止血组合物的制作方法

止血组合物的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种止血组合物，其包含：a)适用于止血的呈颗粒形式的生物相容性聚合物，和b)一种包含反应基团的亲水性聚合组分。
【专利说明】止血组合物
【技术领域】
[0001]本发明涉及止血组合物及制造该组合物的方法。
【背景技术】
[0002]由例如W098/008550A或者W02003/007845A可知包含生物相容的、生物可降解的、
干燥稳定的粒状材料的呈干燥储存稳定形式的止血组合物。这些产品已经成功地应用于止血领域。FloseaIK.是一种强力和多用途的止血剂，其由可在含凝血酶的溶液中溶胀从而形成可流动软膏的粒状明胶基质组成。因为这种产品要应用于人类，有必要为最终产品和其组分的质量、贮存稳定性和无菌程度提供最高安全标准。另一方面，其生产和处理应该尽可能便利和有效。
[0003]另一方面,人们已经发现,在止血减损(impaired hemostasis)的情况下(例如在肝素化后)上述止血组合物不能诱导止血。因此，需要提供一种止血性能提高的材料和组合物。而且，当所述组合物施用于伤口时，施用于该组织的组合物还需要有很强的粘附性。还需要提供在施用于伤口之后具有适当溶胀性能的材料。
[0004]本发明的目 的在于克服这些问题，并提供一种适当的粘附性能改善的止血组合物，以及提供制造这种止血组合物的方法。所述组合物以便捷和适于使用的方式提供。该产品将优选被提供为如下产品形式:能够方便地提供“即用型”止血组合物，其能够被直接地施用于损伤处而不涉及任何耗时的重构(reconstitution)步骤。

【发明内容】

[0005]因此，本发明提供了一种止血组合物，其包含:a)适用于止血的呈颗粒形式的生物相容性聚合物，和b) —种包含反应基团的亲水性聚合组分。
[0006]呈颗粒形式的生物相容性聚合物和一种亲水性聚合组分的组合提供了一种止血性能改善的和组织粘附性能改善的止血组合物。当诱导止血失败、例如在止血减损(impaired hemostasis)的情况下(例如在肝素化后)，该止血组合物特别适用于伤口处理。根据本发明所述的组合物能够改善止血。进一步地，当应用于伤口时，根据本发明所述的组合物表现出很强的组织粘附性。
[0007]在和出血组织接触后，亲水性聚合成分和血液蛋白之间的交联反应可导致具有密封和止血性能的凝胶的形成。组织蛋白表面也会发生交联，并且取决于生物相容性聚合材料的性质，生物相容性聚合材料也会发生交联。后一反应有助于改善组合物材料对伤口组织表面的粘附性。
[0008]本发明的另一方面涉及处理损伤的方法，所述方法包括将止血组合物给药于损伤位点。
[0009]本发明提供一种处理损伤的试剂盒，所述试剂盒包含此处公开的止血组合物和使用说明。
[0010]本发明也涉及制造根据本发明的止血组合物的方法，使得组合物以便利的方式很容易地用于医疗用途。本发明进一步涉及将止血组合物释放至病人身上靶位点的方法，所述方法包括将根据本发明所述方法制造的止血组合物释放至靶位点。根据另一方面，本发明涉及一种通过本发明所述方法获得的终产品容器，其包含本发明所述的止血组合物。本发明同样涉及一种提供即用型止血组合物的方法，所述方法包括接触根据本发明所述方法生产的止血组合物。本发明还涉及一种包含终产品容器和其他施用组合物的工具的试剂盒。根据本发明的组合物对于出血位点的止血是特别有用的，所述血位点包括外科出血位点、创伤出血位点等。组合物的示例性用途是用于密封在为血管导管插入术所产生的血管渗透之上的组织管道(tissue tract)。
【具体实施方式】
[0011]本发明提供了一种改进的止血组合物。根据本发明的止血组合物包含呈颗粒形式的生物相容性聚合物，例如生物相容性聚合物(例如明胶、纤维蛋白、壳聚糖、纤连蛋白、胶原，特别是适用于止血的明胶(“止血生物相容性聚合物组分”或“止血聚合物”))的颗粒。将一种包含反应基团的亲水性聚合组分与该用于止血的生物相容性聚合物混合。根据本发明，聚合物组分的反应基团保持其反应性直到该组合物被置于临床应用位点，例如，置于伤口上。 [0012]本发明的适用于止血的呈颗粒形式的生物相容性聚合物可以包括二维各向同性的或者非各向同性的形式。例如，在根据本发明的生物相容性聚合物可以是颗粒或者纤维；并且可以以不连续的结构、例如呈粉末形式存在。
[0013]根据一种优选的实施方式，所述生物相容性聚合物是可吸收液体的。例如，一旦与液体例如水溶液或悬浮液(尤其是缓冲液或者血液)相接触，该聚合物就吸收液体，并且将取决于水化程度而显示出一定程度的溶胀。材料优选可吸收大约200wt%至大约2000wt%、尤其优选大约400wt%至大约1300wt%的水或者缓冲水溶液,对应于亚单位的单个颗粒的直径或宽度的名义提高范围是例如大约50%至大约500%、通常是大约50%至大约250%。例如，如果(干燥)颗粒具有优选0.01mm至1.5mm、尤其优选0.05mm至Imm的粒度范围，完全水化的组合物(例如在给药于伤口后或者在与缓冲水溶液接触后)可以具有0.05mm至3mm、尤其优选0.25mm至1.5mm的粒度范围。
[0014]取决于使用意图，本发明优选的生物相容性聚合物的平衡溶胀将在例如400%至1300%、优选500%至1100%的范围内。该平衡溶胀可以例如(对于交联聚合物)通过改变交联程度而被控制，反过来可以通过改变交联条件比如交联方法、交联剂的暴露时间、交联剂的浓度、交联温度等而实现交联程度改变。在不同的应用中，具有不同平衡溶胀值的材料表现不同。例如，采用溶胀值在700%至950%范围内的交联明胶材料最容易实现抑制肝脏去皮模型(liver divot model)出血的能力。对于股动脉插入,范围在500%至600%之间的较低的平衡溶胀值更加成功。因此，控制交联和平衡溶胀的能力容许本发明的组合物为多种用途进行优化。除了平衡溶胀之外，在释放至靶位点之前立即控制材料的水合也是重要的。水合和平衡溶胀当然是密切相关的。0%水合的材料是不溶胀的。100%水合的材料将是其处于平衡水分含量。在0%和100%之间的水合将对应于在最小与最大含量之间的溶胀。
[0015]根据本发明优选的实施方式，所述呈用于止血的颗粒形式的生物相容性聚合物和亲水性聚合组分以固体基质形式存在。
[0016]本发明所述的适于止血的呈颗粒形状的生物相容性聚合物可能由生物学聚合物或非生物学聚合物形成。适合的生物学聚合物可能包括蛋白质、多糖、生物学聚合物、非生物学聚合物、及它们的衍生物和组合。适合的蛋白质包括明胶、胶原蛋白、白蛋白、血红蛋白、纤维蛋白原、纤维蛋白、酪蛋白、纤连蛋白、弹性蛋白、角蛋白、和层粘连蛋白、及它们的衍生物和组合。特别优选的是使用明胶或可溶性非纤维状胶原，更优选明胶，代表性明胶配方如下文所示。其他适合的生物学聚合物包括多糖，例如糖胺聚糖、淀粉、纤维素、右旋糖酐、半纤维素、木聚糖、琼脂糖、海藻酸盐和几丁聚糖、及它们的衍生物和组合。适合的非生物学聚合物可选择通过以下两种机理进行降解:即(I)打断聚合骨架；或(2)降解支链，导致聚合物溶于水。适用于止血的示例性的非生物相容性聚合物包括:合成物，例如聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酰胺、聚乙撑亚胺、聚乙烯树脂、聚交酯-乙交酯、聚已酸丙酯、聚氧化乙烯、及它们的衍生物和组合。也可以是不同类型聚合物的组合(例如蛋白质和多糖的组合、蛋白质和非生物学水凝胶状聚合物的组合等)。优选的止血聚合物包括氨基基团，尤其是如果亲水性聚合组分含有给药(例如，伤口环境中)时可以和氨基基团反应的反应基团的话。
[0017]术语“衍生物”包括任何经化学修饰的聚合物，例如交联聚合物。
[0018]优选的止血聚合物包括亲核基团，例如氨基基团，尤其是如果亲水性聚合组分含有给药(例如，伤口环境中)时可以和氨基基团反应的反应基团的话。
[0019]根据本发明优选的 实施方式，所述生物相容性聚合物选自下组:明胶、胶原蛋白、白蛋白、纤维蛋白原、纤维蛋白和它们的衍生物(定义如上所述)；尤其优选的聚合物是明胶或胶原蛋白；尤其优选交联明胶。
[0020]根据本发明优选的实施方式，适于用于止血的生物相容性聚合物包含交联蛋白、交联多糖、交联生物学聚合物、交联非生物学聚合物、或它们的混合物。
[0021]非生物学聚合物可能以任何适于重构的方式交联，例如，形成适宜的止血聚合物的水凝胶基。例如，可能使用双功能或多功能交联剂来交联聚合分子，所述交联剂共价地连接两种或两种以上的聚合物分子链。示例性的多功能交联剂包括乙醛、环氧化物、琥珀酰亚胺、碳二亚胺、顺丁烯二酰亚胺、叠氮化物、碳酸酯、异氰酸酯、二乙烯基砜、乙醇、胺、酰亚胺(imidate)、酸酐、卤化物、硅烷、重氮基醋酸酯、氮丙啶等。作为另一种选择，交联也可以通过使用氧化剂或其他制剂例如高碘酸盐来实现，这些试剂可活化聚合物的侧链或基团使得它们可以和其他侧链或基团反应以形成交联键。交联的另外一种方法包括将聚合物暴露于福射例如Y福射，以活化聚合物链从而允许交联反应。脱水热交联(Dehydrothermalcrosslinking)方法也是适宜的。优选的用于交联明胶分子的方法如下所述。
[0022]一旦施用于伤口，生物相容性止血聚合物就形成能够形成血流屏障的有效基质。具体地讲，止血聚合物的溶胀特性能够使其成为有效的抑制出血和反复出血过程的机械屏障。
[0023]在优选的实施方式中，根据本发明的止血组合物作为颗粒制剂被提供或使用。根据优选的实施方式，适合用于止血的生物相容性聚合物颗粒包含交联蛋白、交联多糖、交联生物学聚合物、交联非生物学聚合物、或它们的混合物。
[0024]如上所述，适用于止血的生物相容性聚合物优选是颗粒状材料。当暴露于液体(即稀释剂)时，该粒状材料能够迅速地溶胀，并且呈这种溶胀形式能够有助于形成能够涂敷于出血位点的可流动软膏。生物学聚合物例如明胶，可以作为胶片被提供，然后能够被磨碾，从而形成粒状材料。该粒状材料包含的大部分颗粒(例如90% w/w以上)的颗粒尺寸优选为100至1，000 μ m,尤其是50至700 μ m。
[0025]根据优选的实施方式，所述适用于止血的呈颗粒形式的生物相容性聚合物是交联明胶。如果与药学可接受的稀释剂相接触，该干燥交联明胶粉末能够被迅速地制备成再水合物(re-hydrate)。明胶颗粒、特别是呈明胶粉形式的明胶颗粒，优选包含相对大的颗粒、也称作碎片或者亚单位的颗粒，如同在W098/08550A和W02003/007845A中描述的那样。优选的(中值)粒度将是10至1，OOOym的范围、优选50至700 μ m，但在该优选范围之外的粒度可以在许多环境中获得应用。当暴露于含水的再水合物介质(=稀释剂，也称作重构介质活再水合介质)时，干燥组合物还将显示出显著的“平衡溶胀”。优选地，所述溶胀值将在400%至1000%的范围内。可以通过由当明胶水凝胶粉末完全水化并且因此完全溶胀时的重量减去明胶水凝胶粉末的干重来确定“平衡溶胀”。该差值然后除以干重、并且乘以100，得到溶胀测量值。应该在将材料暴露于升高的温度持续足以基本上除去所有残留水分的时间例如120°C、两个小时后测量干重。通过将干燥材料浸没在药学可接受的稀释剂比如盐水中保持足以使含水量变成常数的时间周期、典型地在室温下保持18到24小时，能够实现材料的平衡水合。
[0026]根据优选的实施方式，药学可接受的稀释剂进一步含有凝血酶，优选10-10001.U.凝血酶/mL、尤其优选250-7001.U.凝血酶/mL。优选地，呈即用型的止血组合物中含有10-100,000国际单位(LU.)的凝血酶、更优选100-10，0001.U.、尤其优选500-5，0001.U.的凝血酶。即用型组合物中的凝血酶的浓度优选在10至10，0001.U.的范围内，更优选50至5，0001.U.，尤其优选100至I, 0001.U./ml。稀释剂的使用量在即用型组合物中应达到预期的终浓度。凝 血酶制品可以含有其它的有用组分，比如离子、缓冲液、赋形剂、稳定剂
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[0027]凝血酶(或者任何其它的凝血诱导剂，比如蛇毒、血小板活化剂、凝血酶受体活化肽和纤维蛋白原沉淀剂)能够来源自于任何适用于人类的(即药学可接受的)的凝血酶制品。合适的凝血酶来源包括人的和牛的血液、血浆或者血清(如果没有预见到相反的免疫反应，能够使用其它动物来源的凝血酶)，重组来源的凝血酶(例如人重组凝血酶)和自体的人凝血酶能够被优选用于一些应用。
[0028]用于制造交联明胶的示例性方法如下所述。在水溶液中获得并悬浮明胶，以形成非交联水凝胶，典型地，其固体含量为lwt%至70wt%,通常为3wt%至IOwt %。典型地，通过暴露于戊二醛(例如在水缓冲液中0.01%至0.05% W/W，(TC至15°C下过夜)、高碘酸钠(例如0.05M，在0°C至15°C下48小时)或1-乙基_3_ (3-二甲氨基丙基)碳二亚胺(“EDC”)(例如0.5%至1.5% w/w室温下过夜)、或暴露于0.3至3兆拉德剂量的Y放射或电子束放射，使明胶交联。作为另一种选择，明胶颗粒可以悬浮在醇中，优选在甲醇或乙醇中，其固体含量为^^%至70wt%，通常为3?七％至IOwt%，通过暴露于交联剂典型地如戊二醛(例如0.01%至0.l%w/w，室温下过夜)而交联。在乙醛的例子中，pH值优选保持在大约6至11，优选7至10。当采用戊二醛进行交联时，通过希夫氏碱来形成交联，并通过随后的还原反应例如通过用硼氢化钠处理来稳定。交联之后产生的颗粒在水中被冲洗，并可选地在醇中被漂洗，然后干燥。产生的干燥粉末然后被提供在此处所述的最终容器中。
[0029]优选地，生物相容性聚合物呈干燥颗粒形式被提供，以用于制造根据本发明的止血组合物。根据本发明的术语“生物相容性聚合物干燥粒状制品”由例如W098/08550A已知。优选地，聚合物是生物相容的、生物可降解的、干燥稳定的粒状材料。
[0030]根据本发明提供的干燥聚合物通常的颗粒尺寸为10至1，000 μ m。通常，聚合物颗粒具有10-1000 μ m、优选50-700 μ m (平均粒径)的平均粒径(“平均粒径”是通过激光衍射法测量的平均粒径；“中值粒度”(或者质量中值粒径)是将频率分布分割一半的粒直径；给定制品百分之五十的颗粒具有较大直径，百分之五十的颗粒具有较小直径)。施用较大的颗粒基本取决于医学需要；具备较小粒径的颗粒在制造过程中经常更难于处理。因此，干燥的聚合物呈颗粒形式被提供。尽管术语“粉(末)”和“粒状(或者粒子)”有时被用于区别不同种类的材料，粉(末)在此被限定为粒状材料的特殊亚类。特别地，粉末是指具有较细粒径、因此当流动时具有更大的形成结块倾向的粒状材料。颗粒包括不会倾向于形成结块的粗团粒材料，除非当湿润时。对于本发明，所使用的颗粒为那些可以采用适当的涂层技术涂覆的颗粒。因此，根据本发明的聚合物颗粒的颗粒尺寸可以通过该技术的要求被容易地调整并优化至适应特定的涂层工艺。
[0031]根据本发明的止血组合物的亲水性聚合组分(也称为“反应亲水性组分”或“亲水性(聚合的)交联剂”)为亲水性交联剂，一旦将止血组合物施用于病人(例如，施用于病人的伤口处或者病人身上另一个需要止血活性的地方)，该亲水性交联剂就能够与它的反应基团起反应。因此，对于本发明而言，重要的是，当施用于病人时，聚合组分中的反应基团是反应性的。因此，制造根据本发明的止血组合物时，在制造工艺期间必须使得聚合组分中的反应基团被保留，一旦将止血组合物施用于伤口，该反应基团应该发生反应。
[0032]这可以通过多种方式实现。例如，通常，亲水性聚合组分具有接触水后易于水解的反应基团。因此，在将止血组合物给药于病人之前、尤其在制造期间，必须防止止血组合物与水或水相液体过早的接触。然而，在制造期间，当反应基团的反应被抑制时(例如处于低pH)，亲水性聚合组分的处理还可能在水相介质中进行。如果亲水性聚合组分能够被熔化，则能够将熔化后的亲水性聚合组分喷到、或者印刷到生物聚合物的基质上面。也有可能将干燥形式(例如粉末)的亲水性聚合组分与适用于止血的干燥形式的生物相容性聚合物相混合。如有必要，则能够将温度的升高应用于熔化被散布的适用于止血的生物相容性聚合物的亲水性聚合组分，以便得到止血组合物的持久涂层。可选地，这些亲水性聚合组分能够被加入到惰性有机溶剂(同亲水性聚合组分的反应基团相比为惰性的)中，并且加到生物材料的基质上。这些有机溶剂的例子有干燥的乙醇、干燥的丙酮或者干燥的二氯甲烷(例如它们对于亲水性聚合组分比如用NHS-酯取代的PEGs是惰性的)。
[0033]术语“一种包含反应基团的亲水性聚合组分”是指根据本发明的止血组合物将第二种或更多种具有亲核反应基团的亲水性聚合组分排除在外。
[0034]在一种优选的实施方式中，亲水性聚合物组分是单一的亲水性聚合物组分，并且是聚环氧烷聚合物，优选包含聚合物的PEG。该反应性聚合物中的反应基团优选是亲电基团。
[0035]反应性亲水性组分可以是多亲电性聚环氧烷聚合物，例如多亲电性的PEG。反应性亲水性组分能够包括两个以上亲电基团，优选包含两种以上选自下组的反应基团的PEG:琥珀酰亚胺酯(-CON (COCH2) 2)、醛(-CH0)和异氰酸酯(_N = C = O)，例如在W02008/016983A(通过引用将其全部内容并入本文)中公开的组分、以及市场中可以买到的商品名CoSea丨κ的产品中的组分。
[0036]根据本发明的亲水性聚合交联剂中优选的亲电基团是可与蛋白质中的氨基、羧基、硫醇基和羟基发生反应的基团、或者它们的混合物。
[0037]在碳二亚胺异氰酸酯、或ΤΗΡΡ(β_[三(羟甲基)膦基]丙酸)存在的条件下，优选的对氨基特异的反应基团是NHS-酯基、亚氨酯基、醛基、羧基，尤其优选的是季戊四醇聚(乙二醇)醚戊二酸四琥珀酰亚胺酯(=季戊四醇四[1-1’ -氧_5’ -琥珀酰亚胺戊酸酯 _2_ 聚氧代乙二醇]醚(=NHS-PEG, MW10，000)。
[0038]优选的对羧基特异的反应基团是在碳二亚胺存在下的氨基。
[0039]优选的对硫醇基特异的反应基团是顺丁烯二酰亚胺或者卤代乙酰基。
[0040]优选的对羟基特异的反应基团是异氰酸酯基。
[0041]在亲水性交联剂上的反应基团可以相同(功能性同型)或者不同(功能性异型)。亲水性聚合组分可能具有两种反应基团(同型双功能的基团或者异型双功能的基团)或更多种反应基团(同型/异型三功能的基团)。
[0042]在具体的实施方式中，材料是合成聚合物，优选包含PEG。该聚合物可以是PEG的衍生物，该衍生物 包含适合于交联并且粘附至组织的活性侧基。
[0043]借助这些反应基团，亲水性反应性聚合物具有交联血液蛋白质、以及组织表面蛋白质的能力。与生物材料交联也是可能的。
[0044]所述多亲电性聚亚烷基氧化物可以包括两个以上琥珀酰亚胺基。所述多亲电性聚亚烷基氧化物可以包括两个以上马来酰亚胺基团。
[0045]优选地，所述多亲电性聚亚烷基氧化物可以是聚乙二醇或其衍生物。
[0046]在最优选的实施方式中，亲水性聚合组分是季戊四醇聚(乙二醇)醚戊二酸四琥珀酰亚胺酯( = C0H102，亦即，季戊四醇四[1-1’-氧代-5’-琥珀酰亚胺戊酸酯-2-聚氧代乙二醇]醚)。
[0047]该亲水性聚合组分是亲水性交联剂。根据一种优选的实施方式，该交联剂具有超过两个用于交联的反应基团(“臂”)，例如具有3个、4个、5个、6个、7个、8个、或更多个具有用于交联的反应基团的臂。例如，NHS-PEG-NHS是根据本发明有效的亲水性交联剂。然而，对于一些实施方式，可以更优选4-臂聚合物(例如4-臂-p-NP-PEG);基于相同的原理，对于那些其中多个反应性交联为有利的实施方式，甚至可以更优选8-臂聚合物(例如8-臂-NHS-PEG)。另外，根据本发明的亲水性交联剂是聚合物，即，由重复结构单元组成的大分子(巨分子)，所述结构单元典型地通过共价化学键相连接。根据本发明的亲水性聚合物组分应该具有至少1000Da的分子量(以便适当地用作根据本发明的止血组合物中的交联剂)；优选根据本发明的交联聚合物的分子量为至少5000Da、尤其优选至少8000Da。
[0048]对于一些亲水性交联剂，碱性反应条件的存在(例如在给药位点处)是优选的，或者对于功能特性是必需的(例如对于在给药位点处更快的交联反应而言)。例如，碳酸盐或者碳酸氢盐离子(例如，作为PH7.6以上、优选8.0以上、尤其是8.3以上的缓冲液)可以在给药位点处被额外地提供(例如作为缓冲溶液、或者作为用这样一种缓冲液浸溃的织物或衬垫)，从而允许改进根据本发明的止血组合物的性能、或者允许有效地用作止血材料和/或伤口粘附材料。
[0049]在根据本发明的组合物中的亲水性聚合组分的反应性(如上所述，起交联剂作用)被保留在组合物中。这意味着交联剂的反应基团还没有与止血组合物起反应，并且未被水进行水解(或者至少水解量不显著，不会对本发明组合物的止血功能产生消极后果)。这能够通过将止血聚合物与亲水性交联剂进行组合而实现，所述组合的方式不会导致交联剂中的反应基团与止血聚合物、或者与水发生反应。通常，这包括省略含水环境(或者润湿)、尤其是无酸性条件下(假如交联剂在酸性条件下无反应性)的润湿。这允许得到反应性止血材料。
[0050]根据本发明一个特别优选的止血组合物，该生物相容性聚合物是交联明胶，并且所述亲水性聚合组分是季戊四醇聚(乙二醇)醚戊二酸四琥珀酰亚胺酯。
[0051]优选根据本发明的止血组合物中，生物相容性聚合物对于亲水性聚合组分的比率是 0.1-50% w/w、优选 5-40% w/w。
[0052]如果本发明的止血组合物以固体基质提供，那么胶原蛋白用作固体基质是特别优选的。该止血组合物以固体形式提供的实施方式优点是，固体形式通过机械手段是可分离的。这使得在使用的地方允许施用特定大小的止血组合物，例如手术期间给药之前立即施用或给药期间施用。
[0053]根据本发明的“固体基质”与生物相容性聚合物和亲水性聚合组分一起形成根据本发明的固体形式的组合物，其以稳定(robust)的方式保留它的三维结构。因此，固体基质还用作“基质形成组 分”用于本发明组合物的止血成分。
[0054]根据本发明的固体基质优选具有多孔结构和/或纤维状结构，使得液体(例如血液、缓冲液或反应组分)可以进入基质。根据本发明的这些基质包括编织和非编织材料。它们呈连续相，或者存在于不连续相(例如多层)中。优选地，根据本发明的固体基质是渗透性基质。它们可能作为暂时的(例如生物可降解的)或稳定的基质提供。根据优选的实施方式，固体基质包括亲核基团，例如氨基。
[0055]本发明的止血聚合物优选呈冻干形式被提供。而冻干形式，可运输和可储存特性得到了显著改善，这使得本发明也可以应用于不能保证稳定冷藏的地方。
[0056]根据本发明的止血组合物中还可以存在其他组分。根据优选的实施方式，根据本发明的止血组合物可以进一步包含选自下组的物质:抗纤维蛋白溶解剂、促凝剂、血小板活化剂、抗生素、血管收缩剂、色素、生长因子、骨形态发生蛋白质和止痛药。
[0057]根据另一个方面，本发明涉及一种根据本发明的止血组合物的用途，用于处理选自下组的损伤:伤口、出血、受损组织、出血组织和/或骨损伤。
[0058]本发明还涉及处理选自下组的损伤的方法:伤口、出血、受损组织和/或出血组织，所述方法包括给药本发明的组合物到损伤部位。根据另一个方面，本发明提供了一种用于处理选自下组损伤的试剂盒:伤口、出血、受损组织和/或出血组织，所述试剂盒包含:a)根据本发明的止血组合物；和b)使用说明。
[0059]本发明同样涉及一种制造根据本发明的止血组合物的方法，包括:混合步骤，优选将适用于止血的生物相容性聚合物和一种亲水性聚合组分混合，所述亲水性聚合物组分含有带有粘合剂的反应基团，其中聚合组分保留反应性；并且干燥所述组合物，例如冷冻干燥。[0060]根据另一个方面，本发明进一步涉及将根据本发明的止血组合物释放至病人靶位点的方法，所述方法包括将根据本发明所述方法制造的止血组合物释放至靶位点。尽管在特定实施方式中，干燥组合物也能够被直接地施用于靶位点(并且可选择地必要时在靶位点与药学可接受的稀释剂接触)，但优选在给药于靶位点之前使干燥的止血组合物与药学可接受的稀释剂相接触，以便得到呈润湿形式、尤其是水凝胶形式的止血组合物。
[0061]本发明还涉及一种根据本发明所述方法获得的完备的最终容器，该最终容器含有呈无菌的、储存稳定的并且可销售形式的组合组分。该最终容器能够是任何适合于容纳(并储存)药学可给药的化合物的容器。
[0062]结合下述实施例，进一步描述本发明，本发明并不限于这些实施例。
[0063]实施例
[0064]实施例1:制备牛胶原蛋白悬浮液
[0065]将50g切片的牛真皮分散在500ml的2M NaOH溶液中，并且在25°C搅动大约90分钟。将真皮筛出，然后用蒸馏水冲洗，直至流出的水的PH在大约8.0为止。冲洗后的真皮切片用水重悬，并且用HCl将pH调整至大约2.0。所获得的悬浮液在25°C下搅动过夜，从而获得胶原蛋白溶液。获得的溶液冷却至5 °C，并且用NaOH将pH调整至中性。通过将溶液保持在18°C过夜，并且不搅拌，进行胶原蛋白沉淀步骤。通过过滤，分离所获得的沉淀的胶原蛋白。通过重量分析法确定所获得材料中的胶原蛋白的浓度。可选地，制备1%水相胶原蛋白悬浮液，并在12°C添加5000ppm的戊二醛，采用戊二醛进行化学交联。所获得的悬浮液搅拌过夜。过滤所获得的交联的胶原蛋白，并用水冲洗。通过上述重量分析法确定所获得材料中的胶原蛋白的 浓度。
[0066]实施例2:制备用于止血的、NHS-PEG浸溃的固体形式的交联明胶颗粒，所述交联明胶颗粒包埋在松散的胶原蛋白网格中。
[0067]制备包含1.9mg/cm3的牛胶原蛋白(根据实施例1制备)以及19.8mg/Cm3NHS-PEG(C0H102)的水相酸溶液(pH3.0, CH3COOH)，所述水相酸溶液包含25.5ml包含69.lmg/cm3交联明胶颗粒(FlosealTM,巴克斯特)的悬浮液，然后倒入9x7cm PET托盘中并冻干。从而获得在固体明胶基质中包含明胶和NHS-PEG的组合物(“饼”)。
[0068]每个“饼”都和包含干燥剂的小袋一起放到不可渗透的袋子中，该袋子保持密封并在25kGy用Y射线灭菌。
[0069]实施例3:活体数据
[0070]在麻醉的肝素化的猪(1.5x ACT)上，肝脏分叶被包含两个垂直锋利刀片(每个为2cm宽)的工具刺破。从而获得带有十字形穿孔的肝脏分叶。打开根据实施例2获得的包含止血固体形式的袋子，从制品中分离必要含量的材料。借助于外科手套将该材料填充于出血伤口处。使用外科手套从穿孔的两端按压包含止血材料的伤口3分钟。通过该处理可以防止大量出血。
【权利要求】
1.止血组合物，其包含: a)适用于止血的呈颗粒形式的生物相容性聚合物，和 b)一种包含反应基团的亲水性聚合组分。
2.如权利要求1所述的止血组合物，其特征在于，所述生物相容性聚合物和所述亲水性聚合组分以固体基质形式存在。
3.如权利要求1或2所述的止血组合物，其特征在于，所述适用于止血的生物相容性聚合物包含蛋白质、多糖、生物学聚合物、非生物学聚合物、及它们的衍生物和组合。
4.如权利要求1至3中任一项所述的止血组合物，其特征在于，所述适用于止血的生物相容性聚合物包含选自下组的蛋白质:明胶、胶原蛋白、白蛋白、血红蛋白、纤维蛋白原、纤维蛋白、酪蛋白、纤连蛋白、弹性蛋白、角蛋白、和层粘连蛋白、及它们的衍生物和组合。
5.如权利要求1至4中任一项所述的止血组合物，其特征在于，所述适用于止血的生物相容性聚合物包含交联蛋白、交联多糖、交联生物学聚合物、交联非生物学聚合物、或它们的混合物。
6.如权利要求1至5中任一项所述的止血组合物，其特征在于，所述亲水性聚合组分是聚环氧烷聚合物，优选包含聚合物的PEG，更优选多亲电性聚环氧烷聚合物，尤其优选多亲电性PEG，例如季戊四醇聚(乙二醇)醚戊二酸四琥珀酰亚胺酯。
7.如权利要求1 至6中任一项所述的止血组合物，其特征在于，所述包含反应基团的亲水性聚合组分是聚乙二醇(PEG)，优选包含两种以上选自下组的反应基团的PEG:琥珀酰亚胺酯(-CON(COCH2)2)、醛(-CH0)和异氰酸酯(-N = C = O)。
8.如权利要求1至7中任一项所述的止血组合物，其特征在于，所述生物相容性聚合物是交联明胶，所述亲水性聚合组分是季戊四醇聚(乙二醇)醚戊二酸四琥珀酰亚胺酯。
9.如权利要求1至8中任一项所述的止血组合物，其特征在于，所述固体基质是胶原蛋白。
10.如权利要求1至9中任一项所述的止血组合物用于处理选自下组的损伤的用途:伤口、出血、受损组织和/或出血组织。
11.处理损伤的方法，包括将如权利要求1至9中任一项所述的止血组合物给药于损伤位点，所述损伤选自下组:伤口、出血、受损组织和/或出血组织。
12.用于处理选自下组的损伤的试剂盒:伤口、出血、受损组织和/或出血组织，所述试剂盒包括: a)如权利要求1至9中任一项所述的止血组合物；和 b)使用说明。
13.用于制造如权利要求1至9中任一项所述的止血组合物的方法，包括下述步骤:在保留聚合组分反应性的条件下，将适用于止血的生物相容性聚合物和一种包含反应基团的亲水性聚合组分以及基质形成组分相混合；干燥所述组合物，例如冷冻干燥。
14.如权利要求13所述的方法，其特征在于，所述生物相容性聚合物和酸性溶液相混合，所述酸性溶液包含:基质形成组分，尤其是胶原蛋白；和亲水性聚合组分，尤其是季戊四醇聚(乙二醇)醚戊二酸四琥珀酰亚胺酯。
【文档编号】A61L24/00GK103998068SQ201280057486
【公开日】2014年8月20日 申请日期:2012年10月10日 优先权日:2011年10月11日
【发明者】汉斯克里斯蒂安·海德里希, J·赫芬戈夫 申请人:巴克斯特国际公司, 巴克斯特保健股份有限公司