专利名称：山楂叶提取物的制备方法
技术领域：
本发明属于山楂叶提取领域；具体涉及山楂叶提取物的制备方法。
背景技术：
山g口十为!^蔽禾斗山g属植物山里红· Crataegus pinnatifida Bunge. var. major NE. Br.或山楂Crataegus pinnatifida Bge.的干燥叶，山楂叶用于活血化淤，理气通脉。 早在东晋《肘后方》中就有山楂叶“茎叶煮汁，洗漆疮”的记载，广西、江西的地方药材标准均载有山楂叶，2005年版《中国药典》也正式收载山楂叶。随着近年来被广泛用于治疗心血管疾病，山楂叶的药理学研究有了较大的进展，现代药理学认为山楂叶能防治心血管疾病， 具有扩张血管、增加冠脉血流量、改善心脏活力、兴奋中枢神经系统、降低血压和胆固醇、软化血管及利尿和镇静作用；山楂叶黄酮还有强心作用，对老年性心脏病也有益处；山楂叶有活血化淤的功效，有助于解除局部淤血状态，对跌打损伤有辅助疗效。现代药物化学研究认为山楂叶总黄酮是山楂叶心脑血管药理作用的物质基础，随着研究的不断深入，山楂叶提取物已广泛的适用于临床。例如益心酮片等。现在应用的山楂叶总黄酮制备方法较多，多采用乙醇提取、浓缩，水沉淀再采用有机溶剂(如醋酸乙酯或正丁醇)萃取，或者采用大孔树脂纯化；或者几种方法联合使用， 工艺复杂，使用有机溶剂萃取，制造成本高，生成环境与设备要求高；使用大孔树脂纯化的提取物，提取物中的鞣质大分子物质难以完全去除，制备注射剂时，超滤技术虽能去除大分子物质，但提取物超滤处理后总黄酮含量大大降低难以符合注射剂的要求。另外，还有采用水温浸提取，浓缩，乙醇沉淀，静置并冷藏，回收乙醇，水洗，静置并冷藏，过滤，过聚酰胺层析柱，可制备总黄酮大于80%的提取物。该工艺中乙醇处理对于大分子物质如蛋白、多糖效果较好，此类成分采用高浓度醇解吸树脂柱时，同样除去，但对于鞣质类物质效果并不好， 因此意义不大，可取消该步骤。同时聚酰胺对酸性物质吸附较好，但中性或碱性环境聚酰胺吸附均较差，大量的水洗脱即可使黄酮苷流失，水洗用α "萘酚浓硫酸试剂判定终点欠妥， 醛糖及苷类均显阳性，极易导致黄酮苷类成分流失。现有山楂叶提取物的制备方法存在成本高、总黄酮含量低的技术问题。
发明内容
本发明要解决现有山楂叶提取物的制备方法存在成本高、总黄酮含量低的技术问题；而提供山楂叶提取物的制备方法。本发明中山楂叶提取物的制备方法是按下述步骤进行的步骤一、取IOOkg山楂叶，加入水，水的质量是山楂叶的16 20倍，然后煎煮1小时，过滤，收集煎煮液；步骤二、 向步骤一过滤后的滤渣中加水，水的用量是滤渣质量的12 16倍，然后煎煮1小时后过滤收集煎煮液，合并两次煎煮液，再浓缩至200kg 250kg，放冷，得到浓缩提取液；步骤三、将步骤二获得的浓缩提取液用盐酸溶液调pH值至2 3，然后静置12 24小时，取上清液后将残渣离心，合并上清液；步骤四、将合并的上清液过聚酰胺树脂柱，过聚酰胺树脂柱的上样流速为O. 5BV/h，再用去离子水以2. 5 3BV/h的流速进行洗脱，去离子水的洗脱量为 6BV，水洗液弃去后使用体积浓度为55% 85%的乙醇溶液以2 2. 5BV/h的流速洗脱树脂柱，乙醇溶液的洗脱量为5BV，收集乙醇洗脱液；步骤五、对乙醇洗脱液进行减压蒸馏回收乙醇，用氢氧化钠溶液调pH值6. 0 6. 5，干燥，即得到山楂叶提取物。本发明方法采用水提取，较乙醇提取节约成本；同时取消乙醇沉淀的工艺和冷藏工序，提取浓缩液采用酸处理，此操作可有效去除鞣质和酸性大分子物质，酸处理后提取液直接过树脂柱，同时酸性环境可尽可能确保黄酮类成分在聚酰胺树脂上的吸附效果，保证总黄酮尤其是黄酮苷类成分不随水洗而流失，采用较高浓度乙醇解吸，同样可起到醇沉淀的效果，将部分聚酰胺树脂吸附的醇不溶性大分子物质滞留于树脂柱上。使用本发明方法制备的山楂叶提取物总黄酮含量大于90%，能够有效的去除鞣质，符合中药注射剂的技术要求。省去乙醇沉淀，冷藏的工艺步骤，不采用有机溶剂处理，制造方法更加简单，更加节约制造成本。
具体实施例方式本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式
，还包括各具体实施方式
间的任意组合。
具体实施方式
一本实施方式中山楂叶提取物的制备方法是按下述步骤进行的步骤一、取IOOkg山楂叶，加入水，水的质量是山楂叶的16 20倍，然后煎煮1小时，过滤，收集煎煮液；步骤二、向步骤一过滤后的滤渣中加水，水的用量是滤渣质量的12 16倍，然后煎煮1小时后过滤收集煎煮液，合并两次煎煮液，再浓缩至200kg 250kg，放冷，得到浓缩提取液；步骤三、将步骤二获得的浓缩提取液用盐酸溶液调pH值至2 3，然后静置12 24小时，取上清液后将残渣离心，合并上清液；步骤四、将合并的上清液过聚酰胺树脂柱，过聚酰胺树脂柱的上样流速为0. 5BV/ h，再用去离子水以2. 5 3BV/h的流速进行洗脱，去离子水的洗脱量为6BV，水洗液弃去后使用体积浓度为55% 85%的乙醇溶液以2 2. 5BV/h的流速洗脱树脂柱，乙醇溶液的洗脱量为5BV，收集乙醇洗脱液；步骤五、对乙醇洗脱液进行减压蒸馏回收乙醇，用氢氧化钠溶液调pH值6.0 6. 5，干燥，即得到山楂叶提取物。本实施方式所述方法制备的山楂叶提取物总黄酮含量大于90%。
具体实施方式
二 本实施方式与具体实施方式
一不同的是步骤三中所述盐酸溶液的质量浓度为10%。其它步骤和参数与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
三本实施方式与具体实施方式
一或二不同的是步骤四所述乙醇溶液的体积浓度为60% 80%。其它步骤和参数与具体实施方式
一或二相同。
具体实施方式
四本实施方式与具体实施 方式一至或二不同的是步骤四所述的乙醇溶液的体积浓度为80%。其它步骤和参数与具体实施方式
一或二相同。
具体实施方式
五本实施方式与具体实施方式
一至四之一不同的是步骤五中所述氢氧化钠溶液的质量浓度为10%。其它步骤和参数与具体实施方式
一至四之一相同。
具体实施方式
六本实施方式与具体实施方式
一至五之一不同的是步骤五中所述干燥系减压干燥或冷冻干燥。 其它步骤和参数与具体实施方式
一至五之一相同。采用下述试验验证发明效果 试验一方法如下山楂叶100kg，加水20倍量，煎煮1小时，收集煎煮液，再加水 16倍量，煎煮1小时，合并两次煎煮液；浓缩至约230kg，放冷，用10 %盐酸溶液调pH值至 2. 5，静置12小时，取上清液，残渣离心，收集上清液上清液合并，过聚酰胺(200kg湿重)树脂柱，上样流速0. 5BV/h,上样完成用去离子水洗脱6BV，流速2. 5 3BV/h，水洗液弃去；使用55%乙醇溶液洗脱树脂柱5BV，流速2 2. 5BV/h,收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，调pH 值6. 0-6. 5，浓缩至相对密度1. 20 1. 25，干燥，即得山楂叶提取物，山楂叶提取物总黄酮含量大于94. 8%，收率1.78%。试验二 方法如下山山楂叶100kg，加水18倍量，煎煮1小时，收集煎煮液，再加水14倍量，煎煮1小时，合并两次煎煮液；浓缩至约200kg，放冷，用10%盐酸溶液调pH值至2.0，静置12小时，取上清液，残渣离心，收集上清液上清液合并，过聚酰胺(200kg湿重) 树脂柱，上样流速0. 5BV/h，上样完成用去离子水洗脱6BV，流速2. 5 3BV/h，水洗液弃去； 使用70%乙醇溶液洗脱树脂柱5BV，流速2 2. 5BV/h，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，调 pH值6. 0-6. 5，浓缩至相对密度1. 20 1. 25，干燥，即得山楂叶提取物，山楂叶提取物总黄酮含量大于92. 5%，收率2. 10%。试验三方法如下山楂叶100kg，加水16倍量，煎煮1小时，收集煎煮液，再加水 12倍量，煎煮1小时，合并两次煎煮液；浓缩至约250kg，放冷，用10%盐酸溶液调pH值至 3.0，静置12小时，取上清液，残渣离心，收集上清液上清液合并，过聚酰胺(200kg湿重)树脂柱，上样流速0. 5BV/h,上样完成用去离子水洗脱6BV，流速2. 5 3BV/h，水洗液弃去；使用85%乙醇溶液洗脱树脂柱5BV，流速2 2. 5BV/h,收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，调pH 值6. 0-6. 5，浓缩至相对密度1. 20 1. 25，干燥，即得山楂叶提取物，山楂叶提取物总黄酮含量大于95. 2%，收率1. 95%。试验四方法如下山楂叶100kg，加水20倍量，煎煮1小时，收集煎煮液，再加水 16倍量，煎煮1小时，合并两次煎煮液；浓缩至约200kg，放冷，用10 %盐酸溶液调pH值至 2. 5，静置12小时，取上清液，残渣离心，收集上清液上清液合并，过聚酰胺(200kg湿重)树脂柱，上样流速0. 5BV/h,上样完成用去离子水洗脱6BV，流速2. 5 3BV/h，水洗液弃去；使用80%乙醇溶液洗脱树脂柱5BV，流速2 2. 5BV/h,收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，调pH 值6. 0 .5，浓缩至相对密度1. 20 1. 25，干燥，即得山楂叶提取物，山楂叶提取物总黄酮含量大于94. 8 %，收率2. 34%。
权利要求
1.山楂叶提取物的制备方法，其特征在于山楂叶提取物的制备方法是按下述步骤进行的步骤一、取IOOkg山楂叶，加入水，水的质量是山楂叶的16 20倍，然后煎煮1小时， 过滤，收集煎煮液；步骤二、向步骤一过滤后的滤渣中加水，水的用量是滤渣质量的12 16倍，然后煎煮 1小时后过滤收集煎煮液，合并两次煎煮液，再浓缩至200kg 250kg，放冷，得到浓缩提取液；步骤三、将步骤二获得的浓缩提取液用盐酸溶液调pH值至2 3，然后静置12 24小时，取上清液后将残渣离心，合并上清液；步骤四、将合并的上清液过聚酰胺树脂柱，过聚酰胺树脂柱的上样流速为每小时0. 5 柱体积，再用去离子水以每小时2. 5 3柱体积的流速进行洗脱，去离子水的洗脱量为6倍柱体积，水洗液弃去后使用体积浓度为55% 85%的乙醇溶液以每小时2 2. 5柱体积的流速洗脱树脂柱，乙醇溶液的洗脱量为5倍柱体积，收集乙醇洗脱液；步骤五、对乙醇洗脱液进行减压蒸馏回收乙醇，用氢氧化钠溶液调pH值6. 0 6. 5，干燥，即得到山楂叶提取物。
2.根据权利要求1所述的山楂叶提取物的制备方法，其特征在于步骤三中所述盐酸溶液的质量浓度为10%。
3.根据权利要求2所述的山楂叶提取物的制备方法，其特征在于步骤四所述乙醇溶液的体积浓度为60% 80%。
4.根据权利要求2所述的山楂叶提取物的制备方法，其特征在于步骤四所述的乙醇溶液的体积浓度为80%。
5.根据权利要求1 4任一项权利要求所述的山楂叶提取物的制备方法，其特征在于步骤五中所述氢氧化钠溶液的质量浓度为10%。
6.根据权利要求5所述的山楂叶提取物的制备方法，其特征在于步骤五中所述干燥系减压干燥或冷冻干燥。
全文摘要
山楂叶提取物的制备方法，它属于山楂叶提取领域。本发明要解决现有山楂叶提取物的制备方法存在成本高、总黄酮含量低的技术问题。方法如下步骤一、取山楂叶，加入水，然后煎煮，过滤；步骤二、向滤渣中加水，然后煎煮后过滤，合并两次煎煮液，浓缩，放冷；步骤三、调pH值至2～3，静置，合并上清液；步骤四、过聚酰胺树脂柱，用去离子水进行洗脱，乙醇溶液洗脱；步骤五、减压回收乙醇，调pH值6.0～6.5，干燥，即得到山楂叶提取物。本发明方法制备的山楂叶提取物总黄酮含量大于90％。省去乙醇沉淀，冷藏的工艺步骤，不采用乙醇以外的有机溶剂处理，制造方法更加简单，更加节约制造成本。
文档编号A61K127/00GK102349951SQ20111032595
公开日2012年2月15日 申请日期2011年10月24日 优先权日2011年10月24日
发明者付饶, 单钰毓, 吕晓霞, 崔仁海, 李文春, 李殿明, 李长新, 王英新, 苏德龙, 裴福成, 解黎雯 申请人:哈药集团中药二厂