专利名称：两种广谱抗肿瘤药物及其制备方法
技术领域：
本发明属于抗肿瘤药物技术领域，尤其涉及含有苦味西葫芦水提取物或者苦味西葫芦醇提取物的两种广谱抗肿瘤药物及其制备方法。
背景技术：
苦味西葫芦(Cucurbita pepo cv Dayangua)，别名大烟瓜，是葫芦科南瓜属西葫芦的一个变种，主要分布于内蒙古多伦地区。其果实味苦，当地民间常用于治疗感冒，还有镇痛、止泻等功效。当地兽医还用其治疗羊、猪等的发热感冒和羊的痢疾，对家禽的常见传染性疾病如鸡的瘟疫性疾病、传染性法氏囊炎、传染性支气管炎等有很好的疗效；《中兽医医药杂志》2001年03期的《苦味西葫芦药理作用初步研究》(作者王学林，刘军，陈志宝， 高丰，柳巨雄，王晓峰，田宝磊，邓旭明，阎继业)和《中国药学会学术年会》2002年的会议论文《苦味西葫芦药理作用研究》(作者邓旭明)均有相关的记载。苦味西葫芦为1年生蔓生草本，茎具棱沟，其上有细小的刚毛及半透明的棘状毛。 叶柄粗壮，长l(Tl8cm，叶片稍硬挺直，叶片呈心形，前端锐尖，具有2飞个浅裂，其中，顶部的2个裂深达中脉，边缘渐浅，叶缘具有不规则锐齿，叶基近心形，深近7cm，宽11 cm ；叶片宽处近Mem。叶片上表面呈深绿色、下表面颜色稍浅，叶脉及叶片两面均具粗糙毛、卷须稍粗壮，具有柔毛，多为2、分枝。雌雄同株，雄花单生于叶腋，花梗长，略有棱，长iri6cm，被无色至浅黄色短刚毛。花萼基部连合成“帽状”，具明显的5条棱，浅绿色，花萼裂只线状披针形，花冠橘黄色，钟形，长7 8cm，分裂至近中部，裂片直立或稍扩展，石灰岩碳棒扩展，顶端锐尖。雄蕊3个，花丝长1. 2 1. km，花药靠合长1. (Tl. 3cm。雌花单生于叶腋，子房长圆状，3室。花柱粗壮，具3、个深沟槽，柱头2深裂，粗、大，周围具3飞个黄色凸起，退化雄蕊 3个，粗，黄白色，下宽上窄，花瓣状，花冠、花萼同雄蕊，但花柄短，1. 5^2. Ocm侧膜胎座。胚珠多数。果梗粗壮、具明显的棱沟。果蒂稍粗大，棱明显。果实呈黄白或墨绿色，上带细小黄色纹点，重1.25 2.0kg，果肉呈明显丝状。刀切后有酸浆(苦菇芄菇娘)味，食之极苦。 种子扁椭圆形，黄白色。经考证，该植物为葫芦科南瓜属西葫芦的一个栽培变种。现代药理实验研究表明苦味西葫芦提取物具有抗菌、抗病毒、镇痛、增强离体十二指肠兴奋性和消炎解热等方面作用；学术期刊《动物医学进展》2004年第25卷第5期的《苦味西葫芦粗提取物抗炎作用的实验研究》(作者张艳萍，邓旭明，祝万菊，王学林)、《中兽医医药杂志》2004年第23卷第6期的《苦味西葫芦抗炎作用机理的初步研究》(作者张艳萍， 邓旭明，陈志宝)和临床医药实践(下半月刊)2009年第18卷第6期的《苦味西葫芦水提取物镇痛作用的实验研究》(作者高立新)均有相关的记载。从苦味西葫芦果实中提取分离得到的化合物分别为甲级鼠李素的3-芸香糖苷、异鼠李素的3-芸香糖甙-4，-鼠李糖苷、Kaempferol-3-O-neohesp-eridoside、 Larisiresinal4' -0-β-D-glucopyranoside、(+)-5‘ -Methoxy-isolarisiresinol 3 α-0-β-D-glucopyranoside> Lyoniside、I solariciresino1-9-0-β-D-xylopyra noside、Oct-l-en—3-ylβ-D-arabinopyranosyl- (1 — 6)- β—D—glucopyranoside、葫芦素E-2-0-葡萄糖苷、山奈酚-3-0-新橙皮糖苷、乙酸蛇麻脂醇酯、β-香树月旨酉享乙酸酉旨、isomultiflorenol、 isomultiflorenone、 (+)-Isolarisiresinol 3 α -0-β -D-glucopyranoside,2-0-^ -D-葫芦素E葡萄糖苷、D-果糖、硬脂酸三十二烷醇酯、三十三烷、谷留醇、豆留醇、胡萝卜甙、胡萝卜苷、脑甙、13 (18)-齐墩果烯-3-醇、 葫芦苷A和葫芦酯A ；《中国药学杂志》2002年第37卷第9期的《苦味西葫芦化学成分的研究》(作者丁艳丽，邓旭明，蔡辉，王芳生，王学林，张聿梅，杨峻山)、《沈阳药科大学学报》 2006年第23卷第1期的《苦味西葫芦果实的三萜类化学成分》(作者葛杉，王大成，向华， 祝万菊，邓旭明，吴立军)、《中国现代中药》2007年第9卷第7期的《苦味西葫芦化学成分研究》(作者何乐，王大成，吴立军，邓旭明)及《中国医院药学杂志》2007年第27卷第12期的《高效液相色谱法测定苦味西葫芦中药西瓜苦苷的含量》(作者高立新，高慧敏)均有相关的记载。因此，苦味西葫芦提取物具有巨大的开发潜能。
发明内容
本发明的目的在于提供含有苦味西葫芦水提取物或者苦味西葫芦醇提取物的两种广谱抗肿瘤药物。本发明的另一目的在于提供上述两种广谱抗肿瘤药物的制备方法。本发明是通过以下技术来实现的。两种广谱抗肿瘤药物，所述两种广谱抗肿瘤药物是以苦味西葫芦水提取物或者苦味西葫芦醇提取物作为有效成分。其中，所述两种广谱抗肿瘤药物中分别含有有效量的苦味西葫芦水提取物或者苦味西葫芦醇提取物及可药用载体和/或赋形剂。进一步地，所述可药用载体和/或赋形剂为羧甲基纤维素钠。其中，所述两种广谱抗肿瘤药物作为抗肝癌、前列腺癌、肺癌、结肠癌、胃癌、直肠癌、乳腺癌、肾癌、卵巢癌、胰腺癌、子宫肉瘤、宫颈癌、淋巴瘤、白血病、食管癌、鼻咽癌、膀胱癌、肉瘤、喉癌、黑色素瘤、甲状腺癌、髓母细胞瘤的药物。进一步地，所述两种广谱抗肿瘤药物作为抗恶性实体瘤的药物。其中，所述两种广谱抗肿瘤药物为含有苦味西葫芦水提取物的口服液或注射液， 或者为含有苦味西葫芦醇提取物的口服液或注射液。进一步地，所述苦味西葫芦水提取物或者苦味西葫芦醇提取物口服液的口服剂量为每天Ig/体表面积m2。所述的两种广谱抗肿瘤药物的制备方法，是由以下制备步骤制成的所述苦味西葫芦水提取物或者苦味西葫芦醇提取物
(a)取苦味西葫芦瓜果，去皮，将果肉切块，加入水煮制，制得糊状物；
(b)取出糊状物，晒干，制得原药干；
(c)将原药干粉碎为原药粉末，在室温下保存；
(d)取原药粉末，溶解在蒸馏水中，摇动萃取，然后进行离心、过滤，得到上清液，再进行浓缩干燥，得到苦味西葫芦水提取物；或者取原药粉末，加入乙醇，摇动萃取，然后进行离心、过滤，得到上清液，再进行浓缩干燥，得到苦味西葫芦乙醇提取物。
具体地，所述两种广谱抗肿瘤药物的制备方法，是由以下具体制备步骤制成的所述苦味西葫芦水提取物或者苦味西葫芦醇提取物
(a)取100千克半成熟的苦味西葫芦瓜果，去皮，将果肉切成小块，加入25千克的水，煮制4个小时，制得糊状物；
(b)取出糊状物，晒干，制得3.4千克原药干；
(c)将原药干粉碎为原药粉末，在室温下保存；
(d)取100克原药粉末，溶解在1000毫升的蒸馏水中，摇动萃取8小时，然后进行离心、 过滤，得到上清液，再进行浓缩干燥，得到11克苦味西葫芦水提取物；或者取100克原药粉末，加入1000毫升的浓度为95%的乙醇，摇动萃取8小时，然后进行离心、过滤，得到上清液，再进行浓缩干燥，得到10克苦味西葫芦乙醇提取物。本发明的有益效果本发明的含有苦味西葫芦水提取物或者苦味西葫芦醇提取物的两种广谱抗肿瘤药物，能广泛抑制多种类型的人肿瘤细胞系生长，并进一步诱导肿瘤细胞凋亡。在人肿瘤异种移植模型研究中，苦味西葫芦提取物被证明是一种有效的抗肿瘤剂， 能强烈抑制人肝癌、前列腺癌、肺癌、结肠癌、胃癌、直肠癌、乳腺癌、肾癌、卵巢癌、胰腺癌、 子宫肉瘤、宫颈癌、淋巴瘤、白血病、食管癌、鼻咽癌、膀胱癌、肉瘤、喉癌、黑色素瘤、甲状腺癌、髓母细胞瘤细胞在体内生长。苦味西葫芦水提取物和苦味西葫芦醇提取物具有被开发成为抗肿瘤药物的巨大潜能。
图1为苦味西葫芦提取物组及对照组治疗皮下接种的人前列腺癌(LnCAP)细胞的肿瘤体积与移植后天数曲线图。图2为苦味西葫芦提取物组及对照组治疗皮下接种的人肺癌(NCI-H23)细胞的肿瘤体积与移植后天数曲线图。图3为苦味西葫芦提取物组及对照组治疗皮下接种的人结肠癌(HCT-116)细胞的肿瘤体积与移植后天数曲线图。图4为苦味西葫芦提取物组及对照组治疗皮下接种的人肝癌(SMMC-7721)细胞的肿瘤体积与移植后天数曲线图。
具体实施例方式下面以具体实施方式
结合附图对本发明作进一步的说明，但本发明不受下述实施例的限定。采用以下实验设计方法来证明本发明的效果。一、原料与样品的制备。取100千克半成熟的苦味西葫芦瓜果，去皮，然后将果肉切成小块，加入25千克的水，煮制4个小时，制得糊状物。将糊状物捞出，在太阳下晒干，制得3. 4千克原药干。将原药干粉碎，在室温下保存。取100克原药粉末，溶解在1000毫升的蒸馏水中， 摇动萃取8个小时。然后进行离心、过滤，得到上清液，再进行浓缩干燥，得11克苦味西葫芦水提取物样本。取100克原药粉末，加入1000毫升95%的乙醇，摇动萃取8个小时，然后进行离心、过滤，得到上清液，再进行浓缩干燥，得到10克苦味西葫芦乙醇提取物样本。
二、苦味西葫芦水提取物及苦味西葫芦醇提取物的细胞毒性分析。使用人肿瘤细胞系进行细胞毒性分析。人肿瘤细胞系购自ATCC和NCI，用含10% FBS的DMEM培养液，在含5%ω2的37°C孵箱中培养。用胰蛋白酶消化汇合的细胞，经培养液洗涤后计数。向96孔培养板的每孔中加入3000 6000个细胞，孵育16小时或M小时。然后向孔内加入不同浓度的苦味西葫芦水提取物和苦味西葫芦醇提取物。继续培养72小时后，对药物处理组细胞和对照组细胞进行MTT试验。(试验方法详细参见以下文献的 idi(； :Basu S, Ma R, Boyle PJ, Mikulla B, Bradley Μ, Smith B, Basu Μ, Banerjee S. Apoptosis of human carcinoma cells in the presence of potential anti-cancer drugs: III. Treatment of Colo-205 and SKBR3 cells with: cis -platin,Tamoxifen, Melphalan, Betulinic acid, L-PDMP, L-PPMP, and GD3 ganglioside. Glycoconj J. 2004;20 (9):563-77)。在含有不同浓度苦味西葫芦水提取物和苦味西葫芦醇提取物的正常培养基中培养多种肿瘤细胞株，3天后应用MTT法测定细胞存活情况。测定结果见表1。表 1
苦味西葫芦水提物和苦味西葫芦醇提物外抑制人肿瘤细胞生长
权利要求
1.两种广谱抗肿瘤药物，其特征在于所述两种广谱抗肿瘤药物是以苦味西葫芦水提取物或者苦味西葫芦醇提取物作为有效成分。
2.根据权利要求1所述的两种广谱抗肿瘤药物，其特征在于所述两种广谱抗肿瘤药物中分别含有有效量的苦味西葫芦水提取物或者苦味西葫芦醇提取物及可药用载体和/ 或赋形剂。
3.根据权利要求2所述的两种广谱抗肿瘤药物，其特征在于所述可药用载体和/或赋形剂为羧甲基纤维素钠。
4.根据权利要求1所述的两种广谱抗肿瘤药物，其特征在于所述两种广谱抗肿瘤药物作为抗肝癌、前列腺癌、肺癌、结肠癌、胃癌、直肠癌、乳腺癌、肾癌、卵巢癌、胰腺癌、子宫肉瘤、宫颈癌、淋巴瘤、白血病、食管癌、鼻咽癌、膀胱癌、肉瘤、喉癌、黑色素瘤、甲状腺癌、髓母细胞瘤的药物。
5.根据权利要求1所述的两种广谱抗肿瘤药物，其特征在于所述两种广谱抗肿瘤药物作为抗恶性实体瘤的药物。
6.根据权利要求1所述的两种广谱抗肿瘤药物，其特征在于所述两种广谱抗肿瘤药物为含有苦味西葫芦水提取物的口服液或注射液，或者为含有苦味西葫芦醇提取物的口服液或注射液。
7.根据权利要求6所述的两种广谱抗肿瘤药物，其特征在于所述苦味西葫芦水提取物或者苦味西葫芦醇提取物口服液的口服剂量为每天Ig/体表面积m2。
8.权利要求广5任意一项所述的两种广谱抗肿瘤药物的制备方法，其特征在于是由以下制备步骤制成的所述苦味西葫芦水提取物或者苦味西葫芦醇提取物(a)取苦味西葫芦瓜果，去皮，将果肉切块，加入水煮制，制得糊状物；(b)取出糊状物，晒干，制得原药干；(c)将原药干粉碎为原药粉末，在室温下保存；(d)取原药粉末，溶解在蒸馏水中，摇动萃取，然后进行离心、过滤，得到上清液，再进行浓缩干燥，得到苦味西葫芦水提取物；或者取原药粉末，加入乙醇，摇动萃取，然后进行离心、过滤，得到上清液，再进行浓缩干燥，得到苦味西葫芦乙醇提取物。
9.根据权利要求8所述的两种广谱抗肿瘤药物的制备方法，其特征在于是由以下具体制备步骤制成的所述苦味西葫芦水提取物或者苦味西葫芦醇提取物(a)取100千克半成熟的苦味西葫芦瓜果，去皮，将果肉切成小块，加入25千克的水，煮制4个小时，制得糊状物；(b)取出糊状物，晒干，制得3.4千克原药干；(c)将原药干粉碎为原药粉末，在室温下保存；(d)取100克原药粉末，溶解在1000毫升的蒸馏水中，摇动萃取8小时，然后进行离心、 过滤，得到上清液，再进行浓缩干燥，得到11克苦味西葫芦水提取物；或者取100克原药粉末，加入1000毫升的浓度为95%的乙醇，摇动萃取8小时，然后进行离心、过滤，得到上清液，再进行浓缩干燥，得到10克苦味西葫芦乙醇提取物。
全文摘要
本发明属于抗肿瘤药物技术领域，尤其涉及两种广谱抗肿瘤药物及其制备方法，所述两种广谱抗肿瘤药物是以苦味西葫芦水提取物或者苦味西葫芦醇提取物作为有效成分；本发明的含有苦味西葫芦水提取物或者苦味西葫芦醇提取物的两种广谱抗肿瘤药物，能广泛抑制多种类型的人肿瘤细胞系生长，并进一步诱导肿瘤细胞凋亡。在人肿瘤异种移植模型研究中，苦味西葫芦提取物被证明是一种有效的抗肿瘤剂，能强烈抑制人肝癌、前列腺癌、肺癌和结肠癌等肿瘤细胞在体内生长。苦味西葫芦水提取物和苦味西葫芦醇提取物具有被开发成为抗肿瘤药物的巨大潜能。
文档编号A61P35/00GK102552370SQ20121004372
公开日2012年7月11日 申请日期2012年2月24日 优先权日2012年2月24日
发明者傅建平, 张南, 简志光 申请人:傅建平, 张南, 简志光