本专利涉及一种降低血液中尿酸的紫苏叶提取物及其组合物，特别是应用于临床高尿酸血症或高尿酸人群的预防或治疗用途。
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：紫苏(学名：Perillafrutescens)，古名荏，又名苏、白苏、桂荏(《尔雅》)、荏子、赤苏、红苏、香苏、黑苏、白紫苏、青苏、野苏、苏麻、苏草、唐紫苏、皱叶苏、鸡苏、臭苏、大紫苏、假紫苏、水升麻、野藿麻、聋耳麻、孜珠、兴帕夏噶(藏语)等，是唇形科紫苏属下唯一种，一年生草本植物。紫苏叶也叫苏叶，有解表散寒、行气和胃的功能，主治风寒感冒、咳嗽、胸腹胀满，恶心呕吐等症。食疗作用，具有散寒解表，宣肺止咳，理气和中，安胎，解毒。文献报道紫苏具有解热作用，抑菌作用，升血糖作用，对血凝的作用，促进肠蠕动，镇静作用等。但至今没有报道紫苏叶及其提取物具有抑制次黄嘌呤氧化酶活性和体内降尿酸活性及其应用。槐米或槐花广义是为豆科植物槐(SophorajaponicaL.)的干燥花蕾及花。夏季花未开放时采收其花蕾，称为“槐米”；花开放时采收，称为“槐花”。槐米主产于河南、山东、山西、陕西、安徽、河北、江苏等地，近年来宁夏、甘肃等地也已有规模，越南也有大面积的栽种。性微寒，味苦；凉血止血，清肝泻火；用于便血、痔血、血痢、崩漏、吐血、衄血、肝热目赤、头痛眩晕。槐米含芸香甙—芦丁(rutin)、三萜皂甙(0.4％)、白桦脂醇(betulin)、槐花二醇(sophoradiol)、葡萄糖、葡萄糖酸醛(glucuronicacid)，还含有槐花米甲素(14％)槐花米乙素(1.25％)和槐花米丙素(0.35％)甲素是和芸香苷不同的黄酮类化合物，乙素和丙素为甾醇类化合物。葛根(LobedKudzuvineRoot)，为豆科植物野葛的干燥根，习称野葛。秋、冬二季采挖，趁鲜切成厚片或小块；干燥。甘、辛，凉。有解肌退热，透疹，生 津止渴，升阳止泻之功。常用于表证发热，项背强痛，麻疹不透，热病口渴，阴虚消渴，热泻热痢，脾虚泄泻。葛根含异黄酮成分葛根素、葛根素木糖甙、大豆黄酮、大豆黄酮甙及β-谷甾醇、花生酸，又含多量淀粉(新鲜葛根中含量为19～20％)。薏苡仁，中药名。为禾本科植物薏苡Coixlacryma-jobiL.var.mayuen(Roman.)Stapf的干燥成熟种仁。秋季果实成熟时采割植株，晒干，打下果实，再晒干，除去外壳、黄褐色种皮和杂质，收集种仁。性凉，味甘、淡；具有健脾渗湿，除痹止泻。薏米可用于治疗水肿、脚气、小便不利。薏米含蛋白质16.2％，脂肪4.6％，糖类79.2％。高尿酸血症又称痛风(gout)，是一组嘌呤代谢紊乱所致的疾病，其临床特点为高尿酸血症。(hyperuricemia)及由此而引起的痛风性急性关节炎反复发作、痛风石沉积，痛风石性慢性关节炎和关节畸形，常累及肾脏引起慢性间质性肾炎和尿酸肾结石形成。高尿酸血症又称痛风(gout)，是一组嘌呤代谢紊乱所致的疾病，其临床特点为高尿酸血症(hyperuricemia)及由此而引起的痛风性急性关节炎反复发作、痛风石沉积，痛风石性慢性关节炎和关节畸形，常累及肾脏引起慢性间质性肾炎和尿酸肾结石形成。黄嘌呤氧化酶是人体内重要的氧化酶，主要参与核酸的代谢，能催化次黄嘌呤生成黄嘌呤，再进一步生成尿酸和自由基。它由1330个氨基酸构成，其氨基酸序列在鼠和人之间具有90％的同源性，由两个完全对称的结构单元构成。每一个结构单元为145，其催化中心包括一个钼蝶呤中心、两个铁－硫中心和一个黄素腺嘌呤二核苷酸，其中钼蝶呤中心是黄嘌呤氧化酶催化黄嘌呤生成尿酸的关键位点。有效抑制XOD活性可减少黄嘌呤向尿酸的转化，从而可治疗高尿酸血症。痛风急性发病后应尽快给予药物治疗，非甾体消炎药、秋水仙碱、糖皮质激素，是痛风性关节炎急性发作的一线治疗药物。药物的选择取决于关节疼痛的程度和受累关节部位。对于关节轻中度疼痛患者，一个或几个小关节，或1-2个大关节受累，可选非甾体消炎药、秋水仙碱或糖皮质激素。对关节重度疼痛患者， 多关节受累或1～2个大关节受累，可联合使用非甾体消炎药和秋水仙碱，或糖皮质激素和秋水仙碱治疗。对于初始治疗无效的患者可选用白介素1受体拮抗剂。抑制血尿酸合成的药物是通过抑制黄嘌呤氧化酶，阻断次黄嘌呤向黄嘌呤和尿酸转化，从而降低血尿酸浓度，减少尿酸盐在关节及其周围组织沉积，最终减少痛风的发作。代表药物为别嘌呤醇和非布司他。别嘌呤醇(allopurin01)是竞争性黄嘌呤氧化酶抑制剂，早在20世纪60年代就被批准用于治疗痛风，在临床上常作为降尿酸的首选药物。尽管临床上已经开发多种治疗高尿酸血症的药物，但这些药物均具有较大的副作用，临床应用受到一定限制；从天然植物或中药材中发现新的治疗药物具有良好的发展前景中国发明专利CN104162063报道一种治疗高尿酸血症的中药复方制剂及其制备方法，以天然中药龙胆草为主要原料；中国专利CN103372159A报道一种具有降尿酸作用的薏米仁提取物及其制备方法等。目前，国内外文献没有报道紫苏提取物具有降血尿酸活性及其含紫苏、薏米仁、葛根、槐米和玉米须的中药制剂具有降低血尿酸和治疗痛风的用途。本研究通过筛选体外黄嘌呤氧化酶抑制剂过程中发现紫苏提取物具有显著的酶抑制活性，并进一步发现其小鼠体内降尿酸的活性；中药组合物筛选过程中发现紫苏、薏米仁、葛根、槐米和玉米须的组合物具有显著的降尿酸活性，并在小鼠模型中获得验证，证明单独紫苏叶提取物或包括紫苏、薏米仁、葛根、槐米和玉米须等的组合物均能够用于临床高尿酸血症的治疗或高尿酸人群的食疗。技术实现要素：本发明的目的是提供传统中药材紫苏叶提取物及其中药组合物的新药理作用，并制备含紫苏叶提取物或含紫苏叶的中药组合物各种剂型。本发明的发明人在体外筛选黄嘌呤氧化酶抑制剂过程中发现紫苏叶提取物及其中药组合物具有显著的黄嘌呤氧化酶抑制活性，暗示其具有体内抑制血尿酸合成的功能，并进一步使用小鼠体内模型证明其体内降低血尿酸的功能。本发明采用的技术方案如下：本发明提供一种紫苏叶或紫苏叶提取物在制备降低血尿酸的药物或食品中 的应用。其中，所述食品包括普通食品、保健食品以及特殊医学用途配方食品。其中，所述紫苏叶或紫苏叶提取物应用于制备治疗或预防高尿酸血症或痛风的药物或食品。其中，所述紫苏叶提取物采用如下方法制备：以紫苏叶为原料，通过溶剂提取、浓缩与干燥，得到所述紫苏叶提取物。其中，使用的所述溶剂为水或含水乙醇，所述溶剂与紫苏叶的重量份数比均为5-50:1。优选地，所述溶剂为含水乙醇时，含水乙醇与紫苏叶的重量份数比为30-50:1；含水乙醇的体积百分含量为10％-90％；优选为20％-70％。其中，所用提取的方式为加热回流、微波或超声辅助提取。优选地，所述提取时间每次为1-4小时；优选为2小时；提取次数为1-3次，优选提取2次。本发明还提供一种含有紫苏叶提取物的组合物的应用，所述组合物由如下方法制备：将包括紫苏叶、薏米仁、槐米和葛根的原料，通过溶剂混合提取、浓缩与干燥，得到所述组合物。优选地,所述原料还包括玉米须。优选地,按照重量百分含量计，所述组合物包含紫苏叶10％～40％，薏米仁10％～50％，槐米20％～50％，葛根10％～40％，玉米须0～30％。其中，所述组合物通过将所有原料粉碎后一锅煮混合提取的方式制备或将每种原料单独提取后混合的方式制备；所用提取的方式为加热回流、微波或超声辅助提取；优选地，所述提取时间每次为1-4小时，优选为2小时；提取次数为1-3次，优选提取2次；使用的所述溶剂为水或含水乙醇，所述溶剂与原料的重量份数比均为5-50:1。更优选地，所述溶剂为含水乙醇时，含水乙醇的体积百分含量为10％-90％，优选为20-70％，所述含水乙醇与所述原料的重量份数比为30-50:1。其中，通过加入药剂学或食品中允许的辅料，将所述紫苏叶或紫苏叶提取物或含有紫苏叶提取物的组合物制成为相应的药物制剂或食品的固体饮料。其中，所述药物制剂为片剂、胶囊、口服液。本发明通过试验证明，本发明的紫苏叶提取物具有显著抑制体外黄嘌呤氧化酶活性和降低小鼠体内血尿酸的合成的药理活性；含紫苏叶提取物的中药组合物不仅具有抑制体内尿酸合成，还能够利尿并促进体内尿酸排泄功效。具体实施方式下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，均按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。如下实施例中的原料均为市售。实施例1紫苏叶提取物胶囊的制备称取紫苏叶100克，加水500ml矿泉水或去离子水，浸泡2小时，加热回流萃取2小时，取出提取液；加500ml水再同样萃取1次，合并萃取液，减压浓缩至浆状物；按照1：1比例加入微晶纤维素，混合、烘干、粉碎，加1％硬脂酸，装硬胶囊，得到实施例1的紫苏叶提取物胶囊。实施例2紫苏叶提取物胶囊的制备称取紫苏叶50克，加水1500ml矿泉水或去离子水，浸泡2小时，加热回流萃取2小时，取出提取液；加1500ml水再同样萃取1次，合并萃取液，减压浓缩至浆状物；按照1：1比例加入微晶纤维素，混合、烘干、粉碎，加1％硬脂酸，装硬胶囊，得到实施例2的紫苏叶提取物胶囊。实施例3紫苏叶提取物片剂的制备称取50克紫苏叶，加2500ml矿泉水或去离子水，浸泡2小时，加热回流萃取2小时，取出萃取液；加2500ml矿泉水或去离子水同样再提取一次，合并提取液减压浓缩至浆状物，按照1:1比例加入微晶纤维素，混合、烘干、粉碎，加崩解剂及其他辅料，混合均匀，制粒，压片，得到实施例3的紫苏叶提取物片剂。实施例4紫苏叶提取物胶囊的制备称取紫苏叶100克，加水500ml90％乙醇水溶液，浸泡2小时，加热回流萃取2小时，取出提取液；加500ml90％乙醇水溶液再萃取1次，合并萃取液，减压浓缩至浆状物；按照1：1比例加入微晶纤维素，混合、烘干、粉碎，加1％硬脂酸，装硬胶囊，得到实施例4的紫苏叶提取物胶囊。实施例5紫苏叶提取物片剂的制备称取50克紫苏叶，加1500ml90％乙醇水溶液，浸泡2小时，加热回流萃取2小时，取出萃取液；再提取一次，合并提取液减压浓缩至浆状物，按照1:1比例加入微晶纤维素，混合、烘干、粉碎，加崩解剂及其他辅料，混合均匀，制粒，压片，得到实施例5的紫苏提取物片剂。实施例6紫苏提取物片剂的制备称取50克紫苏叶，加1500ml70％乙醇水溶液，浸泡2小时，加热回流萃取2小时，取出萃取液；再提取一次，合并提取液减压浓缩至浆状物，按照1:1比例加入微晶纤维素，混合、烘干、粉碎，加崩解剂及其他辅料，混合均匀，制粒，压片，得到实施例6的紫苏叶提取物片剂。实施例7紫苏叶提取物固体饮料的制备称取50克紫苏叶，加2500ml40％乙醇水溶液，浸泡2小时，超声和微波辅助萃取2小时，取出萃取液；再提取一次，合并提取液减压浓缩至浆状物，按照1:1比例加入微晶纤维素，混合、烘干、粉碎，加其他辅料，制粒，装袋，得到实施例7的紫苏叶提取物固体饮料。实施例8紫苏叶提取物固体饮料的制备称取50克紫苏叶，加2500ml20％乙醇水溶液，浸泡2小时，超声和微波辅助萃取2小时，取出萃取液；再提取一次，合并提取液减压浓缩至浆状物，按照1:1比例加入微晶纤维素，混合、烘干、粉碎，加其他辅料，制粒，装袋，得到 实施例8的紫苏叶提取物固体饮料。实施例9紫苏叶提取物口服液的制备称取50克紫苏叶，加2500ml10％乙醇水溶液，浸泡2小时，加热回流萃取2小时，取出萃取液；再提取一次，合并提取液减压浓缩至浆状物，按照1:1比例加入微晶纤维素，混合、烘干、粉碎，加崩解剂及其他辅料，混合均匀，制成口服液，得到实施例9的紫苏叶提取物口服液。实施例10中药组合物胶囊的制备称取紫苏叶10克、薏米仁50克，槐米20，葛根10克，玉米须10克，加500ml矿泉水或去离子水，浸泡2小时，加热回流萃取2小时，取出提取液；加500ml水再同样萃取1次，合并后获得950ml萃取液，减压浓缩至浆状物；按照1：1比例加入微晶纤维素，混合、烘干、粉碎，加1％硬脂酸镁，装硬胶囊，得到实施例10的中药组合物胶囊。实施例11中药组合物片剂的制备称取紫苏叶10克、薏米仁30克，槐米20，葛根10克，玉米须30克，加1000ml20％乙醇水溶液，浸泡2小时，加热回流萃取2小时，取出提取液；加1000ml20％乙醇水溶液再同样萃取1次，合并萃取液，减压浓缩至浆状物；按照1：1比例加入微晶纤维素，混合、烘干、粉碎，加崩解剂及其他辅料，混合均匀，制粒，压片，得到实施例11的中药组合物片剂。实施例12中药组合物固体饮料1的制备称取紫苏叶40克、薏米仁10克，槐米20，葛根20克，玉米须10克，加3000ml90％乙醇水溶液，浸泡2小时，加热回流萃取2小时，取出提取液；加3000ml90％乙醇水溶液再同样萃取1次；残渣再加1500ml90％乙醇水溶液再同样萃取1次，合并萃取液，减压浓缩至浆状物；按照1：1比例加入微晶纤维素，混合、烘干、粉碎，加其他辅料，制粒，装袋，得到所述中药组合物固体饮料1。实施例13中药组合物口服液的制备称取紫苏叶20克、薏米仁10克，槐米50，葛根20克，加5000ml70％乙醇水溶液，浸泡2小时，加热回流萃取2小时，取出提取液4500ml萃取液，减压浓缩至浆状物；按照1：1比例加入微晶纤维素，混合，制成实施例13的中药组合物口服液。实施例14中药组合物固体饮料2的制备称取紫苏叶40克、薏米仁10克，槐米10，葛根40克，加水500ml90％乙醇水溶液，浸泡2小时，加热回流萃取2小时，取出提取液；加500ml90％乙醇水溶液再同样萃取1次；残渣再加500ml90％乙醇水溶液再同样萃取1次，合并后获得1350ml萃取液，减压浓缩至浆状物；按照1：1比例加入微晶纤维素，混合、烘干、粉碎，加其他辅料，制粒，装袋，制成实施例14的中药组合物固体饮料2。实施例15中药组合物固体饮料3的制备称取紫苏叶30克、薏米仁10克，槐米50，葛根10克，加水2000ml60％乙醇水溶液，浸泡2小时，加热回流萃取2小时，取出提取液；加2000ml60％乙醇水溶液再同样萃取1次；残渣再加1000ml60％乙醇水溶液再同样萃取1次，合并后获得1350ml萃取液，减压浓缩至浆状物；按照1：1比例加入微晶纤维素，混合、烘干、粉碎，加其他辅料，制粒，装袋，制成实施例15的中药组合物固体饮料3。实施例16中药组合物固体饮料4的制备称取紫苏叶10克、薏米仁50克，槐米20，葛根20克，加水500ml90％乙醇水溶液，浸泡2小时，加热回流萃取2小时，取出提取液；加500ml90％乙醇水溶液再同样萃取1次；残渣再加500ml90％乙醇水溶液再同样萃取1次，合并后获得1350ml萃取液，减压浓缩至浆状物；按照1：1比例加入微晶纤维素，混合、烘干、粉碎，加其他辅料，制粒，装袋，制成实施例16的中药组合物固体饮料4。实施例17紫苏叶提取物及中药复合物的体外抑制黄嘌呤氧化酶活性1.试剂配制配制：70mM磷酸缓冲液(pH6.5)；0.3mM黄嘌呤溶液(2.28mg黄嘌呤溶解在50ml70mM磷酸缓冲液中)；配制黄嘌呤氧化酶溶液(0.01U/ml在70mM磷酸缓冲液中)；1NHCL溶液(8.5ml浓.HCL91.5ml水中)。阳性对照药：别嘌醇其他药品：DMSO溶液受试样品：按实施例1-16制备。2.给药溶液的配制测试样品溶液:将实施例1-9的样品(含紫苏叶提取物2mg溶于1mlDMSO，配制成2mg/ml溶液。再用PBS缓冲液稀释10倍(200μg/ml),得到含紫苏叶提取物200μg/ml的溶液。实施例10-16的样品取适量样品2mg溶于1mlDMSO,配制成2mg/ml溶液,再用PBS缓冲液稀释10倍(200μg/ml),得到含中药组合物200μg/ml的溶液(口服液冷冻干燥获得固体粉末，称取2mg)。阳性对照品溶液：1mg别嘌醇溶于1mlDMSO，再用PBS缓冲液稀释180倍后，得到含别嘌醇40μmol/mL的溶液。3.步骤操作：使用96孔版进行酶反应，依次取35μl的70mM磷酸缓冲液、50μl测试样品溶液或阳性对照品溶液和30μl酶溶液加入一个反应池，阳性对照加别嘌呤溶液；酶反应化合物在37℃孵育15分钟，在加入60μl黄嘌呤底物溶液，在25℃下反应30分钟，加入25μl1NHCL终止反应。在Bio-Tek酶标仪读取295nm下各个反应池中溶液的吸光度数据。计算各个样品的抑制率。按照公式计算提取物样品对XOD的抑制率。抑制率(％)＝[(E标准品-E样品)]/E标准品×100％4.测定结果：表1紫苏叶提取物及中药组合物对黄嘌呤氧化酶体外活性抑制活性(酶标法)样品重量：2mg抑制率(％)别嘌呤(阳性对照)95实施例1的紫苏叶胶囊65实施例2的紫苏叶胶囊60实施例3的紫苏叶片剂61实施例4的紫苏叶胶囊62实施例5的紫苏叶片剂62实施例6的紫苏叶片剂58实施例7的紫苏叶固体饮料65实施例8的紫苏叶固体饮料64实施例9的紫苏叶口服液62实施例10的中药组合物胶囊75实施例11的中药组合物片剂78实施例12的中药组合物固体饮料177实施例13的中药组合物口服液68实施例14的中药组合物固体饮料275实施例15的中药组合物固体饮料378实施例16的中药组合物固体饮料471结果表明，紫苏叶及中药组合物各种提取方法制备提取物及各种剂型均表现出较强的黄嘌呤氧化酶抑制活性，比临床化药别嘌呤稍低。实施例18抑制尿酸合成动物模型1、实验动物ICR,雄性，体重22g左右。由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供，动物生产许可证号：SCXK(沪)2013-0016。2、测试样品实施例1-16阳性对照药：别嘌醇3、仪器及试剂全自动生化分析仪ZY-260,科华4、给药溶液的配制测试样品溶液:将实施例1-9的样品配制成含紫苏叶提取物75mg/ml0.5％纤维素钠溶液；将实施例10-16中药组合物配制成含75mg/ml中药组合物制剂的0.5％纤维素钠溶液阳性对照品溶液：别嘌醇12.5mg/ml的0.5％纤维素钠溶液5、实验方法：小鼠分为模型组，阳性药别嘌醇(50mg/kg)组，以上样品组。每个小鼠腹腔注射次黄嘌呤1000mg/kg(0.2ml/10g)，正常组注射水；模型组灌胃等容积蒸馏水，其他样品组给予相应测试样品药液和阳性对照品溶液，给药体积均为0.2ml/10g，各组灌胃1次/d，连续5d。6、血清尿酸测定小鼠禁食不禁水16小时，末次给药30min后，各组腹腔注射HX(Hypoxanthlne，次黄嘌呤)的水混悬液(600mg/kg)，注射体积均为0.2mL/10g。注射HX45min后摘眼球取血0.5mL，放置30分钟，5000rpm),离心5min，分离血清，采用全自动生化分析仪及其原装配套试剂测定血清尿酸浓度。表2紫苏叶提取物对ipHX(腹腔注射次黄嘌呤)致高尿酸血症小鼠模型血清UA(尿酸)的影响##p＜0.01vs正常组，*p＜0.05，**p＜0.01vs模型组。结果表明，紫苏叶及中药组合物的各种提取方法制备提取物及各种剂型均表现出较强的小鼠体内降低血尿酸活性，与模型均具有显著性差异，比阳性药活性弱。实施例19利尿动物模型实验动物ICR,雄性，体重22g左右。由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供，动物生产许可证号：SCXK(沪)2013-0016。2、测试样品实施例1-16阳性对照药：苯溴马隆3、仪器及试剂全自动生化分析仪ZY-260,科华4、给药溶液的配制测试样品溶液:将实施例1-9的样品配制成含紫苏叶提取物75mg/ml0.5％羧甲基纤维素钠溶液；将实施例10-16中药组合物配制成含75mg/ml中药组合物制剂的0.5％羧甲基纤维素钠溶液阳性对照品溶液：苯溴马隆2.5mg/ml的0.5％羧甲基纤维素钠溶液5、实验方法：小鼠分为正常组、模型组，阳性药苯溴马隆(50mg/kg)组，测试样品组。模型组、阳性药组及测试样品组每个小鼠腹腔注射尿酸250mg/kg(0.2ml/10g)，正常注射同体积的0.5％羧甲基纤维素钠溶液；模型组灌胃等容积0.5％纤维素钠溶液，阳性药组罐胃苯溴马隆，其他样品组给予相应测试样品药液和阳性对照品溶液，给药体积均为0.2ml/10g，各组灌胃1次/d，连续5d。6、血清尿酸测定小鼠禁食不禁水16小时，末次给药30min后，各组腹腔注射尿酸的0.5％羧甲基纤维素钠混悬液(250mg/kg)，注射体积均为0.2mL/10g。注射尿酸60min后摘眼球取血0.5mL，放置30分钟，5000rpm),离心5min，分离血清，采用全自动生化分析仪及其原装配套试剂测定血清尿酸浓度。表3紫苏叶提取物及中药组合物对腹腔注射尿酸致高尿酸血症小鼠模型血清UA(尿酸)的影响##p＜0.01vs正常组，*p＜0.05，**p＜0.01vs模型组。结果表明，紫苏叶及中药组合物的各种提取方法制备提取物及各种剂型均表现出较强的小鼠体内利尿生物活性，与模型组相比均具有显著性差异，比阳性药活性相当；而且中药组合物实施例较之紫苏叶实施例表现地更为优异。当前第1页1 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