一种治疗心脑血管疾病的药物组合物、制备方法及其质量控制方法
【专利摘要】本发明提供一种治疗心脑血管疾病的药物组合物、制备方法及其质量控制方法，涉及制药领域。所述治疗心脑血管疾病的药物组合物，由下述重量配比的中药原料制成：地龙30～50份、全蝎15～25份和水蛭30～50份。其制备方法，包括如下步骤：将地龙粗粉、全蝎及水蛭粗粉混合均匀，加水浸泡，将药材连同浸泡液加入粉碎机进行湿法粉碎，离心，取上清液作采用中空纤维膜过滤，取粗提取液中分子量范围为9～120KDa的组分即得所述治疗心脑血管疾病的药物组合物。本发明药物组合物，去除了药材中干扰药效的杂质，所以抗血栓方面的药效较传统药物显著增强，且能显著减少服用剂量，却并未检测到毒性。
【专利说明】—种治疗心脑血管疾病的药物组合物、制备方法及其质量控制方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及制药领域，具体涉及一种治疗心脑血管疾病的药物组合物、制备方法及其质量控制方法。
【背景技术】
[0002]心脑血管疾病是一类常见的疾病，特别在中老年人群中发病率很高，具有高发病率,高死亡率,高致残率的特点,对人体健康有着极大的威胁。
[0003]阿司匹林是非选择性环氧化酶抑制剂，小剂量的阿司匹林主要抑制血小板中环氧化酶I (C0X — I)，减少血栓素A2 (TXA2)的生成，用于预防心脑血管病的发病和短暂性缺血发作。但服用阿司匹林常常会出现许多不良反应，如长期使用易致胃黏膜损伤，引起胃溃疡及胃出血，出现中毒性肝炎、心力衰竭以及其他过敏反应，严重者甚至出现休克[1]。由此可见，虽然阿司匹林在心脑血管疾病上的疗效确切，但其毒副作用亦很明显(夏路风，付得兴.阿司匹林的不良反应与合理应用[J].首都医药，2006，20:48-50.)。
[0004]地龙为矩蝴科动物参环毛蝴Pheretima aspergiIIum(E.Perrier)、通俗环毛虫引Pheretima vulgaris Chen、威廉环毛虫引 P.heretima guillelmi (Miehaelsen)或木节盲环毛虫引 Pheretima Pectinifera Michalelsen 的干燥体。
[0005]全蝎为钳蝎科动物东亚钳蝎Buthus martensii Karsch的干燥体。
[0006]水輕为水輕科动物蚂蟥Whitmania pigra Whitman、水輕 Hirudo nippponicaWhitman或柳叶蚂蟥Whitmania acranulata Whitman的干燥全体。水輕具有破血通经,逐瘀消瘕的功效；地龙又名蚯蚓，味咸，性寒，归肝、肾、肺经，具有清热定惊，平喘通络，利尿之功，可用于风湿痹痛；全蝎为祛风镇痉之品，又有攻毒散结之用，三者共用活血破瘀，扶正而祛邪。
[0007]虽然，地龙、全蝎和水蛭是常用的心脑血管药物，但是全粉入药，药效不能令人满意，口服剂量大，服用不方便。
【发明内容】
[0008]本发明目的是提供一种治疗心脑血管疾病的药物组合物，药效强，服用剂量低，却并未检测到毒性。
[0009]本发明的另一目的是提供上述药物组合物的制备方法，该方法简单，产率高，能够将有效成分与杂质分离，成本低，对环境友好。
[0010]本发明的再一目的是提供上述药物组合物的质量控制方法。
[0011]本发明的目的采用如下技术方案实现。
[0012]治疗心脑血管疾病的药物组合物，由下述重量配比的中药原料制成:地龙30~50份、全蝎15~25份和水蛭30~50份。
[0013]本发明还提供所述治疗心脑血管疾病的药物组合物的制备方法，包括如下步骤:(1)将地龙和水蛭粉碎，分别得到地龙粗粉和水蛭粗粉；
(2)将地龙粗粉、全蝎及水蛭粗粉混合均匀，加水浸泡，将药材连同浸泡液加入粉碎机进行湿法粉碎，得到浆液；将所述浆液离心，取上清液作为粗提取液；
(3)将所述粗提取液采用中空纤维膜过滤，取粗提取液中分子量范围为9~120KDa的组分即得所述治疗心脑血管疾病的药物组合物。
[0014]步骤(3)中将所述粗提取液先用截留分子量为120kDa的中空纤维膜过滤，取滤过液；将所述滤过液再采用截留分子量为9kDa的中空纤维膜过滤，取截留液，即得分子量范围为9~120 KDa的组分。
[0015]步骤(3)中所述分子量范围为9~120 KDa的组分经过浓缩得到所述药物组合物；所述分子量范围为9~120 KDa的组分经过浓缩和冷冻干燥后，得到所述药物组合物。
[0016]所述冷冻干燥方法为:所述粗提取液中分子量范围为9~120 KDa的组分在-50° C~-40° C条件下预处理7~10小时；在-6。C~-4。C、绝对压强为0.05mbr~
0.1mbr条件下冷冻干燥16~24小时，得到的冻干粉，即为该药物组合物。
[0017]步骤(2)中所述地龙粗粉、全蝎及水蛭粗粉的混合物与水的重量比为1:4~20。步骤(2)中水浸泡的时间为I~6小时。所述浆液中颗粒的平均粒径< 100 μ m。
[0018]步骤(3)所述中空纤维膜的材质为聚醚砜或聚偏氟乙酸。
[0019]本发明还提供所述治疗心脑血管疾病的药物组合物的质量控制方法，包括如下步骤:(I)采用双缩脲法检测所述药物组合物的冻干粉，每克药物组合物冻干粉中的蛋白量不少于0.4g ；
(2)每毫克所述药物组合物冻干粉的抗凝生物效价不低于0.288U ；
(3)取不同批次的所述药物组合物冻干粉，配制成浓度为10mg/ml的水溶液，采用SDS-PAGE电泳法，得到参照指纹图谱；将待测药物组合物的冻干粉的指纹图谱与参照指纹图谱进行相似度评价，相似度应大于0.94 ;所述SDS-PAGE电泳法的检测条件为:分离胶浓度为12%，浓缩胶浓度为5%，浓缩胶电压为80mV，分离胶电压为120mV。
[0020]本发明药物组合物的推荐服用剂量为每日0.4~1.2g。
[0021]本发明治疗心脑血管疾病的药物组合物，是从地龙、全蝎和水蛭中提取得到，去除了药材中干扰药效的杂质，所以抗血栓方面的药效较传统药物(全粉入药)显著增强，且能显著减少服用剂量，却并未检测到毒性。本发明药物组合物的抗栓效果可与常用药物阿司匹林相当，同时服用剂量也处于同一水平。虽然阿司匹林在心脑血管疾病上的疗效确切，但其毒副作用亦很明显，而本发明药物组合物却未检测出明显毒性作用，具有广阔的医疗发展前景。
[0022]本发明上述药物组合物的制备方法，不仅能够将有效成分与杂质分离，显著提高最终产品的药效，而且简单、收率高、成本低，对环境友好。
[0023]本发明上述药物组合物的质量控制方法，简单、重复性好，可靠性高。
【专利附图】
【附图说明】
[0024]图1是10种不同批次样品的电泳指纹图谱，其中sl-slO是10批不同的样品。
[0025]图2是10种不同批次样品电泳指纹图谱的光密度吸收曲线，其中sl-slO是10批不同的样品。【具体实施方式】
[0026]下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明 实施例1:制备药物组合物
(I)将地龙饮片，水蛭饮片，分别粗粉碎后，过二号筛(24目)，分别得到地龙粗粉和水蛭粗粉。
[0027](2)处方1:地龙粗粉30克、全蝎18克和水蛭粗粉30克。按照处方I分别称取地龙粗粉、水蛭粗粉及全蝎，混合均匀，加入400mL水，浸泡2小时。将药材连同浸泡液加入振动式超微粉碎机(济南贝力粉有限公司出品，BL-6型)，粉碎lOmin，使药材颗粒的平均粒径(D50) < IOOym,得到浆液。浆液在4° C条件下高速冷冻离心后，取上清液为粗提取液。该粗提取液含生药量0.195g.mL'
[0028](3)将粗提取液先用截留分子量为120kDa的中空纤维膜过滤，取滤过液；将滤过液采用截留分子量为9kDa的中空纤维膜过滤，取截留液。
[0029](4)药物组合物I的浓缩干燥:将步骤(3)得到的截留液用RE-52AA型旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)减压浓缩至生药量为0.5g-mr1时取出，于-50° C下冷冻7小时，然后于温度为-4° C、绝对压强为0.1mbr条件下冷冻干燥16小时，收集冻干粉，即得药物组合物I。其得粉率约为原药材的14.63%。
[0030]药物组合物I具有显著抗凝活性(按照实施例4标题2方法检测)，其活性回收率可达到78.21%。
[0031]实施例2
(I)将地龙饮片，水蛭饮片，分别粗粉碎后，过二号筛(24目)，分别得到地龙粗粉和水蛭粗粉。
[0032](2)处方2:地龙粗粉50克、全蝎25克和水蛭粗粉50克。按照处方2分别称取地龙粗粉、水蛭粗粉及全蝎，混合均匀，加入1900mL水，浸泡4小时。将药材连同浸泡液加入振动式超微粉碎机(济南贝力粉有限公司出品，BL-6型)，粉碎lOmin，使药材颗粒的平均粒径(D50) ( 100 μ m，得到浆液。浆液于4° C高速冷冻离心，取上清液为粗提取液。粗提取液含生药量0.066g.Inr10
[0033](3)将粗提取液先用截留分子量为120kDa的中空纤维膜过滤，取滤过液；将滤过液再采用截留分子量为9kDa的中空纤维膜过滤，取截留液。
[0034](4)药物组合物2的浓缩干燥:将步骤(3)得到的截留液减压浓缩至生药量为1.0g.mr1时取出，于-40° C下冷冻10小时，然后于温度为-6° C、绝对压强为0.05mbr条件下冷冻干燥24小时，收集冻干粉，得到药物组合物2，其得粉率约为原药材的15.09%。
[0035]药物组合物2具有显著抗凝活性(按照实施例4标题2方法检测)，其活性回收率可达到79.08%ο
[0036]实施例3 药物组合物的效果及毒性试验
传统药物(全粉入药)的制备:分别取地龙、水蛭药材进行粉碎，取过六号筛(100目)的最细粉。由于全蝎含水量较高，将全蝎药材于真空干燥箱内45° C烘一天一夜，再进行粉碎，取过六号筛(100目)的最细粉；按药物组合比例分别取地龙细粉30克、全蝎细粉18克及水蛭细粉30克，混合均匀，即得传统药物。[0037]1.对ADP诱导大鼠血小板聚集的影响
SD大鼠110只，随机分为11组，每组10只，第I组为NS阴性对照组(不给药)，第2组为阿司匹林阳性对照组(每日剂量0.0270g/kg), 3、4、5组为传统药物高、中、低(1.35、0.675、
0.3375g生药/kg)剂量组，6、7、8组为药物组合物I高、中、低(1.35、0.675,0.3375g生药/kg)剂量组，9、10、11组为药物组合物2高、中、低(1.35、0.675,0.3375g生药/kg)剂量组；各组药物均为灌胃给药，每日I次，共7日。具体给药方法见表1。
[0038]用2%戊巴比妥钠溶液，40mg/kg麻醉上述11组SD大鼠下颈总动脉取全血。将9倍体积的3.8%枸橼酸钠溶液加入到I倍体积全血中，进行抗凝处理，轻轻摇匀，以1000rpm离心IOmin,吸出上清液，即为富血小板血衆(PRP)，剩余部分再以3000rpm离心IOmin,吸取上清液为贫血小板血浆(PPP)。用PPP稀释PRP，使血小板数约为4 X 108/ml左右，以ADP(二磷酸腺苷)为诱导剂，用LG-PABER-1型血小板聚集凝血因子分析仪进行测试并计算其聚集率(%)及聚集抑制率(%)(操作及计算方法可参见LG-PABER-1型血小板聚集凝血因子分析仪的使用说明书)。
[0039]结果见表1，表明传统药物高、中、低剂量组及药物组合物I和2的高、中、低剂量组均可抑制ADP诱导的血小板聚集。其中传统药物1.35,0.675g生药/kg剂量组及药物组合物I和2的1.35,0.675,0.3375 g生药/kg组与阴性对照组比较，差异具有显著统计学意义(P〈0.01)。服用各剂量药物组合物I和2的SD大鼠，其血小板聚集率平均值均显著低于服用相同剂量传统药物的SD大鼠，其差异亦具有显著统计学意义(P〈0.01)，说明采用本发明方法除去了大量影响药效的杂质，使得相同生药量的药物组合物I和2与传统药物相比，药效显著增加。药物组合物I和2具有显著的抑制ADP诱导的血小板聚集的作用，其效价显著高于传统药物组。
[0040]另外，通过分 析表1，药物组合物I和2的每日剂量为0.3375g生药/kg时，折算成实际固体粉末服用剂量为0.0494g/kg和0.0509g/kg，对血小板的抑制作用低于0.027g/kg的阿司匹林阳性对照组；当药物组合物I和2的每日剂量为0.6750g生药/kg时，折算成实际固体粉末服用剂量为0.0987g/kg和0.1014g/kg，对血小板的抑制作用已优于0.027g/kg的阿司匹林阳性对照组，由此可以发现药物组合物I和2抑制ADP诱导的血小板聚集的剂量与阿司匹林可同处于一个数量级别。
[0041]表1各药物对ADP诱导大鼠血小板聚集率的影响
【权利要求】
1.一种治疗心脑血管疾病的药物组合物，其特征在于由下述重量配比的中药原料制成:地龙30~50份、全蝎15~25份和水蛭30~50份。
2.权利要求1所述治疗心脑血管疾病的药物组合物的制备方法，其特征在于包括如下步骤: (1)将地龙和水蛭粉碎，分别得到地龙粗粉和水蛭粗粉； (2)将地龙粗粉、全蝎及水蛭粗粉混合均匀，加水浸泡，将药材连同浸泡液加入粉碎机进行湿法粉碎，得到浆液；将所述浆液离心，取上清液作为粗提取液； (3)将所述粗提取液采用中空纤维膜过滤，取粗提取液中分子量范围为9~120KDa的组分即得所述治疗心脑血管疾病的药物组合物。
3.根据权利要求2所述治疗心脑血管疾病的药物组合物的制备方法，其特征在于步骤(3)中将所述粗提取液先用截留分子量为120kDa的中空纤维膜过滤，取滤过液；将所述滤过液再采用截留分子量为9kDa的中空纤维膜过滤，取截留液，即得分子量范围为9~120KDa的组分。
4.根据权利要求3所述治疗心脑血管疾病的药物组合物的制备方法，其特征在于步骤(3)中所述分子量范围为9~120 KDa的组分经过浓缩得到所述药物组合物；所述分子量范围为9~120 KDa的组分经过浓缩和冷冻干燥后，得到所述药物组合物。
5.根据权利要求4所述治疗心脑血管疾病的药物组合物的制备方法，其特征在于所述冷冻干燥方法为:所述粗提取液中分子量范围为9~120 KDa的组分在-50° C~-40° C条件下预处理7~10小时；在-6° C~-4° C、绝对压强为0.05mbr~0.1mbr条件下冷冻干燥16~24小时，得到的冻干粉，即为该药物组合物。
6.根据权利要求2-5之一所述治疗心脑血管疾病的药物组合物的制备方法，其特征在于步骤(2)中所述地龙粗粉、全蝎及水蛭粗粉的混合物与水的重量比为1:4~20。
7.根据权利要求6所述治疗心脑血管疾病的药物组合物的制备方法，其特征在于步骤(2)中水浸泡的时间为I~6小时。
8.根据权利要求7所述治疗心脑血管疾病的药物组合物的制备方法，其特征在于步骤(2)中所述浆液中颗粒的平均粒径< 100 μ m。
9.根据权利要求8所述治疗心脑血管疾病的药物组合物的制备方法，其特征在于所述中空纤维膜的材质为聚醚砜或聚偏氟乙酸。
10.权利要求1所述治疗心脑血管疾病的药物组合物的质量控制方法，其特征在于包括如下步骤:(1)采用双缩脲法检测所述药物组合物的冻干粉，每克药物组合物冻干粉中的蛋白量不少于0.4g ； (2)每毫克所述药物组合物冻干粉的抗凝生物效价不低于0.288U ； (3)取不同批次的所述药物组合物冻干粉，配制成浓度为10mg/ml的水溶液，采用SDS-PAGE电泳法，得到参照指纹图谱；将待测药物组合物的冻干粉的指纹图谱与参照指纹图谱进行相似度评 价，相似度应大于0.94 ;所述SDS-PAGE电泳法的检测条件为:分离胶浓度为12%，浓缩胶浓度为5%，浓缩胶电压为80mV，分离胶电压为120mV。
【文档编号】A61K35/56GK103610703SQ201310657998
【公开日】2014年3月5日 申请日期:2013年12月9日 优先权日:2013年12月9日
【发明者】郭立玮, 付廷明, 朱华明, 朱华旭, 张启春, 刘峰, 张伟 申请人:陕西步长制药有限公司, 南京中医药大学