一种高活性柏子提取物及其用途
【专利摘要】本发明提供了一种高活性柏子提取物及其用途。具体地，本发明高活性柏子提取物具有以下特征：(a)所述提取物的分子量分布为280-310；(b)所述提取物中不饱和脂肪酸总含量≥80wt％；(c)所述提取物中来源于柏子的二萜类物质总含量≤0.5wt％；和(d)所述的柏子提取物在0.01-50mg/kg体重计量下施用时，具有促智活性，较佳地，0.02-11mg/kg体重(人)。本发明的柏子提取物在较低剂量下表现出高活性的促智作用，且具有良好的抗疲劳效果。
【专利说明】一种高活性柏子提取物及其用途
【技术领域】
[0001] 本发明涉及中药提取物领域，具体地，涉及一种从柏子中提取的高活性成分，作为 促智尤其是提高认知能力、改善认知功能障碍以及抗疲劳药物和功能食品的用途。
【背景技术】
[0002] 认知功能是指人脑加工、储存和提取信息的能力，包括记忆、语言、视空间、执行、 计算和理解判断等方面的能力。认知功能障碍是指上述一项或多项能力受损，常见于各种 类型的痴呆患者，其中最高发的是阿尔茨海默病（Alzheimer's disease，AD)和血管性痴呆 (vascular Dementia, VaDX
[0003] AD是发生于老年前期或老年期，以进行性痴呆、认知障碍为主要症状，同时伴有精 神行为异常的神经退行性疾病。其特征性临床表现为严重的学习记忆功能下降、分析判断 能力衰退、情绪改变、行为失常、甚至意识模糊。随着人类社会年龄结构老龄化，老年性痴呆 症发病率日趋上升，已成为仅次于心脑血管疾病和肿瘤的第三大健康杀手。据报道，65岁以 上老年人口中,AD患病率占总人口的4wt % -7wt %，80岁以上的老年人可达20wt %;至2015 年，我国老年人口将超过2亿，本世纪40年代后期可能突破4亿。AD发病率随着人口老龄 化的进展呈逐年上升的趋势，寻找治疗AD的有效药物已成为医药领域的研究热点之一。
[0004] AD的临床表现主要为智能和认知功能障碍，属于中医呆病、善忘、痴呆、文痴等范 畴。中药具有效性确切和安全低毒的特点，在以AD为代表的认知功能障碍病症的预防和治 疗方面具有更大的潜力。
[0005] 柏子仁（arboruitae seed)，又称柏实，为裸子植物柏科侧柏（Platycladus orientalis(L. )Franco)的干燥成熟种仁。主产于山东、河南、河北等地。柏子仁味甘、性 平，有养心安神、敛汗、润肠通便之功效。柏子仁应用历史悠久，始载于《神农本草经》，列为 上品。《神农本草经》记载"主惊悸、安五脏、益气、除风湿搏，久服令人润泽美色、耳目聪明、 不饥不劳、轻身延年";《本草纲目》记载：柏子仁具有"养心气，润肾燥，安魂定魄，益智宁神， 烧浙，泽头发，治疥癣"功效，用于惊悸怔忡，失眠健忘，盗汗，肠燥便秘。明代倪朱漠在《本 草汇言》中提到，"柏子仁味甘气平……，此药气极蜂芬芳，则脾胃所喜；质及润泽，则肝肾所 宜。故前古谓安养五脏、主惊悸、定心神、悦颜色、聪耳目，为延年却痛之上剂也。"
[0006] 近年化学研究表明，柏子仁含脂肪酸、柏木醇、谷留醇和二萜类成分，其中二萜 类成分主要红松内脂（pinusolide)、15, 16-双去甲-13-氧代半日花-8(17) -烯-19 酸（15, 16_bisnor-13-〇x〇-8 (17)-labdene-19-oic acid)、15, 16-双去甲-13-氧代半 日花-8(17) ; IlE-二烯-19-酸、二轻基半日花三烯酸（12R, 13RS_dihydroxyconmunic acid)。另有α -雪松醇（a -cedrol)，柏子仁双醇（platydiol)，5-轻基松柏酸 (5-hydroxypinusolidie acid)。酚酸性化合物包括：（+)-儿茶精[(+)-Catechin]、 (-)-表儿茶精[(-)-epicatechin]及其聚合体丙氰定 BI, B3 (Proeyanidin BI, B3)、5-轻 基-7,4-二甲氧基黄酮（5-117(11'(?7-7,4-(1;[11161:11(?7；1^13￥0116)和木质素等。
[0007] 近年药理研究表明，柏子仁具有促智、镇静、润畅通便的作用。1992年日本学者 西山信好[西山信好等，国外医学中医药分册，1992, 14(4)，53-54.]通过小鼠被动学习回 避试验探讨了柏子仁对破坏杏仁核小鼠学习障碍的作用，明暗室法试验中表明，柏子仁乙 醇提取物250, 500mg/kg 口服给药对对杏仁核破坏后小鼠的学习障碍无效，但在跳台试验 中能明显改善、保持、恢复记忆，但对大脑皮层、海马、丘脑下部的乙酰胆碱酯酶活性未见 影响。日本学者楮鹏江[楮鹏江等，国外医学中医药分册，1993，15(2)，40-41.]研究柏 子仁对前脑基底核破坏小鼠被动回避学习障碍的影响时发现，避暗法和跳台试验表明，柏 子仁乙醇提取物250, 500mg/kg 口服给药后对前脑基底核破坏小鼠的被动学习障碍有改 善作用，但对运动低下无拮抗作用。Nishiyama等[Nishiyama N，et al. ,Phytotherapy Research, 1992, 6, 289-293. ]〇
[0008] 研究表明，柏子仁乙醇提取物250, 500mg/kg 口服给药对扁桃体损伤引起的记忆 获得障碍有改善作用，但未能改善记忆保持，对皮质、海马和下丘脑中的胆碱乙酸基转移酶 的活性未见作用，对扁桃体损伤引起的显微病理改变未见影响。
[0009] 因此，本领域迫切需要开发一种对提高认知能力、改善认知功能障碍有良好效果、 活性成分高且易获得的提取物及其组合物。
【发明内容】
[0010] 本发明提供了的柏子提取物，具有活性高、剂量低、能够提高认知能力、改善认知 功能障碍、抗疲劳效果明显的优点。
[0011] 本发明提供了一种柏子提取物，所述的提取物中具有以下特征：
[0012] (a)所述提取物的分子量分布为280-310 ;
[0013] (b)所述提取物中不饱和脂肪酸总含量彡80wt% ;
[0014] (c)所述提取物中来源于柏子的二萜类物质总含量< 0. 5wt% ;和
[0015] (d)所述的柏子提取物在0. 01_50mg/kg体重计量下施用时，具有促智活性，较佳 地，2-10mg/kg体重（小鼠），更佳地0· 2-llmg/kg (人)。
[0016] 在另一优选例中，所述的施用的对象为哺乳动物，较佳地，为小鼠、大鼠、人。
[0017] 在另一优选例中，所述的提取物还具有以下一个或多个特征：
[0018] (e)所述的提取物中的二萜类总含量小于0. 5wt%或无；
[0019] (f)所述的提取物还含有IO-Hwt %的饱和脂肪酸；
[0020] 在另一优选例中，所述的二萜类物质包括选自以下一种或多种的化合物：红 松内脂、15, 16-双去甲-13-氧代半日花-8 (17)-烯-19酸、15, 16-双去甲-13-氧 代半日花-8 (17) ; IlE-二烯-19-酸、二羟基半日花三烯酸、南洋杉酸、13-表柏酸 (13-epicupressic acid)。
[0021] 在另一优选例中，所述的提取物中，南洋杉酸的含量< 0. 5wt% ;和/或13-表柏 酸（13-epicupressic acid)的含量<0· 5wt%。
[0022] 在另一优选例中，所述的提取物中，南洋杉酸的含量为无；和/或13-表柏酸 (13-epicupressic acid)的含量为无。
[0023] 在另一优选例中，其中，所述的饱和脂肪酸包括棕榈酸、硬脂酸；
[0024] 所述的不饱和脂肪酸包括油酸、亚油酸、亚麻酸、9-二十碳烯酸、11-二十碳烯酸、 5, 11-二十烷二烯酸、12, 17-二十烷二烯酸、8, 11，14-二十烷三烯酸、5, 11，14, 17-花生四 烯酸。
[0025] 在另一优选例中，所述的亚麻酸含量为25wt % ;
[0026] 在另一优选例中，所述的提取物是用以下方法制备的：
[0027] (i)获得成熟柏子并粉碎，从而形成柏子粉；
[0028] (ii)将步骤（i)中获得的柏子粉经提取形成柏子提取物。
[0029] 在另一优选例中，所述的提取包括超临界二氧化碳萃取和石油醚提取。
[0030] 本发明第二方面，提供了一种组合物，所述的组合物包括（i)本发明第一方面所 述的柏子提取物作为活性成分；（ii)药学上可接受的载体、或食品上可接受的载体。
[0031] 在另一优选例中，所述的组合物为药品组合物或食品组合物或保健品组合物。
[0032] 在另一优选例中，所述柏子提取物的含量被配制成每日施用剂量，按柏子提取物 计为0· 01-50mg/kg体重；较佳地,为2?10mg/kg体重（小鼠）；更佳地,为4-6mg/kg体重 (小鼠）；和/或较佳地为〇· 〇2-llmg/kg (人）；更佳地为0· 04-6mg/kg(人）。
[0033] 本发明第三方面，提供了一种本发明第一方面所述的柏子提取物的用途，用于制 备改善认知功能障碍的药物和/或食品和/或保健品，且所述的药物和/或食品和/或保健 品中柏子提取物的含量被配制成每日施用剂量为〇. 01?50mg/kg体重；更佳地，为0. 02? llmg/kg 体重（人）。
[0034] 在另一优选例中，所述的药物和/或食品和/或保健品还用于抗疲劳。
[0035] 本发明第四方面，提供了一种改善认知功能，尤其是促智的方法，给需要的对象施 用0. 01?50mg/kg体重本发明第一方面所述的柏子仁提取物。
[0036] 在另一优选例中，所述的施用量为每日施用剂量为0. 01_50mg/kg体重；更佳地， 为2?10mg/kg体重（小鼠），为0· 02?I lmg/kg体重（人）。
[0037] 在另一优选例中，所述的对象是哺乳动物，较佳地包括小鼠、大鼠、人，更佳地，所 述的对象是人。
[0038] 在另一优选例中，所述的对象包括幼儿、儿童、青少年、老年人、和/或AD患者。
[0039] 应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文（如实施例）中具 体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在 此不再一一累述。
【专利附图】
【附图说明】
[0040] 图IA-B显示了柏子经不同提取方法得到的活性部位以及市售鱼油对东莨菪碱致 小鼠记忆障碍均有不同程度记忆改善作用，其中，带壳柏子的提取物BZ-I-SFC的效果优于 其他方法获得的提取物，与其效果相当的为乙醇柏子仁提取物BZR-E，但BZR-E的剂量为 BZ-I-SFC 的 10 倍。
[0041] 图2A显示了柏子提取物BZ-I-SFC多个剂量下均能不同程度的缩短小鼠到达逃脱 平台的时间，而6mg/kg表现出最佳改善作用；图2BBZ-1-SFC多个剂量下均能减少小鼠进入 盲端的错误次数，在6mg/kg时作用也最明显。其作用强度与阳性对照石杉碱甲相当。
[0042] 图3显示了 BZ-I-SFC随着测试浓度的增加，抗疲劳作用效果也随之增强。其中 36mg/kg能明显改善小鼠体力疲劳现象，有显著性统计意义。
【具体实施方式】
[0043] 本发明人通过广泛而深入的研究，首次发现了对带壳柏子进行提取，所获得的提 取物在很低的剂量下即对提高认知能力、改善认知功能障碍有良好的作用，本发明人同时 通过实验证明，本发明提取物具有极高含量的不饱和脂肪酸，大大降低了柏子仁提取物中 对提高认知能力、改善认知功能障碍无活性的杂质成分。在此基础上，完成了本发明。
[0044] 术语
[0045] 如本文所用，术语"本发明柏子提取物"、"本发明柏子有效部位"、"本发明柏子活 性部位"、"BZ-1-SFC"可互换使用，均指将带壳柏子通过提取后获得的柏子提取物，且所述 的柏子提取物均具有不饱和脂肪酸含量> 80wt%，二萜类物质< 0. 5wt%，并在低剂量下 具有提高认知能力、改善认知功能障碍的特性。
[0046] 术语"促智"、"促智活性"可以互换使用，均指对人体或动物施用药物后，具备提高 认知能力、改善认知功能障碍的效果。
[0047] 柏子提取物
[0048] 本发明提供的柏子提取物为一种通过将带壳柏子经过超临界萃取、石油醚提取等 方法获得的高活性提取物。柏子提取物具有极高含量(大于80wt%)的不饱和脂肪酸，且 对提高认知能力、改善认知功能障碍无活性的物质等物质含量极小，其中二萜类物质含量 彡0. 5wt %。由此，本发明柏子提取物可以在极低的剂量下（0. 01-50mg/kg体重，较佳地， 2-10mg/kg体重（小鼠），0· 02-llmg/kg体重（人），更佳地，为4-6mg/kg体重（小鼠）， 0· 04-6. 6mg/kg体重（人）），对提高认知能力、改善认知功能障碍有良好作用。
[0049] 本发明柏子提取物可通过超临界萃取、石油醚提取等方法进行提取。
[0050] 其中，超临界萃取的方法如下：带壳或去壳柏子仁粉碎后，置于超临界萃取装置的 萃取釜(设备：江苏南通华安超临界萃取有限公司，HA221-40-11型超临界萃取装置）中，在 萃取釜温度为32°C、压力为25MPa、CO 2流速为30-341711的条件下萃取1.5小时，萃取完毕 后提取液转移至分离釜，在分离釜温度为38°C、压力为6MPa条件下分离出柏子仁SFC提取 物。
[0051] 石油醚萃取的方法如下：带壳或去壳柏子仁粉碎后，至于3000ml的锥形瓶中，力口 等量的石油醚(沸点60-90°C )超声提取3次，每次Ih ;提取液合并减压蒸干即得柏子仁石 油醚提取物。
[0052] 在本发明柏子提取物中，不饱和脂肪酸含量占> SOwt %，所述不饱和脂肪酸包括 油酸、亚油酸、亚麻酸、9-二十碳烯酸、11-二十碳烯酸、5, 11-二十烷二烯酸、12, 17-二十烷 二烯酸、8, 11，14-二十烷三烯酸I、5, 11，14, 17-花生四烯酸；
[0053] 本发明柏子提取物中所述的二萜类物质含量<0. 5wt%，包括红松内脂、15, 16-双 去甲-13-氧代半日花-8 (17)-烯-19酸、15, 16-双去甲-13-氧代半日花-8(17) ; IlE-二 烯-19-酸、二轻基半日花三烯酸、南洋杉酸、13-表柏酸（13-epicupressic acid);其中，代 表性的二廠类物质包括南洋杉酸、13-表柏酸（13-epicupressic acid)。
[0054] 本发明柏子提取物中，还包括10?15wt%的饱和脂肪酸，所述的饱和脂肪酸包括 棕榈酸、硬脂酸。
[0055] 本发明柏子提取物在低剂量下（0. 01_50mg/kg，较佳地2-10mg(小鼠）， 0· 02-llmg/kg(人）；更佳地4-6mg/kg(小鼠），0· 04-6. 6mg/kg(人））具有改善记忆、促智 的作用，且还具有一定的抗疲劳效果。因此，本发明也提供了通过给需要的受试者施加有效 量的所述柏子提取物来预防、改善或治疗所述疾病的方法。
[0056] 组合物
[0057] 本发明提供一种组合物，以所述组合物总重量计，它含有重量百分比为l-99wt% 的本发明提供的柏子提取物作为活性成分和药学上或食品学上可接受的载体。
[0058] 在本发明中，各种组合物可以按本领域熟知的方法配制，可以将柏子提取物与药 学上或食品学上可接受的载体混合配制。药学上或食品学上可接受的载体的成分是适用于 人和/或动物而无过度不良副反应（如毒性、刺激和变态反应）的，即有合理的效益/风险 比的物质。所述的有药学上或食品学上可接受的载体中还可以包含甘草提取物等天然提取 物、维生素和微量元素等营养强化剂及膳食纤维、糊精。
[0059] "药学上可接受的载体"指用于治疗剂给药的载体，包括各种赋型剂和稀释剂。该 术语指这样一些药剂载体：它们本身并不是必要的活性成分，且施用后没有过分的毒性。合 适的载体是本领域普通技术人员所熟知的，可含有液体，如水、盐水、甘油和乙醇。另外，这 些载体中还可能存在辅助性的物质，如填充剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、泡腾剂、润湿剂或 乳化剂、矫味剂、pH缓冲物质等。
[0060] 在本发明的另一优选方式中，所述的食品学上可接受的载体或赋形剂可含有：填 充剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、泡腾剂、矫味剂、包覆材料、膳食制品、或缓释剂。
[0061] 对于本发明所述的组合物的剂型没有特别的限制，可以是任何适用于哺乳动物服 用的剂型；优选的，所述的剂型可选自胶囊、软胶囊、粉剂、片剂、颗粒剂、口服液、喷雾剂、霜 剂、乳剂、水剂或膏体等。
[0062] 本发明的组合物包括药物组合物、食品组合物、保健品组合物、食品配料组合物、 膳食补充剂组合物、天然药物原料组合物、或化妆品功能成分组合物；也可以是保健饮料、 酒类等。只要它们含有或基本上由柏子提取物组成即可。
[0063] 本发明提到的上述特征，或实施例提到的特征可以任意组合。本案说明书所揭示 的所有特征可与任何组合物形式并用，说明书中所揭示的各个特征，可以任何可提供相同、 均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特 征的一般性例子。
[0064] 柏子提取物BZ-I-SFC促智活性总结与成人剂量换算
[0065] 按照《药理试验方法学》（人民卫生出版社，第四版）中附表资料，小鼠和人的体表 面折算的等效剂量比值为387. 9。以小鼠 lmg/kg剂量为例，计算人给药剂量=1*0. 02kg(小 鼠平均体重）*387. 9/70kg (人平均体重）=0· llmg/kg。
[0066] 在另一优选例中，根据本发明示范例数据，带壳柏子提取物有效剂量范围为 l-50mg/kg，折算成人的剂量为0. l-5mg/kg。然而，由于药物在不同种属动物代谢的差异以 及不同种属动物分子生物学的差异可能导致药物效应的浮动。因此在上述计算剂量下上下 各浮动10倍，折算成人的剂量应为〇. 01_50mg/kg。
[0067] 同理，在确定了应用于小鼠的最佳剂量后，通过此方法同样能够方便地推算的应 用于成人的最佳剂量。
[0068] 本发明的有益效果：
[0069] 1.柏子提取物活性高，施用剂量小：本发明提供的带壳柏子提取物在低剂量 下（0· 01-50mg/kg，较佳地 2-10mg/kg(鼠），0· 02-llmg(人），更佳地 4-6mg/kg(小鼠）， 0. 04-6. 6mg/kg (人））即有提高认知能力、改善认知功能障碍的作用，活性较传统柏子仁提 取物大幅上升（250、500mg/kg体重（小鼠）），更易于施用，从而有助于改善施用对象的服用 依从性。
[0070] 3.提取方法来源充足、经济、方便：本发明采用对带壳柏子的提取，取代了传统去 壳柏子仁提取，效果优于去壳柏子仁的同时，大幅提升了原料获得的便利性、经济性，从而 降低了生产成本，更有利于工业生产推广。
[0071] 实施例1 :柏子提取物的制备
[0072] I. ISFC提取：取带壳柏子288g粉碎后至于SFC中（SFC仪器型号HA221-40-11，江 苏南通华安超临界萃取有限公司），萃取条件：萃取釜温度：32°C，萃取釜温度压力：25MPa ; 分离釜温度：38°C，分离釜温度压力：6MPa ;超临界CO2流速；30-40L/h ;萃取时间：1. 5h。得 柏子提取物BZ-1-SFC23. 2g，得率为8. Owt %。
[0073] 1. 2石油醚提取：取带壳柏子5. 2g粉碎后至于500ml的锥形瓶中，加入250ml石 油醚，超声提取3次，每次lh。石油醚提取液合并，减压蒸馏得活性部位BZR-1-PE1. 2g，得 率为 23. Iwt%。
[0074] 对比例1柏子仁提取物的制备
[0075] I. Ic SFC提取：取去壳柏子仁270g粉碎后至于SFC中（SFC仪器型号 HA221-40-11，江苏南通华安超临界萃取有限公司），萃取条件：萃取釜温度：32°C，萃取釜温 度压力：25MPa ;分离釜温度：38°C，分离釜温度压力：6MPa ;超临界CO2流速；30-40L/h ;萃 取时间：1. 5h。得柏子仁提取物BZR-SFC23. 0g，得率为8. 5wt%。
[0076] I. 2c石油醚提取：取去壳柏子仁5g粉碎后至于500ml的锥形瓶中，加入250ml石 油醚，超声提取3次，每次lh。石油醚提取液合并，减压蒸馏得活性部位BZR-PE1. 2g，得率 为 24wt %。
[0077] I. 3c乙醇提取：取去壳柏子仁20. 45g按照文献（Nishiyama N, et al. , Phytotherapy Research, 1992, 6, 289-293)提供的方法制得柏子仁提取物 BZR-E2. llg，得率为 10. 3wt%。
[0078] 实施例2 :柏子或柏子仁提取物中半日花烷型二萜南洋杉酸和13-表柏酸 (13-epicupressic acid)含量的测定
[0079] 2. L柏子仁提取物中半日花烧型二廠南洋杉酸（imbricatolic acid)和13-表柏 酸（13-epicupressic acid)的分离与纯化：
[0080] 按文献（Wang YZ. et al.，Phytochemistry, 2008, 69, 518-526.)的方法将干燥柏 子仁（10. 2kg)碾碎后，在室温下用95wt%工业乙醇（20LX3)提取，经过不同的柱层析手 段得化合物南洋杉酸（imbricatolic acid) 81. 8g，得率为8. 2wt% ;得化合物13-表柏酸 (13-epicupressic acid) 2. 54g。化合物南洋杉酸和 13-表柏酸（13-epicupressic acid) 的波谱数据如下：
[0081] 南洋杉酸，imbricatolic acid
[0082] 白色粉末，[a ]D(20°C )+50(cl. 5, CHC13) jH-NMlUCDCls，300MHz) : δ 〇· 60(3H，s，C H3-20)，0· 90 (3H，d，J=6. 4Hz，CH3-16)，I. 22 (3H，s，CH3-18)，3· 68 (2H，m，H-15)，4· 50 (1H，s，H -17)，4. 84 (1H，s，H-17) · 13C-NMR (CDCl3, 75MHz) : δ 12. 7 (q，C-20)，19. 8 (q，C-16)，19. 9 (t，C -2)，21.1(t，C-ll)，26.0(t，C-6)，28.9(q，C-18)，30.2(t，C-13)，36.4(t，C-12)，38.0(t，C-3)，38. 7 (t，C-7)，39. I (t，C-l)，39. 5 (t，C-14)，40. 5 (s，C-10)，44. I (s，C-4)，56. 3 (d，C-5)， 56. 6 (d, C-9)，61. 2 (t, C-15)，106. 3 (t, C-17)，148. 2 (s, C-8)，183. 3 (s, C-19)。上述数据与文 献报道[Su, W. C.，Fang, J. Μ·，Cheng, Y. S. Labdanes from Cryptomeria japonica. Phytoch emistry，1994, 37, 1109-1114.] -致。
[0083] 13-表柏酸（13-epicupressic acid)
[0084] 白色粉末，[a ]D(2(TC )+57(c4. 5, CHCl3) !1H-NMR(O)Cl3, 300MHz) : δ 〇· 58(3H，s，C H3-20), I. 22 (3H, s, CH3-I8), I. 26 (3H, s, CH3-16), 4. 43 (1H, s, H-17), 4. 82 (1H, s, H-17), 5. 0 2 (1H, dd, J=IO. 7, I. 0Hz, H-15), 5. 20 (1H, dd, J=17. 3, I. 0Hz, H-15), 5. 90 (1H, dd, J=17. 3, 10 .7Hz,H-14) ; 13C-NMR (CDCl3, 75MHz) : δ 12. 7 (q, C-20), 17. 8 (t, C-I I), 19. 8 (t, C-2), 26. 0 (t ,C-6), 27. 9 (q, C-16), 28. 9 (q, C-18), 37. 9 (t, C-3), 38. 7 (t, C-7), 39. I (t, C-l), 40. 6 (s, C-10), 41. 3 (s, C-12), 44. I (s, C-4), 56. 3 (d, C-5), 56. 4 (d, C-9), 73. 8 (s, C-13), 106. 5 (t, C-I 7)，111. 7 (t, C-15)，144. 7 (d, C-14)，148. 0 (s, C-8)，183. 5 (s, C-19)。上述数据与文献报道 [Su, ff. C. , Fang, J. Μ. , Cheng, Y. S. Labdanes from Cryptomeria japonica. Phytochemistry ，1994, 37, 1109-1114.] -致。
[0085] 2. 2.柏子提取物中南洋杉酸和13-表柏酸（13-epicupressic acid)含量测定
[0086] 柏子活性部位中半日花烧型二廠南洋杉酸和13-表柏酸（13-epicupressicacid) 的含量测定采用高效液相色谱（HPLC)法，液相条件为 ：
[0087] 流动相：二氯甲烷：乙腈=30:70等梯度洗脱
[0088] 检测器：蒸发光散射检测器（ELSD)
[0089] 流速：lml/min
[0090] 柱色谱：Waters Acquity Column BEH RP-C18, 1. 7 μ m, 2. I X 100mm
[0091] 柱温：40°C
[0092] 测定方法：
[0093] 供试品溶液的制备：精密称取活性部位20. Omg，二氯甲烷溶解后转移至100ml的 容量瓶中并定容至刻度，作为供试溶液；
[0094] 对照品溶液的制备：分别称取半日花烷型二萜南洋杉酸和13-表柏酸 (13-epicupressic acid)各IOmg,精密称定，加二氯甲烧制成Iml含200 μ g的溶液，即得。 [0095] 分别精密量取20μ 1对照品和供试品溶液，加入到高效液相色谱仪自动进样器 中，测定。
[0096] 2. 3.含量测定结果如表1所示
[0097] 表1:柏子仁或柏子活性部位二萜的含量
【权利要求】
1. 一种柏子提取物，其特征在于，所述的提取物中具有以下特征： (a) 所述提取物的分子量分布为280-310 ; (b) 所述提取物中不饱和脂肪酸总含量彡80wt% ; (c) 所述提取物中来源于柏子的二萜类物质总含量< 0. 5wt % ;和 (d) 所述的柏子提取物在0. 01_50mg/kg体重计量下施用时，具有促智活性。
2. 如权利要求1所述的提取物，其特征在于，所述施用时的施用对象为哺乳动物，较佳 地，为小鼠、大鼠、人，更佳地，为人。
3. 如权利要求1所述的提取物，其特征在于，所述的提取物还具有以下一个或多个特 征： (e) 所述的提取物中的二萜类总含量小于0. 5wt %或无； (f) 所述的提取物还含有l〇-14wt%的饱和脂肪酸。
4. 如权利要求1所述的提取物，其特征在于，所述的二萜类物质包括选自以下一种或 多种的化合物：红松内脂、15, 16-双去甲-13-氧代半日花-8 (17)-烯-19酸、15, 16-双去 甲-13-氧代半日花_8 (17) ; 11E-二烯-19-酸、二羟基半日花三烯酸、南洋杉酸、13-表柏酸 (13-epicupressic acid)。
5. 如权利要求3所述的提取物，其特征在于，其中，所述的饱和脂肪酸包括棕榈酸、硬 脂酸； 所述的不饱和脂肪酸包括油酸、亚油酸、亚麻酸、9-二十碳烯酸、11-二十碳烯酸、 5, 11-二十烷二烯酸、12, 17-二十烷二烯酸、8, 11，14-二十烷三烯酸、5, 11，14, 17-花生四 烯酸。
6. 如权利要求1所述的提取物，其特征在于，所述的提取物是用以下方法制备的： (i) 获得成熟柏子并粉碎，从而形成柏子粉； (ii) 将步骤（i)中获得的柏子粉经提取形成柏子提取物。
7. -种组合物，其特征在于，所述的组合物包括（i)权利要求1所述的柏子提取物作为 活性成分；（ii)药学上可接受的载体、或食品上可接受的载体。
8. 如权利要求7所述的组合物，其特征在于，所述的组合物为药品组合物或食品组合 物或保健品组合物。
9. 如权利要求8所述的组合物，其特征在于，所述柏子提取物的含量被配制成每日施 用剂量，按柏子提取物计为〇. 01_50mg/kg体重。
10. -种权利要求1所述的柏子提取物的用途，其特征在于，用于制备改善认知功能障 碍的药物和/或食品和/或保健品，且所述的药物和/或食品和/或保健品中柏子提取物 的含量被配制成每日施用剂量为〇. 01?50mg/kg体重。
【文档编号】A61K36/14GK104367603SQ201310349927
【公开日】2015年2月25日 申请日期:2013年8月12日 优先权日:2013年8月12日
【发明者】叶阳, 唐希灿, 章海燕, 姚胜, 王维, 季萍 申请人:中国科学院上海药物研究所