专利名称：某些作为丝氨酸蛋白酶xa因子抑制剂的1－(d－环丙基甘氨酰基)－4－(哌啶－4－基)哌 ...的制作方法
技术领域：
本发明涉及可用作药物的化合物，包含该化合物的药物组合物，制备该化合物的方法，用于制备该化合物的中间体，以及该化合物作为药物的用途。
心血管疾病一直是目前一种主要的世界范围的健康问题，并且是重病和死亡的很常见的原因。
研究人员在寻找新的心血管疾病治疗中所追寻的一条研究路线是假设丝氨酸蛋白酶，即XA因子的抑制剂可以用作治疗血栓形成疾病的抗凝剂。
XA因子的抑制剂是已知的。例如，WO 01/96323公开了某些包含芳基、带有环基的甘氨酸残基和4-取代哌嗪基的化合物。所述环基可以是环烷基，比如环戊基或环己基，但是已表明优选其中环基是苯基的化合物。
令人惊奇的是，现在，通过在WO 01/96323的范围内进行选择，已经发现，当4-甲氧苯基或3-氟-4-甲氧苯基作为芳基，环丙基甘氨酰基团作为甘氨酸残基，并且1-甲基哌啶-4-基哌嗪基作为4-取代哌嗪基时，可以得到一类化合物，它们是选择性的XA因子抑制剂，且具有特别有益的性能。
因此，本发明提供式(I)的化合物
其中R表示氢原子或氟原子，或其药学上可接受的盐。
式(I)的化合物已经被认为是丝氨酸蛋白酶，XA因子的有效的和选择性的抑制剂，在人血浆中具有优良的抗凝活性，在哺乳动物口服时具有优良的血浆曝量(exposure)，并且具有特别有益的药理学和毒理学活性分布。
式(I)的化合物也可以用化学名称表示1-(4-甲氧基苯甲酰基-D-环丙基-甘氨酰基)-4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪和1-(3-氟-4-甲氧基苯甲酰基-D-环丙基-甘氨酰基)-4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪。
应当理解，式(I)化合物包含具有(D)构型的不对称中心。因此，该化合物可以以含有相应的(L)异构体的混合物形式，比如外消旋混合物的形式存在并被分离，或可以独立存在。优选，该化合物被分离得基本上不含(L)异构体。
还应理解，式(I)化合物或其药学上可接受的盐可以以溶剂化物的形式分离，因此任何这种溶剂化物都包括在本发明的范围之内。
药学上可接受的盐的实例包括盐酸盐、富马酸盐和马来酸酸加成盐。
应当理解，式(I)化合物包含有两个碱性氮原子，因此可以形成单和二酸加成盐。
一组式(I)的化合物是其中R是氢原子的化合物。
其中R表示氢原子的特定的化合物是1-(4-甲氧基苯甲酰基-D-环丙基甘氨酰基)-4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪和其盐酸盐、富马酸盐和马来酸酸加成盐，特别是二盐酸盐、二富马酸盐和二马来酸酸加成盐。
已经制备出结晶的二盐酸盐、二富马酸盐和二马来酸酸加成盐，并用差示扫描量热计(DSC)对其进行了表征二盐酸盐熔融之前分解；二富马酸盐222.8℃(开始)，225.4℃(峰值)；和二马来酸盐195.8℃(开始)，202.0℃(峰值)。
特别要提及结晶形态的1-(4-甲氧基苯甲酰基-D-环丙基甘氨酰基)-4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪二富马酸盐。
另一组式(I)的化合物是其中R是氟原子的化合物。
其中R表示氟原子的特定的化合物是1-(3-氟-4-甲氧基苯甲酰基-D-环丙基甘氨酰基)-4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪；和盐酸酸加成盐。
式(I)化合物和其药学上可接受的盐可以通过包括以下步骤的方法制备(a)使式(II)化合物 或其盐(比如三盐酸盐)与式(III)化合物 或其活性衍生物反应；或(b)使式(IV)化合物 或其盐(比如二氢溴酸盐)与式(V)化合物 或其活性衍生物反应；之后，如果希望其药学上可接受的盐的话，形成药学上可接受的盐。
式(II)化合物与式(III)化合物之间的反应可以很方便地使用通常用于形成酰胺键的试剂和反应条件进行。反应很方便地在诸如1-羟基苯并三唑或1-羟基-7-氮杂苯并三唑的基于苯并三唑的试剂和诸如二环己基碳二亚胺或1-(3-二甲基氨丙基)-3-乙基碳二亚胺的脱水剂存在下，在惰性有机溶剂，比如二甲基甲酰胺和/或二氯甲烷中进行。反应温度通常是0-50℃，优选室温。如果使用式(II)化合物的盐，则反应通常在额外存在碱，比如三乙胺的条件下进行。其他适当的试剂和溶剂在本领域中是已知的，例如酰卤，比如对甲氧苯甲酰氯，在碱，比如三乙胺的存在下。
式(IV)化合物与式(V)化合物之间的反应可以很方便地使用通常用于形成酰胺键的试剂和反应条件进行，例如上述用于式(II)化合物与式(III)化合物反应的试剂与反应条件。
式(II)化合物可以通过使式(IV)化合物与式(VI)化合物 反应，其中R1表示氨基保护基，比如叔丁氧基羰基(Boc)，以得到式(VII)化合物， 随后除去保护基来制备。
式(IV)化合物是已知的，还可称作1-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪。
式(V)化合物可以通过使式(VIII)化合物， 其中R2表示羧基保护基，例如(1-6C)烷基，比如甲基或乙基，与式(III)化合物反应，以得到式(IX)化合物， 随后除去保护基来制备。
式(VI)和(VIII)化合物是已知的或者可以使用通用的用于保护氨基酸中羧基或氨基的方法由(D)-环丙基甘氨酸制备。(D)-环丙基甘氨酸可以很方便地使用(R)-(+)-α-甲基苄胺通过美国专利6,090,982中所述的方法，或者通过使用其中引用的方法由环丙烷甲醛制备。
式(III)化合物是众所周知的。
氨基和羧基的保护参见McOmie的著作，Protecting Groups inOrganic Chemistry，Plenum Press，NY，1973，和Greene与Wuts的著作，Protecting Groups in Organic Synthesis，第二版，John Wiley& Sons，NY，1991。羧基保护基的实例包括C1-C6烷基如甲基，乙基，叔丁基和叔戊基；芳基(C1-C4)烷基如苄基，4-硝基苄基，4-甲氧基苄基，3，4-二甲氧基苄基，2，4-二甲氧基苄基，2，4，6-三甲氧基苄基，2，4，6-三甲基苄基，二苯甲基和三苯甲基；甲硅烷基如三甲基甲硅烷基和叔丁基二甲基甲硅烷基以及烯丙基如烯丙基和1-(三甲基甲硅烷基甲基)丙-1-烯-3-基。
胺保护基的实例包括酰基，如式R3CO的基团，其中R3表示C1-6烷氧基，苯基C1-6烷氧基，或C3-10环烷氧基，其中苯基可以任选被，例如一个或两个卤素、C1-C4烷基和C1-C4烷氧基取代。
优选的氨基保护基包括苄氧基羰基(CBz)和叔丁氧基羰基(Boc)。
本发明中描述的某些中间体，例如式(II)和(V)的化合物被认为是新的，因此提供作为本发明的另一方面。
本发明的化合物可以经过任何合理而可行的途径给药，例如施用到胃肠道(如直肠或口腔)、鼻腔、肺、肌肉或血管中或通过经皮给予。本发明化合物可以以任何常用的给药形式，如片剂、粉末剂、胶囊剂、溶液剂、分散剂、混悬剂、糖浆剂、喷雾剂、栓剂、凝胶剂、乳剂、贴剂等形式给予。这些组合物可含有药物制剂中常用的组分，如稀释剂、载体、pH调节剂、甜味剂、添充剂和其它活性剂。如果希望肠胃外给药的话，组合物应当是无菌的并且为适于注射或输注的溶液剂或混悬剂形式。这样的组合物形成本发明的另一方面。
从这一方面考虑，本发明提供了药物组合物，其包含式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的稀释剂或载体。
根据另一方面，本发明提供用于治疗的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
根据另一方面，本发明提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗血栓形成病症的药物方面的用途。
根据另一方面，本发明提供了在需要治疗的对象中治疗血栓形成病症的方法，其包括施用有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
所述对象可以是人或非人动物，如非人哺乳动物，例如猫、狗、马、乳牛或羊。
血栓形成病症可以是，例如，静脉血栓形成，肺栓塞，动脉血栓形成，心肌缺血，心肌梗死或脑血栓形成。根据本发明的方法，本发明化合物也可以用于治疗与溶血栓疗法和再狭窄有关的急性脉管闭合，例如在经腔冠状血管成形术或冠状或周围动脉旁路移植手术之后的急性脉管闭合，和在长期血液透析患者中维持脉管通路开放。
式(I)化合物的剂量将取决于待治疗病症的性质和严重程度、给药途径和对象的大小及种类。一般说来，给药量应当在每公斤体重0.01到100μM范围内。
这里使用的术语″治疗″包括预防。术语″有效量″是指有效减轻或抑制受治疗的血栓形成病症症状的发展的式(I)化合物的量。
本发明的化合物可以单独给药或与具有不同作用方式的抗凝剂或与溶解血栓剂联合使用。
以下实施例举例说明本发明。
使用的缩写遵照IUPAC-IUB命名规则。在全文中使用以下缩写Boc(叔丁氧基羰基)，Calcd(计算的)，DMSO(二甲亚砜，如果用于NMR的话指全氘代的)，EDCI(1-(3-二甲基氨丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)，ES-MS(电子喷雾离子化质谱)，HOBt(1-羟基苯并三唑)，HPLC(高效液相色谱，tr为保留时间)，MeOH(甲醇)，NMR(核磁共振)，TFA(三氟乙酸)。
实施例11-(4-甲氧基苯甲酰基-D-环丙基甘氨酰基)-4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪A.D-环丙基甘氨酸通过使用(R)-(+)-α-甲基苄胺和US 6,090,982的方法，或通过使用其中引用的方法可以很方便地由环丙烷甲醛得到该氨基酸。
B.Boc-D-环丙基甘氨酸将D-环丙基甘氨酸(46.1克，0.4摩尔)在二噁烷(600毫升)、水(300毫升)及1N NaOH(480毫升，0.48摩尔)的混合物中形成的溶液在冰浴中搅拌冷却到0-5℃。慢慢地加入二碳酸二叔丁酯(105克，0.48摩尔)，继续在室温下搅拌0.5小时。将溶液真空浓缩到约500毫升，在冰水浴中冷却，用一层乙酸乙酯(500毫升)覆盖，然后用稀的KHSO4水溶液酸化到pH值为2-3。水相用乙酸乙酯(500毫升)萃取，反复进行萃取直到不残余有产物。将乙酸乙酯萃取物合并，用水(0.5升)、盐水(0.5升)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到白色固体(78克，90.6％)。D20＝-31°(c＝1.02，MeOH)。
1HNMR(CDCl3)δ5.9(sb，1H)，5.09(sb，1H)，3.75(m，1H)，1.42(s，9H)，1.10(d，1H)，0.4-0.7(m，4H)。
C.1-(Boc-D-环丙基甘氨酰基)-4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪将Boc-D-环丙基甘氨酸(216克，1.0摩尔)和1-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪(192克，1.05摩尔)在N2下，在无水CH2Cl2中成浆。然后把混合物在冰浴中冷却到0-5℃。向该混合物中加入1-羟基苯并三唑(HOBt)一水合物(149克，1.1摩尔)和二异丙基乙胺(136克，1.05摩尔)，随后缓慢加入1-[3-(二甲氨基)丙基]-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)(211克，1.1摩尔)，在0-5℃下保持1小时。允许反应混合物升温至室温，反应过夜。然后通过加入饱和NaHCO3水溶液(3升)来中止反应，用二氯甲烷(2升)萃取。分离各层。有机层再次用饱和NaHCO3(3升)、盐水(2升)洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩，得到粗产物，为粘性油状物(415克，109％)，直接使用。
1HNMR(DMSO-d6)δ6.91(d，1H)，3.97(t，1H)，3.41(sb，4H)，2.74(d，2H)，2.40(sb，4H)，2.10(m，1H)，2.09(s，3H)，1.79(t，2H)，1.65(d，2H)，1.40(m，2H)，1.36(s，9H)，1.05(m，1H)，0.93(d，1H)，0.40(m，2H)，0.26(m，1H)。
D.1-(D-环丙基甘氨酰基)-4-(1-甲基哌啶-4-基)-哌嗪三盐酸盐将1-(Boc-D-环丙基甘氨酰基)-4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪(粗品，415克，1.0摩尔)溶于无水甲醇(1.5升)中，在0℃下，向该溶液中加入HCl-MeOH(380克/1.5升，10.4摩尔)溶液。将反应混合物搅拌并慢慢升温到室温，反应2小时。然后在搅拌下加入乙酸乙酯(2升)。继续在0-5℃搅拌1小时，沉淀析出产物，为白色粉末，经过滤和在45℃进行真空干燥，得到标题化合物，为白色固体(357克，91.7％)。
1HNMR(DMSO-d6+D2O)δ8.4(bs，1H)，4.5(bs，2H)，3.0(t，4H)，2.78(m，1H)，2.74(s，3H)，2.35(m，2H)，2.20(m，1H)，2.08(m，2H)，1.06(bd，1H)，0.60(m，4H)。
E.1-(4-甲氧基苯甲酰基-D-环丙基甘氨酰基)-4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪将1-(D-环丙基甘氨酰基)-4-(1-甲基哌啶-4-基)-哌嗪三盐酸盐(300克，0.77摩尔)在N2下，在无水CH2Cl2中成浆。然后把混合物在冰浴中冷却到0-5℃。慢慢加入三乙胺(450毫升，3.23摩尔)，同时将温度保持在0-5℃，随后缓慢加入对甲氧苯甲酰氯(142克，0.83摩尔)，再次将温度保持在0-5℃。允许反应混合物升温至室温，反应2小时。然后通过加入饱和NaHCO3(1升)来中止反应，并分离各层。然后，用CH2Cl2(2升)萃取水层。合并有机层，用盐水(1升)洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩，得到标题化合物(326克，102％)。
1HNMR(DMSO-d6)δ8.55(d，J＝7.7Hz，1H)，7.88(d，2H)，6.96(d，2H)，4.39(t，1H)，3.79(s，3H)，3.45(s，4H)，2.74(d，2H)，2.40(m，4H)，2.09(s，3H)，2.08(m，1H)，1.79(dt，2H)，1.62(d，2H)，1.38(m，2H)，1.26(m，1H)，0.43(m，2H)，0.35(m，2H)。
实施例1a1-(4-甲氧基苯甲酰基-D-环丙基甘氨酰基)-4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪二富马酸盐向升温到65℃的1-(4-甲氧基苯甲酰基-D-环丙基甘氨酰基)-4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪(315克，0.76摩尔)的95％乙醇(4.2升)溶液中加入富马酸(177克，1.52摩尔)的热乙醇(65℃，2.8升)溶液。将最终的澄清溶液在65℃搅拌并慢慢冷却到室温(在2小时内)，然后冷却到0-5℃。通过过滤收集白色晶体，用95％的乙醇(1升)洗涤，45℃下真空干燥，得到标题盐(448克，91.2％)，mp＝205-207℃。
1HNMR(DMSO-d6)δ11.35(s，1H)，8.58(d，1H)，7.86(d，2H)，6.96(d，2H)，6.55(s，4H)，4.39(t，1H)，3.79(s，3H)，3.45(s，4H)，3.20(d，2H)，2.62(t，2H)，2.55(s，3H)，2.42(m，6H)，1.80(d，2H)，1.62(d，2H)，1.28(m，1H)，0.43(m，2H)，0.35(m，2H)。D20＝-37.7°(c＝0.836，H2O)实施例1b1-(4-甲氧基苯甲酰基-D-环丙基甘氨酰基)-4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪盐酸盐将1-(4-甲氧基苯甲酰基-D-环丙基甘氨酰基)-4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪(3.04克，6.73毫摩尔)溶于大约0.2M的HCl(37毫升)中，冷冻干燥，得到2.98克(定量)标题化合物。
部分1HNMR谱(DMSO-d6)δ10.63(br，1H)，8.59(br，1H)，7.88(d，2H)，6.98(d，2H)，436(brt，1H)，3.82(s，3H)，2.70(s，3H)，1.29(m，1H)，0.48(m，2H)，0.36(m，2H)。
ES-MS，m/z 415.5(M+1)+.
C23H34N4O3·1.25HCl·1.0H2O的分析
计算值C57.78；H7.85；N11.72；Cl9.30；实测值C57.79；H7.93；N11.74；Cl9.64。
分析HPLC(Xterra RP18，4.6×150cm，10％的乙腈/水(0.1％TFA)到50％的乙腈/水(0.1％TFA)，整个过程持续40分钟)，1mL/min99％，tr＝10.66分钟。
实施例21-[(3-氟-4-甲氧基苯甲酰基)-D-环丙基甘氨酰基]-4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪向搅拌的1-D-环丙基甘氨酰基-4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪三盐酸盐(1.5克，3.85毫摩尔)的二氯甲烷(30毫升)悬浮液中加入三乙胺(1.36克，13.5毫摩尔)，随后加入3-氟-4-甲氧基苯甲酸(0.622克，3.66毫摩尔)、HOBt(0.573克，4.24毫摩尔)和EDCI(0.813克，4.24毫摩尔)。搅拌过夜之后，使混合物在二氯甲烷和饱和碳酸氢钠水溶液之间分配。然后对有机相再次先用饱和碳酸氢钠水溶液，随后用盐水洗涤，之后经MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。此后，把残余物溶于二氯甲烷中，通过硅胶色谱纯化，用处于二氯甲烷中的0-12％的2N氨/甲醇梯度洗脱。合并含有纯产物的级分，真空浓缩得到1.03克(61％)标题化合物。
ES-MS，m/z433.5(M+1)+分析HPLC(Vydac C18，4.6×150cm，10％的乙腈/水(0.1％TFA)到50％的乙腈/水(0.1％TFA)，整个过程持续40分钟)，1mL/min95％，tr＝13.16分钟实施例2a1-[(3-氟-4-甲氧基苯甲酰基)-D-环丙基甘氨酰基]-4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪盐酸盐将1-[(3-氟-4-甲氧基苯甲酰基)-D-环丙基甘氨酰基]-4-(1-甲基哌啶-4-基]哌嗪(1克，2.31毫摩尔)溶于大约0.2M的HCl(12.7毫升)中，冷冻干燥，得到1.03克(定量)标题化合物。
部分1HNMR谱(DMSO-d6)δ10.36(br，1H)，8.73(d，1H)，7.75-7.83(m，2H)，7.25(t，1H)，4.36(t，1H)，3.90(s，3H)，2.70(s，3H)，1.28(m，1H)，0.48(m，2H)，0.36(m，2H)。
ES-MS，m/z 433.3(M+1)+。
C23H33FN4O3-1.6HCl-0.5H2O的分析计算值C55.26；H7.18；N11.21；F3.80；Cl11.35；实测值C55.31；H7.24；N11.38；F3.64；Cl11.36。
分析HPLC(Xterra RP18，4.6×150cm，10％的乙腈/水(0.1％TFA)到50％的乙腈/水(0.1％TFA)，整个过程持续40分钟)，1mL/min98％，tr＝8.067分钟。
酶抑制试验可采用以下一或多种酶抑制试验法或者本领域技术人员熟知的其它标准试验法，测定试验化合物抑制Xa因子的能力。
酶抑制试验人Xa因子和人凝血酶购自Enzyme Research Laboratories(South Bend，Indiana，USA)。其它蛋白酶从其它商业渠道获得。显色的对硝基苯胺肽蛋白酶底物购自Midwest Biotech(Fishers，Indiana，USA)。
按先前文献说明a、b、c、d，根据从蛋白酶抑制动力学中得到的表观缔合常数(Kass)，测定人Xa因子的结合亲和力。采用在96孔微量滴定板上自动(BioMek-1000)抑制剂稀释系统获得该表观Kass值(分别在4-8个抑制剂浓度下，一式三份进行Kass测定)，采用分子仪(Molecular Devices)(San Francisco)的Thermomax平板读数器，在405nm处测定显色底物水解速率。对于Xa因子抑制作用，试验方案如下在2分钟内，加入50μl缓冲液(0.06M tris、0.3M NaCl，pH7.4)；25μl抑制剂试验溶液(MeOH溶液)；25μl人Xa因子(32nM在0.03M tris、0.15M NaCl，1mg/ml HSA中)；最后150μlBzIleGluGlyArgpNA(0.3mM水溶液)，开始水解。终Xa因子浓度为3.2nM。对于各抑制剂浓度和计算的各抑制剂浓度下的表观Kass，通过应用SoftmaxPro软件，在同一滴定板上，由线性标准曲线测定游离[Xa]和结合[Xa]，所述表观Kass是由使对照(3.2nM Xa因子)产生20％-80％之间水解抑制作用的各抑制剂浓度计算的表观Kass＝[E:I]/[Ef][If]＝[Eb]/[Ef][I°-Ib]。这样得到的表观Kass值大约是各抑制剂的Ki的倒数[1/appKass＝app Ki]。单个底物浓度下测定的平均表观Kass值变异度为+/-15％。试验系统Km测得为0.347+/-0.031mM[n＝4]；Vmax为13.11+/-0.76μl/min。
采用相同方案，用以下酶和底物浓度，测定凝血酶和其它蛋白酶的Kass值带有0.2mM BzPheValArgpNA的5.9nM凝血酶；带有0.4mM pyroGluProArgpNA的1.2nM XIa；带有0.2mM HDProPheArgpNA的10nM XIIa；带有0.5mM HDValLeuLyspNA的3.4nM血纤蛋白溶酶；带有0.8mM HDIleProArgpNA的1.2nM nt-PA；和带有0.4mMpyroGluGlyArgpNA的0.4nM尿激酶；带有0.174mMpyroGluProArgpNA的3nM aPC；带有D-ProPheArgpNA的1.9nM血浆激肽释放酶；带有0.18mM BzPheValArgpNA的1.4nM牛胰蛋白酶。
参考文献(a)Sall DJ，JA Bastian，SL Briggs，JA Buben，NY Chirgadze，DK Clawson，ML Denny，DD Giera，DS Gifford-Moore，RW Harper，KL Hauser，VJ Klimkowski，TJ Kohn，H-S Lin，JR McCowan，ADPalkowitz，GF Smith，ME Richett，K Takeuchi，KJ Thrasher，JMTinsley，BG Utterback，S-CB Yan，M Zhang.作为一类新的直接作用于活性部位的凝血酶抑制剂的二元苯并[b]噻吩衍生物.1.丝氨酸蛋白酶选择性的测定，构效关系和结合定向性.J Med Chem 403489-3493(1997)。
(b)Smith GF，TJ Craft，DS Gifford-Moore，WJ Coffman，KD Kurz，E Roberts，RT Shuman，GE Sandusky，ND Jones，N Chirgadze和CV Jackson.一族与Efegatran相关的精氨酸类凝血酶抑制剂Sem.Thrombos.Hemost.22，173-183(1996)。
(c)Smith GF，DS Gifford-Moore，TJ Craft，N Chirgadze、KJRuterbories，TD Lindstrom，JH Satterwhite.Efegatran一种新的心血管抗凝剂.心血管患者的新抗凝剂.Ed.R Pifarre.Hanley& Belfus，Inc.，Philadelphia(1997)pp 265-300。
(d)Sall DJ，DL Bailey，JA Bastian，NY Chirgadze，AcClemens-Smith，ML Denny，MJ Fisher，DD Geira，DS Gifford-Moore，RW Harper，LM Johnson，VJ Klimkowski，TJ Kohn，HS Lin，JRMcCowan，AD Palkowitz，ME Richett，GF Smith，DW snyder，KTakeuchi，JE Toth，M Zhang.作为一类新的直接作用于活性部位的凝血酶抑制剂的二氨基苯并[b]噻吩衍生物5.C-3侧链修饰的衍生物的潜能、效能和药代动力学性质.J.Med.Chem.，43，649-663(2000)。
已经发现，这里示例的式(I)化合物在酶抑制试验中显示出约14×106到35×106L/mol的Kass值。
试验化合物延长部分凝血致活酶时间(凝血酶原时间)的能力可通过以下试验方案测定。
部分凝血致活酶时间(凝血酶原时间)试验方案将静脉血以1体积抗凝血剂比9体积血液的量，收集到装有3.2％(0.109m)柠檬酸三钠的真空管中。通过以700g离心10分钟来分离血细胞，得到血浆，在-70℃下冷冻备用。
为进行该试验，将100μl血浆用吸管吸至一玻璃试管中，加入1μl试验化合物的DMSO溶液，用2分钟温热至37℃。加入100μl温热(37℃)Manchester(组织凝血致活酶)试剂(Helena Biosciences，UK)，平衡2分钟。加入100μl温热(37℃)的25mM氯化钙溶液，开始凝血。每5秒钟，将该试管通过90°角翻转3次以将所述试剂混合，记录血凝块形成的时间。通过SAS统计分析程序分析一系列观测值和试验化合物浓度的数据，导出每种化合物的CT2(使血凝固时间加倍所需要的浓度)。
发现本发明化合物能明显延长部分凝血致活酶时间(凝血酶原时间)。
另一凝血酶原时间和APTT方案凝聚测定。用STA仪器(Stago)，在人体血浆中测定凝血酶原时间和APTT值。BioPT是由人组织因子(Innovin)启动的一种特别的非血浆凝结试验。通过比较在30mg/ml人血清白蛋白(HAS)和1mg/ml磷脂酰胆碱(PC)存在或不存在时该BioPT的影响，测定与血清白蛋白或质脂的可能结合。将抑制剂在50％MeOH水溶液载体中转送。
APTT试验75μl血浆Citrol Baxter-Dade含柠檬酸盐的正常人血浆25μl试验溶液75μl肌动蛋白Baxter-Dade活化的头肌动蛋白 于37℃培养2分钟。
75μl CaCl2(0.02M)PT试验75μl血浆25μl试验溶液75μl盐水于37℃培养1分钟。
75μl血浆Innovin Baxter-Dade重组人组织因子式(I)化合物另外的有益性能可以通过在实验动物种如猫和狗身上，在禁食与进食状态下口服剂量之后测定其药效(PD)与药代动力学(PK)性能来表明。
权利要求
1.式(I)的化合物 其中，R表示氢原子或氟原子，或其药学上可接受的盐。
2.如权利要求1所要求的化合物，其中R表示氢原子。
3.如权利要求2所要求的化合物，其选自1-(4-甲氧基苯甲酰基-D-环丙基甘氨酰基)-4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪和其盐酸盐、富马酸盐和马来酸酸加成盐。
4.如权利要求3所要求的化合物，其选自结晶形态的二盐酸盐、二富马酸盐和二马来酸酸加成盐。
5.如权利要求4所要求的化合物，其为结晶形态的1-(4-甲氧基苯甲酰基-D-环丙基甘氨酰基)-4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪二富马酸盐。
6.如权利要求1所要求的化合物，其中R表示氟原子。
7.如权利要求6所要求的化合物，其选自1-(3-氟-4-甲氧基苯甲酰基-D-环丙基甘氨酰基)-4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪；和其盐酸酸加成盐。
8.药物组合物，其包含权利要求1-7任一项要求的化合物，以及药学上可接受的稀释剂或载体。
9.制备权利要求1-7任一项的化合物的方法，其包括(a)使式(II)化合物 或其盐与式(III)化合物 或其活性衍生物反应；或(b)使式(IV)化合物 或其盐，与式(V)化合物 或其活性衍生物反应；随后，如果希望药学上可接受的盐的话，形成药学上可接受的盐。
10.式(II)的化合物或其盐
11.式(V)的化合物
12.用于治疗的如权利要求1-7任一项所要求的化合物。
13.权利要求1-7任一项所要求的化合物在制备用于治疗血栓形成病症的药物方面的用途。
14.一种在需要治疗的对象中治疗血栓形成病症的方法，其包括施用有效量的权利要求1所要求的化合物。
全文摘要
式(I)的化合物，其中R表示氢原子或氟原子，或者其药学上可接受的盐是用于治疗血栓形成病症的XA因子抑制剂。
文档编号C07D211/58GK1642914SQ03807414
公开日2005年7月20日 申请日期2003年3月24日 优先权日2002年4月1日
发明者M·R·维利, G·L·恩格尔 申请人:伊莱利利公司