专利名称：一种银、铂纳米簇在肿瘤靶向成像的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及银、钼纳米簇作为肿瘤成像剂在肿瘤靶向成像上的应用，本发明适用于医学成像领域。
背景技术：
活体生物成像技术是检测实验动物体内分子及细胞事件的强有力手段，正在被越来越广泛地应用于医学及生物学研究领域，具有极高的检测灵敏度及低廉的实验费用，可以在极短的时间内应用尽可能少的动物数量却可精确获得预期的实验结果，为研究者提供了广阔的应用空间，但该技术仍然存在许多局限性，尤其是在体内光照时产生的组织自发荧光和在断波激发光照射下的弱的组织渗透性。为了克服这些困难。科学家研究了一系列无机发光纳米材料，一些无机纳米材料，如硅纳米颗粒由于其一些优良的性质在生物分析和成像中得到广泛应用，但仍存在一些问题，最重要的就是纳米颗粒的粒径大小。颗粒粒径越小，颗粒被上皮网状组织系统吸收的几率就越小，且更容易通过泌尿系统排出体外，从而具有更好的生物相容性。另外，当对肿瘤进行祀向成像时，粒径小的纳米材料更容易通过EPR效应被动祀向到肿瘤部位从而实现对肿瘤的精确定位。中国专利CN102735752A公开了金纳米簇在肿瘤靶向活体成像上的应用，目前还没有银、钼纳米簇应用于肿瘤靶向成像的文献资料。
发明内容
发明目的:本发明的目的在于提供一种粒径小、生物相容性好的银、钼纳米簇在肿瘤靶向成像上的应用。技术方案:本发明的原理是一定浓度的银、钼离子可以在生物体内合成纳米簇并且在肿瘤部位富集，通过医学成像可以检测诊断肿瘤部位。具体来说，银、钼纳米簇在肿瘤靶向成像上的应用步骤为:
(1)构建裸鼠肿瘤模型；
(2)向裸鼠体内局部注射经超声分散的银或钼纳米簇，或者直接注射0.l-100Mfflol/L含银溶液或含钼溶液；
(3)注射24h后，用医学成像方法对裸鼠肿瘤部位进行医学成像并对成像结果进行定性及定量分析。将含有0.l-100Mmol/L含银溶液或含钼溶液的培养液与培养24h的细胞或组织于细胞培养箱中共同孵育10-72小时，培养液中可形成银或钼纳米簇，将培养液中的银或钼纳米簇经超声分散仪超声分散后可使银或钼纳米簇颗粒更细，注射至裸鼠体内可使纳米簇颗粒在裸鼠体内分布更均匀。直接向裸鼠体内注射含银溶液或含钼溶液，可在裸鼠体内合成纳米簇并且在肿瘤部位富集，具有良好的生物相容性。
所述的含银溶液为银氨溶液、硝酸银或谷胱甘肽银溶液。所述的含钼溶液为顺式二氨基二络钼溶液或反式二氨基二络钼溶液。所述的医学成像方法为荧光成像、核磁成像、拉曼成像、CT成像、热成像或超声成像。所述的局部注射方式为局部皮下注射、皮内注射、肌肉注射、尾静脉注射或腹腔注射。裸鼠肿瘤模型为原位移植肿瘤模型、原位转移肿瘤模型、皮下接种肿瘤模型、药物诱导肿瘤模型、基因突变肿瘤模型或自发瘤模型。有益效果:与现有技术相比，本发明的显著优点是:
(1)本发明制得的银、钼纳米簇粒径小、渗透性好、荧光稳定性高、灵敏度高、靶向性强，可以实现对肿瘤的精确定位； (2)本发明的银、钼纳米簇通过生物体直接合成，具有很好的生物相容性；
(3)本发明的银、钼纳米簇经超声分散后注射，使纳米颗粒更细更均匀，更有利于吸
收；
(4)本发明操作方便、结果直观，可以对肿瘤进行早期检测与诊断，也可以应用在深部肿瘤、大动物等活体肿瘤追踪观察成像等研究中，具有潜在的临床疾病追踪治疗成像的应用价值。
图1a是本发明实施例1实验组共聚焦荧光显微镜结果 图1b是本发明实施例1对照组共聚焦荧光显微镜结果 图2是本发明实施例2裸鼠荧光成像肿瘤靶向成像图。
具体实施例方式实施例1
选用肝癌细胞(IfepG2)作为研究对象，实验组将处于对数生长期的肝癌细胞(!fepG2)按照1.6X IO5个细胞/孔的密度接种于6孔板中，培养24 h后加入已灭菌并用新鲜无菌的DMEM培养基进行稀释过的含有的谷胱甘肽银氨I Mmol/L溶液。对照组将培养基中的肝癌细胞(!fepG2)按照1.6X IO5个细胞/孔的密度接种于6孔板中，培养24 h。培养时间终止后向实验组和对照组的每孔加入磷酸缓冲溶液(PBS，pH=7.4)冲洗2-3次。然后用共聚焦显微镜进行观察检测。实验组实验结果如图1a所示，可观察到银纳米颗粒的聚集，对照组实验结果如图1b所示，观察不到纳米颗粒。实施例2
构建裸鼠皮下接种乳腺癌模型，乳腺癌细胞培养24h后加入已灭菌并用新鲜无菌的DMEM培养基进行稀释过的0. μ mol/L的谷胱甘肽银氨溶液，于细胞培养箱中孵育24小时制得银纳米簇，将含有银纳米簇的溶液超声分散后，通过尾静脉注射方法注射到裸鼠体内，24 h后，对裸鼠进行活体荧光成像。实验表明银纳米簇可对肿瘤部位实现靶向成像。实验结果如图2所示。实施例3构建裸鼠肝癌原位移植模型，肝癌细胞培养24h后加入已灭菌并用新鲜无菌的DMEM培养基进行稀释过的50Mmol/L的顺式二氨基二络钼溶液，于细胞培养箱中孵育48小时制得钼纳米簇，将含有钼纳米簇的溶液超声分散后，通过局部皮下注射注射到裸鼠体内，24 h后，对裸鼠进行核磁成像并对成像结果进行定性及定量分析。 实施例4
构建裸鼠药物诱导卵巢肿瘤模型，卵巢癌细胞培养24 h后加入已灭菌并用新鲜无菌的DMEM培养基进行稀释过的lOOMmol/L的硝酸银溶液，于细胞培养箱中孵育72小时制得银纳米簇，将含有银纳米簇的溶液超声分散后，通过腹腔注射注射到裸鼠体内，24 h后，对裸鼠进行拉曼成像并对成像结果进行定性及定量分析。实施例5
构建裸鼠皮下接种乳腺癌模型，向裸鼠体内通过尾静脉注射方法直接注射0.lMfliol/L的银氨溶液，24 h后，对裸鼠进行CT成像并对成像结果进行定性及定量分析。实施例6
构建裸鼠肝癌原位移植模型，向裸鼠体内通过皮内注射方法直接注射50μ mo I/L的反式二氨基二络钼溶液，24 h后，对裸鼠进行热成像并对成像结果进行定性及定量分析。实施例7
构建裸鼠药物诱导卵巢肿瘤模型，向裸鼠体内通过尾静脉注射方法直接注射IOOMfflol/L的谷胱甘肽银溶液，24 h后，对裸鼠进行超声成像并对成像结果进行定性及定量分析。
权利要求
1.一种银、钼纳米簇在肿瘤靶向成像上的应用，其特征在于:具体步骤为: (1)构建裸鼠肿瘤模型； (2)向裸鼠体内局部注射经超声分散的银或钼纳米簇，或者直接注射0.l-lOOMfliol/L含银溶液或含钼溶液； (3)注射24h后，用医学成像方法对裸鼠肿瘤部位进行医学成像并对成像结果进行定性及定量分析。
2.按权利要求1所述的银、钼纳米簇在肿瘤靶向成像上的应用，其特征在于:所述的银或钼纳米簇是通过将含有0.1-lOOMmol/L含银溶液或含钼溶液的培养液与培养24h的细胞或组织于细胞培养箱中共同孵育24-72小时制得。
3.按权利要求1或2所述的银、钼纳米簇在肿瘤靶向成像上的应用，其特征在于:所述的含银溶液为银氨溶液、硝酸银或谷胱甘肽银溶液。
4.按权利要求1或2所述的银、钼纳米簇在肿瘤靶向成像上的应用，其特征在于:所述的含钼溶液为顺式二氨基二络钼溶液或反式二氨基二络钼溶液。
5.按权利要求1或2所述的银、钼纳米簇在肿瘤靶向成像上的应用，其特征在于:所述的医学成像方法为荧光成像、核磁成像、拉曼成像、CT成像、热成像或超声成像。
6.按权利要求1或2所述的银、钼纳米簇在肿瘤靶向成像上的应用，其特征在于:所述的局部注射方式为局部皮下注 射、皮内注射、肌肉注射、尾静脉注射或腹腔注射。
7.按权利要求1或2所述的银、钼纳米簇在肿瘤靶向成像上的应用，其特征在于:所述的裸鼠肿瘤模型为原位移植肿瘤模型、原位转移肿瘤模型、皮下接种肿瘤模型、药物诱导肿瘤模型、基因突变肿瘤模型或自发瘤模型。
全文摘要
本发明公开了一种银、铂纳米簇在肿瘤靶向成像上的应用，具体步骤为首先构建裸鼠肿瘤模型；接着向裸鼠体内局部注射经超声分散的银或铂纳米簇，或者直接注射0.1-100μmol/L含银溶液或含铂溶液；注射24h后，用医学成像方法对裸鼠肿瘤部位进行医学成像并对成像结果进行定性及定量分析。本发明制得的银、铂纳米簇粒径小、渗透性好、荧光稳定性高、灵敏度高、靶向性强，可以实现对肿瘤的精确定位；本发明的银、铂纳米簇通过生物体直接合成，具有很好的生物相容性；银、铂纳米簇经超声分散后注射，使纳米颗粒更细更均匀，更有利于吸收；本发明操作方便、结果直观。
文档编号A61K49/04GK103083687SQ20131001535
公开日2013年5月8日 申请日期2013年1月16日 优先权日2013年1月16日
发明者王雪梅, 高生平, 吴长宇, 李水红, 叶静 申请人:东南大学