来自尿路病原性大肠杆菌的免疫原的制作方法

专利名称：来自尿路病原性大肠杆菌的免疫原的制作方法
技术领域：
本发明属于大肠杆菌(E. coli)生物学领域，具体涉及能引起对肠外病原性大肠杆菌(ExPEC)菌株的免疫的免疫原。
背景技术：
很少有微生物具有如大肠杆菌般的多用途。同时作为哺乳动物正常肠道微生物区系的重要成员，其已被广泛用作重组DNA技术的宿主。然而，大肠杆菌也可能成为致命病原体。大肠杆菌菌株通常被分为共生性或病原性，病原性菌株再分成肠内或肠外菌株。更新的分类技术如多基因座酶电泳法(MLEE)将大肠杆菌分为5类系统发生组(A、BI、B2、D和E)，这些分组与传统的分类不匹配。例如MLEE BI组包括共生性和病原性菌株，D组包括肠内和肠外菌株。大肠杆菌的肠外病原性菌株(或’ ExPEC 菌株[I])落入MLEE B2组和D组中，包括尿路病原性(UPEC)菌株和脑膜炎/脓毒症相关性(MNEC)菌株。UPEC菌株引起尿路感染(UTI)，为膀胱炎的最普遍形式。它们还引起肾盂肾炎(及其并发症如脓毒症)和尿导管相关感染。MNEC菌株引起病例致死率范围在25% -40%的新生儿脑膜炎(每1000个活新生儿中出现O. I例)，还引起大约1/6的脓毒症病例。最早的ExPEC疫苗基于细胞裂解物或细胞结构。S0LC0UR0VAC 包括10种不同的热杀细菌，包括6种ExPEC菌株，參考文献2中报道了成功的II期临床实验。UR0-VAX0M 是ー种含有18种选择的大肠杆菌菌株的冻干细菌裂解物的ロ服片剂疫苗[3]。BaxterVaccines研制出一种基于6_10种不同菌株来源的菌毛的UTI疫苗,但该产品已被放弃。MedImmune研制出一种基于FimH粘附素复合物的名为MEDI516的产品[4]，但是II期临床实验显示效カ不够。而且，这种疫苗存在影响正常肠道菌丛中的非病原性FimH^菌株的风险，同吋，由于其膀胱特异性粘附机制，预计这种疫苗仅对UPEC菌株有效，而其它ExPEC菌株不受它的控制。因此，需要ー种改良的ExPEC疫苗，还需要从天然细胞裂解物转移到更明确的分子，还需要鉴定适于包含入疫苗的其它抗原，尤其是那些在临床ExPEC菌株中很普遍、而在共生性菌株中不存在的抗原。
參考文献5报道了满足上述需要的ー种方法，其发明人寻找在MLEE B2类型和D类型的基因组中存在但在MLEE A类型和BI类型中不存在的基因。基于扣除杂交的其它比较方法參见參考文献6和7。參考文献8中也鉴定了 ExPEC菌株的毒力基因。參考文献9分析了 UPEC大肠杆菌菌株536中的四种致病性岛(island)。參考文献10采用UPEC(06:K2:H1)菌株CFT073的基因组序列[11，12]来鉴定在非病原性大肠杆菌菌株中不存在的序列。參考文献13比较了大肠杆菌人肾盂肾炎分离物536(06:K15:H31)( ー种UPEC)的基因组序列与菌株CFTO 7 3 (UPEC)、EDL933(肠出血性)和MG1655(非病原性实验菌株)的序列数据。病原性菌株的基因组序列获自数据库中的登录号AE005174、BA000007和NC-004431。非病原性菌株的序列获自登录号U00096。本发明的目的是提供用于引起对病原性大肠杆菌菌株、具体是ExPEC菌株、更具体是UPEC菌株的免疫的其它抗原。

发明内容
发明人确定了能包含入对病原性大肠杆菌菌株有特异性的免疫原性组合物中的各种基因。所述基因来自尿路病原性菌株(UPEC)，然而在非病原性菌株中不存在，并且其编码蛋白的细胞定位使它们可受免疫系统的影响。一方面，本发明涉及一种多肽，其包含(a)选自下组的氨基酸序列SEQ ID N022、 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、I10、I11、I12、I13、I14、I15、I16、I17、I18、I19、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、
218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249、250、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、264、265、266、267、268、269、270、271、272、273、274、275、276、277、278、279、280、281、282、283、284、285、286、287、288、289、290、291、292、293、294、295、296、297、298、299、300、301、302、303、304、305、306、307、308、309、310、311、312、313、314、315、316、317、318、319、320、321、322、323、324、325、326、327、328、329、330、331、332、333、334、335、336、337、338、339、340、341、342、343、344、345、346、347、348、349、350、351、352、353、354、355、356、357、358、359、360、361、362、363、364、365、366、367、368、369、370、371、372、373、374、375、376、377、378、379、380、381、382、383、384、385、386、387、388、389、390、391、392、393、394、395、396、397、398、399、400、401、402、403、404、405、406、407、408、409、410、411、412、413、414、415、416、417、418、419、420、421、422、423、424、425、426、427、428、429、430、431、432、433、434、435、436、437、438、439、440、441、442、443、444、445、446、447、448、449、450、451、452、453、454、455、456、457、458、459、460、461、462、463、464、465、466、467、468、469、470、471、472、473、474、475、476、477、478、479、480、481、482、483、484、485、486、487、488、489、490、491、492、493、494、495、496、497、498、499、500、501、502、503、504、505、506、507、508、509、510、511、512、513、514、515、516、517、518、519、520、521、522、523、524、525、526、527、528、529、530、531、532、533、534、535、536、537、538、539、540、541、542、543、544、545、546、547、548、549、550、551、552、553、554、555、556、557、558、559、560、561、562、563、564、565、566、567、568、569、570、571、572、573、574、575、576、577、578、579、580、581、582、583、584、585、586、587、588、589、590、591、592、593、594、595、596、597、598和599 ； (b)与氨基酸序列(a)的序列相同性至少为80%的氨基酸序列；(c)作为氨基酸序列(a)中至少10个连续氨基酸的片段的氨基酸序列；或(d)与氨基酸序列(a)的序列相同性至少为80%并包含氨基酸序列(a)中至少10个连续氨基酸的片段的氨基酸序列。在ー个具体实施方式
中，本发明这方面的多肽包含ー种片段，其包含至少ー个(a)的B细胞表位。 另ー方面，本发明涉及一种多肽，其包含(a)选自下组的氨基酸序列SEQ IDNO22、120、219、221、305、371、400、489、555、565、597、598 和 599 ； (b)与氨基酸序列(a)的序列相同性至少为80%的氨基酸序列；(c)作为氨基酸序列(a)中至少10个连续氨基酸的片段的氨基酸序列；或(d)与氨基酸序列(a)的序列相同性至少为80%并包含氨基酸序列(a)中至少10个连续氨基酸的片段的氨基酸序列。在ー个具体实施方式
中，本发明这方面的多肽包含ー种片段，其包含至少ー个(a)的B细胞表位。本发明的多肽可用于在患者中产生免疫应答的药物及药物的制备。本发明还涉及ー种药物组合物，其包含与药学上可接受载体混合的本发明多肽。本发明还涉及ー种药物组合物，其包含两种或多种与药学上可接受载体混合的本发明多肽。在ー个具体实施方式
中，本发明药物组合物还包含疫苗佐剂。本发明还涉及免疫原性组合物，其包含表达或过表达包含如下氨基酸序列的ー种或多种多肽的一种或多种外膜泡(OMV) (a)选自下组的氨基酸序列SEQ IDNO 22、120、
219、221、305、371、400、489、555、565、597、598 和 599 ;(b)与氨基酸序列(a)的序列相同性至少为80%的氨基酸序列；(c)作为氨基酸序列(a)中至少10个连续氨基酸的片段的氨基酸序列；或(d)与氨基酸序列(a)的序列相同性至少为80%并包含氨基酸序列(a)中至少10个连续氨基酸的片段的氨基酸序列。在ー个具体实施方式
中，本发明这方面的免疫原性组合物包含一种或多种多肽，所述多肽含有包含至少ー个(a)的B细胞表位的片段。本发明还涉及ー种在患者中产生免疫应答的方法，所述方法包括给予所述患者本发明的药物组合物或免疫原性组合物的步骤。在ー个具体实施方式
中，所述免疫应答能保护对象不受ExPEC感染。 本发明的其它方面描述如下。


图I显示用热灭活CFT073进行免疫后，用CFT073刺激后小鼠的存活率。
具体实施方式
本发明人鉴定了可包含在对病原性大肠杆菌菌株特异性的免疫原性组合物中的各种基因。所述基因来自UPEC菌株，然而在非病原性菌株中不存在，并且其编码蛋白的细胞定位使它们可受免疫系统的影响。多肽本发明提供多肽，其包含实施例中公开的氨基酸序列。序列表中的SEQ IDN01-596和SEQ ID NO 597-599给出了这些氨基酸序列。SEQ ID NO 1-596中的优选序列在表2、表3和表5中给出。本发明还提供包含与实施例中公开的氨基酸序列具有序列相同性的氨基酸序列的多肽。针对特定序列，序列相同性程度优选大于50% (如60%、7 0%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高)。这些多肽包括同源物、直向同源物、等位基因变体和突变体。一般地，两种多肽序列之间相同性为50%或更高被认为是功能等效的标志。优选用MPSRCH程序(Oxford Molecular)中运行的Smith-Waterman同源性检索算法来确定多肽间的相同性，其采用带有參数缺ロ开放罚分=12和缺ロ延伸罚分=I的仿射缺ロ检索来进行。与实施例的序列相比，这些多肽可包含ー个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10
等)保守的氨基酸取代，即用具有相关侧链的另ー种氨基酸取代原有氨基酸。遗传编码氨基酸通常分成4种家族(I)酸性，即天冬氨酸、谷氨酸；(2)碱性，即赖氨酸、精氨酸、组氨酸；(3)非极性，即丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸；和(4)不带电荷的极性氨基酸，即甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸。有时将苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸一起称为芳族氨基酸。通常，这些家族中的单个氨基酸的替换不会对生物活性产生重要影响。相对于參比序列，所述多肽可以有ー个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10等)单个氨基酸的缺失。相对于參比序列，所述多肽还可包含ー个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10等)插入(如1、2、3、4或5个氨基酸)。优选的多肽包含那些脂质化的、位于外膜中的、位于内膜中的、或位于周质中的多肽。尤其优选的多肽是同时属于这些范畴中I种以上的多肽，如位于外膜中的脂质化多肽。翻译后加工信号肽后脂蛋白的N端半胱氨酸共价连接于脂质。可以进行脂质化的多肽包括SEQID NO :1、2、7、12、13、14、15、16、17、18、22、26、28、29、33、34、38、40、45、50、51、59、67、68、69、71、77、80、82、83、84、92、98、103、104、105、120、121、124、125、126、127、130、131、133、134、138、142、147、159、160、176、184、185、186、187、192、206、210、215、222、223、225、226、228、233、234、246、251、252、268、272、273、275、284、287、293、295、297、298、299、300、302、303、304、305、310、311、312、314、315、320、326、327、330、331、336、340、359、360、364、366、367、369、370、371、374、378、379、386、387、388、389、390、395、400、401、407、408、418、419、422、423、425、429、431、433、434、435、436、438、441、442、444、447、453、464、465、472、478、492、500、506、509、517、518、519、523、526、531、536、540、543、544、546、548、551、557、559、560、562、563、564、565、566、568、569、574、577、583、584、585、586、593 和 594。优选多肽为表2、表3和表5列出的多肽，尤其是表3列出的多肽。本发明还提供包含实施例中公开的氨基酸序列的片段的多肽。所述片段包含该序列中至少η个连续氨基酸，针对特定序列，η为7或更大(如8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100或更大)。所述片段可包含该序列的至少ー
个T细胞表位，或优选地，B细胞表位。T细胞表位和B细胞表位可凭经验鉴定(如采用PEPSCAN[14、15]或类似方法)或预测(如采用Jameson-WoIf抗原性指数[16]、矩阵基方法、TEPIT0PE[18]、神经网络[19]、OptiMer & EpiMer [20、21]、ADEPT [22]、Tsites [23]、亲水性[24]、抗原性指数[25]或參考文献26公开的方法等)。其它优选片段为(a)本发明多肽的N端信号肽、(b)不具有N端信号肽的本发明多肽、(c)不具有其N端氨基酸残基的本发明多肽。其它优选的片段为以可能的起始密码子(ATG、GTG、TTG)编码的氨基酸开始的那些片段。从所示起始密码子下游的起始密码子编码的甲硫氨酸处开始的片段为本发明多肽。其它优选的片段为那些与本发明多肽以及与由參考文献5、6、8、10和11中的任一 篇鉴定的多肽相同的片段。本发明多肽可以许多方式制备，如化学合成(全部或部分)、用蛋白酶消化较长多肽、对RNA进行翻译、从细胞培养物(如重组表达的细胞培养物)或生物体本身(如经过细菌培养或直接来自患者的生物体)进行纯化等。制备长度<40个氨基酸的多肽的优选方法包括体外化学合成[27、28]。尤其优选固相的肽合成，如基于tBoc或Fmoc[29]化学的方法。也可部分或全部采用酶合成[30]。作为对化学合成的替代方法，还可采用生物合成，例如可以通过翻译来制备多肽。这可在体外或体内进行。生物学方法通常限于制备L氨基酸多肽，然而操控翻译机器(如氨酰基tRNA分子)可用于引入D氨基酸(或其它非天然氨基酸，如碘化酪氨酸或甲基苯丙氨酸、叠氮高丙氨酸等)[31]。然而，含有D氨基酸吋，优选采用化学合成方法。可在C末端和/或N末端对本发明多肽进行共价修饰。本发明多肽可采取各种形式(如天然、融合、糖基化、非糖基化、脂质化、非脂质化、磷酸化、非磷酸化、十四烷基化、非十四烷基化、単体、多聚体、颗粒、变性等)。优选提供纯化或基本纯化形式，即基本上不含其它多肽(如不含天然产生的多肽)，尤其是不含其它ExPEC或宿主细胞多肽的本发明多肽，通常至少约50 %纯(重量)，通常至少约90%纯，即其它表达多肽占该组合物的约50%以下，更优选约10%以下(如5%或更少)。本发明的多肽优选为ExPEC多肽。本发明多肽可连接于固相载体。本发明多肽可包含检测标记(如放射性或荧光标记或生物素标记)。术语“多肽”指任何长度的氨基酸聚合物。所述聚合物可以是直链或支链，它可包含修饰氨基酸，并且可被非氨基酸所中断。所述术语还涵盖经天然修饰或介入(intervention)修饰的氨基酸聚合物；例如，ニ硫键形成、糖基化、脂质化、こ酰化、磷酸化或任何其它操控或修饰，如与标记组分偶联。该定义还包括(例如)含有一个或多个氨基酸类似物(包括(如)非天然氨基酸等)以及其它本领域公知修饰的多肽。多肽可以单链或结合链的形式存在。本发明多肽可以是天然或人工糖基化的多肽(即所述多肽的糖基化模式与在相应的天然产生多肽中发现的糖基化模式不同)。本发明多肽的长度可以是至少40个氨基酸(如至少40、50、60、70、80、90、100、120、140、160、180、200、220、240、260、280、300、350、400、450、500 或更多)。本发明多肽可短于 500 个氨基酸(如不超过 40、50、60、70、80、90、100、120、140、160、180、200、220、240、260、280、300、350、400 或 450 个氨基酸)。本发明提供的多肽包含序列-X-Y-或-Y-X-，其中-X-为上述定义的氨基酸序列，-Y-并非上述定义的序列，即本发明提供融合蛋白。当多肽编码序列的N末端密码子并非ATG时，所述密码子将会按照该密码子的标准氨基酸进行翻译而不是翻译成Met，这种情况发生在该密码子翻译成起始密码子吋。本发明提供一种制备本发明多肽的方法，包括在诱导多肽表达的条件下培养本发明的宿主细胞的步骤。本发明提供一种制备本发明多肽的方法，其中所述多肽部分或完全用化学方法合成。本发明提供ー种含有两种或多种本发明多肽的组合物。本发明还提供一种以通式NH2-A-[-X-L-]n-B-C00H表示的杂交多肽，其中X为上述定义的本发明多肽，L为任选的接头氨基酸序列，A为任选的N末端氨基酸序列，B为任选的C末端氨基酸序列，η为大于I的整数。η值在2和X之间，X值一般为3、4、5、6、7、
8、9或10。优选地，η为2、3或4 ;更优选地为2或3 ;最优选地，η = 2。在姆种η的例子中，-X-可以相同或不同。在[-X-L-]的每种η的例子中，接头氨基酸序列-L-可有或无。例如，当 η = 2 时，该杂交体可以是 NH2-X1-L1-X2-L2-COOHAH2-X1-X2-COOHAH2-X1-L1-X2-COOlNH2-X1-X2-L2-COOH等。接头氨基酸序列-L-一般为短序列(如20个或更少氨基酸，即19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1个)。例子包括有助于克隆的短肽序列、聚甘氨酸接头(即Glyn，其中η = 2、3、4、5、6、7、8、9、10或更大)、和组氨酸标签(即Hisn，其中11 = 3、4、5、6、7、8、9、10或更大)。其它合适的接头氨基酸序列对本领域技术人员而言是显而易见的。-A-和-B-为任选序列，一般为短序列(如40个或更少氨基酸，即39、38、37、
36、35、34、33、32、31、30、29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、
11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1个)。例子包括指导多肽运输的前导序列，或有助于克隆或纯化的短肽序列(如组氨酸标签，即把811，其中11 = 3、4、5、6、7、8、9、10或更大)。其它合适的N末端和C末端氨基酸序列对本领域技术人员而言是显而易见的。可采用各种试验来评估本发明多肽的体内免疫原性。例如，多肽可重组表达并通过免疫印迹法用来筛选患者血清。多肽和患者血清之间发生阳性反应说明患者以前对所研究蛋白产生了免疫应答，即该蛋白为免疫原。这种方法还可用来鉴定优势免疫蛋白。抗体本发明提供与本发明多肽结合的抗体。它们可以是多克隆或单克隆抗体，并可由任何合适方法制备(如通过重组表达)。为了增加其与人免疫系统的相容性，所述抗体可以是嵌合抗体或人源化抗体[如，參考文献32和33]，或可采用完全人杭。所述抗体可以包含检测标记(如用于诊断试验)。本发明抗体可以连接于固相载体。本发明抗体优选为中和抗体。单克隆抗体对鉴定和纯化与之结合的単独多肽尤其有用。本发明的单克隆抗体也可以用作免疫測定、放射性免疫试验(RIA)或酶联免疫吸附试验(ELISA)等的试剂。在这些应用中，可用分析检测试剂如放射性同位素、荧光分子或酶标记抗体。以上述方法制备的单克隆抗体还可用于本发明多肽的分子鉴定或表征(表位作图)。 本发明抗体优选对大肠杆菌的ExPEC菌株具有特异性，即，相对于其它细菌(如，相对于非ExPEC大肠杆菌和相对于非大肠杆菌细菌)，它们优选地与ExPEC大肠杆菌结合。更优选地，所述抗体对UPEC菌株具有特异性，即，相对于其它细菌，包括其它ExPEC大肠杆菌，它们优选地与UPEC细菌结合。本发明抗体优选地以纯化或基本纯化形式提供。一般地，抗体存在于基本上不含其它多肽的组合物中，如组合物中其它多肽少于90% (重量)，通常少于60%，更通常少于50%。本发明抗体可以是任何同种型(如IgA、IgG、IgM,即α、γ或μ重链)，然而通常为IgG。在IgG同种型中，抗体可以是 IgGl、IgG2、IgG3、IgG4亚类。本发明抗体可具有K或λ轻链。本发明抗体可具有各种形式，包括完整抗体，抗体片段如F(ab’)2和F(ab)片段、Fv片段(非共价异ニ聚体)、单链抗体(如单链Fv分子(scFv))、小抗体、寡抗体(oligobody)等。术语“抗体”不暗指任何特定来源，并包括由非常规方法(如噬菌体呈现)所获得的抗体。本发明提供一种检测本发明多肽的方法，包括如下步骤(a)在适于形成抗体-杭原复合物的条件下将生物样品与本发明抗体接触；和(b)检测所述复合物。本发明提供一种检测本发明抗体的方法，包括如下步骤(a)在适于形成抗体-杭原复合物的条件下将生物样品(如血液或血清样品)与本发明多肽接触；和(b)检测所述复合物。优选抗体与本发明多肽结合的亲和カ明显大于本领域公知抗体。优选地，该亲和カ至少比本领域公知抗体强I. 5倍、2倍、5倍、10倍、100倍、IO3倍、IO4倍、IO5倍、IO6倍等。核酸本发明还提供包含编码本发明多肽的核苷酸序列的核酸。本发明还提供包含与所述核苷酸序列有序列相同性的核苷酸序列的核酸。序列之间的相同性优选用上述Smith-Waterman同源检索算法确定。本发明还提供可与这些核酸杂交的核酸。杂交反应可以在不同“严格”条件下进行。本领域众所周知并公开了提高杂交严格性的条件[如參考文献34第7. 52页]。相关条件的例子包括(以严格性递增的顺序)培育温度25で、37で、50で、55で和68で；缓冲液浓度:10XSSC、6XSSC、1XSSC、0. I X SSC (其中 SSC 为 O. 15M NaCl 和 15mM 柠檬酸盐的缓冲液)及采用其它缓冲体系的等效物；甲酰胺浓度50%和75% ;培育时间从5分钟到24小时；1次、2次或更多次洗涤步骤；1分钟、2分钟或15分钟的洗涤培育时间；洗涤溶液6XSSC、1XSSC、0. IXSSC或去离子水。杂交技术及其优化为本领域公知[如见參考文献34-37等]。一些实施方式中，本发明核酸在低严格条件下与靶点杂交；在其它实施方式中它在中等严格条件下杂交；优选实施方式中，它在高度严格条件下杂交。低严格杂交条件的示例性參数组为50°C和10XSSC。中等严格杂交条件的示例性參数组为55°C和1XSSC。高度严格杂交条件的示例性參数组为68°C和O. IXSSC0还提供了包含这些序列片段的核酸。它们应该包含序列中的至少η个连续核苷酸，根据特定序列，η 为 10 或更多(如 12、14、15、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100,150,200或更多)。优选的片段为与本发明核酸序列和參考文献5、6、8、10和11中任ー篇所鉴定的核苷酸序列相同的那些片段。本发明提供通式5' -X-Y-Z-3'的核酸，其中-X-为由X个核苷酸组成的核苷酸序列；-Z-为Z个核苷酸组成的核苷酸序列；-Y-为由以下片段组成的核苷酸序列(a)编码SEQ ID NO :1-596之一的核酸序列的片段；或(b)编码SEQ ID NO :597-599之一的核苷酸序列的片段；或(c) (a)或(b)的互补物;所述核酸5' -X-Y-Z-3'不是⑴编码SEQ IDNO :1-596之一或编码SEQ ID NO :597-599之一的核酸序列的片段，也不是(ii) (i)的互补物。-X-和/或-Z-部可包含启动子序列(或其互补序列)。本发明包括包含与这些序列互补的序列的核酸(如作为反义链或探针，或用作引物)。本发明核酸可用于杂交反应(如Northern杂交或Southern印迹 、或用于核酸微阵列或‘基因芯片’)、扩增反应(如PCR、SDA、SSSR、LCR、TMA, NASBA等)和其它核苷酸技术。本发明核酸可具有各种形式(如单链、双链、载体、引物、探针、标记等)。本发明核酸可以是环状或支链，然而通常为直链。除非另有限定或要求，采用核酸的本发明任何实施方式均可采用双链形式和组成该双链形式的两条互补的单链形式。引物和探针通常为单链，反义核苷酸通常也是单链。优选以纯化或基本纯化的形式，即基本上不含其它核酸(如不含天然产生的核酸)、尤其不含其它ExPEC或宿主细胞核酸的形式提供本发明核酸，通常为至少约50%纯(重量)，通常至少约90%纯。本发明核酸优选地为ExPEC核酸。本发明核酸可以多种方式制备，如完全或部分采用化学合成(如DNA的亚磷酰胺合成)，用核酸酶消化较长核酸(如限制性酶)，连接基因组或cDNA文库中的较短核酸或核苷酸(如采用连接酶或聚合酶)等。本发明核酸可以连接于固相载体(如珠子、平板、滤纸、膜、玻片、微阵列载体、树脂等)。可用(如)放射性标记或荧光标记、或生物素标记标记本发明核酸。当该核酸用于检测技术，如该核酸是引物或探针时，标记特别有用。术语“核酸”通常包括任何长度的核苷酸的聚合形式，其包含脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸和/或其类似物。它包括DNA、RNA、DNA/RNA杂交体。它还包括DNA或RNA类似物，如含有修饰主链(如肽核酸(PNA)或硫代磷酸酷)或修饰碱基的类似物。因此本发明包括mRNA、tRNA、rRNA、核酶、DNA、cDNA、重组核酸、支链核酸、质粒、载体、探针、引物等。当本发明的核酸采用RNA形式时，它可能或可能不带有5'帽。本发明核酸包含序列，然而它们还可以包含非ExPEC序列(如上述通式5' -X-Y-Z-3'的核酸)。这对探针而言尤其适用，从而可使探针包含与靶核酸互补的第一序列和不与靶核酸互补的第二序列。引物中的任何此类非互补序列优选位于互补序列的
。典型的非互补序列包含限制性位点或启动子序列。本发明的核酸可用许多方法制备，如化学合成(至少一部分)，用核酸酶(如限制性酶)消化较长核酸，连接基因组或cDNA文库中的较短核酸(如采用连接酶或聚合酶)等。本发明核酸可以是载体的一部分，即设计用于转导/转染ー种或多种细胞类型的核酸构建物的一部分。载体可以是，例如，设计用来分离、増殖和复制插入核苷酸的“克隆载体”，设计用来在宿主细胞中表达核苷酸序列的“表达载体”，设计用来生产重组病毒或病毒样颗粒的“病毒载体”，或包括超过ー种类型的载体的属性的“穿梭载体”。优选的载体为质粒。“宿主细胞”包括单个细胞或细胞培养物，其可以作为或已经作为外源核酸的受体。宿主细胞包括单个宿主细胞的后代，并且由于天然、偶然或有意的突变和/或改变，所述后代不一定与原始亲代细胞完全相同(形态方面或总DNA互补物(complement)方面)。宿主细胞包括用本发明核酸在体内或体外转染或感染的细胞。当核酸为DNA吋，应理解，RNA序列中的“U”会被DNA中的“T”取代。相似地，当核酸为RNA吋，应理解，DNA序列中的“ T ”会被RNA中的“ U ”取代。当术语“互补物”或“互补”用于核酸时，指Watson-Crick碱基配对。因此C的互补物为G，G的互补物为C，A的互补物为T(或U)，T(或U)的互补物为Α。还 可能使用如1(嘌呤肌苷)这样的碱基，与嘧啶(C或Τ)互补。所述术语还暗示了方向，即5' -ACAGT-3'的互补物为 5' -ACTGT-3'而不是 5' -TGTCA-3'。本发明核酸可用于，如制备多肽；作为在生物样品中检测核酸的杂交探针；产生核酸的额外拷贝；产生核酶或反义寡核苷酸；作为单链DNA引物或探针；或作为三链形式寡核苷酸。本发明提供一种制备本发明核酸的方法，其中所述核酸为部分或全部采用化学方法合成的。本发明提供包含本发明核苷酸序列的载体(如，克隆或表达载体)和转染有所述载体的宿主细胞。本发明还提供包含用于扩增ExPEC核酸序列内所含模板序列的引物(如PCR引物)的试剂盒，所述试剂盒包括第一引物和第二引物，其中所述第一引物与所述模板序列基本互补，所述第二引物与所述模板序列的互补物基本互补，其中基本互补的所述引物部分确定了待扩增模板序列的末端。所述第一引物和/或第二引物可包括可检测标记(如荧光标记)。本发明还提供ー种试剂盒，其包括第一和第二单链寡核苷酸，其可以扩增单链或双链核酸(或其混合物)内所含的ExPEC模板核酸序列，其中(a)所述第一寡核苷酸包含与所述模板核酸序列基本互补的引物序列；(b)所述第二寡核苷酸包含与所述模板核酸序列的互补物基本互补的引物序列；(C)所述第一寡核苷酸和/或所述第二寡核苷酸包含不与所述模板核酸互补的序列；和(d)所述引物序列确定了待扩增模板序列的末端。所述特征(c)的非互补序列优选位于所述引物序列的上游(即其5'方向)。(c)序列中一种或两种可包含限制性位点[如參考文献38]或启动子序列[如39]。第一寡核苷酸和/或第二寡核苷酸可包括可检测标记(如荧光标记)。本发明提供检测本发明核酸的方法，包括如下步骤(a)在杂交条件下将生物样品与本发明核酸探针接触以形成双链体；和(b)检测所述双链体。本发明提供检测生物样品(如血液)的方法，包括如下步骤在杂交条件下将生物样品与本发明核酸接触。所述方法可以包括核酸扩增(如，PCR、SDA、SSSR、LCR、TMA、NASBA等)或杂交(如微阵列、印迹、在溶液中与探针杂交等)。已经报道过用PCR检测临床样品中的ExPEC [如，见參考文献40]。在參考文献41中总体描述了基于核酸的临床试验。本发明提供ー种制备靶序列片段的方法，其中通过延伸核酸引物制备所述片段。所述靶序列和/或引物为本发明的核酸。所述引物延伸反应可包括核酸扩增(如，PCR、SDA、SSSR、LCR、TMA、NASBA 等)。本发明的核酸扩增可以是定量和/或实时扩增。就本发明的某些实施方式而言，核酸长度优选为至少7个核苷酸(如8、9、10、11、
12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、45、50、55、60、65、70、75、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、225、250、275、300 个核苷酸或更长)。就本发明的某些实施方式而言，核酸长度优选为至多500个核苷酸(如450、400、350、300、250、200、150、140、130、120、110、100、90、80、75、70、65、60、55、50、45、40、39、38、
37、36、35、34、33、32、31、30、29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15 个核苷酸
或更短)。本发明的引物和探针，以及其它用于杂交的核酸的长度优选为10-30个核苷酸(如 10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29 或 30 个核苷酸)。小泡參考文献42描述了通过敲除mltA(胞壁质溶解性糖基转移酶)或大肠杆菌Tol-Pal复合物的一种或多种组分(如tolA、tolQ、tolB、pal和/或tolR)从尿路病原性(UPEC)菌株中制备小泡的方法。可以对细菌染色体进行ー个或多个遗传改变或插入附加型元件(如表达载体)来増加小泡表面保护性抗原的量和/或免疫可及性，从而改进小泡。获得此类改进的ー种方法是上调本发明多肽的表达。本领域熟知增加靶蛋白表达的多种不同遗传方案，它们可能分成两大类ー类依赖对染色体的修饰(如用较强的启动子替换野生型启动子、使天然抑制基因失活等)以增加内源性基因的表达，另ー类则基于附加型元件(如高拷贝数质粒、携帯工程改造的靶基因的载体等)或染色体中整合外源性基因进行的重组表达。这些方法的实施例可以在參考文献44-50中找到。提高小泡免疫原性和选择性的另ー种方法是下调免疫优势非保护性抗原的表达或下调与共生菌株中找到的蛋白同源的蛋白。可以通过对LPS的脂质A部分进行脱毒而获得进ー步改进。先前描述了相似的改变，以从其它革兰阴性病原体中产生改进小泡(參见參考文献51和52)。所有上述方案均可単独使用或联用以获得用于免疫原性组合物的改进小泡。本发明提供一种敲除了 mltA和/或其Tol-Pal复合物的组分和下组中ー种或多种的病原性大肠杆菌(尤其是UPEC) (i)在一种与编码本发明多肽的基因天然相连的启动子相比使本发明多肽表达水平升高的启动子的控制下编码本发明多肽的染色体基因；(ii)编码本发明多肽的自主复制的染色体外元件；和/或(iii)相对于野生型LPS减弱大肠杆菌LPS的脂质A部分毒性的遗传修饰。本发明还提供可通过培育此类细菌获得的小泡，例如在细菌培养时，释放入培养 基中的小泡。药物组合物本发明提供的组合物含有(a)本发明的多肽、抗体、小泡和/或核酸；和(b)药学上可接受的载体。这些组合物可能适合用作免疫原性组合物，例如，或者用作诊断试剂，或者用作疫苗。本发明的疫苗可以是预防性疫苗或治疗性疫苗，但一般是预防性疫苗。
在ー个具体方面，本发明提供包含表达或过表达ー种或多种本发明多肽的ー种或多种外膜泡(OMV)的免疫原性组合物。在ー个具体实施方式
中，本发明提供包含表达或过表达ー种或多种多肽的ー种或多种OMV的免疫原性组合物，所述多肽包含(a)选自SEQ IDNO :22、120、219、221、305、371、400、489、555、565、597、598 或 599 的氨基酸序列；(b)与氨基酸序列(a)的序列相同性至少为80%的氨基酸序列；(c)作为来自氨基酸序列(a)的至少10个连续氨基酸的片段的氨基酸序列；或(d)与氨基酸序列(a)的序列相同性至少为80%并包含氨基酸序列(a)中至少10个连续氨基酸的片段的氨基酸序列。在另ー实施方式中，所述免疫原性组合物包含含有片段的多肽，所述片段含有选自下组的氨基酸序列的至少ー个 B 细胞表位SEQ ID NO 22、120、219、221、305、371、400、489、555、565、597、598 和599。‘药学上可接受的载体’包括自身不诱导产生对接受该组合物的个体有害的抗体 的任何载体。合适的载体一般为大的、代谢缓慢的大分子如蛋白质、多糖、聚乳酸、聚こ醇酸、多聚氨基酸、氨基酸共聚物、蔗糖、海藻糖、乳塘和脂质聚集体(如油滴或脂质体)。此类载体对本领域技术人员为公知技木。所述疫苗还可包含稀释剂，如水、盐水、甘油等。此夕卜，可存在助剂，如湿润剂或乳化剤、PH缓冲物质等。无菌无热原的磷酸盐缓冲生理盐水是典型的载体。对药学上可接受赋形剂的详细讨论參见參考文献296。本发明的组合物可包含抗微生物剂、尤其是以多剂量形式包装吋。本发明的组合物可包含去污剂，如吐温(聚山梨醇酷)，例如吐温80。去污剂的含量通常很低，如< O. 01% O本发明的组合物可包含钠盐(如氯化钠)以提供涨度(tonicity)。NaCl浓度ー般为 10±2mg/ml。本发明的组合物通常包含缓冲液。一般为磷酸盐缓冲液。本发明的组合物，尤其是当其将被冻干或当它们包含由冻干材料重建获得的物质时，可包含(如)约15-50mg/ml (如25mg/ml)的糖醇(如甘露醇)或ニ糖(如鹿糖或海藻糖)。在冻干前可将用于冻干的组合物的PH调整为约6. I。本发明的多肽可与其它免疫调节剂一起给药。具体说，组合物通常包含疫苗佐剂。所述佐剂可选自THl佐剂和TH2佐剂中的ー种或多种，下面进行进一歩论述。可用于本发明组合物的佐剂包括，但不限于A.含矿物质的组合物适合用作本发明佐剂的含矿物质的组合物包括无机盐、如铝盐和钙盐。本发明包括无机盐,如氢氧化物(例如羟基氧化物)、磷酸盐(例如羟磷酸盐、正磷酸盐)、硫酸盐等[例如參见參考文献53的第8和9章]或不同无机化合物的混合物(如磷酸盐和氢氧化物佐剂的混合物，任选地磷酸盐过量)，该化合物采用任何合适的形式(例如凝胶、晶体、无定形等)，优选吸附于盐。含矿物质的组合物制成金属盐颗粒[54]。典型的磷酸铝佐剂为无定形羟基磷酸铝，其P04/A1摩尔比为O. 84-0. 92，包括约O. 6mg Al3Vml0可以采用低剂量磷酸铝进行吸附，如每剂量每个偶联物采用50-100 μ gAl3+。当采用磷酸铝并且不希望使抗原吸附于佐剂时，宜在溶液中包含游离磷酸根离子(如通过采用磷酸盐缓冲液)。磷酸铝的零电荷点(PZC)与磷酸基团取代羟基的程度负相关，所述取代程度可能取决于用于以沉淀制备盐的反应条件和反应物浓度。也可通过改变溶液中游离磷酸根离子的浓度(更多磷酸离子=更偏酸性的PZC)或通过添加缓冲液如组氨酸缓冲液(使得PZC更偏碱性)来改变PZC。本发明采用的磷酸铝的PZC通常为4. 0-7. O,更优选5. 0-6. 5，如约
5.7。用于制备本发明组合物的铝盐悬液可以包含缓冲液(如磷酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或Tris缓冲液)，但并非必须包含。所述悬液优选为无菌且无热原的。悬液可以含有游离水相磷酸根离子如其浓度是I. 0-20mM，优选5-15mM，更优选约IOmM的磷酸根离子。所述悬液还可包含氯化钠。本发明可采用氢氧化铝和磷酸铝的混合物。此时磷酸铝比氢氧化铝多，如重量比为至少2 1，如彡5 I、彡6 I、彡7 I、彡8 I、彡9 I等。本发明疫苗中可含有铝盐，使Al3+的剂量为每剂量O. 2-1. Omg0 B.油乳剂适合用作本发明佐剂的油乳剂组合物包括鲨烯-水乳剤，如MF59 (采用微流化机将5%鲨烯、O. 5%吐温80和O. 5% Span 85制成亚微米颗粒)[參考文献53的第10章；还參见參考文献55-57，參考文献58的第12章]。MF59用作FLUAD 流感病毒三价亚基疫苗的佐剂。所述乳剂宜包含柠檬酸根离子，如IOmM柠檬酸钠缓冲液。用于该组合物中的尤其优选佐剂为亚微米水包油乳剂。本发明采用的优选的亚微米水包油乳剂为鲨烯/水乳剂，任选地包含不同量的MTP-PE，如含有4-5% (重量/体积)鲨烯、O. 25-1. O % (重量/体积)吐温80 (聚氧こ烯山梨糖醇单油酸酯)、和/或O. 25-1. O %的Span85 (山梨聚糖三油酸酯)以及任选的N-こ酰胞壁酰基-L-丙氨酰基-D-异谷氨酰氨酰基-L-丙氨酸-2-(1, -2, - ニ棕榈酰基-sn-甘油-3-羟基磷酰氧基)-こ胺(MTP-PE)的亚微米水包油乳剤。參考文献55和59-60中详细描述了用于组合物的亚微米水包油乳齐U、其制备方法和免疫刺激剂如胞壁酰肽。可以采用鲨烯、生育酚和吐温80的乳剤。所述乳剂可包含磷酸盐缓冲盐水。还可包含Span85 (如I % )和/或卵磷脂。这些乳剂可含有2-10%的鲨烯、2-10%的生育酚和O. 3-3%的吐温80，并且鲨烯生育酚的重量比优选彡1，以提供更稳定的乳剤。此类乳剂中的ー种可以通过以下方法制备将吐温80溶于PBS以获得2%溶液，然后将90ml所述溶液与5g DL-α-生育酚和5ml鲨烯的混合物混合，然后微流化所述混合物。得到的乳剂可含有(如)平均直径为100-250nm，优选约180nm的亚微米油滴。可以采用鲨烯、生育酚和Triton去污剂(如Triton X-100)的乳剤。可以采用鲨烯、聚山梨醇80和泊洛沙姆401( “Plur0nicTML121”)的乳剤。可用磷酸盐缓冲盐水，PH7.4配制所述乳剤。所述乳剂可用作胞壁酰ニ肽的递送载体，并与苏氨酰-MDP—起用于“SAF-1”佐剂[61] (O. 05-1 % Thr_MDP、5 %鲨烯、2. 5 %普朗尼克(Pluronic)L121和O. 2%聚山梨醇80)。它还可以在没有苏氨酰-MDP的情况下用作“AF”佐剂[62] (5%鲨烯、I. 25%普朗尼克(Pluronic)L121和O. 2%聚山梨醇80)。优选进行微流化。还可将完全弗氏佐剂(CFA)和不完全弗氏佐剂(IFA)用作本发明佐剂。C.皂苷制剂[參考文献53第22章]皂苷制剂也可用作本发明的佐剂。皂苷为留醇糖苷和三萜糖苷的异种组，其发现于广泛的植物种类的树皮、叶、莖、根甚至花中。分离自阜树(Quillaia Saponaria,Molina)树皮的阜苷作为佐剂已广泛研究。在商业上，阜苷还可获自丽花菝葜(Smilax ornata)(墨西哥菝葜)、满天星(Gypsophilla paniculata)(婚纱花)和肥阜草(Saponariaofficianalis)(皂根)。皂苷佐剂制剂包括纯化制剂如QS21和脂质制剂如ISCOM。皂苷组合物采用HPLC和RP-HPLC纯化。已鉴定出采用这些技术特别纯化的部分，包括QS7、QS17、QS18、QS21、QH-A、QH-B 和 QH-C。优选地，皂苷为 QS21。制备 QS21 的ー种方法示于參考文献63。皂苷制剂还可包含留醇，如胆固醇[64]。皂苷和胆固醇的组合可用于形成免疫刺激复合物(ISCOM)的独特颗粒[參考文献53第23章]。ISCOM通常也包含磷脂，如磷脂酰こ醇胺或磷脂酰胆碱。任何已知皂苷均可用于ISC0M。优选地，ISCOM包含ー种或多种Qui 1A、QHA和QHC。ISCOM在參考文献64-66中进ー步描述。任选地，ISCOM不含另外的去污剂[67]。
有关皂苷基佐剂的进展的综述可见參考文献68和69。D.病毒体或病毒样颗粒病毒体和病毒样颗粒(VLP)也可用作本发明的佐剂。这些结构通常包含一种或多种来自病毒的蛋白，所述病毒任选结合磷脂或用磷脂配制。它们通常为不致病、不复制且通常不含有任何天然病毒基因组。所述病毒蛋白可由重组方法制备或从完整病毒中分离。这些适用于病毒体或VLP的病毒蛋白包括由如下病毒衍生的蛋白流感病毒(如HA或NA)、こ肝病毒(如核心蛋白或衣壳蛋白)、戊肝病毒、麻疹病毒、辛德比斯病毒(Sindbis)、轮状病毒、ロ蹄疫病毒、反转录病毒、诺沃克病毒(Norwalk)、人乳头状瘤病毒、HIV、RNA噬菌体、
噬菌体(如外被蛋白)、GA噬菌体、fr噬菌体、AP205噬菌体、和Ty (如反转录转座子Ty蛋白pi)。VLP在參考文献70-75中进ー步讨论。病毒体在參考文献76中进ー步讨论。E.细菌或微生物衍生物适用于本发明的佐剂包括细菌或微生物衍生物，如肠细菌脂多糖(LPS)的非毒性衍生物、脂质A衍生物、免疫刺激性寡核苷酸和ADP核糖基化毒素及其脱毒衍生物。LPS的非毒性衍生物包括单磷酰脂质A (MPL)和3_0_脱酰化MPL (3dMPL)。3dMPL为带有4、5或6条酰化链的3脱-O-酰化单磷酰脂质A的混合物。优选的“小颗粒”形式的3脱-O-酰化单磷酰脂质A在參考文献77中公开。此类3dMPL “小颗粒”足够小，能通过O. 22 μ m膜进行无菌过滤[77]。其它非毒性LPS衍生物包括单磷酰脂质A模拟物，如氨烷基氨基葡糖苷磷酸衍生物，如RC529[78、79]。脂质A衍生物包括大肠杆菌来源的脂质A的衍生物，如OMl74。OMl74在參考文献80和81中进行了描述。适合用作本发明佐剂的免疫刺激性寡核苷酸包括含有CpG基序(含有通过磷酸键与鸟嘌呤连接的未甲基化胞嘧啶的二核苷酸序列)的核苷酸序列。含有回文或聚(dG)序列的双链RNA和寡核苷酸也显现出免疫刺激性。CpG可包括核苷酸修饰/类似物，如硫代磷酸修饰并可为双链或单链。參考文献82、83和84公开了可能的类似物取代，如用2'-脱氧_7_脱氮鸟苷代替鸟苷。CpG寡核苷酸的佐剂效果在參考文献85-90中进ー步讨论。CpG序列可指向TLR9，如基序GTCGTT或TTCGTT[91]。CpG序列可特异性诱导Thl免疫应答，如CpG-A 0DN,或可更特异性地诱导B细胞应答，如CpG-BODN。CpG-A和CpG-BODN在參考文献92-94中讨论。优选的CpG为CpG-A ODN0优选地，构建CpG寡核苷酸使5'端能进行受体识别。可选地，两种CpG寡核苷酸以其V端相连以形成“免疫聚体(immunomers)”。參见例如，參考文献91和95-97。其它免疫刺激性寡核苷酸包括双链RNA、或含有回文序列的寡核苷酸、或含有聚(dG)序列的寡核苷酸。细菌ADP-核糖基化毒素及其脱毒衍生物可用作本发明的佐剂。优选地，蛋白获自大肠杆菌(大肠杆菌热不稳定肠毒素“ LT”)、霍乱(“CT”)或百日咳(“PT”)。采用脱毒ADP-核糖基化毒素作为粘膜佐剂在參考文献98中描述,作为肠道外佐剂在參考文献99中描述。毒素或类毒素优选为包含A和B亚基的全毒素形式。优选地，A亚基包含脱毒突变；B亚基优选不突变。优选地，佐剂为脱毒LT突变体，如LT-K63、LT-R72和LT-G192。采用ADP-核糖基化毒素及其脱毒衍生物，尤其是LT-K63和LT-R72作为佐剂可參见參考文献 100-107。氨基酸取代的參比数字优选根据參考文献108中所列的ADP-核糖基化毒素的A和B亚基的比对得到。式I、II或III化合物或其盐也可以用作佐剂
I
权利要求
1.一种多肽，其含有氨基酸序列SEQ ID NO 577，该多肽用于在患者中产生免疫应答的药物的制备。
2.如权利要求I所述的多肽，其特征在于，所述多肽含有SEQID NO 557和选自有助于克隆的短肽序列、聚甘氨酸接头、和组氨酸标签的序列。
3.如权利要求I所述的多肽，其特征在于，所述多肽如SEQID NO 577所示。
4.ー种药物组合物，所述药物组合物包含如权利要求1-3中任一项所述的多肽与药学上可接受的载体的混合物。
5.ー种药物组合物，所述药物组合物包含两种或多种如权利要求1-3中任一项所述的多肽与药学上可接受的载体的混合物。
6.如权利要求4或5所述的组合物，还包含免疫佐剂。
7.如权利要求1-3中任一项所述的多肽或者如权利要求4或5所述的药物组合物在制备用于在患者中产生免疫应答的药物中的应用。
8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述免疫应答保护个体免受ExPEC感染。
全文摘要
本文公开了可包含在对病原性大肠杆菌(E.Coli)菌株特异性的免疫原性组合物中的各种基因。所述基因来自尿路病原性菌株，但不存在于非病原性菌株中，并且其编码蛋白的细胞定位使它们可受免疫系统的影响。
文档编号A61P31/04GK102675432SQ20121010312
公开日2012年9月19日 申请日期2006年2月17日 优先权日2005年2月18日
发明者D·戈麦斯·莫里尔, F·博兰达斯科萨, L·塞里诺, M·R·丰塔纳, M·皮萨 申请人:诺华疫苗和诊断公司