专利名称：金属-结合性化合物及其用途的制作方法
金属-结合性化合物及其用途
本申请是中国申请00815718. 9的分案申请，该母案于2000年9月四日以国际申 请号PCT/US00/26952提交，于2002年5月15日进入中国国家阶段，本分案采用了与该母 案一致的发明名称。发明领域
本发明涉及减少由反应性氧类(R0Q所致分子、细胞和组织损伤的方法。本发明 还涉及某些化合物，尤其是某些肽和肽衍生物，它们与金属离子、特别是Cu (II)结合。本发 明化合物与金属离子的结合抑制ROS的生成和/或蓄积，和/或使得ROS所致损伤靶向化 合物本身(也就是说，本发明化合物可以充当牺牲性抗氧化剂)。
背景
反应性氧类(ROS)包括自由基(例如超氧化物阴离子和羟基、peroxyl与烷氧 基原子团)和非原子团类(例如单线态氧和过氧化氢)。ROS能够导致广泛的细胞和组 织损伤，据报道它们在各种疾病和疾患中扮演主要角色。的确，ROS在一百多种疾病和 病理条件中都有牵连，据推测ROS可能构成涉及所有人类疾病的共同致病机理。Mohs， J. Basic Clin. Physiol. Pharmacol.，6，205-2 (1995)。关于描述 ROS、它们的生成、它们导 致细胞和组织损伤的机理和它们在大量疾病和障碍中的牵连，例如参见Manso，Rev. Port. Cardiol. ,11,997-999(1992) ；Florence, Aust. N Z J. Opthalmol. ,23,3-7(1992) ；Stohs, J.Basic Clin. Physiol. Pharmacol. ,6, 205-228(1995) ；Knight, Ann. Clin. Lab. Sci. ,25, 111-121(1995) ；Kerr et al. ,Heart & Lung，25，200—209(1996) ；Roth,Acta Chir. Hung., 36,302-305(1997)。
缺血/再灌注是世界上病患和病残的主导原因。心血管缺血在美国是病患和死亡 的主导原因，其中肌体向心脏供氧的能力减小了。脑缺血是脑血管意外(中风)的前兆，它 在美国是死亡的第三大主导原因。缺血还发生在其他器官(例如肾、肝、肺和肠道)、所采集 的器官(例如为移植或研究(例如灌注器官模型)而采集的器官)，以及作为其中有血流中 断的手术(例如开心手术和冠脉旁路术)的结果而发生。缺血不必限于一个器官；它也可 能是更加泛化的(例如在出血性休克中)。
作为缺氧的结果，在缺血期间发生细胞和组织损伤。不过，发生在缺血期间的 损伤一般轻于发生在缺血组织和器官的再灌注之后的严重损伤。例如参见Manso，Rev. Port.Cardiol. ,11,997-999(1992) ；Stohs, J.Basic Clin.Physiol.Pharmacol. ，6， 205-228(1995) ；Knight，Ann. Clin. Lab. Sci.，25，111-121 (1995) ；Kerr et al. , Heart & Lung, 25, 200-209 (1996) ；Roth, Acta Chir. Hung.，36，302-305 (1997)。据报道 ROS 对由缺 血组织和器官的再灌注所导致的严重损伤负责。例如参见Manso，Rev. Port. Cardiol.，11， 997-999(1992) ；Stohs, J. Basic Clin.Physiol. Pharmacol. ,6,205-228(1995) ；Knight, Ann.Clin. Lab. Sci.，25，111-121(1995) ；Kerr et al. , Heart & Lung,25，200—209(1996)； Roth, Acta Chir. Hung,36，302-305(1997)。
金属离子、主要是过渡金属离子能够导致ROS的产生和蓄积。确切地说，从贮存部位释放的铜和铁离子是继发于损伤的ROS产生的主要原因之一，这些损伤包括缺 血/再灌注损伤和由热、冷、创伤、过量运动、毒素、辐射和感染引起的损伤。Roth，Acta Chir. Hung.，36，302-305 (1997)。据报道铜和铁离子以及其他过渡金属离子(例如钒 和铬离子)催化 ROS 的产生。例如参见 Stohs，J. Basic Clin. Physiol. Pharmacol. ,6, 205-228(1995) ；Halliwell et al. , Free Radicals In Biology And Medicine, pages 1-19(Oxford University 1989) ；Marx et al.，Biochem. J，236，397-400(1985) ；Quinlan et al.，J. Pharmaceutical Sci.，81，611-614(1992)。据报道其他过渡金属离子(例如 镉、汞和镍离子)和其他金属离子(例如砷和铅离子)耗尽一些天然抗氧化剂防御系统的 分子，由此导致ROS的蓄积增加。例如参见Mohs，J. Basic Clin. Physiol. Pharmacol.， 6, 205-228 (1995) 0尽管据报道游离铜离子非特异性地与本质上任意蛋白质的氨基结 合(Gutteridge et al.，Biochim. Biophys. Acta, 759，38-41 (1983))，不过与蛋白质结 合的铜离子仍然能够导致ROS的产生，后者至少损害与铜离子结合的蛋白质。例如参见 Gutteridge et al. ,Biochim. Biophys. Acta,759,38-41(1983) ；Marx et al. ,Biochem. J., 236,397-400(1985) ；Quinlan et al. ,J Pharmaceutical Sci.，81，611—614(1992)。
白蛋白已被描绘为细胞外抗氧化剂。例如参见Halliwell and Gutteridge, Arch. Biochem. Biophys. ,280,1-8 (1990) ；Das et al. , Methods Enzymo1., 233, .601-610(1994) ；Stohs, J Basic Clin.Physiol. Pharmacol.，6，205-228(1995)； Dunphy et al.，Am. J Physiol.，276，H1591-H1598 (1999))。白蛋白的抗氧化剂特性 归因于白蛋白的若干生理功能，包括白蛋白结合金属(特别是铜离子)、结合脂肪酸、 结合和转运类固醇、结合和转运胆红素、清除HOCl等能力。例如参见Halliwell and Gutteridge,Arch.Biochem. Biophys. ,280,1-8(1990) ；Halliwell and Gutteridge,Arch. Biochem. Biophys. ,246,501-514(1986) ；Stohs, . . Basic Clin.Physiol. Pharmacol. ,6, 205-228(1995) ；Dunphy et al.，Am. J. Physiol.，276，H 1591-H1598 (1999))。白蛋白含 有若干金属-结合性部位，其中一个位于N-末端。包括人、鼠和牛血清白蛋白在内的若干 白蛋白的N-末端金属-结合性部位对Cu(II)和Ni(II)表现较高的亲和性，人们已经鉴 别了参与这些金属离子的高亲和性结合的氨基酸。参见Laussac et al. , Biochem. ,23, 2832-2838(1984) ；Predki et al. , Biochem. J. ,287,211-215(1992) ；Masuoka et al., J. Biol. Chem.，268，21533-21537 (1993)。据报道在除高亲和性N-末端部位以外的金 属-结合性部位与白蛋白结合的铜产生自由基，后者在听命于“宽松”金属-结合性部位 位置的部位对白蛋白导致广泛损伤，致使白蛋白被描绘为“牺牲抗氧化剂”。参见Marx et al. , Biochem. J. ,236,397-400(1985) ；Halliwell et al. , Free Radicals In Biology And Medicine, pages 1-19(Oxford University 1989) ；Halliwell and Gutteridge, Arch. Biochem. Biophys. ,280,1-8(1990) ；Quinlan et al. , J. Pharmaceutical Sci. , 81, 611-614(1992)。
尽管如此，使用白蛋白治疗脑缺血的尝试显示出形形色色的结果。据报道白蛋 白在脑缺血的动物模型中是和不是神经保护剂。Compare Huh et al.，Brain Res. ,804, 105-113(1998)and Remmers et al. , Brain Res.，827，237-242 (1999)，with Little et al. , Neurosurgery,9,552-558(1981)and Beaulieu et al. , J. Cereb. Blood Flow. Metab., 18,1022-1031 (1998)ο5
在用于保藏切除心脏的心麻痹溶液中使用白蛋白也得到形形色色的结果。根据 Dunphy et al. ,Am. J. Physiol. ,276,H 1591-H1598 (1999)的报道，向用于保藏切除心脏的 标准心麻痹溶液中加入白蛋白没有改善被该溶液灌注二十四小时的心脏的功能。当用含有 白蛋白和若干增强剂(胰岛素、ATP、皮质酮和丙酮酸)的心麻痹溶液灌注时，心脏的确证明 有功能改善。这是一种协同效应，因为单独的增强剂以及单独的白蛋白都不显著改善心脏 功能。使用含有白蛋白的心麻痹溶液改善心脏功能的早期报道也归因于增强剂与白蛋白之 间的协同作用。参见 Dunphy et al. ,Am. J. Physiol. , 276,H1591-H1598 (1999)的最后一段 和其中引用的 Hisatomi et al.，Transplantation，52，754-755 (1991)。在另一项研究中， 被含有白蛋白的心麻痹溶液灌注的心脏与不含白蛋白的溶液相比，以剂量相关的方式增加 了再灌注损伤。Suzer et al.，Pharmacol. Res.，37，97-101 (1998)。基于他们和其他人的 研究，Suzer等得出结论，白蛋白尚未显示有效的心保护作用。他们进一步认为，由于可能的 变态反应和与血液产品的使用有关的危险，在心麻痹溶液中使用白蛋白可能是不安全的。
最后，尽管白蛋白已被描绘为一种抗氧化剂，不过据报道它增强小神经胶质产生 超氧化物阴离子(Si et al. , GLIA,21,413-418(1997)) 0这种结果引起作者推测，在某些 障碍中从被破坏的血脑屏障漏出白蛋白加强小神经胶质产生超氧化物阴离子，这种超氧化 物阴离子产生增加对脑缺血/再灌注中的神经元损伤发病和一些神经变性疾病负责。
如上所述，若干白蛋白的N-末端金属-结合性部位对Cu(II)和Ni(II)表现较 高的亲和性。这些部位已经得到广泛研究，并且已经鉴别了一般性氨基末端Cu(II)-与 Ni (II)-结合性(ATCUN)基序。例如参见 Harford and Sarkar, Acc. Chem. Res.，30， 123-130 (1997)。ATCUN基序可以被定义为存在于这样的蛋白质或肽中，它具有N-末端游离 NH2、第三位组氨酸残基和两个间插肽氮。例如参见Harfordand Sarkar, Acc. Chem. Res.， 30,123-130 (1997) ο因而，ATCUN基序是由肽序列)(aa Xaa His所提供的，其中Xaa是任意 氨基酸，脯氨酸除外。例如参见 Harford and Sarkar，Acc. Chem. Res.，30，123-130 (1997)。 Cu(II)和Ni(II)与四个氮结合，这四个氮是由ATCUN基序的三个氨基酸所提供的(游离 NH2的氮、两个肽氮和组氨酸的咪唑氮)，呈略微扭曲的正方平面构型。例如参见Harford and Sarkar, Acc. Chem. Res.，30，123-130 (1997)。组成 ATCUN 基序的三个氨基酸的侧链基 团能够参与Cu(II)和Ni(II)的结合，接近这三个N-末端氨基酸的氨基酸也可以影响这些 金属离子的结合。例如参见 Harford and Sarkar，Acc. Chem. Res.，30，123-130 (1997) ；Bal et al.，Chem. Res. Toxicol.，10,906-914(1997)。例如，人血清白蛋白的 N-末端金属-结 合性部位的序列是Asp AlaHis Lys [SEQ ID NO :1]，N-末端Asp和Lys残基的游离侧链羧 基据报道参与Cu(II)和Ni(II)的结合，除了由Asp Ala His所提供的四个氮以外。参见 Harford and Sarkar,Acc. Chem. Res. ,30,123-130(1997) ；Laussac et al. ,Biochem. ,23, 2832-2838(1984) ；and Sadler e al.，Eur.J. Biochem.，220，193-200(1994)。
在除白蛋白以外的其他天然存在的蛋白质中已经发现了 ATCUN基序，并且已经合 成了包含ATCUN基序的非天然存在的肽和蛋白质。例如参见Harford and Sarkar, Acc. Chem. Res. ,30,123-130 (1997) ；Bal et al. , Chem Res. Toxicol. ,10,906-914 (1997)； Mlynarz,et al. ,Speciation 98 :Abstracts,http://www. jate.u_szeged.hu/ spec98/ abstr/mlynar. htmL·含有ATCUN的肽和蛋白质的Cu (II)与Ni (II)配合物据报道表现超 氧化物歧化酶(SOD)活性。参见 Cotelle e al.，J. Inorg. Biochem.，46，7-15 (1992) ；Uedaet al.，J. Inorg. Biochem.，55，123-130(1994)。尽管报道了它们的 SOD 活性，不过这些配 合物仍然产生损害DNA、蛋白质和其他生物分子的自由基。参见Harford and Sarkar,Acc. Chem. Res. ,30,123-13((1997) ；Bal et al. , Chem. Res. Toxicol. ,10,915-21(1997) ；Ueda et al. , Free Radical Biol. Medl8,929-933(1995) ；Ueda et al. , J. Inorg. Biochem. ,55, 123-130(1994) ； Cotelle et al. ,J. Inorg Biochem.，46，7-15 (1992)。其结果是，假设铜和 镍的体内副作用至少有一部分可归因于Cu(II)和Ni(II)与含有ATCUN的蛋白质的结合， 导致损害性自由基的产生。参见Harforc and Sarkar，Acc. Chem. Res.，30，123-130 (1997)； Bal et al. , Chem. Res. Toxicol. , 10,915-921 (1997) ； Cotelle et al. ,J. Inorg. Biochem., 46，7-15 (1992) · Cf. Koch et al.，Chem. &Biol.，4，54960 (1997)。由含有 ATCUN 的肽的 Cu(II)配合物所产生的损害效应已被开发用于体外杀死癌细胞和体内产生抗肿瘤作用。参 见 Harfordand Sarkar, Acc. Chem. Res.，30，123-130 (1997)。
发明概述
本发明提供减少由反应性氧类(R0Q所致哺乳动物损伤的方法。该方法包含对该 动物给以有效量的具有通式P1-P2的金属-结合性肽或其生理学上可接受的盐。
本发明进一步提供减少由ROS所致组织或器官损伤的方法，该组织或器官已从动 物体内取出。该方法包含使该组织或器官与含有有效量的肽P1-P2或其生理学上可接受的 盐的溶液接触。
本发明还提供在有相应需要的动物体内降低金属浓度的方法。该方法包含对该动 物给以有效量的具有通式P1-P2的金属-结合性肽或其生理学上可接受的盐。
本发明还提供药物组合物，其包含药学上可接受的载体和肽P1-P2或其生理学上 可接受的盐。
另外，本发明提供用于减少由ROS所致组织或器官损伤的试剂盒，该组织或器官 已从动物体内取出。该试剂盒包含一个盛有肽P1-P2的容器。
式P1-P2 中
P1 是 Xaa1 Xaa2 His 或 Xaa1 Xaa2 His Xaa3 ；
P2 是(XaEi4) n。
Xaa1是甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)、缬氨酸(Val)、亮氨酸(Leu)、异亮氨酸(Ile)、 丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)、天冬氨酸(Asp)、天冬酰胺(Asn)、谷氨酸(Glu)、谷氨酰胺 (Gin)、赖氨酸(Lys)、羟赖氨酸(Hylys)、组氨酸(His)、精氨酸(Arg)、鸟氨酸(Orn)、苯丙 氨酸(Wie)、酪氨酸(Tyr)、色氨酸(Trp)、半胱氨酸(Cys)、甲硫氨酸(Met)或α -羟甲基丝 氨酸(HMS)。) 优选为Asp、Glu、Arg或HMS。更优选地，Xaa1是Asp或Glu。最优选地， Xaa1 是 Asp0
Xaa2 是 Gly、Ala、β-Ala、Val、Leu、Ile、Ser、Thr、Asp、Asn、Glu、Gln、Lys、Hylys、 His、Arg、Orn> Phe> Tyr> Trp> Cys> Met 或 HMS0 Xaa2 优选为 Gly、Ala、Val、Leu、lie、Thr> ^51~、4811、]^仏见8或圓5。更优选地，Xagi2是々1&、Val、Thr、Ser或HMS。进而更优选地， Xaa2 是 Ala、Thr 或 HMS。最优选地，Xaa2 是 Ala。
Xaa3 是 Gly、Ala、Val、Lys、Arg、Orn、Asp、Glu、Asn、Gln 或 Trp,优选为 Lys0
) 是任意的氨基酸。
最后，η是0-100，优选为0_10，更优选为0_5，最优选为0。
在优选的实施方式中，P1氨基酸至少有一个是D-氨基酸，若存在β -Ala则该氨基 酸除外。优选地，该D-氨基酸是)(aai、His或二者皆是。最优选地，除β-Ala以外的所有 P1氨基酸都是D-氨基酸。在另一种优选的实施方式中，P1氨基酸除β-Ala以外至少有一 个是D-氨基酸，P2氨基酸至少有50 %也是D-氨基酸。最优选地，所有P2氨基酸都是D-氨基酸。
在另一种优选的实施方式中，P1和/或P2氨基酸至少有一个是被取代的，(a)取 代基增加肽的亲脂性，而不改变P1与金属离子结合的活性，(b)取代基保护肽不受蛋白酶的 作用，而不改变？工与金属离子结合的活性，或者(C)取代基是非肽类金属-结合性官能团， 它提高肽与金属离子结合的活性。
本发明提供另一种减少由ROS所致动物损伤的方法。该方法包含对该动物给以有 效量的金属-结合性肽(MBP)，该肽连接有非肽类金属-结合性官能团。金属-结合性肽 MBP可以是任意的金属-结合性肽，而不仅仅是PfP2。
本发明进一步提供另一种减少由ROS所致组织或器官损伤的方法，该组织或器官 已从动物体内取出。该方法包含使该组织或器官与含有有效量的金属-结合性肽MBP的溶 液接触，其中该肽连接有非肽类金属-结合性官能团。
本发明提供另一种在有需要的动物体内降低金属浓度的方法。该方法包含对该动 物给以有效量的金属-结合性肽MBP，该肽连接有非肽类金属-结合性官能团。
本发明还提供药物组合物，它包含药学上可接受的载体和金属-结合性肽MBP，其 中该肽连接有非肽类金属-结合性官能团。
本发明还提供用于减少由ROS所致组织或器官损伤的试剂盒，该组织或器官已从 动物体内取出。该试剂盒包含一个盛有金属-结合性肽MBP的容器，该肽连接有非肽类金 属-结合性官能团。
本发明还提供另外一种减少由反应性氧类(R0Q所致动物损伤的方法。该方法包 含对该动物给以有效量的式P3-L-P3的金属-结合性肽二聚体，其中每个P3可以是相同或 不同的，而且是能够与金属离子结合的肽，L是通过它们的C-末端氨基酸连接这两个P3肽 的化学基团。在优选的实施方式中，这两个P3肽之一是P1,或二者皆是。
本发明进一步提供减少由ROS所致组织或器官损伤的方法，该组织或器官已从动 物体内取出。该方法包含使该组织或器官与含有有效量的式P3-L-P3的金属-结合性肽二 聚体的溶液接触。
本发明还提供在有相应需要的动物体内降低金属浓度的方法。该方法包含对该动 物给以有效量的式P3-L-P3的金属-结合性肽二聚体。
本发明还提供药物组合物，其包含药学上可接受的载体和式P3-L-P3的金属-结合 性肽二聚体。
另外，本发明还提供用于减少由ROS所致组织或器官损伤的试剂盒，其中该组织 或器官已从动物体内取出。该试剂盒包含一个盛有式P3-L-P3的金属-结合性肽二聚体的 容器。
另外，本发明提供具有式P1-P2的肽或其生理学上可接受的盐，其中除β "Ala以外 的P1氨基酸至少有一个是D-氨基酸。
进一步由本发明所提供的是具有式P1-P2的肽或其生理学上可接受的盐，其中P1和/或&氨基酸至少有一个是被取代的，(a)取代基增加肽的亲脂性，而不改变P1与金属离 子结合的活性，(b)取代基保护肽不受蛋白酶的作用，而不改变P1与金属离子结合的活性， 或者(C)取代基是非肽类金属-结合性官能团，它提高肽与金属离子结合的活性。
另外，本发明提供具有式P1-P2的肽，其中P1定义同上，P2是包含金属-结合性部位 的序列的肽序列。确切地说，P2可以具有下列序列之一 OCaa4)m Xaa3His Xaa2Xaa5, (Xaa4) m His Xaa2Xaa5, (Xaa4)m Xaa5Xaa2HisXaa3 或(Xaa4)m Xaa5Xaa2His,其中 Xaa5 是具有游离侧 链NH2的氨基酸，m是0-5。
本发明还提供金属-结合性肽MBP，该肽连接有非肽类金属-结合性官能团。
最后，本发明提供具有通式P3-L-P3的金属-结合性肽二聚体。
更具体地，本发明涉及
1.减少由反应性氧类(R0Q所致动物损伤的方法，包含对该动物给以有效量的具 有下式的肽
P1-P2,
其中
P1 是
Xaa1Xaa2His 或
Xaa1Xaa2His Xaa3 ；
P2 是(XaEi4)n;
叙％是甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、天冬氨酸、天 冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、赖氨酸、羟赖氨酸、组氨酸、精氨酸、鸟氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、 色氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸或α-羟甲基丝氨酸；
)(皿2是甘氨酸、丙氨酸、β-丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、 天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、赖氨酸、羟赖氨酸、组氨酸、精氨酸、鸟氨酸、苯丙氨 酸、酪氨酸、色氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸或α-羟甲基丝氨酸；
& 3是甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、赖氨酸、精氨酸、鸟氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、天冬 酰胺、谷氨酰胺或色氨酸；
) 是任意的氨基酸；
η 是 0-100 ；
或其生理学上可接受的盐。
2.项1的方法，其中) 是天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸或α -羟甲基丝氨酸。
3.项1的方法，其中& 2是甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、丝 氨酸、天冬酰胺、甲硫氨酸、组氨酸或α-羟甲基丝氨酸。
4.项1的方法，其中) 是赖氨酸。
5.项1的方法，其中) 是天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸或α -羟甲基丝氨酸，Xaa2 是甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、丝氨酸、天冬酰胺、甲硫氨酸、组氨酸 或α-羟甲基丝氨酸， 是赖氨酸。
6.项5的方法，其中) 是天冬氨酸或谷氨酸，Xm2是丙氨酸、甘氨酸、缬氨酸、苏 氨酸、丝氨酸或α-羟甲基丝氨酸。
7.项6的方法，其中) 是丙氨酸、苏氨酸或α -羟甲基丝氨酸。
8.项7的方法，其中) 是天冬氨酸，Xaa2是丙氨酸。
9.项1的方法，其中η是0-10。
10.项9的方法，其中η是0_5。
11.项10的方法，其中η是0。
12.项1的方法，其中P2包含金属-结合性序列。
13.项12的方法，其中P2包含下列序列之一
(Xaa4)m Xaa3His Xaa2Xaa5,
(Xaa4)m His Xaa2Xaa5,
(Xaa4)m Xaa5Xaa2His Xaa3 或
(Xaa4)m Xaa5Xaa2His,
其中) 是具有游离侧链NH2的氨基酸，m是0-5。
14.项13的方法，其中Xaa5是Orn或Lys0
15.项1的方法，其中P1氨基酸除β-丙氨酸以外至少有一个是D-氨基酸。
16.项15的方法，其中) 是D-氨基酸，His是D-氨基酸，或者) 和His都是D-氨基酸。
17.项16的方法，其中除β-丙氨酸以外的所有P1氨基酸都是D-氨基酸。
18.项15的方法，其中P2氨基酸至少有50%是D-氨基酸。
19.项16的方法，其中P2氨基酸至少有50%是D-氨基酸。
20.项17的方法，其中P2氨基酸至少有50%是D-氨基酸。
21.项1-20中任一项的方法，其中该动物是需要该肽的，因为需要再灌注该动物 的缺血组织或器官。
22.项21的方法，其中该动物患有脑血管缺血，缺血组织位于动物大脑中。
23.项21的方法，其中该动物患有心血管缺血，缺血组织位于动物心脏中。
24.项21的方法，其中该肽是在再灌注之前、与再灌注同时、在再灌注之后或其组 合的情况下给药的。
25.项1-20中任一项的方法，其中该动物是需要该肽的，因为神经病学创伤的缘故。
26.项1-20中任一项的方法，其中该动物是需要该肽的，因为它患有神经变性疾病。
27.项1-20中任一项的方法，其中该肽是预防性给药的。
28.项27的方法，其中将该肽对表现可能的脑血管缺血或可能的心血管缺血症状 的正在接受诊断的动物给药。
29.项27的方法，其中在手术之前、手术期间、手术之后或其组合的情况下将该肽 对动物给药。
30.项四的方法，其中该手术是开心手术或向动物移植器官的手术。
31.项27的方法，其中在放射疗法之前、放射疗法期间、放射疗法之后或其组合的 情况下将该肽对动物给药。
32.项1-20中任一项的方法，其中至少一个P1氨基酸是被取代的，(a)取代基增 加肽的亲脂性，而不改变P1与金属离子结合的活性，(b)取代基保护肽不受蛋白酶的作用，而不改变P1与金属离子结合的活性，或者(C)取代基是非肽类金属-结合性官能团，它提 高肽与金属离子结合的活性。
33.项32的方法，其中该动物是需要该肽的，因为需要再灌注该动物的缺血组织 或器官。
34.项33的方法，其中该动物患有脑血管缺血，缺血组织位于动物大脑中。
35.项33的方法，其中该动物患有心血管缺血，缺血组织位于动物心脏中。
36.项33的方法，其中该肽是在再灌注之前、与再灌注同时、在再灌注之后或其组 合的情况下给药的。
37.项32的方法，其中该动物是需要该肽的，因为神经病学创伤的缘故。
38.项32的方法，其中该动物是需要该肽的，因为它患有神经变性疾病。
39.项32的方法，其中该肽是预防性给药的。
40.项39的方法，其中将该肽对表现可能的脑血管缺血或可能的心血管缺血症状 的正在接受诊断的动物给药。
41.项39的方法，其中在手术之前、手术期间、手术之后或其组合的情况下将该肽 对动物给药。
42.项41的方法，其中该手术是开心手术或向动物移植器官的手术。
43.项39的方法，其中在放射疗法之前、放射疗法期间、放射疗法之后或其组合的 情况下将该肽对动物给药。
44.项32的方法，其中P1具有下式之一
权利要求
1.不具有结合的金属离子的线性金属-结合肽或其生理上可接受的盐在制备用于减 少有需要的动物中由反应性氧类所致损伤的药物中的用途，其中所述肽具有下式Pi-P2' 其中 P1是Xaa1Xaa2His ；或 Xaa1Xaa2His Xaa3 ； Xaa1是天冬氨酸； Xaa2是丙氨酸； Xaa3是赖氨酸；P2是氨基酸数为0-10的任意氨基酸序列。
2.权利要求1的用途，其中动物因为再灌注动物中缺血性组织或器官的需要而需要所 述肽或其生理上可接受的盐。
3.权利要求2的用途，其中所述动物患有脑血管缺血，并且所述缺血性组织位于所述 动物脑部。
4.权利要求2的用途，其中所述动物患有心血管缺血并且缺血性组织位于所述动物的 心脏中。
5.权利要求1的用途，其中所述动物需要肽或其生理上可接受的盐以治疗创伤。
6.权利要求1的用途，其中所述动物需要肽或其生理上可接受的盐以治疗神经变性疾病。
7.权利要求1-6中任一项的用途，其中所述肽的至少一个氨基酸是D-氨基酸。
8.不具有结合的金属离子的线性金属-结合肽或其生理上可接受的盐在制备用于减 少从动物中摘除的器官或组织中的由反应性氧类所致损伤的药物中的用途，其中所述肽具 有下式Pi-P2' 其中 P1是Xaa1Xaa2His ；或 Xaa1Xaa2His Xaa3 ； Xaa1是天冬酰胺； Xaa2是丙氨酸； Xaa3是赖氨酸；P2是氨基酸数为0-10的任意氨基酸序列。
9.权利要求8的用途，其中所述肽的至少一个氨基酸是D-氨基酸。
10.不具有结合的金属离子的线性金属-结合肽或其生理上可接受的盐在制备用于减 少有需要的动物中的金属离子浓度的药物中的用途，其中所述肽具有下式Pi-P2' 其中 P1是Xaa1Xaa2His ；或 Xaa1Xaa2His Xaa3 ； Xaa1是天冬氨酸； Xaa2是丙氨酸； Xaa3是赖氨酸；P2是氨基酸数为0-10的任意氨基酸序列。
11.权利要求10的用途，其中所述肽的至少一个氨基酸是D-氨基酸。
12.药物组合物，包括药用载体和不具有结合的金属离子的线性金属-结合肽或其生 理上可接受的盐，其中所述肽具有下式Pi-P2' 其中 P1是Xaa1Xaa2His ；或 Xaa1Xaa2His Xaa3 ； Xaa1是天冬氨酸； Xaa2是丙氨酸； Xaa3是赖氨酸；P2是氨基酸数为0-10的任意氨基酸序列。
13.权利要求12的药物组合物，其中所述肽的至少一个氨基酸是D-氨基酸。
14.试剂盒，包括装有不具有结合的金属离子的线性金属-结合肽或其生理上可接受 的盐的容器，其中所述肽具有下式Pi-P2' 其中 P1是Xaa1Xaa2His ；或 Xaa1Xaa2His Xaa3 ； Xaa1是天冬氨酸； Xaa2是丙氨酸； Xaa3是赖氨酸；P2是氨基酸数为0-10的任意氨基酸序列。
15.权利要求14的试剂盒，其中所述肽的至少一个氨基酸是D-氨基酸。
全文摘要
本发明提供减少由反应性氧类(ROS)所致动物损伤的方法。本发明还提供减少动物体内金属浓度的方法。这些方法包含对该动物给以有效量的金属-结合性化合物，本申请对此有进一步描述。本发明进一步提供减少由ROS所致组织或器官损伤的方法，该组织或器官已从动物体内取出。该方法包含使该组织或器官与含有有效量的本发明金属-结合性化合物的溶液接触。本发明进一步提供新颖的金属-结合性化合物、包含该金属-结合性化合物的药物组合物和包含盛放本发明金属-结合性化合物的容器的试剂盒。
文档编号A61K38/00GK102038932SQ20101058077
公开日2011年5月4日 申请日期2000年9月29日 优先权日1999年10月1日
发明者C.杰拉尔德.柯蒂斯, 万尼尔.M.克鲁克, 戴维.巴奥, 爱德华.劳, 纳加拉加.K.R.拉奥, 詹姆斯.V.温克勒 申请人:Dmi生物科学公司