专利名称：通过用微细分的二氧化硅处理去除丝氨酸蛋白酶的制作方法
通过用微细分的二氧化硅处理去除丝氨酸蛋白酶相关申请的交叉引用本申请要求2010年5月26日提交且作为澳大利亚专利号2010202125颁布的AU专利申请号2010202125、2010年5月27日提交的美国专利申请序号12/789，365以及2010年7月23日提交的美国专利申请序号12/842，944的优先权，所述文献的公开内容据此以全文引用的方式并入本文中以便达成所有目的。
背景技术：
源自血浆的血液产品不仅用以治疗多种血液病症，而且用于治疗其它来源的疾病。例如，1952年首次使用来自人类血浆的免疫球蛋白(IgG)产品来治疗免疫缺乏症。从那以后，IgG制剂被广泛用于至少三个主要类别的医学病状中(I)免疫缺乏症，如X连锁无Y球蛋白血症、低Y球蛋白血症(原发性免疫缺乏症)以及后天免疫力低下病状(继发性免疫缺乏症)，特征为抗体水平低；(2)发炎性和自体免疫性疾病；以及(3)急性感染。同样地，因子H被暗示作为数种人类疾病病况的潜在治疗剂，所述病况包括年龄相关的黄斑变性(AMD)、溶血尿毒症综合症(aHUS)以及膜增生性肾小球肾炎(MPGN)。具体来说，已经表征了因子H的补体控制蛋白(CCP)模块7中的单核苷酸多形现象(SNP)与年龄相关的黄斑变性(AMD)之间的因果关系。研究已显示间α抑制蛋白(IaIp)血浆水平减低与患严重败血症的患者死亡率之间的关联性(Lim等，J Infect Dis. (2003)9 月 15 日;188 (6) : 919-26 和 Opal等，Crit Care Med. (2007) 2月；35 (2) : 387-92)。此外，数种研究已显示施用IaIp可降低与败血症和败血性休克相关的死亡率(Jourdain等，Am J Respir Crit Care Med.(1997) 12 月;156 (6) :1825-33 ;Yang 等，Crit Care Med. (2002) 3 月;30 (3) :617-22 ；Lim等，JInfect Dis. (2003)9 月 15 日;188 (6) : 919-26 ;以及 Wu 等，Crit Care Med. (2004)8月；32(8) :1747-5 2;所述出版物的公开内容是以全文引用的方式并入本文中以便达成所有目的)。当制造和配制源自血浆的生物治疗剂时必须考虑各种安全预防措施。这些措施包括去除和/或使由使用捐赠的血浆所产生的血浆携带的病原体(例如病毒性和细菌性病原体)、抗补体活性以及其它有害污染物灭活的方法。研究表明施用高水平的酰胺水解活性(amidolytic activity)会引起有害血栓栓塞事件(Wolberg AS 等，CoagulationfactorXI is a contaminant in intravenous immunoglobulin preparations. Am JHematol2000;65:30-34 ;和 Alving BM 等，Contact-activated factors: contaminants ofimmunoglobulins preparations with coagulant and vasoactive properties. J LabClin Medl980;96:334-346 ;所述出版物的公开内容据此以全文引用的方式并入本文中以便达成所有目的)。突显这一问题的是在有关血栓栓塞事件的报告增加之后，近来在美国自动撤销OCtagMM* (Octapharma)和欧洲委员会(European Commission)中止OCtagamH和octagaml0%的销售授权。血栓事件增加可能由生物制剂中由丝氨酸蛋白酶和丝氨酸蛋白酶原杂质如因子X1、因子XIa、因子XII以及因子XIIa引起的高水平的酰胺水解活性所致(FDA通知2010年9月23日，自市场自动撤销Octagam [静脉注射用免疫球蛋白(人类)]5%液体制剂；AFSSAPS于2010年9月9日在线公布，检疫隔离所有批次的0ctagam50mg/ml 输注药液(solution pour perfusion) (Octapharma France);以及欧洲药品管理局(European Medicines Agency)于2010年9月23日在线公布的关于中止Octagam(人类正常免疫球蛋白5%和10%)的销售授权的问答)。一般称为凝血因子的专用丝氨酸蛋白酶为凝血级联反应的接触活化与组织因子路径的必要组分。当刺激凝血路径时，作为无活性的酶前体的丝氨酸蛋白酶原成为可催化下一个蛋白酶原活化的活化蛋白酶，从而引起活化级联反应。这种凝血级联反应以活化凝血酶(因子IIa)和因子XIIIa而终结，凝血酶和因子XIIIa功能分别在于使纤维蛋白原(因子I)转化成纤维蛋白(因子Ia)和使纤维蛋白交联而形成纤维蛋白凝块。还称为固有凝血路径的接触活化路径分别由激肽释放酶和因子XIIa(FXIIa)自前激肽释放酶和因子XII的活化开始。所活化的丝氨酸蛋白酶FXIIa裂解因子XI (FXI)，使酶原转化成因子XIa(FXIa)，即一种活性丝氨酸蛋白酶，其会参与因子Xa(FXa)的后续活化。由于对源自血浆的蛋白质组合物中存在丝氨酸蛋白酶和丝氨酸蛋白酶原的担忧不断增加，因此本领域中仍存在对降低这些污染物并且尤其是FX1、FXIa、FXII以及FXIIa的水平的方法的需要。本发明通过提供所述方法和丝氨酸蛋白酶与丝氨酸蛋白酶原水平降低的源自血浆的蛋白质组合物来实现这些和其它需要。发明概述一方面，本发明是基于以下令人意外的发现丝氨酸蛋白酶和丝氨酸蛋白酶原，并且具体来说FX1、FXIa、FXII以及FXIIa可以通过用微细分的二氧化硅(SiO2)处理而自源自血浆的蛋白质组合物去除。以此方式，本发明提供降低源自血浆的蛋白质组合物的丝氨酸蛋白酶活性、丝氨酸蛋白酶含量以及丝氨酸蛋白酶原含量的方法。还提供丝氨酸蛋白酶活性、丝氨酸蛋白酶含量以及丝氨酸蛋白酶原含量降低的治疗性源自血浆的蛋白质组合物，以及通过施用所述组合物来治疗或预防疾病的方法。
在第一方面中，本发明提供一种用于降低源自血浆的目标蛋白质组合物中丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的量的方法，该方法包括以下步骤(a)在适合于结合至少一种丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的条件下使所述组合物与微细分的二氧化硅(SiO2)接触；和(b)使SiO2与组合物分离以去除所结合的丝氨酸蛋白酶。在一个优选实施方案中，丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原为因子XIa(FXIa)、因子XIIa(FXIIa)、因子XI (FXI)或因子XII(FXII)。在某些实施方案中，上述方法进一步包括以下步骤执行第一目标蛋白质浓化步骤以形成第一浓化组合物，然后使所述组合物与微细分的二氧化硅(SiO2)接触。在一个实施方案中，第一目标蛋白质浓化步骤是蛋白质沉淀步骤。在一个特定实施方案中，蛋白质沉淀步骤是醇分离步骤。在另一个实施方案中，第一目标蛋白质浓化步骤是超滤/透滤步骤。在上述方法的其它实施方案中，所述方法进一步包括以下步骤执行第二目标蛋白质浓化步骤，然后使浓化组合物与微细分的二氧化硅(SiO2)接触。在一个实施方案中，第二目标蛋白质浓化步骤是蛋白质沉淀步骤。在一个特定实施方案中，蛋白质沉淀步骤是醇分离步骤。在另一个实施方案中，第二目标蛋白质浓化步骤是超滤/透滤步骤。在另一个实施方案中，第二目标蛋白质浓化步骤是色谱浓化步骤。
在上述方法的其它实施方案中，所述方法进一步包括以下步骤在使组合物与微细分的二氧化硅(SiO2)接触之后，执行第三目标蛋白质浓化步骤。在一个实施方案中，第三目标蛋白质浓化步骤是蛋白质沉淀步骤。在一个特定实施方案中，蛋白质沉淀步骤是醇分离步骤。在另一个实施方案中，第三目标蛋白质浓化步骤是超滤/透滤步骤。在另一个实施方案中，第三目标蛋白质浓化步骤是色谱浓化步骤。在上述方法的某些实施方案中，色谱浓化步骤包括以下子步骤(i)在适合于结合源自血浆的目标蛋白质的条件下使源自血浆的目标蛋白质组合物与色谱树脂接触；和( )自色谱树脂洗脱源自血浆的目标蛋白质。在一个特定实施方案中，在子步骤(i)中杂质不结合至色谱树脂。在另一个特定实施方案中，在子步骤(i)中杂质结合至色谱树脂，但在子步骤(ii)中不会自色谱树脂洗脱。在上述方法的其它某些实施方案中，色谱浓化步骤包括以下子步骤(i)在适合于结合至少一种杂质的条件下使第一浓化的源自血浆的目标蛋白质组合物与色谱树脂接触；和(ii)使树脂与源自血浆的蛋白质组合物分离，其中在子步骤(i)中源自血浆的目标蛋白质不结合至色谱树脂。在上述包 括色谱浓化步骤的方法的某些实施方案中，色谱树脂选自由以下组成的组阴离子交换树脂、阳离子交换树脂、疏水性相互作用树脂、混合式树脂(mixed moderesin)、羟磷灰石树脂、配位体亲和树脂、免疫亲和树脂以及尺寸排阻树脂。在上述包括色谱浓化步骤的方法的其它某些实施方案中，色谱浓化步骤包括使用尺寸排阻色谱法按大小和/或形状自目标蛋白质分离至少一种杂质。在上述方法的某些实施方案中，源自血浆的目标蛋白质选自免疫球蛋白(Ig)、白蛋白、α-1-抗胰蛋白酶(AlPI)、丁酰胆碱酯酶、补体系统的蛋白质以及间α胰蛋白酶抑制剂(I α I)。在一个特定实施方案中，补体系统的蛋白质选自由因子H(FH)、因子D、补体蛋白C3以及C4结合蛋白组成的组。在上述方法的另一个实施方案中，源自血浆的目标蛋白质组合物是制造中间物。在第二方面中，本发明提供一种用于制备源自血浆的因子H组合物的方法，所述组合物具有降低量的丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原，所述方法包括以下步骤(a)在适合于结合因子H和至少一种丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的条件下使含有因子H和至少一种丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的组合物与微细分的二氧化硅(SiO2)接触；(b)使SiO2与组合物分离；(c)在因子H仍保持结合的溶液条件下自SiO2洗脱丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原；以及(d)自SiO2洗脱因子H。在上述方法的某些实施方案中，丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原自SiO2洗脱，并且因子H仍保持结合的溶液条件包括大于约6. O的pH。在另一个实施方案中，丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原自SiO2洗脱，并且因子H仍保持结合的溶液条件包括大于约6. 5的pH。在另一个实施方案中，丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原自SiO2洗脱，并且因子H仍保持结合的溶液条件包括大于约7. O的pH。在另一个实施方案中，丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原自SiO2洗脱，并且因子H仍保持结合的溶液条件包括至少约7. 5的pH。在上述方法的某些实施方案中，溶液条件包括不大于11. O的pH。在另一个实施方案中，溶液条件包括不大于10. O的pH。在另一个实施方案中，溶液条件包括不大于9. O的pH。
在上述方法的某些实施方案中，丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原自SiO2洗脱，并且因子H仍保持结合的溶液条件包括大于约lOmS/cm的电导率。在上述方法的另一个实施方案中，丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原自SiO2洗脱，并且因子H仍保持结合的溶液条件包括大于约20mS/cm的电导率。在上述方法的另一个实施方案中，丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原自SiO2洗脱，并且因子H仍保持结合的溶液条件包括介于约lOmS/cm与约50mS/cm之间的电导率。在上述方法的另一个实施方案中，丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原自SiO2洗脱，并且因子H仍保持结合的溶液条件包括介于约20mS/cm与约50mS/cm之间的电导率。在第三方面中，本发明提供一种用于制备因子H组合物的方法，所述组合物具有降低量的丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原，所述方法包括以下步骤(a)在适合于结合因子H和至少一种丝氨酸蛋白酶的条件下使含有因子H和至少一种丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的组合物与微细分的二氧化硅(SiO2)接触；(b)使SiO2与组合物分离；以及(c)在丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原仍保持结合至SiO2的条件下自SiO2洗脱因子H。在上述方法的某些实施方案中，因子H自SiO2洗脱，并且丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原仍保持结合的溶液条件包括大于约6. O的pH。在另一个实施方案中，因子H自SiO2洗脱，并且丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原仍保持结合的溶液条件包括大于约6. 5的pH。在另一个实施方案中，因子H自SiO2洗脱，并且丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原仍保持结合的溶液条件包括大于约7. O的pH。在另一个实施方案中，因子H自SiO2洗脱，并且丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原仍保持结合的溶液条件包括至少约7. 5的pH。在上述方法的某些实施方案中，溶液条件包括不大于11. O的pH。在另一个实施方案中，溶液条件包括不大于10. O的pH。在另一个实施方案中，溶液条件包括不大于9. O的pH。在上述方法的某些实施方案中，因子H自SiO2洗脱，并且丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原仍保持结合的溶液条件包括小于约20mS/cm的电导率。在另一个实施方案中，因子H自SiO2洗脱，并且丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原仍保持结合的溶液条件包括小于约lOmS/cm的电导率。在上述 方法的另一个实施方案中，因子H自SiO2洗脱，并且丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原仍保持结合的溶液条件包括介于约2mS/cm与约20mS/cm之间的电导率。在上述方法的另一个实施方案中，因子H自SiO2洗脱，并且丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原仍保持结合的溶液条件包括介于约2mS/cm与约10mS/cm之间的电导率。在第四方面中，本发明提供一种用于制备因子H组合物的方法，所述组合物具有降低量的丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原，所述方法包括以下步骤(a)在适合于结合因子H,但不适合于结合至少一种丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的条件下,使含有因子H和至少一种丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的组合物与微细分的二氧化硅(SiO2)接触；(b)使SiO2与所述组合物分离；以及(c)自SiO2洗脱因子H。在上述方法的某些实施方案中，因子H结合至SiO2，并且丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原不结合至SiO2的溶液条件包括大于约6. O的pH。在另一个实施方案中，因子H结合至SiO2,并且丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原不结合至SiO2的溶液条件包括大于约6. 5的pH。在另一个实施方案中，因子H结合至SiO2,并且丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原不结合至SiO2的溶液条件包括大于约7.0的pH。在另一个实施方案中，因子H结合至SiO2，并且丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原不结合至SiO2的溶液条件包括至少约7. 5的pH。
在上述方法的某些实施方案中，溶液条件包括不大于11. O的pH。在另一个实施方案中，溶液条件包括不大于10. O的pH。在另一个实施方案中，溶液条件包括不大于9. O的pH。在上述方法的某些实施方案中，因子H结合至SiO2，并且丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原不结合至SiO2的溶液条件包括大于约10mS/cm的电导率。在上述方法的另一个实施方案中，因子H结合至SiO2,并且丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原不结合至SiO2的溶液条件包括大于约20mS/cm的电导率。在上述方法的另一个实施方案中，因子H结合至SiO2,并且丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原不结合至SiO2的溶液条件包括介于约10mS/cm与约50mS/cm之间的电导率。在上述方法的另一个实施方案中，因子H结合至SiO2，并且丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原不结合至SiO2的溶液条件包括介于约20mS/cm与约50mS/cm之间的电导率。在第五方面中，本发明提供一种用于制备因子H组合物的方法，所述组合物具有降低量的丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原，所述方法包括以下步骤(a)在适合于结合至少一种丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原，但不适合于结合因子H的条件下使含有因子H和至少一种丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的组合物与微细分的二氧化硅(SiO2)接触，和
(b)使SiO2与组合物分离。在上述方法的某些实施方案中，丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原结合至SiO2，并且因子H不结合至SiO2的溶液条件包括大于约6. O的pH。在另一个实施方案中，丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原结合至SiO2,并且因子H不结合至SiO2的溶液条件包括大于约6. 5的pH。在另一个实施方案中，丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原结合至SiO2，并且因子H不结合至SiO2的溶液条件包括大于约7. O的pH。在另一个实施方案中，丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原结合至SiO2,并且因子H不结合至SiO2的溶液条件包括至少约7. 5的pH。在上述方法的某些实施方案中，溶液条件包括不大于11. O的pH。在另一个实施方案中，溶液条件包括不 大于10. O的pH。在另一个实施方案中，溶液条件包括不大于9. O的pH。在上述方法的某些实施方案中，丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原结合至SiO2，并且因子H不结合至SiO2的溶液条件包括小于约20mS/cm的电导率。在另一个实施方案中，丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原结合至SiO2，并且因子H不结合至SiO2的溶液条件包括小于约10mS/cm的电导率。在上述方法的另一个实施方案中，丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原结合至SiO2,并且因子H不结合至SiO2的溶液条件包括介于约2mS/cm与约20mS/cm之间的电导率。在上述方法的另一个实施方案中，丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原结合至SiO2,并且因子H不结合至SiO2的溶液条件包括介于约2mS/cm与约lOmS/cm之间的电导率。在第六方面中，本发明提供一种用于制备间α胰蛋白酶抑制剂(I α I)组合物的方法，所述组合物具有降低的丝氨酸蛋白酶活性，所述方法包括以下步骤(a)在适合于结合I α I和至少一种丝氨酸蛋白酶的条件下使含有I α I和至少一种丝氨酸蛋白酶的溶液与微细分的二氧化硅(SiO2)接触；(b)使SiO2与组合物分离；(C)在I α I仍保持结合的条件下自SiO2洗脱丝氨酸蛋白酶；以及(d)自SiO2洗脱Ia I。在第七方面中，本发明提供一种用于制备间α胰蛋白酶抑制剂(I α I)组合物的方法，所述组合物具有降低的丝氨酸蛋白酶活性，所述方法包括以下步骤(a)在适合于结合I α I和至少一种丝氨酸蛋白酶的条件下使含有I α I和至少一种丝氨酸蛋白酶的溶液与微细分的二氧化硅(SiO2)接触；(b)使SiO2与组合物分离；以及(C)在丝氨酸蛋白酶仍保持结合至SiO2的条件下自SiO2洗脱I α I。在第八方面中，本发明提供一种用于制备间α胰蛋白酶抑制剂(I α I)组合物的方法，所述组合物具有降低的丝氨酸蛋白酶活性，所述方法包括以下步骤(a)在适合于结合I α I，但不适合于结合至少一种丝氨酸蛋白酶的条件下使含有I α I和至少一种丝氨酸蛋白酶的溶液与微细分的二氧化硅(SiO2)接触；(b)使SiO2与组合物分离；以及(C)自SiO2洗脱Ia I。在第九方面中，本发明提供一种用于制备间α胰蛋白酶抑制剂(I α I)组合物的方法，所述组合物具有降低的丝氨酸蛋白酶活性，所述方法包括以下步骤(a)在适合于结合丝氨酸蛋白酶，但不适合于结合间α胰蛋白酶抑制剂(IaI)的条件下，使含有间α胰蛋白酶抑制剂(Ια I)和至少一种丝氨酸蛋白酶的溶液与微细分的二氧化硅(SiO2)接触；和(b)使SiO2与组合物分离。在上述方面的某些实施方案中，使组合物与SiO2在每克蛋白质至少I克的SiO2的最终浓度下接触。在上述方面的另一个实施方案中，使组合物与SiO2在每克蛋白质至少2克的SiO2的最终浓度下接触。在上述方面的另一个实施方案中，使组合物与SiO2在每克蛋白质至少2. 5克的SiO2的最终浓度下接触。在上述方面的某些实施方案中，丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原是因子XI。在上述方面的另一个实施方案中，丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原是因子XIa。在上述方面的另一个实施方案中，丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原是因子XII。在上述方面的另一个实施方案中，丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原是因子Xlla。在第十方面中，本发明提供一种源自血浆的蛋白质组合物，其是通过包括根据任一上述方面的降低丝氨酸蛋白 酶活性的方法的工艺来制备。在一个实施方案中，组合物被配制用于施用给受试者。在一个特定实施方案中，组合物被配制成用于静脉内、肌肉内或皮下施用。在一个实施方案中，组合物为水性的。在另一个实施方案中，组合物被冻干。在第十一方面中，本发明提供一种用于治疗有需要的受试者的与血浆蛋白质的异常活性相关的疾病的方法，所述方法包括施用根据上述方面的源自血浆的蛋白质组合物。在某些实施方案中，组合物包含选自以下的源自血浆的蛋白质免疫球蛋白(Ig)、白蛋白、α-1-抗胰蛋白酶(AlPI)、丁酰胆碱酯酶、补体系统的蛋白质以及间α胰蛋白酶抑制剂(I α I)。在第十二方面中，本发明提供一种用于制备因子H组合物的方法，所述方法包括以下步骤(a)使含有因子H的悬浮血浆沉淀物部分与微细分的二氧化硅(SiO2)接触；(b)用包含低PH和低电导率的洗涤缓冲液洗涤SiO2 ;以及(c)用包含介于7. O与8. O之间的pH和至少lOmS/cm的电导率的洗脱缓冲液自SiO2洗脱因子H。在特定实施方案中，含有因子H的血浆沉淀物部分是科恩部分(Cohn fraction) II+III沉淀物、科恩部分I+II+III沉淀物、奇斯勒/尼赤曼沉淀物(Kistler/Nitschmann Precipitate) A或奇斯勒/尼赤曼沉淀物B。在某些实施方案中，所述方法进一步包括一或多个选自以下的其它步骤(d)自因子H洗脱中沉淀并去除至少一种杂质；(e)自浓化组合物沉淀并回收因子H; (f)通过阴离子交换色谱法进一步浓化因子H ； (g)通过肝素亲和色谱法进一步浓化因子H ； (h)专用病毒灭活步骤；以及α)通过超滤/透滤浓缩浓化的因子η组合物。在一个实施方案中，本发明提供一种用于降低源自血浆的目标蛋白质组合物中的丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的量的方法，所述方法包括以下步骤(a)在适合于结合至少一种丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的条件下使所述组合物与微细分的二氧化硅(Si02)接触；和(b)使Si02与组合物分离以去除所结合的丝氨酸蛋白酶，其中至少一种丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原是因子XIa(FXIa)、因子XIIa(FXIIa)、因子XI (FXI)或因子XII(FXII)。在上述方法的一个特定实施方案中，所述方法进一步包括以下步骤执行第一目标蛋白质浓化步骤以形成第一浓化组合物，然后使所述组合物与微细分的二氧化硅(Si02)接触。在一个实施方案中，第一目标蛋白质浓化步骤是蛋白质沉淀步骤。在一个特定实施方案中，蛋白质沉淀步骤是醇分离步骤。在另一个特定实施方案中，第一目标蛋白质浓化步骤是超滤/透滤步骤。在上述方法的一个特定实施方案中，所述方法进一步包括以下步骤执行第二目标蛋白质浓化步骤，然后使所述浓化组合物与微细分的二氧化硅(Si02)接触。在一个实施方案中，第二目标蛋白质浓化步骤是蛋白质沉淀步骤。在一个特定实施方案中，蛋白质沉淀步骤是醇分离步骤。在一个实施方案中，第二目标蛋白质浓化步骤是超滤/透滤步骤。在一个实施方案中，第二目标蛋白·质浓化步骤是色谱浓化步骤。在上述方法的一个特定实施方案中，所述方法进一步包括以下步骤执行第三目标蛋白质浓化步骤，然后使所述浓化组合物与微细分的二氧化硅(Si02)接触。在一个实施方案中，第三目标蛋白质浓化步骤是蛋白质沉淀步骤。在一个特定实施方案中，蛋白质沉淀步骤是醇分离步骤。在一个实施方案中，第三目标蛋白质浓化步骤是超滤/透滤步骤。在一个实施方案中，第三目标蛋白质浓化步骤是色谱浓化步骤。在上述方法的一个特定实施方案中，所述色谱浓化步骤包括以下子步骤(i)在适合于结合源自血浆的目标蛋白质的条件下使源自血浆的目标蛋白质组合物与色谱树脂接触；和(ii)自色谱树脂洗脱源自血浆的目标蛋白质。在一个特定实施方案中，在子步骤
(i)中至少一种杂质不结合至色·谱树脂。在另一个特定实施方案中，在子步骤(i)中至少一种杂质结合至色谱树脂，但在子步骤(ii)中不会自色谱树脂洗脱。在上述方法的一个特定实施方案中，所述色谱浓化步骤包括以下子步骤(i)在适合于结合至少一种杂质的条件下使第一浓化的源自血浆的目标蛋白质组合物与色谱树脂接触；和(ii)使树脂与源自血浆的蛋白质组合物分离，其中在子步骤(i)中源自血浆的目标蛋白质不结合至色谱树脂。在上述方法的一个特定实施方案中，色谱树脂选自由以下组成的组阴离子交换树脂、阳离子交换树脂、疏水性相互作用树脂、混合式树脂、羟磷灰石树脂、配位体亲和树月旨、免疫亲和树脂以及尺寸排阻树脂。在一个实施方案中，色谱树脂是阴离子交换树脂。在一个实施方案中，色谱树脂是阳离子交换树脂。在一个实施方案中，色谱树脂是疏水性相互作用树脂。在一个实施方案中，色谱树脂是混合式树脂。在一个实施方案中，色谱树脂是羟磷灰石树脂。在一个实施方案中，色谱树脂是配位体亲和树脂。在一个实施方案中，色谱树脂是免疫亲和树脂。在一个实施方案中，色谱浓化步骤包括使用尺寸排阻色谱法按大小和/或形状自所述目标蛋白质分离至少一种杂质。
在上述方法的一个特定实施方案中，源自血浆的目标蛋白质选自免疫球蛋白(Ig)、白蛋白、α-1-抗胰蛋白酶(AlPI)、丁酰胆碱酯酶、补体系统的蛋白质以及间α胰蛋白酶抑制剂(Ια I)。在一个实施方案中，源自血浆的蛋白质是免疫球蛋白(Ig)。在一个实施方案中，源自血浆的蛋白质是白蛋白。在一个实施方案中，源自血浆的蛋白质是α-l-抗胰蛋白酶。在一个实施方案中，源自血浆的蛋白质是丁酰胆碱酯酶。在一个实施方案中，源自血浆的蛋白质是补体系统的蛋白质。在一个实施方案中，补体系统的蛋白质选自由因子H(FH)、因子D、补体蛋白C3和C4结合蛋白组成的组。在一个实施方案中，源自血浆的蛋白质是间α胰蛋白酶抑制剂。在上述方法的一个特定实施方案中，源自血浆的目标蛋白质组合物为制造中间物。在一个实施方案中，本发明提供一种用于制备源自血浆的因子H组合物的方法，所述组合物具有降低量的丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原，所述方法包括以下步骤(a)在适合于结合因子H和至少一种丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的条件下使含有因子H和至少一种丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的组合物与微细分的二氧化硅(Si02)接触；(b)使Si02与组合物分离；(c)在实质部分的因子H仍保持结合的溶液条件下，自Si02洗脱丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原；以及(d)自Si02洗脱因子H。在上述方法的一个特定实施方案中，因子H和至少一种丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原结合Si02的溶液条件包括低于7. O的pH和小于llmS/cm的电导率。在上述方法的一个特定实施方案中，因子H和至少一种丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原结合Si02的溶液条件包括介于4. 5与6. 5之间的pH和小于6mS/cm的电导率。
在上述方法的一个特定实施方案中，因子H和至少一种丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原结合Si02的溶液条件包括介于4. 5与6. 5之间的pH和介于O. 5mS/cm与5mS/cm之间的电导率。在上述方法的一个特定实施方案中，丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原自Si02洗脱并且实质部分的因子H仍保持结合的溶液条件包括低于7. O的pH和小于llmS/cm的电导率。在上述方法的一个特定实施方案中，丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原自Si02洗脱并且实质部分的因子H仍保持结合的溶液条件包括介于4. 5与6. 5之间的pH和小于6mS/cm的电导率。在上述方法的一个特定实施方案中，丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原自Si02洗脱并且实质部分的因子H仍保持结合的溶液条件包括介于5. O与6. 5之间的pH和介于O. 5mS/cm与5mS/cm之间的电导率。在上述方法的一个特定实施方案中，因子H自Si02洗脱的溶液条件包括至少6mS/cm的离子强度。在上述方法的一个特定实施方案中，因子H自Si02洗脱的溶液条件包括至少llmS/cm的离子强度。在上述方法的一个特定实施方案中，因子H自Si02洗脱的溶液条件包括介于5. O与7. O之间的pH。在上述方法的一个特定实施方案中，因子H自Si02洗脱的溶液条件包括介于7. O与8. O之间的pH和介于4mS/cm与7mS/cm之间的离子强度。在一个实施方案中，本发明提供一种用于制备因子H组合物的方法，所述组合物具有降低量的丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原，所述方法包括以下步骤(a)在适合于结合因子H和至少一种丝氨酸蛋白酶的条件下使含有因子H和至少一种丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的组合物与微细分的二氧化硅(Si02)接触；(b)使Si02与组合物分离；以及
(c)在实质部分的丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原仍保持结合至Si02的条件下，自Si02洗脱因子H。在上述方法的一个特定实施方案中，因子H和至少一种丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原结合Si02的溶液条件包括低于7. O的pH和小于llmS/cm的电导率。在上述方法的一个特定实施方案中，丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原自Si02洗脱并且实质部分的因子H仍保持结合的溶液条件包括介于4. 5与6. 5之间的pH和小于6mS/cm的电导率。在上述方法的一个特定实施方案中，适合于结合因子H和至少一种丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的溶液条件包括介于5. O与6. O之间的pH和介于O. 5mS/cm与5mS/cm之间的电导率。在上述方法的一个特定实施方案中，因子H自Si02洗脱并且实质部分的丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原仍保持结合的溶液条件包括介于5. O与7. O之间的pH和至少IlmS/cm的电导率。在上述方法的一个特定实施方案中，因子H自Si02洗脱并且实质部分的丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原仍保持结合的溶液条件包括介于7. O与8. O之间的pH和介于2mS/cm与10mS/cm之间的电导率。
在上述方法的一个特定实施方案中,溶液条件的电导率介于4mS/cm与7mS/cm之间。在上述方法的一个特定实施方案中，溶液条件的电导率介于5mS/cm与6mS/cm之间。在一个实施方案中，本发明提供用于制备因子H组合物的方法，所述组合物具有降低量的丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原，所述方法包括以下步骤(a)在适合于结合因子H,但不适合于结合实质部分的至少一种丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的条件下,使含有因子H和至少一种丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的组合物与微细分的二氧化硅(Si02)接触；(b)使Si02与组合物分离；以及(C)自Si02洗脱因子H。在上述方法的一个特定实施方案中，因子H结合至Si02，并且实质部分的丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原不结合至Si02的溶液条件包括介于5. O与7. O之间的pH和不大于14mS/cm的电导率。在上述方法的一个特定实施方案中，溶液条件的电导率介于9mS/cm与14mS/cm之间。在一个实施方案中，本发明提供一种用于制备因子H组合物的方法，所述组合物具有降低量的丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原，所述方法包括以下步骤(a)在适合于结合至少一种丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原，但不适合于结合实质部分的因子H的条件下，使含有因子H和至少一种丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的组合物与微细分的二氧化硅(Si02)接触；和(b)使Si02与组合物分离。在上述方法的一个特定实施方案中，丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原结合至Si02，并且实质部分的因子H不结合至Si02的溶液条件包括介于5. O与7. O之间的pH和至少llmS/cm的电导率。在上述方法的一个特定实施方案中，丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原结合至Si02，并且实质部分的因子H不结合至Si02的溶液条件包括介于7. O与8. O之间的pH和介于2mS/cm与10mS/cm之间的电导率。在上述方法的一个特定实施方案中，溶液条件的电导率介于4mS/cm与7mS/cm之间。在上述方法的一个特定实施方案中，溶液条件的电导率介于5mS/cm与6mS/cm之间。在一个实施方案中，本发明提供一种用于制备因子H组合物的方法，所述方法包括以下步骤(a)在适合于结合因子H的条件下，使含有因子H和至少一种丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的组合物与微细分的二氧化硅(Si02)接触；(b)用包含介于5. O与7. O之间的pH和小于4mS/cm的电导率的溶液洗涤Si02 ;以及(c)用包含介于7. O与8. O之间的pH和大于lOmS/cm的电导率的溶液自Si02洗脱因子H。在上述方法的一个特定实施方案中，用于洗涤Si02的溶液包含介于5. 5与6. 5之间的pH。在上述方法的一个特定实施方案中，用于洗涤Si02的溶液包含介于6. O±O. 2之间的pH。在上述方法的一个 特定实施方案中，用于洗脱因子H的溶液包含至少20mS/cm的电导率。在上述方法的一个特定实施方案中，用于洗脱因子H的溶液包含介于25mS/cm与40mS/cm之间的电导率。在上述方法的一个特定实施方案中，含有因子H的起始组合物是悬浮的科恩部分II+III沉淀物，或其等效部分。在上述方法的一个特定实施方案中，含有因子H的起始组合物是悬浮的奇斯勒/尼赤曼沉淀物A,或其等效部分。在上述方法的一个特定实施方案中，含有因子H的起始组合物是悬浮的奇斯勒/尼赤曼沉淀物B,或其等效部分。在上述方法的一个特定实施方案中，所述方法进一步包括以下步骤使至少一种杂质自回收的因子H溶液沉淀，其中因子H不沉淀。在上述方法的一个特定实施方案中，沉淀步骤是PEG沉淀。在上述方法的一个特定实施方案中，PEG沉淀包括用PEG 4000在介于3%与7%之间的最终浓度下沉淀。在上述方法的一个特定实施方案中，PEG 4000的最终浓度是5±0. 5%。在上述方法的一个特定实施方案中，所述方法进一步包括以下步骤使因子H自回收的因子H溶液沉淀。
在上述方法的一个特定实施方案中，沉淀步骤是PEG沉淀。在上述方法的一个特定实施方案中，PEG沉淀包括用PEG 4000在介于10%与15%之间的最终浓度下沉淀。在上述方法的一个特定实施方案中，PEG 4000的最终浓度是12±0. 5%。在上述方法的一个特定实施方案中，所述方法进一步包括以下步骤通过色谱法浓化因子H。在上述方法的一个特定实施方案中，所述色谱浓化步骤包括阴离子交换色谱法。在上述方法的一个特定实施方案中，所述色谱浓化步骤包括肝素亲和色谱法。在上述方法的一个特定实施方案中，所述色谱浓化步骤包括阴离子交换色谱法，之后是肝素亲和色谱法。在上述方法的一个特定实施方案中，所述方法进一步包括至少一个专用的病毒去除或灭活步骤。在上述方法的一个特定实施方案中，所述方法包括纳滤步骤。在上述方法的一个特定实施方案中，所述方法进一步包括浓缩因子H组合物的步骤，所述步骤包括超滤/透滤。在一个实施方案中，本发明提供一种用于制备间α胰蛋白酶抑制剂(I α I)组合物的方法，所述组合物具有降低量的丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原，所述方法包括以下步骤(a)在适合于结合I aI和至少一种丝氨酸蛋白酶的条件下使含有IaI和至少一种丝氨酸蛋白酶的溶液与微细分的二氧化硅(Si02)接触；(b)使Si02与组合物分离；(C)在实质部分的I a I仍保持结合的条件下，自Si02洗脱丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原；以及
(d)自 Si02 洗脱 Ia I。在一个实施方案中，本发明提供一种用于制备间a胰蛋白酶抑制剂(I a I)组合物的方法，所述组合物具有降低量的丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原，所述方法包括以下步骤(a)在适合于结合IaI和至少一种丝氨酸蛋白酶的条件下使含有IaI和至少一种丝氨酸蛋白酶的溶液与微细分的二氧化硅(Si02)接触；(b)使Si02与组合物分离；以及(C)在实质部分的丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原仍保持结合至Si02的条件下，自Si02洗脱 I a I。在一个实施方案中，本发明提供一种用于制备间a胰蛋白酶抑制剂(I a I)组合物的方法，所述组合物具有降低量的丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原，所述方法包括以下步骤(a)在适合于结合I α I，但不适合于结合实质部分的至少一种丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的条件下，使含有I α I和至少一种丝氨酸蛋白酶的溶液与微细分的二氧化硅(Si02)接触；(b)使Si02与组合物分离；以及(C)自Si02洗脱I α I。在一个实施方案中，本发明提供一种用于制备间α胰蛋白酶抑制剂(Ια I)组合物的方法，所述组合物具有降低量的丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原，所述方法包括以下步骤(a)在适合于结合丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原，但不适合于结合间α胰蛋白酶抑制剂(Ια I)的条件下，使含有间α胰蛋白酶抑制剂(Ια I)和至少一种丝氨酸蛋白酶的溶液与微细分的二氧化硅(Si02)接触；和(b)使Si02与组合物分离。在一个实施方案中，本发明提供一种用于制备免疫球蛋白G(IgG)组合物的方法，所述组合物具有降低量的丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原，所述方法包括以下步骤(a)在第一沉淀步骤中，用介于约6%与约10%之间的醇，在介于约7. O与约7. 5之间的pH下，使冷质粒上清液部分沉淀，以便获得第一沉淀物和第一上清液；(b)在第二沉淀步骤中，用介于约20%与约25%之间的醇，在介于约6. 7与约7. 3之间的pH下，使IgG自第一上清液沉淀，以便形成第二沉淀物；(c)将第二沉淀物再悬浮，以形成悬浮液；(d)在适合于结合丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的溶液条件下，使所述悬浮液与微细分的二氧化硅(Si02)接触；以及(e)使Si02与悬浮液分离，以形成净化悬浮液。在上述方法的一个特定实施方案中，所述方法进一步包括以下步骤(f)在第三沉淀步骤中，用介于约22%与约28%之间的醇，在介于约6. 7与约7. 3之间的pH下，使IgG自在步骤(e)中形成的净化悬浮液沉淀，以便形成第三沉淀物；(g)将第三沉淀物再悬浮，以形成悬浮液；以及(h)自步骤(e)中形成的悬浮液分离可溶性部分，从而形成浓化的IgG组合物。在上述方法的一个特定实施方案中，所述方法进一步包括阴离子交换色谱法浓化步骤。在上述方法的一个特定实施方案中，所述方法进一步包括阳离子交换色谱法浓化步骤。在上述方法的一个特定实施方案中，所述方法进一步包括至少一个专用的病毒灭活或去除步骤。在上述方法的一个特定实施方案中，所述方法包括溶剂/清洁剂(S/D)病毒灭活步骤。在上述方法的一个特定实施方案中，所述方法包括纳滤步骤。在上述方法的一个特定实施方案中，所述方法包括在低pH下的培育步骤。
在上述方法的一个特定实施方案中，步骤(b)包括在介于约_7°C与约_9°C之间的温度下，将步骤(a)中形成的第一上清液的乙醇浓度调整至约25%(v/v)。在上述方法的一个特定实施方案中，所述温度是约_9°C。在上述方法的一个特定实施方案中，步骤(C)包括用含有磷酸盐和乙酸盐的缓冲液将步骤(b)的沉淀物再悬浮，其中用每1000L缓冲液介于300mL与700mL之间的冰乙酸来调整述缓冲液的pH。在上述方法的一个特定实施方案中，步骤(d)包括添加Si02至对于步骤(b)中形成的每克沉淀物约O. 02克与对于步骤(b)中形成的每克沉淀物约O. 06克的最终浓度。在上述方法的一个特定实施方案中，适合于结合丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的溶液条件包括介于4. 5与6. O之间的pH和介于O.1mS/cm与3mS/cm之间的电导率。在上述方法的一个特定实施方案中，pH介于4. 9与5. 3之间。在上述方法的一个特定实施方案中，电导率介于O. 5mS/cm与2mS/cm之间。在上述方法的一个特定实施方案中，步骤(e)包括以下子步骤(i)用至少3个压滤机死体积的含有磷酸盐和乙酸盐的缓冲液洗涤压滤机，其中用每1000L缓冲液介于50mL与200mL之间的冰乙酸调整缓冲液的pH，从而形成洗涤溶液；和(ii)合并步骤(f)的滤液与步骤(g)的洗涤溶液，从而形成溶液。在上述方法的一个特定实施方案中，进一步包括以下子步骤(iii)用清洁剂处理所述溶液。
在上述方法的一个特定实施方案中，步骤(h)进一步包括浓化的IgG组合物的溶剂和清洁剂(S/D)处理。在上述方法的一个特定实施方案中，步骤(h)中获得的浓化的IgG组合物含有步骤(a)中所用的冷血浆上清液部分中所发现的IgG含量的至少85%。在上述方法的一个特定实施方案中，步骤(h)中获得的浓化的IgG组合物含有步骤(a)中所用的冷血浆上清液部分中所发现的IgG含量的至少90%。在上述方法的一个特定实施方案中，丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的量已被降低至少90%。在上述方法的一个特定实施方案中，丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的量已被降低至少95%。在上述方法的一个特定实施方案中，丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的量已被降低至少98%。在上述方法的一个特定实施方案中，丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的量已被降低至少99%。在上述方法的一个特定实施方案中，丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原是FXIa。在上述方法的一个特定实施方案中，所述组合物与Si02在每克蛋白质至少I克的Si02的最终浓度下接触。在上述方法的一个特定实施方案中，所述组合物与Si02在每克蛋白质至少2克的Si02的最终浓度下接触。 在上述方法的一个特定实施方案中，所述组合物与Si02在每克蛋白质至少2. 5克的Si02的最终浓度下接触。在上述方法的一个特定实施方案中，丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原是因子XI。
在上述方法的一个特定实施方案中，丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原是因子XII。在上述方法的一个特定实施方案中，丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原是因子XIa。在上述方法的一个特定实施方案中，丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原是因子XIIa0在一个实施方案中，本发明提供一种源自血浆的蛋白质组合物，其是通过包括根据以上权利要求中任一项所述的降低丝氨酸蛋白酶活性的方法的工艺来制备。在上述组合物的一个特定实施方案中，组合物被配制用于施用给受试者。在上述组合物的一个特定实施方案中，组合物被配制成用于静脉内、肌肉内或皮下施用。在上述组合物的一个特定实施方案中，所述组合物为水性的。在上述组合物的一个特定实施方案中，组合物被冻干。在一个实施方案中，本发明提供一种用于治疗有需要的受试者的与血浆蛋白质的异常活性相关的疾病的方法，所述方法包括施用根据权利要求124至128中任一项所述的源自血浆的蛋白质组合物。在一个实施方案中，所述组合物包含源自血浆的蛋白质，所述源自血浆的蛋白质选自免疫球蛋白(Ig)、白蛋白、α-1-抗胰蛋白酶(AlPI)、丁酰胆碱酯酶、补体系统的蛋白质以及间α胰蛋白酶抑制剂(Ια I)。附图简述
图1.示例性血浆分离方案的概要。图2.如通过ELISA所测量的工业规模血浆蛋白质分离的所选部分中的因子H含量。图3.在pH7. 5和不同电导率的溶液条件下自SiO2洗脱的因子H和酰胺水解活性(如使用底物CS2166所测量)的图解说明。发明详述1.引言考虑到治疗性源自血浆的血液蛋白质组合物(如免疫球蛋白组合物、血液凝固因子、凝血因子抑制剂以及补体系统的蛋白质)的广泛使用，确保这些组合物的安全性十分重要。近来对与施用源自血浆的蛋白质组合物的患者中发生血栓栓塞事件成对出现的这些组合物的酰胺水解含量的关注已经突显出了在本领域中需要在制造这些生物制剂期间降低丝氨酸蛋白酶(例如FXIa和FXIIa)和丝氨酸蛋白酶原(例如FXI和FXII)的方法。本发明宜至少部分基于以下令人意外的发现微细分的二氧化硅(SiO2)可以用来结合源自血浆的蛋白质组合物中存在的丝氨酸蛋白酶和丝氨酸蛋白酶原。因而，本文提供用于在制造源自血浆的蛋白质组合物期间降低丝氨酸蛋白酶和丝氨酸蛋白酶原的浓度的方法。在某些方面中，本发明提供制造方法，所述方法是基于以下令人意外的发现微细分的二氧化硅(SiO2)可以用来自源自血浆的蛋白质溶液去除大量丝氨酸蛋白酶(例如FXIa和FXIIa)和丝氨酸蛋白酶原(例如FXI和FXII)。因而，可容易地将本文提供的方法整合到现有制造程序中，例如通过在冷却下用乙醇分离汇集的血浆样品，优选人类血浆样品(综述于 Schultze H E, Heremans J F;Molecular Biology of Human Proteins.第
I卷Nature and Metabolism of Extracellular Proteinsl966, Elsevier PublishingCompany;第236-317页中 )。然而，本文提供的方法决不仅限于用于包括乙醇分离的制造方法。纯化源自血浆的蛋白质的其它方法也与本文提供的方法相容，所述其它方法例如有聚合物(例如PEG)分离和色谱方法(例如阴离子和/或阳离子交换色谱法、亲和色谱法、免疫亲和色谱法、尺寸排阻色谱法、疏水性相互作用色谱法、混合式色谱法以及类似方法)。此外，不同于经由在宿主细胞系中DNA载体的重组表达所产生的其它生物制剂，源自血浆的蛋白质是自人类血液和血浆捐赠物分离而来。因此，这些产品的供应无法通过简单增加生产量(volume of production)来增加。相反地，市售血液产品的水平受可获得的血液和血浆捐赠物供应限制。这一动态导致用于制造商业市场尚未充分确立的新型源自血浆的血液因子的原始人类血浆的可用性不足，所述因子包括补体因子H(CFH)和间α胰蛋白酶抑制蛋白(I ct Ip)。由于缺乏可用于制造新型源自血浆的产品的血浆，因此必须将新型源自血浆的产品的制造整合至如免疫球蛋白和白蛋白的源自血浆的产品的已确立的制造过程的现有构架中。因子H-被暗示作为AMD、aHUS以及MPGN连同其它病状的潜在治疗剂-是一种如此的源自血浆的血液产品，其正逐渐引起医师的关注。然而，由于致力于例如IgG Y球蛋白制造的资源，因此需要可以被引入现有的制造方案中的制造因子H的方法。已经表明数种方法正好可实现这一目的，然而许多这些所提出的解决办法需要修改已确立产品的现有制造方案。对于已确立产品，所述变化将需要新的管理批准，并且甚至可能引起已确立产品的特征的变化。
例如，W02007/066017描述自冷沉淀物的上清液产生因子H制剂的方法。所公开的方法由以下组成制备冷沉淀物的上清液，使所述上清液经受阴离子交换色谱法(AEC)，使来自AEC的流过物经受肝素亲和色谱法(HAC)，使有关的来自HAC的洗脱液经受强阳离子交换色谱法(CEC)，使有关的来自CEC的洗脱液经受强阴离子交换色谱法(sAEC)，以及自sAEC洗脱因子H。不利的是，在包括IgGY球蛋白(IVIG和皮下)和白蛋白的许多商业上重要的源自血浆的血液产品的制造过程中，冷沉淀物上清液为常见中间物部分。使这一部分经受色谱法步骤将改变冷沉淀物上清液，并且将会要求以未知方式修改已确立的下游血液产品的制造过程。除了要求这些制造过程的完全重新生效和可能的重新设计之外，还需要关键管理机构对制造程序的管理再批准。同样地，W02008/113589描述自人类血浆产生因子H制剂的方法。具体来说，这一公布描述了自三个已知的血浆处理部分，即科恩-翁克莱(Cohn-Oncley)部分I上清液、科恩-翁克莱部分III沉淀物以及奇斯勒/尼赤曼沉淀物B部分来纯化因子H。关于第一种方法，W02008/113589公开因子H可以通过添加肝素亲和色谱法步骤而自科恩-翁克莱部分I上清液去除。不利的是，在包括IgGY球蛋白(IVIG和皮下)和白蛋白的许多商业上重要的源自血浆的血液产品的制造过程中，科恩-翁克莱部分I上清液为常见中间物部分。类似地，许多免疫球蛋白(例如IgG、IVIG等)制造过程并不依赖于科恩-翁克莱部分III沉淀或奇斯勒/尼赤曼沉淀物B步骤,例如Gammagard 液体和Kiovig(BaxterInternational Inc.)。将如肝素亲和色谱法、部分III沉淀或沉淀物B步骤的其它步骤引入如上文所概述的已确立血液产品的制造方案中的缺点在于它要求使制造程序重新生效、关键管理机构对制造程序的管理再批准，并且对于其它已确立产品的产率和/或纯度可能进一步具有无法预见的后果。因而，在本领域中仍然需要制造因子H的方法，所述方法不要求使用额外输入的血浆或对商业上重要的源自血浆的血液产品(如白蛋白和用于静脉内施用的IgGY球蛋白(IVIG)或皮下施用的IgGY球蛋白)的现有制造过程作出重新设计和管理再批准。本发明宜至少部分基于以下令人意外的发现因子H、丝氨酸蛋白酶以及丝氨酸蛋白酶原可同时结合至微细分的二氧化硅(SiO2)，从而使丝氨酸蛋白酶和丝氨酸蛋白酶原与未结合的所关注的第一蛋白质(例 如IgG)分离，然后，通过自SiO2有差别地洗脱因子H和丝氨酸蛋白酶以及丝氨酸蛋白酶原来分离。类似地，本发明至少部分基于以下令人意外的发现1α Ip、丝氨酸蛋白酶以及丝氨酸蛋白酶原可以同时结合至微细分的二氧化硅(SiO2),然后通过自SiO2有差别地洗脱I a Ip和丝氨酸蛋白酶以及丝氨酸蛋白酶原来分离。I1.定义如本文所用的“因子H”是指由补体因子H基因编码的补体替代路径的蛋白质组分(例如 CFH;NM000186 ；GeneID:3075；UniProt ID P08603 ；Ripoche 等，Biochem.J. 249:593-602(1988))。将因子H翻译为1，213个氨基酸的前体多肽，通过去除18个氨基酸的信号肽对多肽进行加工，从而产生成熟因子H蛋白(氨基酸19-1231)。如本发明所用的因子H涵盖可见于例如人类血浆样品的血浆样品中的任何天然变异体、替代性序列、同功型或突变蛋白。可见于人群中的因子H突变的实例包括但不限于Y402H;V62I ；R78G ；R127L ； Δ 224 ；Q400K ；C431S ；T493R ；C536R ；I551T ；R567G ；C630ff ；C673S ；C673Y ；E850K ；S890I ；H893R ；C915S ；E936D ；Q950H ；Y951H ；T956M ；C959Y ；W978C ；N997T ；V1007I ；V1007L ；AlOlOT ；T1017I ；Y1021F ；C1043R ；N1050Y ；I1059T ；Q1076R ；R1078S ；D1119G ；V1134G ；Y1142D ；Q1143E ；W1157R ；C1163ff ；W1183L ；W1183R ；T1184R ；L1189R ；S1191L ；G1194D ；V1197A ；E1198A ；F1199S ；R1210C ；R1215G ；R1215Q ；YPTCAKR1225:1231FQS ;以及 P1226S。已发现许多这些突变与多种疾病和病症相关，所述疾病和病症包括非典型溶血性尿毒症综合症(aHUS)、年龄相关的黄斑退化(AMD)、II型膜增生性肾小球肾炎(MPGNII)、CFH缺乏症以及基底膜玻璃膜抚(basal laminar drusen)。因子H还包括含有翻译后修饰的蛋白质。例如，咸信因子H在残基529、718、802、822、882、911、1029以及1095处由N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)修饰。如本文所用的“间α抑制蛋白”或“Ialp”是指一类血浆蛋白酶抑制剂，所述抑制剂包括由以下一个或多个编码的多肽α-l-微球蛋白/ 二库宁(bikunin)前体基因(AMBP ；UniGene ID: 231948，二库宁多肽)、间 α (球蛋白)抑制剂 Hl 基因(ΙΤΙΗ1 ；UniGeneID:224173，Hl 多肽)、间 α (球蛋白)抑制剂 H2 基因(ΙΤΙΗ2 ；Unigene ID: 139782，H2 多肽)、间α (球蛋白)抑制剂Η3基因(ΙΤΙΗ3 ；UniGene ID: 140017，H3多肽)或间α (球蛋白)抑制剂Η4(血浆激肽释放酶敏感糖蛋白，Η4多肽)基因(ΙΤΙΗ4 ；UniGene ID:3321613)。示例性IaIp蛋白酶抑制剂包括但不限于IaI ( 二库宁、Hl以及H2多肽);PaI ( 二库宁和H3多肽)、IaLI ( 二库宁和H2多肽)、IaIH4P(H4多肽)以及二库宁(上述Salier, J，等)。如本文所用的“冷血衆上清液(cryo-poor plasma) ”是指在去除通过在接近冷冻的温度下，例如在约10°C以下的温度下，优选在不高于约6°C的温度下解冻血浆或汇集的血浆而形成的冷沉淀物之后所产生的上清液。在本发明的上下文中，血浆可以互换地指回收的血浆(即离体自全血分离的血浆)或源血浆(即经由血浆去除术收集的血浆)。冷沉淀通常例如通过解冻先前冷冻的汇集的血浆来执行，所述血浆的安全和质量因素已被测定，但也可以使用新鲜血浆。在低温下完全解冻冷冻血浆之后，在冷却(例如<6°C)下通过过滤离心进行固体冷沉淀物与液体上清液的分离。如本文所用的“科恩池”是指用于分离血浆样品或血浆样品池的起始材料。科恩池包括可能经受或可能未经受预处理步骤的全血浆、冷血浆上清液样品以及冷血浆上清液样品池。在某些实施方案中，科恩池为冷血浆上清液样品，所述样品在预处理步骤中已被去除一种或多种血液因子，所述预处理步骤例如吸附于固相(例如氢氧化铝、微细分的二氧化硅等)或色谱步骤(例如离子交换或肝素亲和色谱法)。包括但不限于因子8抑制剂旁路活性(FEIBA)、因子IX复合物、因子VII浓缩物或抗凝血酶III复合物的各种血液因子可以自冷血浆上清液样品分离，以便形成科恩池。如本文所用的“部分II+III滤饼”是指在过滤或离心科恩-翁克莱或等效部分II+III糊状物悬浮液之后所回收的固相。在一个优选实施方案中，部分II+III悬浮液将用例如微细分的二氧化硅的吸附材料进行处理来去除如脂质、纤维蛋白原、酰胺水解活性、前激肽释放酶活性以及脂蛋白的杂质。在另一个优选实施方案中，在离心或过滤之前，可以将助滤剂添加至部分II+III悬浮液中。在一个最优选的实施方案中，在离心或过滤之前部分II+III悬浮液将用吸附材料与助滤剂处理。在分离净化的部分II+III悬浮上清液后，将回收的固相材料称为部分II+III滤饼。如本文所用的“微细分的二氧化娃(finely divided silicon dioxide/finelydivided silica) ”是指具有式SiO2的硅氧化物，其是以允许因子H吸附到它表面上的方式制造。适用于本发明方法的微细分的二氧化硅的示例性形式包括但不限于烟雾状二氧化硅、热解二氧化硅、Aerosjl 、Cab-o-Sil 、胶态二氧化硅、硅藻土以及类似物。在一个优选实施方案中，将商业亲水性烟雾状二氧化硅产品用于本文所提供的方法。这些产品的非限制性实例包括由Evonik Industries以商标名Aerosil ::出售的那些产品(例如Aerosil
90、Aerosil 130、Aerosil 150、Aerosil 200、Aerosil 300、Aerosil 380、Aerosil OX
50、Aerosil EG 50、Aerosil TT 600、Aerosil 200 SP, Aerosil 300 SP 以及 Aerosil300/30)。如本文所用的“与因子H功能障碍相关的疾病或病症”是指受试者的由受试者因子H活性水平降低所引起、特征在于受试者因子H活性水平降低或导致受试者因子H活性水平降低的任何疾病、病症或病状。出于本发明的目的，因子H活性可以指因子H结合蛋白质或配位体(例如C3b、C3bBb、C3b2Bb、csbC3b、补体因子B(CFB)、C反应蛋白、内皮细胞、葡糖胺聚糖(GAG))的能力，或者可以指它的因子I辅因子活性或它的加速C3bBb和C3b2Bb的不可逆的解离的能力。在一个实施方案中，与因子H功能障碍相关的疾病或病症会引起C3缺乏症和细菌感染易感性。在一些情况下，与因子H功能障碍相关的疾病或病症包括由编码因子H的CFH基因的突变和多形现象引起的或与其有关的病状(关于综述，参见Barlow等，Adv Exp Med Biol. 2008;632:117-42，其公开内容是以全文引用的方式并入本文中以便达成所有目的)。与CFH基因的突变或多形现象有关的疾病包括但不限于因子H缺乏症、非典型溶血性尿毒症综合症(aHUS)、年龄相关的黄斑退化(AMD)、
II型膜增生性肾小球肾炎(MPGNII ;de Cordoba&de Jorge, Clinical and ExperimentalImmunologyl51, 1-13 (2008))、心肌梗塞(Kardys 等，Journal of the American Collegeof Cardiology 47, 1568-1575(2006) ；Mooijaart 等,Experimental Gerontology
42,1116-1122(2007) ;Nicaud 等，Journal of Molecular Medicine 85, 771-775(2007)；Pai 等，European Hear t Journal 28, 1297-1303 (2007) ；Stark 等，ClinicalScience(Lond) 113，213-218(2007))、冠心病/冠状动脉病(CAD/CHD ;Meng等，BMC MedicalGenetics8,62(2007) ；Pulido 等,Mayo Clinic Proceedings82, 301-307 (2007) ; Topol等，Human Molecular Genetics 15 Spec 第 2 期，R117-R123 (2006))以及阿兹海默氏病(Alzheimer’s disease)(Hamilton 等，Neuromolecular Medicine 9, 331-334 (2007)；Zetterberg 等，American Journal of Ophthalmology 143,1059-1060(2007))。描述 CFH基因的突变和多形现象与与因子H功能障碍相关疾病之间的关联性的上述文献的公开内容是以全文引用的方式并入本文中以便达成所有目的。如本文所用的“与异常替代途径补体活性相关的疾病或病症”是指由补体的替代途径的不受控制或异常的活化导致的疾病、病症或病状。补体替代途径的不受控制或异常的活化一般会导致宿主细胞和组织的正常功能丧失(bystander damage)连同C3损耗和相应的病原体感染(例如真菌性、细菌性、病毒性以及原生生物性感染)易感性。与异常替代途径补体活性相关的疾病和病症的实例包括但不限于各种自体免疫疾病(如类风湿性关节炎、IgA肾病、哮喘、全身性红斑狼疮、多发性硬化症、抗磷脂综合症、ANCA相关血管炎、天疱疮、葡萄膜炎、重症肌无力(myathemia gravis)、桥本氏甲状腺炎(Hashimoto’sthyroiditis))、肾病(如IgA肾病、溶血尿毒症综合症、膜增生性肾小球肾炎)、其它疾病(如哮喘、阿兹海默氏病、成年黄斑退化、阵发性夜间血尿症(proximal nocturnalhemoglobinuria)、腹主动脉瘤、缺血以及败血症)。如本文所用的术语“超滤(UF) ”涵盖多种膜过滤方法，其中流体静压力迫使液体靠向半透膜。高分子量悬浮固体和溶质被保留下来，而水和低分子量溶质通过薄膜。这种分离过程经常用于纯化和浓缩巨分子(IO3至IO6Da)溶液，尤其是蛋白质溶液。根据膜保留的分子的大小，可获得许多超滤膜。超滤的典型特征在于薄膜孔径在I与IOOOkDa之间并且操作压力在O. 01与10巴之间。如本文所用的术语“透滤”是用与超滤相同或类似的薄膜来执行并且典型地以切向流过滤模式来执行。在透滤期间，将缓冲液引入再循环槽中，同时自单元操作去除滤液。在产品为保留物(例如因子H)的过程中，透滤尤其适用于分离蛋白质与小分子(像糖和盐)。在某些情况下，透滤可以用来交换溶液、缓冲液或缓冲系统的单个组分。如本文所用的术语“混合”描述通过任何形式的搅动使两种或更多种不同化合物或物质在溶液或悬浮液中平均分布的行为。当术语“混合”用于本申请中时，不需要所有成分在溶液或悬浮液中完全平均分配作为“混合”的结果。如本文所用的术语“溶剂”涵盖能够溶解或分散一或多种其它物质的任何液体物质。溶剂实质上可以是无机溶剂，如水，或可以是有机液体，如乙醇、丙酮、乙酸甲酯、乙酸乙酯、己烷、石油醚等。如术语“溶剂清洁剂处理”中所用的溶剂表示有机溶剂(例如磷酸三-正丁酯)，所述溶剂是用以使溶液中的脂质包膜的病毒灭活的溶剂清洁剂混合物的一部分。如本文所用的术语“清洁剂”在本申请中可以与术语“表面活性剂”或“表面活化剂”互换使用。表面活性剂典型的是两亲型有机化合物，即含有疏水基(“尾部”)与亲水基(“头部”)的两亲型有机化合物，其使表面活性剂可溶于有机溶剂与水中。表面活性剂可以根据它头部的形式上带电的基团的存在来分类。非离子型表面活性剂在它的头部没有带电基团，而离子型表面活性剂在 它的头部带有净电荷。两性离子表面活性剂含有具有两个带相反电荷的基团的头部。常见表面活性剂的一些实例包括阴离子型表面活性剂(基于硫酸根、磺酸根或羧酸根阴离子)全氟辛酸盐(PF0A或PF0)、全氟辛磺酸盐(PFOS)、十二烷基硫酸钠(SDS)、月桂基硫酸铵以及其它烷基硫酸盐、月桂醇醚硫酸钠(还称为月桂基醚硫酸钠或SLES)、烷基苯磺酸盐；阳离子型表面活性剂(基于季铵阳离子):鲸蜡基三甲基溴化铵(CTAB)(还称作十六烷基三甲基溴化铵)和其它烷基三甲基铵盐、鲸蜡基氯化吡锭鎗(CPC)、聚乙氧基化动物脂胺(POEA)、氯化苯甲烃铵(BAC)、苄索氯铵(BZT);长链脂肪酸和它们的盐包括辛酸盐、辛酸、庚酸盐(h印tanoat)、己酸、庚酸、壬酸、癸酸等；两性离子型表面活性剂(两性)十二烷基甜菜碱；椰油酰胺基丙基甜菜碱；椰油两性甘氨酸盐；非离子型表面活性剂烷基聚(氧化乙烯)、烷基苯酚聚(氧化乙烯)、聚(氧化乙烯)与聚(氧化丙烯)的共聚物(商业上称为泊洛沙姆(Poloxamers)或泊洛沙胺(Poloxamines))、烧基多聚葡糖苷(包括辛基葡糖苷、癸基麦芽糖苷)、脂肪醇(例如鲸蜡醇和油醇)、椰油酰胺MEA、椰油酰胺DEA、聚山梨醇酯(Tween20、Tween80等)、曲拉通(Triton)清洁剂以及十二烷基二甲基氧化胺。如本文所用的术语“治疗有效量或剂量”或“足够/有效量或剂量”是指可在施用期间产生作用的剂量。精确剂量将取决于治疗目的并且将由本领域的技术人员使用已知技术来确定(参见例如 Lieberman, Pharmaceutical Dosage Forms (第 1-3 卷,1992)；Lloyd,The Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compounding(1999)；Pickar, Dosage Calculations (1999)；以及 Remington:The Science and Practice ofPharmacy,第 20 版，2003，Gennaro 编，Lippincott, Williams & Wilkins ;其公开内容是以全文引用的方式并入本文中以便达成所有目的)。如本申请中所用的术语“喷雾”是指例如在醇沉淀步骤(如科恩分离I或II+III沉淀步骤)中将液体物质以液体物质的细滴或雾气形式传递至系统中的方法。喷雾可以通过如容器(例如喷雾瓶)的任何加压装置达成，所述装置具有喷头或喷嘴，并且手动或自动操作以由液体产生细雾。典型地，在将接受液体物质的系统连续搅拌或以其它方式混合以确保系统内的液体快速并且平均分布时执行喷雾。如本文所用的术语“约”表示自指定值加上或减去10%的近似范围。例如，语言“约20%”涵盖18%至22%的范围。如本文所用的约还包括精确量。因此，“约20%”意指“约20%”和“20%”。如本文所用的“约”是指指定值或约指定值的范围。术语“剂量(dose) ”和“剂量(dosage) ”在本文中可以互换使用。剂量是指各次施用时给予个体的活性成分的量。剂量将视许多因素而不同，所述因素包括施用频率；个体的体型和耐受性；病状的严重程度；副作用的风险；以及施用途径。本领域的技术人员将认识到剂量可以根据上述因素或基于治疗性进展而加以修改。术语“剂型”是指药物的特定型式，并取决于施用途径。例如，剂型可以是液体，例如注射用生理盐水溶液。 如本文所用的术语“预防”是指由与血液蛋白质的功能缺乏或功能失调相关的病状所产生的症状的可能性降低或症状的频率减小。如本文所用的术语“疗法”、“治疗”以及“改善”是指由与血液蛋白质的功能缺乏或功能失调相关的病状所产生的症状的严重程度的任何降低。如本文所用的术语“治疗”和“预防”不意图为绝对术语。治疗可以指发作的任何延迟、症状的改善、患者存活的改进、存活时间或存活率增加等。治疗效果可以与未接受治疗的个体或个体集合相比。
如本文所用的术语“实质部分”是指组合物中特定蛋白质群体的至少10%。例如，当提及组合物中的丝氨酸蛋白酶的实质部分时，丝氨酸蛋白酶的实质部分与组合物中存在的丝氨酸蛋白酶的至少10%对应。在一个实施方案中，实质部分是指组合物中特定蛋白质群体的至少25%。在另一个实施方案中，实质部分是指组合物中特定蛋白质群体的至少50%。在另一个实施方案中，实质部分是指组合物中特定蛋白质群体的至少75%。在其它实施方案中，实质部分是指组合物中特定蛋白质群体的至少10%，或组合物中特定蛋白质群体的至少15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99% 或 99% 以上。II1.丝氨酸蛋白酶和丝氨酸蛋白酶原含量的降低在第一方面中，本发明提供一种用于降低源自血浆的目标蛋白质组合物中丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的量的方法，该方法是通过使丝氨酸蛋白酶和/或丝氨酸蛋白酶原结合至微细分的二氧化硅(SiO2)并且分离SiO2与组合物来实现。在一个实施方案中，所述方法包括以下步骤(a)在适合于结合至少一种丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的条件下使组合物与微细分的二氧化硅(SiO2)接触；和(b)使SiO2与组合物分离以去除结合的丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原。在一个优选实施方案中，丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原为因子XIa (FXIa)、因子XIIa (FXIIa)、因子XI (FXI)和/ 或因子 XII (FXII)。因此，在一个实施方案中，本发明提供一种用于降低源自血浆的蛋白质组合物中因子XI的量的方法，所述方法包括以下步骤(a)在适合于结合因子XI的条件下使组合物与微细分的二氧化硅(SiO2)接触；和(b)使SiO2与组合物分离以去除结合的因子XI。在另一个实施方案中，本发明提供一种用于降低源自血浆的蛋白质组合物中因子XIa的量的方法，所述方法包括以下步骤(a)在适合于结合因子XIa的条件下使组合物与微细分的二氧化硅(SiO2)接触；和(b)使SiO2与组合物分离以去除结合的因子XIa。在另一个实施方案中，本发明提供一种用于降低源自血浆的蛋白质组合物中因子XII的量的方法，所述方法包括以下步骤(a)在适合于结合因子XII的条件下使组合物与微细分的二氧化硅(SiO2)接触；和(b)使SiO2与组合物分离以去除结合的因子XII。在另一个实施方案中，本发明提供一种用于降低源自血浆的蛋白质组合物中因子XIIa的量的方法，所述方法包括以下步骤(a)在适合于结合因子XIIa的条件下使组合物与微细分的二氧化硅(SiO2)接触；和(b)使SiO2与组合物分离以去除结合的因子Xlla。在某些实施方案中，上述方法进一步包括以下步骤执行第一目标蛋白质浓化步骤以形成第一浓化组合物，然后使所述组合物与微细分的二氧化硅(SiO2)接触。在某些实施方案中，第一目标蛋白质浓化步骤选自蛋白质沉淀步骤(例如醇分离步骤)、超滤/透滤步骤以及色谱步骤。因此，在一个实施方案中，本发明提供一种降低源自血浆的目标蛋白质中丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的量的方法，所述方法包括以下步骤(a)通过使源自汇集的血浆的起始材料中的蛋白质部分沉淀而形成第一浓化的源自血浆的目标蛋白质组合物；(b)在适合于结合至少一种丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的条件下使所述第一浓化组合物与微细分的二氧化硅(SiO2)接触；以及(C)使SiO2与组合物分离以去除结合的丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原。在一 个实施方案中，使用醇实现部分沉淀。在一个优选实施方案中，醇为乙醇。在另一个优选实施方案中，丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原为因子XIa(FXIa)、因子 XIIa(FXIIa)、因子 XI (FXI)和 / 或因子 XII (FXII)。在另一个实施方案中，本发明提供一种用于降低源自血浆的目标蛋白质中丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的量的方法，所述方法包括以下步骤(a)通过超滤和/或透滤源自汇集的血浆的起始材料而形成第一浓化的源自血浆的目标蛋白质组合物；(b)在适合于结合至少一种丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的条件下使所述第一浓化组合物与微细分的二氧化硅(SiO2)接触；以及(C)使SiO2与组合物分离以去除结合的丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原。在一个优选实施方案中，丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原为因子XIa(FXIa)、因子 XIIa(FXIIa)、因子 XI (FXI)和 / 或因子 XII (FXII)。在另一个实施方案中，本发明提供一种降低源自血浆的目标蛋白质中丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的量的方法，所述方法包括以下步骤(a)通过使源自汇集的血浆的起始材料与色谱树脂接触而形成第一浓化的源自血浆的目标蛋白质组合物；(b)在适合于结合至少一种丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的条件下使所述第一浓化组合物与微细分的二氧化硅(SiO2)接触；以及(C)使SiO2与组合物分离以去除结合的丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原。在某些实施方案中，色谱树脂选自阴离子交换树脂、阳离子交换树脂、疏水性相互作用树脂、混合式树脂、羟磷灰石树脂、配位体亲和树脂、免疫亲和树脂以及尺寸排阻树脂。在一个优选实施方案中，丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原为因子XIa (FXIa)、因子XIIa(FXIIa)、因子 XI (FXI)和 / 或因子 XII (FXII)。在某些实施方案中，上述方法进一步包括以下步骤执行第二目标蛋白质浓化步骤以形成第二浓化组合物，然后使所述组合物与微细分的二氧化硅(SiO2)接触。在某些实施方案中，第一目标蛋白质浓化步骤选自蛋白质沉淀步骤(例如醇分离步骤)、超滤/透滤步骤以及色谱步骤。因此，在一个实施方案中，本发明提供一种降低源自血浆的目标蛋白质中丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的量的方法，所述方法包括以下步骤(a)执行第一目标蛋白质浓化步骤以形成第一浓化的源自血浆的目标蛋白质组合物；(b)执行第二目标蛋白质浓化步骤以形成第二浓化的源自血浆的目标蛋白质组合物；(C)在适合于结合至少一种丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的条件下使所述第二浓化组合物与微细分的二氧化硅(SiO2)接触；以及(d)使SiO2与组合物分离以去除结合的丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原。在一个优选实施方案中，丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原为因子XIa(FXIa)、因子XIIa(FXIIa)、因子XI (FXI)和/或因子XII (FXII)。在某些实施方案中，第一与第二浓化步骤的组合是选自表I中所见的变化形式I至变化形式100中的任一种变化形式。表1.第一与 第二浓化步骤的组合的示例性实施方案
权利要求
1.一种降低源自血浆的目标蛋白质组合物中的丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的量的方法，所述方法包括以下步骤 (a)在适合于结合至少一种丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的条件下使所述组合物与微细分的二氧化硅(SiO2)接触；和 (b)使所述SiO2与所述组合物分离以去除所结合的丝氨酸蛋白酶； 其中所述至少一种丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原为因子XIa (FXIa)、因子XIIa(FXIIa)、因子 XI (FXI)或因子 XII (FXII)。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述方法进一步包括以下步骤执行第一目标蛋白质浓化步骤以形成第一浓化组合物，然后使所述组合物与微细分的二氧化硅(SiO2)接触。
3.如权利要求2所述的方法，其中所述第一目标蛋白质浓化步骤是蛋白质沉淀步骤。
4.如权利要求3所述的方法，其中所述蛋白质沉淀步骤是醇分离步骤。
5.如权利要求2所述的方法，其中所述第一目标蛋白质浓化步骤是超滤/透滤步骤。
6.根据权利要求2至5中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括以下步骤执行第二目标蛋白质浓化步骤，然后使所述浓化组合物与微细分的二氧化硅(SiO2)接触。
7.如权利要求6所述的方法，其中所述第二目标蛋白质浓化步骤是蛋白质沉淀步骤。
8.如权利要求7所述的方法，其中所述蛋白质沉淀步骤是醇分离步骤。
9.如权利要求6所述的方法，其中所述第二目标蛋白质浓化步骤是超滤/透滤步骤。
10.如权利要求6所述的方法，其中所述第二目标蛋白质浓化步骤是色谱浓化步骤。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括以下步骤在使所述组合物与微细分的二氧化硅(SiO2)接触之后，执行第三目标蛋白质浓化步骤。
12.如权利要求11所述的方法，其中所述第三目标蛋白质浓化步骤是蛋白质沉淀步骤。
13.如权利要求12所述的方法，其中所述蛋白质沉淀步骤是醇分离步骤。
14.如权利要求12所述的方法，其中所述第三目标蛋白质浓化步骤是超滤/透滤步骤。
15.如权利要求12所述的方法，其中所述第三目标蛋白质浓化步骤是色谱浓化步骤。
16.如权利要求10或15所述的方法，其中所述色谱浓化步骤包括以下子步骤 (i)在适合于结合所述源自血浆的目标蛋白质的条件下使所述源自血浆的目标蛋白质组合物与色谱树脂接触；和 (ii)自所述色谱树脂洗脱所述源自血浆的目标蛋白质。
17.如权利要求16所述的方法，其中在子步骤(i)中至少一种杂质不结合至所述色谱树脂。
18.如权利要求16所述的方法，其中在子步骤(i)中至少一种杂质结合至所述色谱树月旨，但在子步骤(ii)中不会自所述色谱树脂洗脱。
19.如权利要求10或15所述的方法，其中所述色谱浓化步骤包括以下子步骤 (i)在适合于结合至少一种杂质的条件下使所述第一浓化的源自血浆的目标蛋白质组合物与色谱树脂接触；和 ( )使所述树脂与所述源自血浆的蛋白质组合物分离， 其中在子步骤(i)中所述源自血浆的目标蛋白质不结合至所述色谱树脂。
20.根据权利要求15至19中任一项所述的方法，其中所述色谱树脂选自由以下组成的组阴离子交换树脂、阳离子交换树脂、疏水性相互作用树脂、混合式树脂、羟磷灰石树脂、配位体亲和树脂、免疫亲和树脂以及尺寸排阻树脂。
21.如权利要求20所述的方法，其中所述色谱树脂是阴离子交换树脂。
22.如权利要求20所述的方法，其中所述色谱树脂是阳离子交换树脂。
23.如权利要求20所述的方法，其中所述色谱树脂是疏水性相互作用树脂。
24.如权利要求20所述的方法，其中所述色谱树脂是混合式树脂。
25.如权利要求20所述的方法，其中所述色谱树脂是羟磷灰石树脂。
26.如权利要求20所述的方法，其中所述色谱树脂是配位体亲和树脂。
27.如权利要求20所述的方法，其中所述色谱树脂是免疫亲和树脂。
28.如权利要求10或15所述的方法，其中所述色谱浓化步骤包括使用尺寸排阻色谱法按大小和/或形状自所述目标蛋白质分离至少一种杂质。
29.根据权利要求1至28中任一项所述的方法，其中所述源自血浆的目标蛋白质选自免疫球蛋白(Ig)、白蛋白、α-1-抗胰蛋白酶(AlPI)、丁酰胆碱酯酶、补体系统的蛋白质以及间α胰蛋白酶抑制剂(Ια I)。
30.如权利要求29所述的方法，其中所述源自血浆的蛋白质是免疫球蛋白(Ig)。
31.如权利要求29所述的方法，其中所述源自血浆的蛋白质是白蛋白。
32.如权利要求29所述的方法，其中所述源自血浆的蛋白质是α-1-抗胰蛋白酶。
33.如权利要求29所述的方法，其中所述源自血浆的蛋白质是丁酰胆碱酯酶。
34.如权利要求29所述的方法，其中所述源自血浆的蛋白质是补体系统的蛋白质。
35.如权利要求34所述的方法，其中所述补体系统的蛋白质选自由因子H(FH)、因子D、补体蛋白C3和C4结合蛋白组成的组。
36.如权利要求29所述的方法，其中所述源自血浆的蛋白质是间α胰蛋白酶抑制剂。
37.根据权利要求1至36中任一项所述的方法，其中所述源自血浆的目标蛋白质组合物为制造中间物。
38.一种用于制备源自血浆的因子H组合物的方法，所述组合物具有降低量的丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原，所述方法包括以下步骤 (a)在适合于结合因子H和至少一种丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的条件下使含有因子H和至少一种丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的组合物与微细分的二氧化硅(SiO2)接触； (b)使所述SiO2与所述组合物分离； (c)在实质部分的因子H仍保持结合的溶液条件下，自所述SiO2洗脱所述丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原；以及 (d)自所述SiO2洗脱所述因子H。
39.如权利要求38所述的方法，其中所述因子H和至少一种丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原结合所述SiO2的所述溶液条件包括低于7. O的pH和小于llmS/cm的电导率。
40.如权利要求38或39所述的方法，其中所述因子H和至少一种丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原结合所述SiO2的所述溶液条件包括介于4. 5与6. 5之间的pH和小于6mS/cm的电导率。
41.如权利要求40所述的方法，其中所述因子H和至少一种丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原结合所述SiO2的所述溶液条件包括介于4. 5与6. 5之间的pH和介于O. 5mS/cm与5mS/cm之间的电导率。
42.根据权利要求38至41中任一项所述的方法，其中所述丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原自所述SiO2洗脱并且实质部分的所述因子H仍保持结合的所述溶液条件包括低于7. O的pH和小于llmS/cm的电导率。
43.如权利要求42所述的方法，其中所述丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原自所述SiO2洗脱并且实质部分的所述因子H仍保持结合的所述溶液条件包括介于4. 5与6. 5之间的pH和小于6mS/cm的电导率。
44.如权利要求42所述的方法，其中所述丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原自所述SiO2洗脱并且实质部分的所述因子H仍保持结合的所述溶液条件包括介于5. O与6. 5之间的pH和介于O. 5mS/cm与5mS/cm之间的电导率。
45.根据权利要求38至44中任一项所述的方法，其中所述因子H自所述SiO2洗脱的所述溶液条件包括至少6mS/cm的离子强度。
46.根据权利要求38至45中任一项所述的方法，其中所述因子H自所述SiO2洗脱的所述溶液条件包括至少llmS/cm的离子强度。
47.根据权利要求38至46中任一项所述的方法，其中所述因子H自所述SiO2洗脱的所述溶液条件包括介于5. O与7. O之间的pH。
48.根据权利要求38至44中任一项所述的方法，其中所述因子H自所述SiO2洗脱的所述溶液条件包括介于7. O与8. O之间的pH和介于4mS/cm与7mS/cm之间的离子强度。
49.一种用于制备因子H组合物的方法，所述组合物具有降低量的丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原，所述方法包括以下步骤 (a)在适合于结合所述因子H和至少一种丝氨酸蛋白酶的条件下使含有因子H和至少一种丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的组合物与微细分的二氧化硅(SiO2)接触； (b)使所述SiO2与所述组合物分离；以及 (c)在实质部分的所述丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原仍保持结合至所述SiO2的条件下，自所述SiO2洗脱所述因子H。
50.如权利要求49所述的方法，其中所述因子H和至少一种丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原结合所述SiO2的所述溶液条件包括低于7. O的pH和小于llmS/cm的电导率。
51.如权利要求49或50所述的方法，其中所述丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原自所述SiO2洗脱并且实质部分的所述因子H仍保持结合的所述溶液条件包括介于4. 5与6. 5之间的pH和小于6mS/cm的电导率。
52.如权利要求49所述的方法，其中适合于结合所述因子H和至少一种丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的所述溶液条件包括介于5. O与6. O之间的pH和介于O. 5mS/cm与5. OmS/cm之间的电导率。
53.根据权利要求49至52中任一项所述的方法，其中所述因子H自所述SiO2洗脱并且实质部分的所述丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原仍保持结合的溶液条件包括介于5. O与7.O之间的pH和至少llmS/cm的电导率。
54.根据权利要求49至52中任一项所述的方法，其中所述因子H自所述SiO2洗脱并且实质部分的所述丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原仍保持结合的溶液条件包括介于7. O与`8.O之间的pH和介于2mS/cm与IOmS/cm之间的电导率。
55.如权利要求54所述的方法，其中所述溶液条件的电导率介于4mS/cm与7mS/cm之间。
56.如权利要求54所述的方法,其中所述溶液条件的电导率介于5mS/cm与6mS/cm之间。
57.一种用于制备因子H组合物的方法，所述组合物具有降低量的丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原，所述方法包括以下步骤 (a)在适合于结合因子H，但不适合于结合实质部分的至少一种丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的条件下，使含有所述因子H和所述至少一种丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的组合物与微细分的二氧化硅(SiO2)接触； (b)使所述SiO2与所述组合物分离；以及 (c)自所述SiO2洗脱所述因子H。
58.如权利要求57所述的方法，其中所述因子H结合至所述SiO2,并且实质部分的所述丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原不结合至所述SiO2的所述溶液条件包括介于5. O与7. O之间的pH和不大于14mS/cm的电导率。
59.如权利要求58所述的方法，其中所述溶液条件的电导率介于9mS/cm与14mS/cm之间。
60.一种用于制备因子H组合物的方法，所述组合物具有降低量的丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原，所述方法包括以下步骤 (a)在适合于结合至少一种丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原，但不适合于结合实质部分的因子H的条件下，使含有所述因子H和所述至少一种丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的组合物与微细分的二氧化硅(SiO2)接触；和 (b)使所述SiO2与所述组合物分离。
61.如权利要求60所述的方法，其中所述丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原结合至所述SiO2,并且实质部分的所述因子H不结合至所述SiO2的所述溶液条件包括介于5. O与7. O之间的pH和至少llmS/cm的电导率。
62.如权利要求60所述的方法，其中所述丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原结合至所述SiO2,并且实质部分的所述因子H不结合至所述SiO2的所述溶液条件包括介于7. O与8. O之间的pH和介于2mS/cm与10mS/cm之间的电导率。
63.如权利要求62所述的方法，其中所述溶液条件的电导率介于4mS/cm与7mS/cm之间。
64.如权利要求62所述的方法，其中所述溶液条件的电导率介于5mS/cm与6mS/cm之间。
65.一种用于制备因子H组合物的方法，所述方法包括以下步骤 (a)在适合于结合因子H的条件下，使含有所述因子H和至少一种丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的组合物与微细分的二氧化硅(SiO2)接触； (b)用包括介于5.O与7. O之间的pH和小于4mS/cm的电导率的溶液洗涤所述SiO2 ；以及 (c)用包括介于7.O与8. O之间的pH和大于lOmS/cm的电导率的溶液自所述SiO2洗脱因子H。
66.如权利要求65所述的方法,其中用于洗漆所述SiO2的溶液包含介于5.5与6. 5之间的pH。
67.如权利要求65所述的方法,其中用于洗漆所述SiO2的溶液包含介于6.0±0. 2之间的pH。
68.根据权利要求65至67中任一项所述的方法，其中用于洗脱因子H的所述溶液包含至少20mS/cm的电导率。
69.如权利要求68所述的方法，其中用于洗脱因子H的所述溶液包含介于25mS/cm与40mS/cm之间的电导率。
70.根据权利要求38至69中任一项所述的方法，其中含有因子H的所述起始组合物是悬浮的科恩部分(Cohn fraction) II+III沉淀物,或其等效部分。
71.根据权利要求38至69中任一项所述的方法，其中含有因子H的所述起始组合物是悬浮的奇斯勒/尼赤曼沉淀物(Kistler/Nitschmann Precipitate) A,或其等效部分。
72.根据权利要求38至69中任一项所述的方法，其中含有因子H的所述起始组合物是悬浮的奇斯勒/尼赤曼沉淀物B，或其等效部分。
73.一种用于制备间α胰蛋白酶抑制剂(I α I)组合物的方法，所述组合物具有降低量的丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原，所述方法包括以下步骤 (a)在适合于结合IaI和至少一种丝氨酸蛋白酶的条件下使含有IaI和至少一种丝氨酸蛋白酶的溶液与微细分的二氧化硅(SiO2)接触； (b)使所述SiO2与所述组合物分离； (C)在实质部分的I a I仍保持结合的条件下，自所述SiO2洗脱所述丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原；以及 (d)自所述SiO2洗脱所述I a I。
74.一种用于制备间α胰蛋白酶抑制剂(I a I)组合物的方法，所述组合物具有降低量的丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原，所述方法包括以下步骤 (a)在适合于结合IaI和至少一种丝氨酸蛋白酶的条件下使含有IaI和至少一种丝氨酸蛋白酶的溶液与微细分的二氧化硅(SiO2)接触； (b)使所述SiO2与所述组合物分离；以及 (C)在实质部分的所述丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原仍保持结合至所述SiO2的条件下，自所述SiO2洗脱所述I a I。
75.一种用于制备间α胰蛋白酶抑制剂(I a I)组合物的方法，所述组合物具有降低量的丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原，所述方法包括以下步骤 (a)在适合于结合Iα I，但不适合于结合实质部分的至少一种丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的条件下，使含有所述I α I和所述至少一种丝氨酸蛋白酶的溶液与微细分的二氧化硅(SiO2)接触； (b)使所述SiO2与所述组合物分离；以及 (C)自所述SiO2洗脱所述Ia I。
76.一种用于制备间α胰蛋白酶抑制剂(I α I)组合物的方法，所述组合物具有降低量的丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原，所述方法包括以下步骤(a)在适合于结合丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原，但不适合于结合间α胰蛋白酶抑制剂(I α I)的条件下，使含有所述间α胰蛋白酶抑制剂(I α I)和所述至少一种丝氨酸蛋白酶的溶液与微细分的二氧化硅(SiO2)接触；和 (b)使所述SiO2与所述组合物分离。
77.一种用于制备免疫球蛋白G(IgG)组合物的方法，所述组合物具有降低量的丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原，所述方法包括以下步骤 (a)在第一沉淀步骤中，用介于约6%与约10%之间的醇，在介于约7.O与约7. 5之间的PH下，使冷质粒上清液部分沉淀，以便获得第一沉淀物和第一上清液； (b)在第二沉淀步骤中，用介于约20%与约25%之间的醇，在介于约6.7与约7. 3之间的PH下，使IgG自所述第一上清液沉淀，以便形成第二沉淀物； (c)将所述第二沉淀物再悬浮，以形成悬浮液； (d)在适合于结合丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的溶液条件下，使所述悬浮液与微细分的二氧化硅(SiO2)接触；以及 (e)使所述SiO2与所述悬浮液分离，以形成净化悬浮液。
78.如权利要求77所述的方法，其中所述方法进一步包括以下步骤 (f)在第三沉淀步骤中，用介于约22%与约28%之间的醇，在介于约6.7与约7. 3之间的PH下，使IgG自在步骤(e)中形成的所述净化悬浮液沉淀，以便形成第三沉淀物； (g)将所述第三沉淀物再悬浮，以形成悬浮液；以及 (h)自步骤(e)中形成的所述悬浮液分离可溶性部分，从而形成浓化的IgG组合物。
79.如权利要求77或78所述的方法，其中所述方法进一步包括阴离子交换色谱法浓化步骤。
80.根据权利要求77至79中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括阳离子交换色谱法浓化步骤。
81.根据权利要求77至80中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括至少一个专用的病毒灭活或去除步骤。
82.如权利要求81所述的方法，其中所述方法包括溶剂/清洁剂(S/D)病毒灭活步骤。
83.如权利要求81或82所述的方法，其中所述方法包括纳滤步骤。
84.根据权利要求81至83中任一项所述的方法，其中所述方法包括在低pH下的培育步骤。
85.根据权利要求78至84中任一项所述的方法，其中步骤(b)包括在介于约-7V与约-9°C之间的温度下，将步骤(a)中形成的所述第一上清液的乙醇浓度调整至约25%(v/V)。
86.如权利要求85所述的方法，其中所述温度是约_9°C。
87.根据权利要求78至86中任一项所述的方法，其中步骤(c)包括用含有磷酸盐和乙酸盐的缓冲液将步骤(b)的所述沉淀物再悬浮，其中用每1000L缓冲液介于300mL与700mL之间的冰乙酸调整所述缓冲液的pH。
88.根据权利要求78至87中任一项所述的方法，其中步骤(d)包括添加最终浓度为每克步骤(b)中形成的沉淀物约O. 02克至每克步骤(b)中形成的沉淀物约O. 06克的SiO2。
89.根据权利要求78至88中任一项所述的方法，其中适合于结合丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的溶液条件包括介于4. 5与6. O之间的pH和介于O.1mS/cm与3mS/cm之间的电导率。
90.如权利要求89所述的方法，其中所述pH介于4.9与5. 3之间。
91.如权利要求89或90所述的方法，其中所述电导率介于O.5mS/cm与2mS/cm之间。
92.根据权利要求78至91中任一项所述的方法，其中步骤(e)包括以下子步骤 (i)用至少3个压滤机死体积的含有磷酸盐和乙酸盐的缓冲液洗涤所述压滤机，其中用每1000L缓冲液介于50mL与200mL之间的冰乙酸调整所述缓冲液的pH，从而形成洗涤溶液；和 ( )合并步骤(f)的所述滤液与步骤(g)的所述洗涤溶液，从而形成溶液。
93.如权利要求92所述的方法，其进一步包括以下子步骤 (iii)用清洁剂处理所述溶液。
94.根据权利要求78至93中任一项所述的方法，其中步骤(h)进一步包括所述浓化的IgG组合物的溶剂和清洁剂(S/D)处理。
95.根据权利要求78至93中任一项所述的方法，其中步骤(h)中获得的所述浓化的IgG组合物含有在步骤(a)中所用的冷血浆上清液部分中所发现的IgG含量的至少85%。
96.如权利要求95所述的方法，其中步骤(h)中获得的所述浓化的IgG组合物含有在步骤(a)中所用的冷血浆上清液部分中所发现的IgG含量的至少90%。
97.根据权利要求77至96中任一项所述的方法，其中丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的量已被降低至少90%。
98.如权利要求97所述的方法，其中丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的量已被降低至少 95%。
99.如权利要求97所述的方法，其中丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的量已被降低至少 98%ο
100.如权利要求97所述的方法，其中丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原的量已被降低至少99%。
101.根据权利要求97至100中任一项所述的方法，其中所述丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原是FXIa。
102.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中使所述组合物与SiO2在每克蛋白质至少I克的SiO2的最终浓度下接触。
103.如权利要求102所述的方法，其中使所述组合物与SiO2在每克蛋白质至少2克的SiO2的最终浓度下接触。
104.如权利要求102所述的方法，其中使所述组合物与SiO2在每克蛋白质至少2.5克的SiO2的最终浓度下接触。
105.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中所述丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原是因子XI。
106.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中所述丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原是因子XII。
107.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中所述丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原是因子XIa。
108.根据以上权利要求中任一项所述的方法，其中所述丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原是因子Xlla。
109.—种源自血浆的蛋白质组合物，其通过包括根据以上权利要求中任一项所述的降低丝氨酸蛋白酶活性的方法的工艺来制备。
110.如权利要求109所述的源自血浆的蛋白质组合物，其中所述组合物被配制用于施用给受试者。
111.如权利要求109所述的源自血浆的蛋白质组合物，其中所述组合物被配制成用于静脉内、肌肉内或皮下施用。
112.根据权利要求109至111中任一项所述的源自血浆的蛋白质组合物，其中所述组合物为水性组合物。
113.根据权利要求109至111中任一项所述的源自血浆的蛋白质组合物，其中所述组合物被冻干。
114.一种用于治疗有需要的受试者的与血浆蛋白质的异常活性相关的疾病的方法，所述方法包括施用根据权利要求109至113中任一项所述的源自血浆的蛋白质组合物。
115.如权利要求114所述的方法，其中所述组合物包含源自血浆的蛋白质，所述源自血浆的蛋白质选自免疫球蛋白(Ig)、白蛋白、α-1-抗胰蛋白酶(AlPI)、丁酰胆碱酯酶、补体系统的蛋白质以及间α胰蛋白酶抑制剂(Ια I)。
全文摘要
本发明提供了降低源自血浆的蛋白质组合物的丝氨酸蛋白酶和/或丝氨酸蛋白酶原含量的新型方法。还提供了制造丝氨酸蛋白酶和/或丝氨酸蛋白酶原含量降低的源自血浆的蛋白质组合物的方法。在其它方面，本发明提供了丝氨酸蛋白酶和/或丝氨酸蛋白酶原含量降低的源自血浆的蛋白质的水性和冻干组合物。其它方面包括治疗、处理和/或预防疾病的方法，所述方法包括施用丝氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶原含量降低的源自血浆的蛋白质组合物。
文档编号A61K9/08GK103068365SQ201180036374
公开日2013年4月24日 申请日期2011年5月26日 优先权日2010年5月26日
发明者W·特施纳, H·P·施瓦茨, R·马德利纳, S·斯瓦托斯, A·普列夫科维奇, A·韦伯 申请人:巴克斯特国际公司, 巴克斯特保健股份有限公司