专利名称：胰岛素脂质体冻干粉、口服胰岛素复合制剂及其制备方法与应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种用于治疗II型糖尿病的胰岛素脂质体冻干粉、口服胰岛素复合制剂及其制备方法与应用。
背景技术：
胰岛素作为降血糖的生化药用于治疗糖尿病已有近百年历史，迄今仍为I型糖尿病患者的首选药，亦是越来越多的II型糖尿病患者的必不可少的药物。目前临床治疗更倾向于对II型糖尿病患者尽早使用胰岛素，这样可使胰岛素细胞得到修复，同时更好的减少糖尿病所引起的并发病。但由于胰岛素是多肽类药物，会被肠胃道的蛋白水解酶降解而不被吸收，所以口服途径的治疗几乎是无效的，为此，临床常用胰岛素针剂治疗。同时，为了避免外周给药的不便与不良影响，以及单纯用降糖药带来的并发病，国内外各大机构均设计了各种非注射的胰岛素制剂，尤其以各种方式包埋的口服胰岛素为主，但现有采用包埋方式生产的胰岛素仍普遍存在包埋率低、稳定性不好，难达成工业化生产等弱点。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种包埋率高的胰岛素脂质体冻干粉和一种含有该胰岛素脂质体冻干粉的治疗II型糖尿病的口服胰岛素复合制剂，该口服胰岛素复合制剂稳定性好、便于工业化生产。一种胰岛素脂质体冻干粉，其按照以下步骤制备1)将胰岛素加入到0. 01-0. 02M的HCl水溶液中充分溶解，使胰岛素的浓度为 2. 6-3. 4g/l，再加入pH为6. 5-7. 5,0. 1-0. 2M的磷酸盐缓冲液混合均勻，使胰岛素的浓度达到0. 34-0. 45g/l，再加入浓度为0. 01-0. 02g/ml胆酸钠溶液，使胰岛素的浓度达到 0. 33-0. 43g/l，得到水相混合液；2)将质量比为1 (1-3)的胆固醇和卵磷脂的混合物共溶于无水乙醇中，充分溶解混合均勻，使混合物的浓度为0. 018-0. 025g/ml,再加上浓度为0. 01-0. 02g/ml的甘露醇水溶液，使胆固醇和卵磷脂的混合物浓度达到0. 011-0. 013g/ml,再加入浓度为 0. 01-0. 02g/ml的胆酸钠溶液，使胆固醇和卵磷脂的混合物浓度达到0. 011-0. 012g/ml，将所得液体放置于高压均质机均质10-30min，得到油相混合液；3)将体积比为(1. 3-2. 9) 1的水相混合液与油相混合液在容器中混合均勻并放置在2-6°C的水浴中2-4小时后，减压蒸馏除去无水乙醇，得到浓缩液；4)将浓缩液冷冻干燥后得到胰岛素脂质体冻干粉。本发明胰岛素脂质体冻干粉，其按照以下步骤制备1)将胰岛素加入到0. OlM的HCl水溶液中充分溶解，使胰岛素的浓度为2. 9g/l， 再加入PH为7. 0,0. 2M的磷酸盐缓冲液混合均勻，使胰岛素的浓度达到0. 42g/l，再加入浓度为0. 01g/ml胆酸钠溶液，使胰岛素的浓度达到0. 40g/l，得到水相混合液；
2)将质量比为1 3的胆固醇和卵磷脂的混合物溶于无水乙醇中，充分溶解混合 均勻，使混合物的浓度为0. 020g/ml，再加上浓度为0. 02g/ml的甘露醇水溶液，使胆固醇和 卵磷脂的混合物浓度达到0. 0125g/ml，再加入浓度为0. 01g/ml的胆酸钠溶液，使胆固醇和 卵磷脂的混合物浓度达到0. 011g/ml，将所得液体放置于高压均质机均质10-30min，得到 油相混合液；3)将体积比为2. 7 1的水相混合液与油相混合液在容器中混合均勻并放置在 2-6°C的水浴中2-4小时后，减压蒸馏除去无水乙醇，得到浓缩液；4)将浓缩液冷冻干燥后得到胰岛素脂质体冻干粉。一种治疗II型糖尿病的ロ服胰岛素复合制剂，包括按重量份计的以下组分上述胰岛素脂质体冻干粉1份；葛根4-13 份；天花粉9- 份；地黄5-15 份；人参1-3 份；黄芪3-9 份；山药3-10 份。本发明治疗II型糖尿病的ロ服胰岛素复合制剂，包括按重量份计的以下组分权利要求1或2所述的胰岛素脂质体冻干粉1份；葛根8份；天花粉16份；地黄10 份；人参2份；黄芪6份；山药6份。一种治疗II型糖尿病的ロ服胰岛素复合制剂的制备方法，包括以下步骤按比例 称取ロ服胰岛素复合制剂中的各组分并混合均勻，粉碎过80目筛，湿法制粒，将湿颗粒于 60 70°C烘干，干颗粒用20目筛整粒，灌装成胶囊。上述胰岛素脂质体冻干粉在制备治疗II型糖尿病的药物中的应用。上述ロ服胰岛素复合制剂在制备治疗II型糖尿病的药物中的应用。本发明添加葛根、天花粉、地黄、人參、黄芪、山药中药材作为辅料，其中葛根味甘、辛，凉；归脾、胃经。功能与主治解肌退热，生律，透疹，升阳止泻。《本 草纲目》载葛根，性凉、气平、味甘，具清热、降火、排毒诸功效。天花粉生律，止渴，降火，润燥，排脓，消肿。用于热病烦渴，肺热燥咳，内热消渴， 疮疡肿毒。《本草备要》降火润燥，滑痰解渴，古方多用治消渴病(即糖尿病)。行水通经， 胃热疸黄，ロ燥唇干，肿毒发背，乳痈疮痔。《医林纂要》补肺，敛气，降火，宁心，兼泻肝郁， 缓肝急，清膀胱热，止热淋小便短数，除阳明湿热。地黄滋阴，养血。治阴虚发热，消渴，吐血，衄血，血崩，月经不调，胎动不安，阴伤 便秘。①《本经》主折跌绝筋，伤中，逐血痹，填骨髄，长肌肉，作汤除寒热积聚，除痹。生者 尤良。②《别录》主男子五劳七伤，女子伤中，胞漏下血，破恶血，溺血，利大小肠，去胃中宿食，补五脏，内伤不足，通血脉，益气力，利耳目。③《药性论》补虚损，温中下气，通血脉，治产后腹痛，主吐血不止。④《日华子本草》治惊悸劳劣，心肺损，吐血，鼻衄，妇人崩中血晕， 助筋骨。⑤王好古主心病，掌中热痛，痹气痿蹙，嗜卧，足下热而痛。⑥《本草从新》治血虚发热，常觉饥馁，倦怠嗜卧。人参大补元气，固脱生津，安神。《医学启源》记录人参治脾胃阳气不足及肺气促，短气、少气，补中缓中，泻肺脾胃中火邪。《主治秘要》记录人参补元气，止泻，生津液。 《滇南本草》记录人参治阴阳不足，肺气虚弱。补气固表，利尿托毒，排脓，敛疮生肌。用于气虚乏力，食少便溏，中气下陷，久泻脱肛，便血崩漏，表虚自汗，气虚水肿黄芪痈疽难溃，久溃不敛，血虚痿黄，内热消渴；慢性肾炎蛋白尿，糖尿病。山药补脾养胃，生津益肺，补肾涩精。用于脾虚食少，久泻不止，肺虚喘咳，肾虚遗精，带下，尿频，虚热消渴。本发明提供的胰岛素脂质体冻干粉的包埋率高，胰岛素的包埋率均在90%以上； 含有该胰岛素脂质体冻干粉的口服胰岛素复合制剂稳定性好，保存对个月后，口服胰岛素复合制剂中的胰岛素含量仍保持了 99%以上，而胰岛素脂质体的包埋率与0个月时相比， 仅降低了 2%左右，说明包埋在脂质体中的胰岛素泄露的情况不显著；由于包埋率高、稳定性好使得该口服胰岛素复合制剂便于工业化生产。胰岛素脂质体包埋过程在做包膜的过程中选用无水乙醇作为溶剂较用乙醚、氯仿作为溶剂毒副作用小，且形成包膜与胰岛素溶液结合力强。
具体实施例方式实施例1胰岛素脂质体冻干粉的制备1)将IOOmg胰岛素加入30ml 0. OlM的HCl水溶液中充分溶解，再加入200ml的 pH6. 5,0. IM的磷酸盐缓冲液混合均勻，再加入IOml浓度为0. 01g/ml胆酸钠溶液混合均勻， 得到水相混合液；2)将胆固醇0. 5g、卵磷脂0. 5g共溶于40ml无水乙醇中，充分溶解混合均勻，再加上40ml浓度为0. 01g/ml的甘露醇溶液和IOml浓度为0. 01g/ml的胆酸钠溶液，将所得液体放置于高压均质机均质lOmin，得到油相混合液；3)将上述水相混合物和油相混合物倒入容器中混合均勻并放在2V的水浴中2小时后，减压蒸去无水乙醇，得到浓缩液；4)将浓缩液冷冻干燥后得到胰岛素脂质体冻干粉。实施例2 口服胰岛素复合制剂的制备按重量份计，将实施例1所得胰岛素脂质体冻干粉作为1份，再加入4份葛根、9份天花粉、5份地黄、1份人参、3份黄芪、3份山药混合均勻，粉碎过80目筛，湿法制粒，将湿颗粒于60°C烘干，干颗粒用20目筛整粒，灌装成胶囊。实施例3胰岛素脂质体冻干粉的制备1)将400mg胰岛素加入150ml 0. 02M的HCl水溶液中充分溶解，再加入1000ml、 pH7. 5的0. 2M磷酸盐缓冲液混合均勻，再加入60ml浓度为0. 02g/ml胆酸钠溶液混合均勻， 得到水相混合液；2)将胆固醇2. 5g、卵磷脂7. 5g共溶于450ml无水乙醇中，充分溶解混合均勻，再加上400ml浓度为0. 02g/ml的甘露醇溶液和40ml浓度为0. 02g/ml的胆酸钠溶液，将所得液体放置于高压均质机均质30min，得到油相混合液；3)将上述所得水相混合液和油相混合液倒入容器中混合均勻并放置在6°C的水浴中4小时后，减压蒸去无水乙醇，得到浓缩液；4)将浓缩液冷冻干燥后得到胰岛素脂质体冻干粉。实施例4 口服胰岛素复合制剂的制备按重量份计，将实施例3所得胰岛素脂质体冻干粉作为1份，再加入13份葛根、29 份天花粉、15份地黄、3份人参、9份黄芪、10份山药混合均勻，粉碎过80目筛，湿法制粒，将湿颗粒于70°C烘干，干颗粒用20目筛整粒，灌装成胶囊。实施例5胰岛素脂质体冻干粉的制备1)将200mg胰岛素加入70ml 0. OlM的HCl水溶液中充分溶解，再加入400ml、 pH7. 0的0. 2M磷酸盐缓冲液混合均勻，再加入20ml浓度为0. 01g/ml胆酸钠溶液混合均勻， 得到水相混合液；2)将胆固醇0. 5g、卵磷脂1. 5g共溶于IOOml无水乙醇中，充分溶解混合均勻，再加上60ml浓度为0. 02g/ml的甘露醇溶液和20ml浓度为0. 01g/ml的胆酸钠溶液，将所得液体放置于高压均质机均质20min，得到油相混合液；3)将上述所得水相混合液和油相混合液倒入容器中混合均勻并放置在6°C的水浴中3小时后，减压蒸去无水乙醇，得到浓缩液；4)将浓缩液冷冻干燥后得到胰岛素脂质体冻干粉。实施例6 口服胰岛素复合制剂的制备按重量份计，将实施例5所得胰岛素脂质体冻干粉作为1份，再加入8份葛根、16 份天花粉、10份地黄、2份人参、6份黄芪、6份山药混合均勻，粉碎过80目筛，湿法制粒，将湿颗粒于65°C烘干，干颗粒用20目筛整粒，灌装成胶囊。实施例7胰岛素脂质体冻干粉的制备1)将270mg胰岛素加入IOOml 0. OlM的HCl水溶液中充分溶解，再加入500ml、 pH7. O的0. IM磷酸盐缓冲液混合均勻，再加入30ml浓度为0. 01g/ml胆酸钠溶液混合均勻， 得到水相混合液；2)将胆固醇1. 5g、卵磷脂1. 5g共溶于160ml无水乙醇中，充分溶解混合均勻，再加上80ml浓度为0. 01g/ml的甘露醇溶液和30ml浓度为0. 01g/ml的胆酸钠溶液，将所得液体放置于高压均质机均质20min，得到油相混合液；3)将上述所得水相混合液和油相混合液倒入容器中混合均勻并放置在6°C的水浴中3小时后，减压蒸去无水乙醇，得到浓缩液；4)将浓缩液冷冻干燥后得到胰岛素脂质体冻干粉。实施例8 口服胰岛素复合制剂的制备按重量份计，将实施例7所得胰岛素脂质体冻干粉作为1份，再加入8份葛根、16 份天花粉、10份地黄、2份人参、6份黄芪、6份山药混合均勻，粉碎过80目筛，湿法制粒，将湿颗粒于65°C烘干，干颗粒用20目筛整粒，灌装成胶囊。实施例9胰岛素脂质体冻干粉的胰岛素包埋率检测精确称取实施例2、4、6和8中所得胶囊的内容物各2. 5g，分别加入三蒸水IOml使内容物均勻分散且使冻干粉溶解，在低温离心机中4°C、12000rpm分别离心IOmin去除中药粉末，取上清液，分别用截留分子量为12000的滤膜进行超滤，游离胰岛素溶液可通过滤膜，分别测量各游离胰岛素溶液体积，依中华人民共和国药典2010年版二部胰岛素检验方法采用HPLC法测定游离胰岛素浓度，色谱条件如下。包埋率=(1-游离胰岛素浓度X游离胰岛素溶液体积/总胰岛素质量)X 100%，其中总胰岛素质量是指在实施例1、3、5、7中进行包埋时，投入包埋体系中总的胰岛素质量。包埋率检测结果见表1。色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0. 2mo 1/L硫酸盐缓冲液(取无水硫酸钠28. 4g，加水溶解后，加磷酸2. 7ml、水800ml，用乙醇胺调节pH值至2. 3，加水至 IOOOml)-乙腈(体积比74 26))为流动相，流速为1. Oml/min ；柱温为40°C ；检测波长 214nm。表1胰岛素脂质体冻干粉包埋率检测结果
样品包埋率实施例291. 7%实施例491. 2%实施例692. 0%实施例891. 5%结果表明胰岛素脂质体冻干粉中能够包埋90%以上的胰岛素，包埋率高。实施例10 口服胰岛素复合制剂中胰岛素稳定性的检测将实施例2、4、6和8中所得口服胰岛素复合制剂置于温度25士2°C、湿度60% 士 10%的条件下保存，于0、3、6、9、12、18、对个月分别取样。精确称取实施例2、4、6和8中所得胶囊的内容物各2. 5g，加入IOml的0. lmol/L盐酸水溶液使内容物均勻分散且使冻干粉溶解，将其静置过夜使脂质体破裂，在低温离心机中4°C、12000rpm分别离心IOmin去除中药粉末，取上清液，分别测量各上清液体积，依中华人民共和国药典2010年版二部胰岛素检验方法采用HPLC法测定上清液中胰岛素浓度。保留的胰岛素含量百分比=上清液中胰岛素浓度X上清液体积/总胰岛素质量X100%，其中总胰岛素质量是指在实施例1、3、 5、7中进行包埋时，投入包埋体系中总的胰岛素质量。具体检验结果见表2。表2 口服胰岛素复合制剂中胰岛素稳定性检测结果
权利要求
1.一种胰岛素脂质体冻干粉，其特征在于按照以下步骤制备1)将胰岛素加入到0.01-0. 02M的HCl水溶液中充分溶解，使胰岛素的浓度为 2. 6-3. 4g/l，再加入pH为6. 5-7. 5,0. 1-0. 2M的磷酸盐缓冲液混合均勻，使胰岛素的浓度达到0. 34-0. 45g/l，再加入浓度为0. 01-0. 02g/ml胆酸钠溶液，使胰岛素的浓度达到 0. 33-0. 43g/l，得到水相混合液；2)将质量比为1 (1- 的胆固醇和卵磷脂的混合物共溶于无水乙醇中，充分溶解混合均勻，使混合物的浓度为0. 018-0. 025g/ml，再加上浓度为0. 01-0. 02g/ml的甘露醇水溶液，使胆固醇和卵磷脂的混合物浓度达到0. 011-0. 013g/ml，再加入浓度为0. 01-0. 02g/ml 的胆酸钠溶液，使胆固醇和卵磷脂的混合物浓度达到0. 011-0. 012g/ml，将所得液体放置于高压均质机均质10-30min，得到油相混合液；3)将体积比为(1.3-2.9) 1的水相混合液与油相混合液在容器中混合均勻并放置在 2-6°C的水浴中2-4小时后，减压蒸馏除去无水乙醇，得到浓缩液；4)将浓缩液冷冻干燥后得到胰岛素脂质体冻干粉。
2.根据权利要求1所述的胰岛素脂质体冻干粉，其特征在于按照以下步骤制备1)将胰岛素加入到0.OlM的HCl水溶液中充分溶解，使胰岛素的浓度为2. 9g/l，再加入pH为7. 0,0. 2M的磷酸盐缓冲液混合均勻，使胰岛素的浓度达到0. 42g/l，再加入浓度为 0. 01g/ml胆酸钠溶液，使胰岛素的浓度达到0. 40g/l，得到水相混合液；2)将质量比为1 3的胆固醇和卵磷脂的混合物溶于无水乙醇中，充分溶解混合均勻， 使混合物的浓度为0. 020g/ml，再加上浓度为0. 02g/ml的甘露醇水溶液，使胆固醇和卵磷脂的混合物浓度达到0. 0125g/ml，再加入浓度为0. 01g/ml的胆酸钠溶液，使胆固醇和卵磷脂的混合物浓度达到0. 011g/ml，将所得液体放置于高压均质机均质10-30min，得到油相混合液；3)将体积比为2.7 1的水相混合液与油相混合液在容器中混合均勻并放置在2-6°C 的水浴中2-4小时后，减压蒸馏除去无水乙醇，得到浓缩液；4)将浓缩液冷冻干燥后得到胰岛素脂质体冻干粉。
3.一种治疗II型糖尿病的口服胰岛素复合制剂，其特征在于包括按重量份计的以下组分权利要求1或2所述的胰岛素脂质体冻干粉1份； 葛根4-13份；天花粉9- 份；地黄5-15份；人参1-3份；黄芪3-9份；山药3-10份。
4.根据权利要求3所述治疗II型糖尿病的口服胰岛素复合制剂，其特征在于包括按重量份计的以下组分权利要求1或2所述的胰岛素脂质体冻干粉1份； 葛根8份；天花粉16份；黄参芪药地人黄山10份；2份； 6份； 6份。
5.一种如权利要求3所述的治疗II型糖尿病的口服胰岛素复合制剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤按比例称取口服胰岛素复合制剂中的各组分并混合均勻，粉碎过80 目筛，湿法制粒，将湿颗粒于60 70°C烘干，干颗粒用20目筛整粒，灌装成胶囊。
6.一种如权利要求4所述的治疗II型糖尿病的口服胰岛素复合制剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤按比例称取口服胰岛素复合制剂中的各组分并混合均勻，粉碎过80 目筛，湿法制粒，将湿颗粒于60 70°C烘干，干颗粒用20目筛整粒，灌装成胶囊。
7.根据权利要求1或2所述的胰岛素脂质体冻干粉在制备治疗II型糖尿病的药物中的应用。
8.根据权利要求3所述的口服胰岛素复合制剂在制备治疗II型糖尿病的药物中的应用。
9.根据权利要求4所述的口服胰岛素复合制剂在制备治疗II型糖尿病的药物中的应用。
全文摘要
本发明涉及一种用于治疗II型糖尿病的胰岛素脂质体冻干粉、口服胰岛素复合制剂及其制备方法与应用，胰岛素脂质体冻干粉包埋率高，口服胰岛素复合制剂稳定性好、便于工业化生产。本发明胰岛素脂质体冻干粉按照以下步骤制备将胰岛素加入到HCl水溶液中，再加入磷酸盐缓冲液和胆酸钠溶液，得到水相混合液；将胆固醇和卵磷脂共溶于无水乙醇中，再加上甘露醇水溶液和胆酸钠溶液，均质10-30min，得到油相混合液；将水相混合液与油相混合液混合均匀并放置在2-6℃的水浴中，减压蒸馏，得到浓缩液；将浓缩液冷冻干燥。
文档编号A61K36/8945GK102319216SQ20111028530
公开日2012年1月18日 申请日期2011年9月23日 优先权日2011年9月23日
发明者王志萍, 范圣刚 申请人:范圣刚