包含过氧化物酶体增殖物激活受体-γ的组合物的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种包括用于皮下给药的过氧化物酶体增殖物激活受体-γ的可注射组合物和一种用于改善皮肤缺点的方法。将该可注射组合物皮下给药于皮肤缺点的区域，包括步骤：a，鉴定皮肤缺点的区域；b，通过皮下或真皮下给药，在所述皮肤缺点的区域施用安全和美容有效量的组合物。
【专利说明】包含过氧化物酶体增殖物激活受体-Y的组合物
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种包含用于皮下给药的过氧化物酶体增殖物激活受体-Y的可注射组合物。本发明还涉及一种组合物用于改善皮肤缺点的用途。进一步地，本发明还涉及一种改善皮肤缺点的方法。其中，该包括过氧化物酶体增殖物激活受体-Y的可注射组合物皮下给药于皮肤缺点的区域，包括步骤:a，鉴定皮肤缺点的区域；b，通过皮下或真皮给药在所述皮肤缺点的区域施用安全和美容有效量的组合物。
【背景技术】
[0002]皮肤是一种复杂的组织，其通常被划分为三个主要的层，即表皮、真皮及位于真皮下方的皮下组织。皮肤最深的一层包含脂肪细胞，也被称为皮下脂肪层。皮肤相对于外界环境形成一个屏障结构。其具有各种功能，其中一个是控制身体的温度。皮肤会随着年纪发生变化。起隔绝和填充作用的皮下脂肪层会慢慢变薄，并失去一些脂肪。这就增加了皮肤受伤的风险和降低控制身体温度的能力。尤其是脸部和脖子部位的皮肤的脂肪量会随着年纪增大而减少。这就导致皮肤的填充量变少，这与皮肤上明显的皱纹，笑纹，面部皱纹的形成密切相关，尤其是面部肌肉运动较多易形成皱纹的区域。除了之外，随着年龄增长，内脏区域脂肪的重新排布会导致局部脂肪代谢障碍，并与如获得性免疫缺陷综合症(艾滋病)的病毒感染密切相关。
[0003]皮肤变化是最明显老化迹象之一。皮肤最显着的变化是出现皱纹和皮肤松弛。然而，越来越多的人喜欢感觉自己很年轻，且不想看上去很老。于是出现了许多被宣称能减少皱纹的产品，诸如面霜和乳液。但这往往只作为一个营销策略，实际并未被证实有这样的效果。其他用于治疗皮肤皱纹的方法包括在目标区域注射填料。真皮填充物包括骨胶原，透明质酸，藻朊酸盐，也可以包括人皮肤成纤维细胞等细胞，剁碎的脂肪组织，或自体移植细胞或组织等细胞。
`[0004]这类填料专门是针对组织量不足的缺陷(volume deficiencies),但在注射后总是会产生异物反应，而该异物反应会导致数个月甚至是高达数年的炎性结节和肉芽肿。通常，采用这类填料还会带来填料迁移的风险。真皮填充剂可以一种可吸收的非永久性的填充物，或者是一种是非吸收性的永久性的填充物。然而，合成的或动物来源的填料可能会弓I起超敏性反应。将病人的脂肪从一个位置转移到另一个位置的自体脂肪注射的过程非常复杂，价格昂贵且是侵入性的治疗，还需要配合合适的时机，即对病人而言，具有不便利性。
[0005]因此，对皮肤缺点的改进仍然是一种持续的需求。
[0006]本发明的一个目的是提供一种可注射组合物，该组合物具有良好的再生脂肪组织的功效。
【发明内容】
[0007]令人惊奇的是，一种包括用于皮下给药的过氧化物酶体增殖物激活受体-Y的可注射组合物满足了本发明的目的。[0008]因此，在一方面，本发明提供一种包括用于皮下给药的过氧化物酶体增殖物激活受体-Y的可注射组合物。皮下给药该包括用于皮下给药的过氧化物酶体增殖物激活受体-Y的组合物可以改善皮肤缺点，例如，由于年龄或病毒感染等原因引起的皮肤缺点。该可注射组合物可以为作为美容组合物或药物组合物。
[0009]本发明也涉及一种包括用于皮下给药的过氧化物酶体增殖物激活受体-Y可注射组合物，该组合物包括:
[0010]a,过氧化物酶体增殖物激活受体-Y ;b，药物可接受的载体，和可选的C，真皮填充物质。该可注射组合物可以为作为美容组合物或药物组合物。
[0011]本发明也涉及一种皮下注射本发明的可注射组合物用于改善皮肤缺点的用途，用于面部或身体外形修整，面部或身体塑形，作为面部或身体的填充物，或用于治疗大面积的组织量不足，和用于作为真皮填充材料的用途。该可注射组合物可以作为美容用组合物或者药用组合物。因此，本发明涉及一种非治疗性或治疗性的可注射组合物。
[0012]另外，本发明涉及一种改善皮肤缺点的方法，将本发明的可注射组合物皮下给药于皮肤缺点的区域，包括步骤:
[0013]a，鉴定皮肤缺点的区域；
[0014]b，通过皮下或真皮给药在所述皮肤缺点的区域施用安全和美容有效量的组合物。
[0015]该组合物可以作为美容用组合物或者药用组合物。本发明涉及一种非治疗性或治疗性的方法。将该包括过氧化物酶体增殖物激活受体-Y的组合物进行皮下给药可以减少在鉴定皮肤缺点的区域的皮肤缺点现象。
[0016]进一步地，本发 明的可注射组合物可以包括至少一种过氧化物酶体增殖物激活受体-Y的激动剂。进一步地，本发明的可注射的组合物可以含有视黄酸，视黄醇，视黄醛和/或类视黄醇X受体。
[0017]进一步地，本发明的可注射组合物可以包括如下所述的真皮填充材料，但并不限于此，包括:胶原蛋白，交联胶原蛋白，透明质酸，交联透明质酸，聚乳酸，羟基磷灰石钙，硫酸软骨素，聚酯，聚乙二醇，聚碳酸酯，聚乙烯醇，聚丙烯酰胺，聚酰胺，聚丙烯酸酯，聚醚酯，聚甲基丙烯酸酯，聚氨酯，聚己酸内酯，聚偶磷氮，聚原酸酯，聚乙交酯，赖氨酸和乳酸共聚物，赖氨酸-RGD和乳酸共聚物，脱乙酰壳多糖，藻酸盐，果胶，明胶，胶凝糖，角叉菜胶，细胞，干细胞，成体干细胞，胚胎干细胞，诱导多能干细胞，祖细胞，剁碎组织，自体移植细胞，脂肪或组织，以及它们的混合物。
[0018]对本发明的其他特征和有益效果体现在详细的【具体实施方式】和权利要求中。【具体实施方式】
[0019]本发明提供一种包括用于皮下给药过氧化物酶体增殖物激活受体-Y的可注射组合物。本发明的组合物具有良好的生物利用度(bioavaiIabiIity),可诱导天然脂肪的可持续生成(再生)，且并不具有任何强烈的侵入性。除此之外，相比现有的填充物，还可以减少副作用。更进一步地，还可以形成较为自然的外观。本发明的组合物可以作为填充物或者身体塑性剂。此外，相比合成的或动物来源的填料而言，通过使用一种天然化合物(该注射组合物)，从而具有一致的耐受性和安全性。因此，不太可能产生过敏反应。另外，对病人而言，既方便，更有效。[0020]该组合物带来的有益效果被认为是由于过氧化物酶体增殖物激活受体-Y与脂肪细胞发生反应产生的。过氧化物酶体增殖物激活受体Y (PPAR-Y)属于核激素受体亚家族的转录因子，被认为是可以用于上调脂肪组织。这种上调脂肪组织的能力可以用来改善在皮下脂肪组织中的脂肪量。与传递规则(topic delivery)相反,皮下给药可以将药效有效的传递到作用部位。另外，即使在治疗大面积脂肪组织不足的情况下，本发明的组合物也可以提供长期的药效，诱导人体自身的皮下脂肪再生。
[0021]在本发明中，术语“可注射的”意为本发明的组合物是可以注射于活体身体的目标区域，比如说哺乳动物。可以使用任何注射方式，包括但不限于针，显微操作针，注射器等。该组合物可以通过微创注射方式给药。微创注射方式给药是一种可持续诱导天然脂肪(生成)再生且没有任何强烈侵略性的微创技术。
[0022]术语“皮下给药”意为直接将药物沉积在真皮层，或在皮下脂肪层。可用的方式包括针，微针，多针阵列注射器，注射器或类似设备。例如喷射注射。
[0023]术语“皮下脂肪组织”是指位于脊椎动物皮肤的真皮层下的组织，也被称为皮下组织。
[0024]术语“缺点(imperfection)”意为指损失或不完美。更具体地说，“皮肤缺点”是指在皮肤逐渐衰老过程中表现出来的缺陷或瑕疵，例如，脂肪代谢障碍，皮肤老化或病毒感染。“皮肤缺点”可以为皱纹，眼皮松弛，鱼尾纹，鼻唇沟皱纹，疤痕或皮肤皱纹，皮肤下垂和皮肤凹陷。面部皮肤缺点包括，但不限于皱眉纹，眉间纹，鼻唇沟皱褶，前额皱纹，愤怒引起的皱纹，担心引起的皱纹，鱼尾纹或眶周线，笑纹，垂直或口周唇线，木偶线或口角纹，痤疮疤痕，脸颊凹陷，面部疤痕，嘴唇疤痕等。
[0025]术语“皮肤缺点”包括但不限制于皱皮，疤痕或有皱纹的皮肤，折叠皮肤，皮肤下垂。更进一步地，皮肤疾病或缺损不仅包括老化皮肤，还包括显示在外的具有审美缺陷的皮肤疾病，如粉刺或其他不平整的皮肤，抽脂后形成的皮肤凹陷或其他皮肤区域凹陷，二次植皮或其他外科手术弓I起的皮肤不平`整。
[0026]术语“外形修整”意为调整，塑形，重整或改变皮肤特征以形成一个看上去更青春，更饱满，更健康的皮肤外观，以及改善皮肤表现出的缺陷。这包括处理遍布全身的体积不足的缺陷以恢复青春或获得更年轻美貌的外观。例如，上臂，乳房，臀部。皮肤缺点也涉及手上、领口(decolletage)等大面积的体积不足。
[0027]术语“药学上可接受的”意为各种化合物或载体可以适用于皮下给药，且没有异常的毒性，不相容性，不稳定性，刺激性，过敏性反应等。该术语并不意味着限制所用化合物或产品的用途，而仅仅是用于描述药学的，且与本发明的主体具有相容性。
[0028]术语“美容有效量的”意为化合物或组合物的用量足以用于治疗皮肤缺点或修整面部轮廓，但该用量要求足以避免产生严重的副作用。
[0029]除非另有定义，本文所用的技术术语和科学术语与属于本领域普通技术人员所通常理解的含义相同。
[0030]在一实施方式中，过氧化物酶体增殖物激活受体-Y占组合物的总质量的0.00001%?5%。在其他实施例中，过氧化物酶体增殖物激活受体-Y占组合物的总质量的0.001%?1%。更进一步地，过氧化物酶体增殖物激活受体-Y可以占组合物的总质量的0.01% ?0.1%。[0031]过氧化物酶体增殖物激活受体-Y可以通过生物技术产生重组，例如在已知的主体中进行表达，如大肠杆菌(E.coli)，巨大芽孢杆菌，枯草芽孢杆菌，酵母，或中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。此外，也可以在真菌主体中表达，例如黑曲霉，构巢曲霉和毕赤酵母。该蛋白质可以通过如色谱等纯化手段进行纯化。在另一实施方式中，过氧化物酶体增殖物激活受体-Y也可以通过化学合成方法产生。此外,过氧化物酶体增殖物激活受体-Y也可以直接购买。
[0032]根据本发明的一实施方式，该组合物可以包括如下至少一种过氧化物酶体增殖物激活受体-Y的激动剂中:类花生酸类物质，特别是例如Λ12-前列腺素J2和15-脱氧-Λ 12-前列腺素J2的前列腺素。噻唑烷衍生物，例如罗格列酮，环格列酮，曲格列酮，恩格列酮和吡格列酮。非留体类抗炎药(NSAID)，非饱和的脂肪酸，α-亚油酸，花生四烯酸，二十二碳六烯酸，二十碳五烯酸，联苯衍生物，N-(苯基恶唑-4-基-甲氧基甲基)-环己基-琥珀酸酰胺衍生物，以及它们的混合物。
[0033]在本文中，“过氧化物酶体增殖物激活受体-Y的激动剂”是指可以直接与过氧化物酶体增殖物激活受体-Y蛋白发生反应，并刺激其与视黄醇X受体和/或它的靶基因反应以产生生理效应的化合物。通过与过氧化物酶体增殖物激活受体-Y的相互作用，激动剂可以增强和/或延长的该包括过氧化物酶体增殖物激活受体-Y组合物的作用效果。
[0034]根据本发明的一实施方式，该噻唑烷衍生物为罗格列酮，(RS)-5- ((4- (2-(甲基-2-吡啶基氨基)乙氧基)苯基)甲基)_2，4-噻唑烷二酮。更进一步地，包括在本发明的组合物中的噻唑烷衍生物可以为曲格列酮，(RS)-5-(4-(6-羟基-2，5，7，8-四甲基-2-基-甲氧基)苄基)-2，4-噻唑烷二酮)。在本发明的另一个实施例中，噻唑烷衍生物为吡格列酮，(RS)-5-{对-[2- (5-乙基-2-吡啶基)乙氧基]苄基} _2，4-噻唑烷二酮。
[0035]在一实施方式中，过氧化物酶体增殖物激活受体-Y的激动剂占组合物的总质量的0.00001%?5%。在另一实施例中，过氧化物酶体增殖物激活受体-Y的激动剂占组合物的总质量的0.001%?1%。在另一实施例中，过氧化物酶体增殖物激活受体-Y的激动剂占组合物的总质量的0.01% ?0.1%。
[0036]在本发明的一实施方式中，该组合物可以包括视黄酸，视黄醇和/或类视黄醇X受体。类视黄醇X受体与过氧化物酶体增殖物激活受体-Y形成异质二聚体。通过与类视黄醇X受体的相互作用，该含有过氧化物酶体增殖物激活受体-Y组合物的作用效果得以提高。在一实施方式中，该视黄酸，视黄醇，视黄醛或类视黄醇X受体占组合物的总质量的0.00001%?5%。在另一实施方式中，视黄酸，视黄醇，视黄醛或类视黄醇X受体占组合物的总质量的0.001%?1%。在其他实施例中，视黄酸，视黄醇，视黄醛或类视黄醇X受体占组合物的总质量的0.01%?0.1%。
[0037]在本发明的一实施方式中，该组合物进一步包括选自下述皮肤填充材料中的一种:胶原蛋白，交联胶原蛋白，透明质酸，交联透明质酸，聚乳酸，羟基磷灰石钙，硫酸软骨素，聚酯，聚乙二醇，聚碳酸酯，聚乙烯醇，聚丙烯酰胺，聚酰胺，聚丙烯酸酯，聚醚酯，聚甲基丙烯酸酯，聚氨酯，聚己酸内酯，聚偶磷氮，聚原酸酯，聚乙交酯，赖氨酸和乳酸共聚物，赖氨酸-RGD和乳酸共聚物，脱乙酰壳多糖，藻酸盐，果胶，明胶，胶凝糖，角叉菜胶，细胞，干细胞，成体干细胞，胚胎干细胞，诱导多能干细胞，祖细胞，剁碎组织，自体移植细胞，脂肪，组织，和它们的混合物。[0038]在本文中，“真皮填充材料”是指一种用于化妆及审美需求的用于容量补充的材料。该真皮填充材料可以为胶原蛋白。在其他实施例中，该真皮填充材料可以为胶原蛋白与一个或多个糖交联形成的交联胶原蛋白。在另一实施方式中，该真皮填充材料为藻朊酸盐。术语“藻朊酸盐”是指一种天然阴离子无支链的多糖，是从海洋褐藻中分离出来的。它是由-D-甘露糖醛酸和L-古罗糖醛酸两种聚合物构成的，通过两种酸的杂聚区域分开。根据本发明的一个实施例，可以通过使用均质藻类原料和标准化流程分离出高纯度的藻朊酸盐。藻朊酸盐需要满足生物相容性。在另一实施例中，真皮填充材料是交联的藻朊酸盐，例如钡交联的藻朊酸盐。藻朊酸盐和钡交联形成稳定的水凝胶。在另一实施例中，真皮填充材料可以是细胞，例如人皮肤成纤维细胞。
[0039]在一实施方式中,真皮填充材料是透明质酸(hyaluronic acid)。该透明质酸作为真皮填充材料，按照重量计算，占组合物的总质量的0.001%?8%。在另一实施方式中，按照重量计算，该透明质酸占组合物的总质量的1%?4%。在其他实施例中，该真皮填充材料透明质酸，按照重量计算，占组合物的总质量的2%?2.5%。
[0040]在一实施方式中，该组合物是皮下注射剂。皮下注射剂可以包括水溶液，悬浮液，油性溶液，乳剂，微乳剂，脂质体，微球，纳米粒子和植入物。皮下注射剂的优点是起效快，且对目标组织起针对性效果。更进一步，化合物系统可用的量是随着时间的推移而降低，这是由于在皮下组织的药物吸收速度慢。
[0041]在一实施方式中，该组合物包括一种介质，过氧化物酶体增殖物激活受体-Y悬浮在该介质中。该介质可以为无菌水，磷酸盐缓冲盐水(PBS)，林格液，等渗盐溶液(0.9%),氨基丁三醇，柠檬酸盐，碳酸盐，醋酸盐，硼酸盐，氨基酸，二乙胺，葡萄糖酸内酯，甘氨酸，乳酸，顺丁烯二酸，甲磺酸，单乙醇胺，酒石酸盐缓冲剂或它们的任意组合。
[0042]在本发明中，进一步地，该组合物还可以包括一种或多种选自如下所述的赋形剂:抗氧化剂，缓冲剂，等渗剂(tonicity agents),保湿剂,粘度增强剂和/或粘度调节剂，表面活性剂，络合剂(complex .builder),防沫剂,防腐剂，或它们的混合物。具体的，还可以为如络合剂，防沫剂和/或防腐剂等添加剂的物质，例如可以是乙二胺四乙酸(EDTA)，甲酚及其衍生物，苯甲酸，4-羟基苯甲酸酯，和/或山梨酸。典型的表面活性剂包括非离子型表面活性剂如聚山梨酸酯，聚山梨酯20或聚山梨酯80,西曲溴铵(cetrimoniumbromid)十六烧基批唳氯化物(cetylpyridiniumchlorid),脱氧胆酸盐,或它们的混合物。
[0043]抗氧化剂可以为，但不限制于如下所述:维生素E，维生素C，谷胱甘肽，辅酶Q，白藜芦醇，槲皮素，亚硫酸氢钠，丁基羟基苯甲醚/甲苯，半胱氨酸，连二亚硫酸钠，龙胆酸，谷氨酸，甲醒合次硫酸氢钠，偏亚硫酸氢钠，单硫代甘油(monothiogyIceroI),没食子酸丙酯，亚硫酸钠，硫代甘油钠(thiogycolate sodium),黄酮类化合物,过氧化氢酶,番爺红素,胡萝卜素，叶黄素，超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶(peroxidises)，锌或它们的混合物。
[0044]如上所述的本发明的组合物还可以包括一种或多种活性药物成分，该活性药物成分选自如下所述:麻醉剂，止痛剂(analgenics),抗菌剂,消炎药,生长因子,激素，药妆品，维生素，营养素，兴奋剂，类固醇，血管收缩药，抗血栓形成剂，抗凝血剂，镇静剂，肌肉松弛齐U，抗真菌剂，脂肪分解剂和生物复兴剂(biorejunevation)。
[0045]术语“活性药物成分”是指所有药物活性并可以在哺乳动物产生药物作用的结构和它们的所有已知的化学形式。例如，共轭物，同分异构体，酯，衍生物，代谢物，残留物，盐或它们的前体药物，但不限于此。
[0046]麻醉剂可以为，但不限于局部麻醉剂，如普鲁卡因，苯佐卡因，氯普鲁卡因，可卡因，环美卡因，地美卡因(dimethodcaine ),拉罗卡因，丙氧卡因，丙美卡因，丁卡因(tretracaine),阿替卡因，丁哌卡因，卡替卡因，辛可卡因，依替卡因，左布比卡因，甲哌卡因，哌罗卡因，丙胺卡因，罗哌卡因，三甲卡因。按照重量比，麻醉剂占组合物的合适的质量百分数约为0.01%?6%。
[0047]镇痛药可以为，但不限于对乙酰氨基酚，异丁苯丙酸，双氯芬酸，甲氧萘丙酸，阿司匹林，塞来昔布，依托昔布，罗美昔布，帕瑞昔布，罗非昔布，伐地昔布，尼美舒利，恶噻酰胺，如批罗昔康，异恶噻酰胺，酮尼昔康(tonexicam),舒多昔康和CP-14, 304 ;水杨酸类盐,如水杨酸，阿司匹林，双水杨脂制剂(disalcid),贝诺酯,三水杨酸胆碱镁(trilisate),阿司匹林对乙酰氨基酹混合物(safapryn),阿司匹林(solprin), 二氟尼柳，和芬度柳；乙酸衍生物，如双氯芬酸，芬氯酸，吲哚美辛，舒林酸，托美汀，伊索克酸，呋罗芬酸，硫平酸，齐多美辛，阿西美辛，芬噻唑酸，佐美酸(zomepiract)，环氯茚酸，奥昔平酸，联苯乙酸；灭酸酯类，如甲灭酸，甲氯芬，氟芬那酸，尼氟灭和托芬那酸；丙酸衍生物，如异丁苯丙酸，甲氧萘丙酸，苯恶洛芬，氟比洛芬，酮洛芬，非诺洛芬，联苯丁酮酸，吲哚布洛芬，吡咯布洛芬，卡布洛芬，恶丙嗪，普拉洛芬，咪洛芬，硫恶洛芬，舒洛芬，烯氨苯丙酸和噻洛芬。吡唑类，如保泰松，羟基保泰松，非普拉宗，阿扎丙宗和曲保松。
[0048]抗菌剂可以是，但不限于抗生素，如丁胺卡那霉素，庆大霉素，新霉素，妥布霉素，卡那霉素，美罗培南，亚胺培南或头孢克洛。抗病毒药物，如阿巴卡韦，阿昔洛韦，金刚烷胺，博赛泼维，西多福韦，瑞那韦，依度尿苷，泛昔洛韦，更昔洛韦，异丙肌苷(imunovir)，肌苷，干扰素，拉米夫定，索拉非尼(nexavir),奥司他韦，喷昔洛韦,利巴韦林,金刚乙胺，盐酸塔利韦林(viramidine)和齐多夫定。以及抗真菌药物，如咪康唑，酮康唑，伊曲康唑，克霉唑，益康唑，氟康唑，伏立康唑，阿巴芬净，萘替芬，卡泊芬净，米卡芬净，苯甲酸和灰黄霉素。
[0049]抗炎药可以是，但不限于，锌盐，包括多糖酸的锌盐，如透明质酸。
[0050]本发明的组合物可 以制成各种各样适合于注射给药到目标组织的产品，包括但不限于所列举的，溶液剂，凝胶剂，乳剂，悬浮液，微乳液，纳米乳液，滴液，脂质体，缓释药物材料，聚合物或单体和聚合剂等。在本发明中所用的组合物可以配制成溶液。本发明的组合物的制备可以为，将过氧化物酶体增殖物激活受体- Y与生理上可接受的盐和/或稠化剂在水中混合，如透明质酸，羟乙基纤维素，羧甲基纤维素，丙三醇或其他物质。该组合物还可以进一步包括有机溶剂。该组合物可以为任何已知形式的已制备的水溶液混合物。
[0051]在本发明的一实施方式中，该组合物可以用于改善皮肤缺点，用于面部或身体外形修整，面部或身体塑形，作为面部或身体的填充物，或用于治疗大面积的组织量不足的用途。
[0052]“大面积的组织量不足”是指皮肤的区域缺陷，它可以作为一个单一的大皱纹，例如脸颊凹陷，或领口，乳房，臀部，上臂等身体部位区域缺陷。
[0053]在本发明的一实施方式中，皮肤缺点可以是如下所述的疾病或皮肤瑕疵:皱皮，皮肤皱起，折叠皮肤，皮肤松弛，鱼尾纹，伤痕累累的皮肤，和皮肤上的洼地。皮肤缺点可能是有一些原因导致，如年纪，环境影响，减肥，怀孕，外科干预或痤疮。皮肤缺点尤指因年纪而引起的皮肤缺点。该组合物可以用于减少皮肤皱褶的深度，减少皱纹，填补组织缺损和减少可见性的疤痕。该组合物特别适合用于治疗皱纹，例如抬头纹，愤怒引起的皱纹，担心引起的皱纹，眉间纹；中等深度皱纹，如鼻唇沟，眉间纹，明显的轻度至中度鼻皱纹和面颊的皱纹，口周皱纹，眼皮松弛，鱼尾纹，痤疮疤痕。该组合物还适用于注射于嘴唇用于治疗手部区域，肩部和皮肤压痕的皱纹。
[0054]本发明还提供一种包括用于皮下注射给药的过氧化物酶体增殖物激活受体-Y的可注射组合物，该组合物包括:a，过氧化物酶体增殖物激活受体-Y，b，药学可接受的载体，和可选的C，一种皮肤填充材料。
[0055]根据本发明的一个方面，该组合物可以包括一个或多个药学上可接受的载体。合适的载体包括，但不限于，无菌水，磷酸盐缓冲盐水(PBS)，林格液，等渗盐溶液(0.9 % )，氨基丁三醇，柠檬酸盐，碳酸盐，醋酸盐，硼酸盐，氨基酸，二乙胺，葡萄糖酸内酯，甘氨酸，乳酸，顺丁烯，甲磺酸，单乙醇胺盐，酒石酸盐缓冲液或它们的任意组合。
[0056]任选地，该组合物还包括真皮填充材料。该真皮填充材料主要包括，但不限于，胶原蛋白，交联胶原蛋白，透明质酸，交联透明质酸，聚乳酸，羟基磷灰石钙，硫酸软骨素，聚酯，聚乙二醇，聚碳酸酯，聚乙烯醇，聚丙烯酰胺，聚酰胺，聚丙烯酸酯，聚醚酯，聚甲基丙烯酸酯，聚氨酯，聚己酸内酯，聚偶磷氮，聚原酸酯，聚乙交酯，赖氨酸和乳酸共聚物，赖氨酸-RGD和乳酸共聚物，脱乙酰壳多糖，藻酸盐，果胶，明胶，胶凝糖，角叉菜胶，细胞，干细胞，成体干细胞，胚胎干细胞，诱导多能干细胞，祖细胞，剁碎组织，自体移植细胞，脂肪或组织，以及它们的混合物。在一个优选的实施方式中，本发明的组合物可以一开始结合真皮填充材料后直接给药，然后给药包括过氧化物酶体增殖物激活受体-Y但不包括支撑物真皮填充材料的组合物。
[0057]在一实施方式中，真皮填充材料可以为胶原蛋白。在另一实施方式中，真皮填充材料可以为胶原蛋白与一个或多个糖交联形成的交联胶原蛋白。在其他的实施方式中，真皮填充材料为藻朊酸盐。更进一步，真皮填充材料可以为交联藻朊酸盐，如钡交联藻朊酸盐。在进一步的实施例中，皮肤的填充材料可以是细胞，例如人皮肤成纤维细胞。在一个实施例中，皮肤的填充材料是透明质酸。`按照重量比计，皮肤填充材料透明质酸占组合物的质量百分数约为0.001%?8%。在另一个实施例中，皮肤填充材料透明质酸占组合物的质量百分数约为1%?4%。在其他实施例中，皮肤填充材料透明质酸占组合物的质量百分数约为2%?
2.5%。
[0058]本发明还涉及一种根据本发明的组合物用于改善皮肤缺点的用途，用于面部或身体外形修整，面部或身体塑形，作为面部或身体的填充物，或用于治疗大面积的组织量不足的用途。
[0059]在一实施方式中，皮肤可以是如下所述的疾病或皮肤瑕疵:伤痕累累的皮肤，皱皮，皮肤皱纹，折叠皮肤，皮肤松弛，眼角鱼尾纹，和皮肤坑洼。皮肤缺点可能是有一些原因导致，如衰老，环境影响，减肥，怀孕，外科干预或痤疮。皮肤缺点尤指因年纪而引起的皮肤缺点。该组合物可以用于减少皮肤皱褶的深度，减少皱纹，填补组织缺损和减少可见性的疤痕。该组合物特别适合用于治疗皱纹，例如抬头纹，愤怒的皱纹，由担心引起的皱纹，眉间纹；中等深度皱纹，如鼻唇沟，眉间纹，明显的轻度至中度鼻皱纹和面颊的皱纹，口周皱纹，眼皮松弛，鱼尾纹，痤疮疤痕。该组合物还适用于注射于嘴唇用于治疗手部区域，肩部和皮肤压痕引起的皱纹。[0060]在一实施方式中，本发明的组合物可以用作真皮填充材料。例如，该组合物可以作为注射填料，用于减少皮肤皱褶的深度，减少皱纹，填补组织缺损和减少可见性的疤痕。在一实施方式中，本发明的组合物可以作为天然注射填充剂，用于审美性治疗皱纹。
[0061]本发明还涉及一种用于改善皮肤缺点的方法，将组合物用于皮下给药于皮肤缺点的区域，包括步骤:
[0062]a，鉴定皮肤缺点的区域；
[0063]b，通过皮下或真皮给药在所述皮肤缺点的区域施用安全和美容有效量的组合物。
[0064]在一实施方式中，本发明的组合物通过皮下注射给药。在另一实施方式中，该组合物通过皮内和/或皮下注射给药。
[0065]在一实施方式中，该组合物通过针或其它合适的技术给药。注射可以由多倍或数倍注射到受影响的皮肤区域。另外，可以进行一次或多次注射。在一个实施例中，该组合物I次注射的量约0.15毫升至约5毫升。在另一个实施例中，组合物I次注射量约约0.5毫升至约2晕升。
[0066]本发明的组合物适于用于改善因衰老、环境影响、减肥、怀孕、外科干预和痤疮引起的皮肤缺点。该皮肤缺点尤其是指皮肤老化的条件或缺陷。在一实施方式中，皮肤老化的条件或缺陷包括如下所述情况:皱皮，皮肤皱纹，折叠皮肤，皮肤松弛，眼角鱼尾纹，和皮肤坑洼。该组合物尤其是适合用于治疗皱纹。抬头纹，愤怒的皱纹，担心皱纹，眉间纹，中等深度皱纹，如鼻唇沟，眉间纹，明显的轻度至中度鼻沟和面颊皱纹，口周皱纹，眼皮松弛，鱼尾纹，痤疮疤痕。该组合物还适用于注射于嘴唇用于治疗皱纹或手部区域，肩部的体积缺失和抽脂后的皮肤缺口，或者其他皮肤区域缺陷。所举的方法对于减少皮肤皱褶，对减少皱纹，填补组织缺损和减少可见性的疤痕都是有效的。该方法可以改善围绕所述面部皮肤的区域的面部轮廓。
[0067]本发明可以通过下面的实施例进行更详细地解释。至少包括一个示例性的实施例。但应当理解，还可以包括大量的变形的实施。还应当理解的是，实施例仅仅是用于示例，并不能以任何方式来限制范围，适用性或结构。在下述描述中，将提供至少一个示例性实施例供本领域的普通技术人员实施。在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。本发明的范围以所附的权利要求书为准。
【专利附图】
【附图说明】
[0068]图1显示了采用MTT法光度测量法检测了在不同浓度的PPAR Y (0D χ10-3)中培养了 6天的脂肪干细胞；条I到条10显示在匪中培养脂肪干细胞；在不含FCS(lM DMEM中培养阴性对照组；在标准培养基匪(2)中培养对照组；在含有DMSO(3)的NM中培养溶剂对照组；在浓度为 2.7 μ g/ml (4), I μ g/ml (5) 0.5 μ g/ml (6),或 0.I μ g/ml (7)的 PPAR Y ,或5 μ M吡格列酮(8)，5 μ M吡格列酮和2.7 μ g/ml的PPAR Y (9)，或5 μ M吡格列酮和0.1 μ g/ml PPARy (10)的匪中培养细胞；条11到条18表示在AM-中培养脂肪干细胞；在AM-( 11)中培养对照组；在浓度为 2.7 μ g/ml (12)，I μ g/ml (13)，0.5 μ g/ml (14)，或 0.1 μ g/ml (15)的PPAR -，或5 μ M吡格列酮(16)，5 μ M吡格列酮和2.7 μ g/ml的PPAR Y (17)，或5 μ M吡格列酮和0.1 μ g/ml PPAR y (18)的AM-中培养细胞。
[0069]图2显示了采用光度测量法检测了在不同浓度的PPARy中培养了 6天的脂肪干细胞；条I到条8表示在匪培养基中培养的脂肪干细胞，在标准培养基匪(I)培养对照组，分别在浓度为 2.7 μ g/ml (2)，I μ g/ml (3) 0.5 μ g/ml (4),或 0.1 μ g/ml (5)的 PPAR y，或5 μ M吡格列酮(6)，5 μ M吡格列酮和2.7 μ g/ml PPARy (7)，或5 μ M吡格列酮和0.1yg/ml PPAR Y (8)的匪中培养细胞；条9至16表示在AM-培养基中培养脂肪干细胞；在标准培养基 AM- (9)培养对照组，在 2.7 μ g/ml (10)，1 μ g/ml (11)，0.5 μ g/ml (12)，或 0.1 μ g/ml (13)的 PPAR Y，或 5 μ M 吡格列酮(14)，5 μ M 吡格列酮和 2.7 μ g/ml PPARy (15)，或 5 μ M吡格列酮和0.1 μ g/ml PPAR y (16)的AM-中培养细胞。
[0070]图3 (放大倍率为630X)表示采用油红O染色在含有不同浓度的PPAR Y的标准培养基(匪)中培养的脂肪干细胞；图3a)显示的为对照组；图3b)，图3c)，图3d)和图3e)分别显示了在含有2.7 μ g/ml, I μ g/ml, 0.5 μ g/ml,或0.1 μ g/ml的PPAR Y的培养基中培养的细胞。
[0071]实施例1:
[0072]包括用于皮下给药的过氧化物酶体增殖物激活受体-Y蛋白的制备
[0073]为了在巨大芽孢杆菌中表达过氧化物酶体增殖物激活受体-Y蛋白，其过程类似于Barg, H.，Malten, M.&Jahn, D.(2005)的公开的“在巨大芽孢杆菌中生产蛋白质和维生素”,微生物生物技术产品和生物转化的方法(Barg, H.，Malten, M.&Jahn, D.(2005)"Protein and vitamin production in Bacillus megaterium", Methods inBiotechnology-Microbial Products and Biotransformations) (Barredo, J._L.，ed.)。真菌生产菌株可以使用毕赤酵母(例如GSl 15和KM71 (Invitrogen)等)和构巢曲霉(例如 RMS011, Stringer, M A, Dean, R A, Sewall, T C, Timber lake, W E (1991)。“Rodletless，一种新的通过基因激活直接诱发的曲霉属发育突变体”("Rodletless，anew Aspergillus developmental mutant induced by direct gene activation", GenesDev5:1161-1171) Genes Dev5:1161-1171)和 SRF200(Karos, M, Fischer, R(1999)。“Molecular characterization of HymA, 一种高度进化保存的且高表达的构巢曲霉蛋白”，Mol Genet Genomics260:510-521)，等)分子表征HymA,高度进化保存的且高表达的构巢曲霉蛋白，("Molecular characterization of HymA, an evolutionarily highlyconserved and highly expressed protein of Aspergillus nidulans") Mol GenetGenOmicS260:510-521),等。另外，也可以利用其他的真菌生产主体，例如，在黑曲霉中表达。另外，过氧化物酶体增殖物激活受体-Y蛋白可以在大肠杆菌中产生重组，例如，使用如PQE30的载体系统。可采用亲和色谱法进行纯化(例如His-Tag)。
[0074]实施例2:采用过氧化物酶体增殖物激活受体-Y诱导脂肪细胞分化
[0075]在脂肪干细胞(ASC)中研究了过氧化物酶体增殖物激活受体-Y诱导脂肪细胞分化的能力。采用(Crandall et al, Endocrinologyl40:154-8, 1999)中公布的方法，通过吸脂和培养获得了人脂肪干细胞。简单地说，用2毫克/毫升的胶原酶的Krebs-林格碳酸氢盐缓冲液(pH为7.4)消化脂肪组织。将前体脂肪细胞分数(preadipocyte fraction)再悬浮于生长培养基中，转移至培养瓶，在培养箱中在维持在37°C下，5% CO2条件下培养。细胞附着16-20小时后取出，然后将没有附着的细胞移出。[0076]在细胞接种后，分别加入过氧化物酶体增殖物激活受体-Y (PPAR Y )形成终浓度分别为0.0001 %,0.01%和I %的培养基，培养24小时。培养基每隔三天更换一次，并补充新的过氧化物酶体增殖物激活受体-Y。将细胞在过氧化物酶体增殖物激活受体-Y中培养5天。在去除过氧化物酶体增殖物激活受体-Y之后，再将细胞在培养基中培养9天以观察脂滴形成，这是分化的能力的指标。在不含过氧化物酶体增殖物激活受体-Y的培养基中培养对照组。采用油红O染色检测脂滴的形成，采用显微镜和96孔平底微孔板分光光度法(波长540nm)分析一种脂溶性染料对玻片上的三甘油三酯的染色情况。增强的油红O染色表示有较多的脂滴的形成，表明分化程度较高。其结果列在表I所示:
[0077]表I
[0078]
【权利要求】
1.一种可注射组合物，其特征在于，包括用于皮下给药的过氧化物酶体增殖物激活受体-Y。
2.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物包括选自如下所述的过氧化物酶体增殖物激活受体-Y的激动剂中的至少一种:类花生酸类物质，特别是例如△ 12-前列腺素J2和15-脱氧-△ 12-前列腺素J2的前列腺素，噻唑烷衍生物，例如罗格列酮，环格列酮，曲格列酮，恩格列酮和吡格列酮，非甾体类抗炎药，不饱和脂肪酸，α -亚油酸，花生四烯酸，二十二碳六烯酸，二十碳五烯酸，联苯衍生物，N-(苯基恶唑-4-基-甲氧基甲基)-环己基-琥珀酸酰胺衍生物，以及它们的混合物。
3.如权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，所述组合物包括视黄酸，视黄醇，视黄醛和/或类视黄醇X受体。
4.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述过氧化物酶体增殖物激活受体-Y占所述组合物的总质量的0.00001%?5%。
5.如权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述过氧化物酶体增殖物激活受体-Y的激动剂占所述组合物的总质量的0.00001%?5%。
6.如权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述视黄酸，所述视黄醇，所述视黄醛或所述类视黄醇X受体占所述组合物的总质量的0.00001%?5%。
7.如上任意一项权利要求所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包括选自如下所述的真皮填充材料中的一种:胶原蛋白，交联胶原蛋白，透明质酸，交联透明质酸，聚乳酸，羟基磷灰石钙，硫酸软骨素，聚酯，聚乙二醇，聚碳酸酯，聚乙烯醇，聚丙烯酰胺，聚酰胺，聚丙烯酸酯，聚醚酯，聚甲基丙烯酸酯，聚氨酯，聚己酸内酯，聚偶磷氮，聚原酸酯，聚乙交酯，赖氨酸和乳酸共聚物，赖氨酸.-RGD和乳酸共聚物，脱乙酰壳多糖，藻酸盐，果胶，明胶，胶凝糖，角叉菜胶，细胞，干细胞，成体干细胞，胚胎干细胞，诱导多能干细胞，祖细胞，剁碎组织，自体移植细胞，脂肪，组织，和它们的混合物。
8.如上任意一项权利要求所述的组合物，其特征在于，所述组合物为皮下注射剂。
9.如上任意一项权利要求所述的组合物，在用于改善皮肤缺点，在面部或身体外形修整，面部或身体塑形，作为面部或身体的填充物，或用于治疗大面积的组织量不足中的用途。
10.如权利要求9所述的组合物，所述皮肤缺点为选自如下所述的皮肤疾病或缺点中的一种:皱皮，皮肤沟痕，折叠皮肤，皮肤松弛，眼角鱼尾纹，疮痕和皮肤坑洼。
11.一种包括用于皮下给药的过氧化物酶体增殖物激活受体-Y的可注射组合物，其特征在于，所述组合物包括:a，过氧化物酶体增殖物激活受体-Y，b，药学可接受的载体，和可选的C，一种真皮填充材料。
12.—种如权利要求1至11任意一项所述的组合物在用于改善皮肤缺点，用于面部或身体外形修整，面部或身体塑形，作为面部或身体的填充物，或用于治疗大面积的组织量不足的用途。
13.—种如上所述任意一项所述的组合物用于作为皮肤填充剂的用途。
14.一种改善皮肤缺点的方法，其特征在于，将如权利要求1至11任意一项所述的组合物皮下给药于皮肤缺点的区域，包括步骤: a，鉴定皮肤缺点的区域；b，通过皮下或真皮下给药在所述皮肤缺点的区域施用安全和美容有效量的组合物。
15.如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述组合物通过真皮内和/或皮下注射方式进行皮下给药或真皮下给 药。
【文档编号】A61K8/02GK103442676SQ201280010609
【公开日】2013年12月11日 申请日期:2012年2月29日 优先权日:2011年3月1日
【发明者】H·巴格, R·波特 申请人:莫茨制药有限及两合公司