专利名称：两亲性n-长链烷基-n-精氨酸壳聚糖作为藤黄酸增溶、促吸收载体的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及利用两亲性N-长链烷基-N-精氨酸壳聚糖衍生物(OACS)作为难溶性药物藤黄酸(GA)的增溶、促吸收纳米载体，制备出溶解度大、吸收好的GA-OACS的纳米药物。
背景技术：
壳聚糖是自然界中唯一的碱性多糖，是一种阳离子聚合物，具有生物黏附性，可延长药物在生物黏膜表面的滞留时间，壳聚糖所带的正电荷基团还可与表面带负电荷的细胞膜相互作用，增强膜通透性，从而增强黏膜对药物的吸收。壳聚糖的促渗作用很有可能由于它对膜蛋白的显著影响，所带正电荷与细胞间紧密连接的开放结构相互作用，使细胞骨架蛋白由丝状变为球状，从而使大分子药物可以通过细胞旁路进行跨膜吸收(vander LubbenIM,Verhoef JC,Borchard G,et al.Chitosan and its derivatives in mucosaldrug andvaccine delivery [J].Eur J Pharm Sc1.2001,14 (3):201-207 ;王智琪，张强.渗透促进剂对多肽类药物肺部 给药促渗作用的机理.Acta Pharmaceutica Sinica, 2003, 38 (12):957-961 ;刘梅，陈小平.壳聚糖及其衍生物在肽类口服给药系统的应用.国外医学药学分册，2000，27 (6):351-354)。
藤黄酸(Gambogic Acid, GA)是从中药藤黄中提取的有效成分。实验结果表明，GA能够抑制肺癌、肝癌、乳腺癌、胃癌、黑色素瘤、神经胶质瘤、前列腺癌以及白血病等多种人类常见肿瘤，而且有效剂量范围内对肿瘤细胞选择性高，对正常动物造血系统和免疫功能则无明显影响，毒副作用较低。但是由于GA溶解度低(< lyg/mL)，目前有专利使用L-精氨酸(GA-Arg)与藤黄酸形成复合物来制备藤黄酸的水溶液供静脉注射用(Dai，J.G.(2003).The preparation of a kind of gambogic acid injection.CHN PatentCN03131511.9.； Jin, B., Dong, H., and Qiao, L.(2003).The preparation of a kind ofgambogic acid injection.CHN Patent CN02124510.X.；You, Q.D., Guo, Q.L., Ke, X.,Xiao, ff., Dai, L.L., and Lin, Y.(2003).The preparations of gambogic acid and itscompound.CHN Patent CN03132386.3.)。
近年来，穿膜肽促进生物大分子口服吸收和促进基因转染的研究比较多。穿膜肽通常指具有穿透细胞膜并转运药物到细胞内能力的一类短肽，常少于30个氨基酸残基，这些肽段有个共同的特性就是都带正电荷，即一般富含碱性氨基酸如精氨酸或赖氨酸。精氨酸的胍基与脂双分子层的磷脂可以形成氢键.氢键的形成以及胍基的强碱性(PKa 12.5)在控制细胞膜转运过程中起着非常重要的作用，但精氨酸详细的促渗机制目前还不清楚(Umezawa N, Gelman M A, Haigis M C, et al.Translocation of a beta-peptideacrosscell membranes.J Am Chem Soc, 2002,124 (3):368-369 ;朱敦院，张海玲，柏金根，等.精氨酸修饰壳聚糖提高基因转染效率的研究.科学通报，2007，52:2199-2205)。
目前聚合物胶束是药剂学研究的热点，它既可生物降解，又可形成药物纳米载体。聚合物胶束是以疏水基团为内核、亲水基团为外壳的分子有序聚集体，它可增溶疏水性药物，对聚合物胶束的粒径和表面特征的设计可有助于避免网状内皮系统的识别，延长体循环时间；一些带有电荷的聚合物胶束可以保护基因、疫苗和蛋白质药物的活性，可作为生物大分子药物的口服给药系统。
借鉴以上研究结果，如能将一定量精氨酸引入壳聚糖作为亲水性，并能同时引入一定量疏水性基团，形成具有一定粒径和载药能力的聚合物胶束，由于其亲水基为具有与磷脂双分子层具有极好的亲和性和穿膜性的精氨酸，且已有专利报道精氨酸常用于增溶藤黄酸，因此制备而成的N-长链烷基-N-精氨酸壳聚糖衍生物(OACS)纳米载药胶束与传统聚合物胶束相比，一定能更大程度地增加藤黄酸在水中的溶解度，还能利用精氨酸的穿膜作用提高藤黄酸的吸收效果，达到更好的治疗效果。发明内容
本发明要解决的技术问题是:用可生物降解的天然来源的壳聚糖作为原料，进行化学结构修饰，使其形成具有两亲性的聚合物分子，即一端含亲水基，且此亲水基为具有与细胞膜良好亲和性和穿透性的精氨酸；另一端含亲脂基并且可在体内进行生物降解的聚合物，以适合于包载药物形成纳米聚合物胶束。
为解决上述技术问题，本发明提供技术解决方案如下。
由下述通式表示的两亲性N-长链烷基-N-精氨酸壳聚糖衍生物:
权利要求
1.一种藤黄酸的纳米胶束，其特征在于，它主要是由藤黄酸和两亲性N-长链烷基-N-精氨酸壳聚糖衍生物所组成，所述两亲性N-长链烷基-N-精氨酸壳聚糖衍生物是由下述通式表示的:
2.权利要求1所述的藤黄酸纳米胶束，其特征在于，它主要是由1-100份的藤黄酸和1-100份的两亲性N-长链烷基-N-精氨酸壳聚糖衍生物所组成。
3.权利要求1-2任一项所述的所述的纳米胶束，其特征在于:所述两亲性N-长链烷基-N-精氨酸壳聚糖衍生物中壳聚糖的分子量介于5000-500000，精氨酸取代度为I % 50 %，长链烷基取代度为I % 50 %。
4.权利要求1任一项所述的所述的藤黄酸纳米胶束，其特征在于:所述藤黄酸占制剂重量的I 50%。
5.权利要求1-4任一项所述的藤黄酸纳米胶束的制备方法，其特征在于，它包括如下步骤: (1)按重量体积比称取两亲性N-长链烷基N-精氨酸壳聚糖衍生物1-50份，加入水1-100份，20-70°C水浴搅拌l_120min，制成载体溶液； (2)按重量体积比加入藤黄酸1-50份至载体溶液中，冰浴下探头超声Ι-lOOmin，重蒸水透析，过滤，即得载药胶束溶液。
6.权利要求1-4任一项所述的藤黄酸纳米胶束的制备方法，其特征在于，它包括如下步骤: (1)按重量体积比称取两亲性N-长链烷基-N-精氨酸壳聚糖衍生物1-50份，加入水1-100份，20-70°C水浴搅拌l_120min，制成载体溶液； (2)按重量体积比称取 藤黄酸1-50份，溶于有机溶剂中，制成浓度为0.l-20g/L的藤黄酸的有机溶液； (3)逐滴滴加步骤(2)所得的藤黄酸的有机溶液于载体溶液中，冰浴下探头超声，室温敞口搅拌过夜，挥干有机溶剂，过滤，即得载药胶束溶液。
7.权利要求1-4任一项所述的藤黄酸纳米胶束的制备方法，其特征在于，它包括如下步骤: (1)按重量体积比称取两亲性N-长链烷基-N-精氨酸壳聚糖衍生物1-50份，加入水1-100份，20-70°C水浴搅拌l_120min，制成载体溶液； (2)按重量体积比称取藤黄酸1-50份，溶于乙醇中，制成浓度为0.l_20g/L的藤黄酸乙醇溶液； (3)逐滴滴加步骤(2)所得的藤黄酸乙醇溶液于载体溶液中，直到达到处方比例，重蒸水透析过夜，即得载药胶束溶液。
8.权利要求1-4任一项所述的藤黄酸纳米胶束的制备方法，其特征在于，它包括如下步骤: (1)按重量体积比称取藤黄酸1-50份，置于圆底烧瓶中，加入乙醇，制成浓度为0.l_20g/L的藤黄酸乙醇溶液，在20-70°C下旋转蒸发1-1OOmin将乙醇蒸干，得干燥透明的药膜骨架； (2)按重量体积比称取两亲性N-长链烷基-N-精氨酸壳聚糖衍生物1-100份，加入水1-100 份； (3)将步骤(2)所得溶液然后加加入到步骤(I)所得药膜骨架中，直到达到处方比例，20-70°C下水化，膜过滤，得到透明的载药胶束溶液。
9.权利要求1-4任一项所述的藤黄酸纳米胶束制成的制剂，其特征在于，所述制剂包括冻干针剂、注射剂、透皮制剂、气雾剂、口服液、溶液剂、眼用制剂、片剂或胶囊剂。
10.权利要求1所述的纳米胶束，其特征在于，所述两亲性N-长链烷基-N-精氨酸壳聚糖衍生物是由下述通式表示的:
全文摘要
本发明公开了一种源于天然且可生物降解的N-长链烷基-N-精氨酸壳聚糖衍生物及其胶束制备方法，以及作为口服难溶、难吸收性药物藤黄酸的增溶、促吸收纳米载体的应用。
文档编号A61K31/352GK103142469SQ20131008230
公开日2013年6月12日 申请日期2013年3月15日 优先权日2013年3月15日
发明者吕慧侠, 喻樊, 周建平 申请人:中国药科大学