。(f)所用材料用于配制上述缓冲液的化学制品如下盐酸胍·Sigma Aldrich. G4505正磷酸氢二钠.VffR.1038349正磷酸二氢钠.VWR.102454R乙酸钠三水合物.VWR. 102354X.氯化钠.VWR.10241AP.乙酸.VWR. 10001CU.聚山梨醇酯80. J. T. Baker. 7394.实施例3 28天稳定性分析rmp蛋白A层析如下文表1所列进行。表1:蛋白A层析参数
基质rmp 蛋白 A Sepharose床高14. 2cm柱直径5. Ocm柱体积278ml线性流速150cm/hr平衡缓冲液及CV 磷酸盐缓冲盐水PH7. 2，5个CV加载物质澄清后的培养物收获物加载容量(mg IgG/ml基质)16. 6mg/ml 基质
权利要求
1.用于纯化IL-13抗体的方法，其包括一个或多个层析分离步骤，其中每一个所述分 离步骤包括用含有一种或多种制药学可接受赋形剂并用乙酸盐缓冲剂缓冲至PH 3. 5-7. 0 的洗脱缓冲液进行洗脱。
2.依照权利要求1的方法，其中所述层析分离步骤选自亲和层析和离子交换层析。
3.依照权利要求2的方法，其中所述层析分离是通过蛋白A亲和层析接着阳离子交换 层析再接着阴离子交换层析而进行的。
4.依照权利要求1-3任一项的方法，其中所述一种或多种制药学可接受赋形剂包括无 机盐。
5.依照权利要求4的方法，其中所述无机盐是氯化钠，所述氯化钠以10-200mM的量存 在于所述洗脱缓冲液中。
6.依照权利要求1-5任一项的方法，其中所述乙酸盐缓冲剂是乙酸钠，所述乙酸钠以 I-IOOmM的量存在于所述洗脱缓冲液中。
7.依照权利要求1-5任一项的方法，其中所述洗脱缓冲液含有50mM乙酸钠和85mM氯 化钠，并缓冲至PH 5. 5 士0. 1。
全文摘要
本发明涉及白介素-13抗体组合物，更具体地，本发明涉及一种药物组合物，其包含白介素-13抗体，更具体的说是白介素-13单克隆抗体，尤其是人白介素-13单克隆抗体。本发明还涉及纯化所述抗体的方法和使用所述组合物来治疗白介素-13相关病症诸如哮喘、特应性皮炎、变应性鼻炎、纤维化、慢性阻塞性肺病、硬皮病、炎性肠病和何杰金氏淋巴瘤，特别是哮喘的用途。
文档编号A61K39/395GK102060925SQ20101055120
公开日2011年5月18日 申请日期2006年9月29日 优先权日2005年9月30日
发明者克莱尔·L·霍普, 卡伦·班尼斯特, 布伦丹·C·菲什, 珍妮特·E·兰斯通 申请人:医学免疫有限公司