一种解热抗炎的中药组合物及其制备方法与流程

文档序号:11789778阅读:554来源:国知局

本发明涉及治疗感冒的中药组合物,具体涉及一种解热抗炎的中药组合物及其制备方法。



背景技术:

风热感冒是风热之邪犯表、肺气失和所致。症状表现为发热重、微恶风、头胀痛、有汗、咽喉红肿疼痛、咳嗽、痰黏或黄、鼻塞黄涕、口渴喜饮、舌尖边红、苔薄白微黄。风热感冒多见于夏秋季,外感风热所致。中医认为,风热感冒是感受风热之邪所致的表证。证候:发热无汗,或有汗不畅,微恶风寒,头痛口渴,咳嗽咽痛,舌尖红,苔薄白或薄黄,脉浮数。治则:风热感冒的治疗,主要以辛凉透表,清热解毒为主。

复方金钱草清热颗粒收载于国家食品药品监督管理局国家药品标准,标准编号为WS-5582(B-0582)-2014Z,其公开的复方金钱草清热颗粒公开了如下信息:

【处方】山芝麻384g 葫芦茶384g 马兰草384g 积雪草384g 狗肝菜256g 篱栏网256g 玉叶金花256g 地胆草256g 金钱草256g 布渣叶256g 甘草256g 岗梅572g

【制法】以上十二味药,先将岗梅粉碎成细粉,其余十一味加水煎煮二次,每次2小时,煎液滤过,滤液合并,浓缩至相对密度为1.17-1.20(80℃),与上述细粉和适量糊精混匀,只颗粒,干燥,制成1000g,即得。

由于十二味药材中活性成分的性质各不相同,上述制备方法采用水提法,会导致一些活性成分无法提出,或提取率低,影响药效的发挥。

因此,需要提供一种可以提高药品的活性成分提取率,以提高药品疗效的制备方法。



技术实现要素:

本发明的目的是提供一种疗效确切的解热抗炎的中药组合物。

本发明提供的一种解热抗炎的中药组合物,其活性成分的制备方法包括以下步骤:

(1)称取以下重量份药材:山芝麻350-400份、葫芦茶350-400份、马兰草350-400份、积雪草350-400份、狗肝菜230-300份、篱栏网230-300份、玉叶金花230-300份、地胆草230-300份、金钱草230-300份、布渣叶230-300份、甘草230-300份、岗梅500-700份;

(2)取金钱草,加40-60%乙醇提取,过滤,滤液回收乙醇,得金钱草提取液,用已预处理的NKA-9型大孔树脂吸附,用50-80%乙醇洗脱,收集洗脱液,减压浓缩得金钱草浓缩液;

(3)取葫芦茶,加30-60%丙酮提取,过滤,滤液回收丙酮,得葫芦茶提取液,用已预处理的D101大孔树脂吸附,20-50%乙醇进行洗脱,收集洗脱液,减压浓缩得葫芦茶浓缩液;

(4)取积雪草,加60-80%乙醇提取,过滤,滤液回收乙醇,得积雪草提取液,加3-5倍水,冷藏过夜,离心,取上清液,用2mol/L的盐酸调节pH值,冷藏过夜,离心,取上清液,用已预处理的HPD-100大孔树脂吸附,用40-60%乙醇洗脱,收集洗脱液,减压浓缩得积雪草浓缩液;

(5)取山芝麻、狗肝菜、篱栏网、玉叶金花、甘草,加水浸泡后,加热提取,过滤,滤液浓缩,得水提浓缩液;

(6)取马兰草、积雪草、地胆草、布渣叶,加50-70%乙醇浸泡,超声提取,过滤,回收乙醇,得醇提浓缩液;

(7)取岗梅,用超微粉碎机粉碎成最细粉;与步骤2)、3)4)、5)、6)所得浓缩液混合均匀,即得。

上面所述制备解热抗炎中药组合物步骤中:

所述步骤1)组合物优选为:山芝麻384份、葫芦茶384份、马兰草384份、积雪草384份、狗肝菜256份、篱栏网256份、玉叶金花256份、地胆草256份、金钱草256份、布渣叶256份、甘草256份、岗梅572份。

所述步骤2)金钱草浓缩液制备方法优选为:取金钱草,加40-60%乙醇提取,乙醇用量为药材重量份的6-10倍,加热提取2-3次,每次1-3小时,过滤,滤液浓缩至生药浓度为0.5g/ml,得金钱草提取浓缩液,用已预处理的NKA-9型大孔树脂吸附,树脂柱柱径高比为1:9-1:15,上样速度为1-3BV/h,50-80%乙醇洗脱,洗脱速度2-3BV/h,收集洗脱液3-5BV,洗脱液减压浓缩,得金钱草浓缩液。

所述步骤2)金钱草浓缩液制备方法进一步优选为:取金钱草,加50%乙醇提取,乙醇用量为药材重量份的8倍,加热提取2次,每次2小时,过滤,滤液浓缩至生药浓度为0.5g/ml,得金钱草提取浓缩液,用已预处理的NKA-9型大孔树脂吸附,树脂柱柱径高比为1:12,上样速度为2BV/h,70%乙醇洗脱,洗脱速度2BV/h,收集洗脱液4BV,洗脱液减压浓缩,得金钱草浓缩液;

所述步骤3)葫芦茶浓缩液制备方法优选为:取葫芦茶,加30-60%丙酮提取,丙酮用量为药材重量份的6-10倍,30℃提取1-3次,每次2-5小时,过滤,回收丙酮,滤液浓缩至生药浓度为0.5g/ml,得葫芦茶提取浓缩液,用已预处理的D101大孔树脂吸附,树脂柱柱径高比为1:8-1:12,上样速度2-4BV/h,20-50%乙醇进行洗脱,洗脱速度1-3BV/h,收集洗脱液4-8BV,洗脱液减压浓缩,得葫芦茶浓缩液。

所述步骤3)葫芦茶浓缩液制备方法进一步优选为:取葫芦茶,加50%丙酮提取,丙酮用量为药材重量份的8倍,30℃提取2次,每次4小时,过滤,回收丙酮,滤液浓缩至生药浓度为0.5g/ml,得葫芦茶提取浓缩液,用已预处理的D101大孔树脂吸附,树脂柱柱径高比为1:10,上样速度3BV/h,30%乙醇进行洗脱,洗脱速度2BV/h,收集洗脱液6BV,洗脱液减压浓缩,得葫芦茶浓缩液。

所述步骤4)积雪草浓缩液制备方法优选为:取积雪草,加60-80%乙醇提取,乙醇用量为药材重量份的8-12倍,加热提取2-4次,每次2-4小时,过滤,回收乙醇,滤液浓缩至生药浓度为1.0g/ml,得积雪草提取浓缩液,加3-5倍水,边加边搅拌,冷藏过夜,离心,取上清液,用2mol/L的盐酸调节pH值至2.0,4℃冷藏过夜,离心,取上清液,用已预处理的HPD-100大孔树脂吸附,树脂柱柱径高比为1:8-1:12,上样速度为0.5-1.0BV/h,先用2BV水洗脱,再用40-60%乙醇洗脱,洗脱速度1-2BV/h,收集乙醇洗脱液6-10BV,洗脱液减压浓缩,得积雪草浓缩液。

所述步骤4)积雪草浓缩液制备方法进一步优选为:取积雪草,加70%乙醇提取,乙醇用量为药材重量份的10倍,加热提取3次,每次3小时,过滤,回收乙醇,滤液浓缩至生药浓度为1.0g/ml,得积雪草提取浓缩液,加4倍水,边加边搅拌,冷藏过夜,离心,取上清液,用2mol/L的盐酸调节pH值至2.0,4℃冷藏过夜,离心,取上清液,用已预处理的HPD-100大孔树脂吸附,树脂柱柱径高比为1:10,上样速度为0.5BV/h,先用2BV水洗脱,再用50%乙醇洗脱,洗脱速度1BV/h,收集乙醇洗脱液8BV,洗脱液减压浓缩,得积雪草浓缩液。

所述步骤5)浓缩液制备方法优选为:取山芝麻、狗肝菜、篱栏网、玉叶金花、甘草,加入药材重量份8-20倍纯化水浸泡1-2h后,超声提取2-3次,超声功率为150-200W,时间30-90min,温度80-100℃,过滤,合并滤液,浓缩,得水提浓缩液。

所述步骤5)浓缩液制备方法进一步优选为:取山芝麻、狗肝菜、篱栏网、玉叶金花、甘草,加入药材重量份15倍纯化水浸泡1h后,超声提取3次,超声功率为150W,时间60min,温度90℃,过滤,合并滤液,浓缩,得水提浓缩液。

所述步骤6)浓缩液制备方法优选为:取马兰草、地胆草、布渣叶,加入药材重量份10-20倍50-70%乙醇,浸泡30-60min后,超声提取2-3次,超声功率为150-200W,时间30-60min,温度60-80℃,过滤,合并滤液,回收乙醇,得醇提浓缩液。

所述步骤5)浓缩液制备方法进一步优选为:取马兰草、地胆草、布渣叶,加入药材重量份12倍60%乙醇,浸泡40min后,超声提取2次,超声功率为150W,时间45min,温度60℃,过滤,合并滤液,回收乙醇,得醇提浓缩液。

本发明还提供了含上述中药组合物的制剂,该制剂由中药组合物单独制成或由中药组合物和药学上可接受的载体组成。

所述制剂为固体制剂或液体制剂,固体制剂为片剂、胶囊剂或颗粒剂;液体制剂为合剂或口服液。

所述药学上可接受的载体为乳糖、淀粉、糊精、甘露醇、蔗糖、羟丙甲基纤维素、交联羧甲基纤维素钠、低取代羟丙基纤维素、微晶纤维素、微粉硅胶、预胶化淀粉、山梨醇、硬脂酸镁、滑石粉、羟丙甲基纤维素、低取代羟丙基纤维素、苯甲酸钠、山梨酸钾、蔗糖或阿斯巴甜中、味精、蜂蜜、甜橙香精的一种或几种。

本发明中药组合物制剂的制备方法,该方法可以采用常规制剂工艺制备为各种常见剂型。

本发明还提供了上述中药组合物或制剂在制备解热抗炎时提高治疗效果的应用。

本发明所公开的中药组合物有效成分是由山芝麻、葫芦茶、马兰草、积雪草、狗肝菜、篱栏网、玉叶金花、地胆草、金钱草、布渣叶、甘草、岗梅、山芝麻、甘草等原料制备而成。发明人在多年的制剂研究过程中发现,相同的药物用量,不同提取工艺制备所得的活性成分,其药理作用也会存在较大的差异和侧重点,为此,申请人对本发明的中药组合物结合药理实验进行了一系列的工艺研究,总结出本发明的提取工艺方法,并且经实验验证这样的改进带来了药效增效:所得的中药组合物用于治疗风热感冒时,其解热、抗炎、增强免疫作用远远优于相同处方的现有提取技术,临床疗效显示,本发明的提取物与现有技术相比,解热、抗炎、增强免疫疗效有显著差异,具有显著性进步。

由于每味中药材均含有诸多的活性成分,至少尚未有任何一味中药被完完全全地分析清楚所有成分,不同的中药合并在一起用不同提取方式提取时,由于溶剂、温度及不同成分之间的相互影响和作用,会产生极为复杂的化学反应。按现有技术对某味药材仅检测其中一、两味有效成分是极其片面的,部分有效成分的变化指标无法真正判断复方中成药的疗效变化。因此,目前通过药效实验来对比不同提取方式在某个治疗用途方面的优劣,是最能体现出提取方式合理与否的方法。

我们通过动物实验对比不同提取方式治疗咳嗽、哮喘、发热、炎症的疗效。

发明人对本发明的各个药材的提取方法与药物优效进行了大量系统性的研究实验,通过把药材拆分为多组,用不同的方法提取,最后得到了本发明的提取技术方案,使相同配方的药材,发挥出治疗目的更明确、疗效更显著的作用。

本发明提供的一种解热抗炎的中药组合物具有以下优点:

1、本发明中药组合物治疗发热、炎症、咳嗽、哮喘作用明显,具有解热、抗炎、增强免疫等作用,对风热感冒具有良好的治疗及改善作用。

2、本发明与对比例比较,存在显著性差异(P<0.05)。药效试验结果表明,本发明提供的中药组合物解热、抗炎、增强免疫作用优于现有技术。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明,但不用来限制本发明的范围。

如无特殊说明,本发明中的乙醇浓度均为体积百分比。

实施例1:

(1)称取以下重量份药材:山芝麻384份、葫芦茶384份、马兰草384份、积雪草384份、狗肝菜256份、篱栏网256份、玉叶金花256份、地胆草256份、金钱草256份、布渣叶256份、甘草256份、岗梅572份;

(2)取金钱草,加50%乙醇提取,乙醇用量为药材重量份的8倍,加热提取2次,每次2小时,过滤,滤液浓缩至生药浓度为0.5g/ml,得金钱草提取浓缩液,用已预处理的NKA-9型大孔树脂吸附,树脂柱柱径高比为1:12,上样速度为2BV/h,70%乙醇洗脱,洗脱速度2BV/h,收集洗脱液4BV,洗脱液减压浓缩,得金钱草浓缩液;

(3)取葫芦茶,加50%丙酮提取,丙酮用量为药材重量份的8倍,30℃提取2次,每次4小时,过滤,回收丙酮,滤液浓缩至生药浓度为0.5g/ml,得葫芦茶提取浓缩液,用已预处理的D101大孔树脂吸附,树脂柱柱径高比为1:10,上样速度3BV/h,30%乙醇进行洗脱,洗脱速度2BV/h,收集洗脱液6BV,洗脱液减压浓缩,得葫芦茶浓缩液;

(4)取积雪草,加70%乙醇提取,乙醇用量为药材重量份的10倍,加热提取3次,每次3小时,过滤,回收乙醇,滤液浓缩至生药浓度为1.0g/ml,得积雪草提取浓缩液,加4倍水,边加边搅拌,冷藏过夜,离心,取上清液,用2mol/L的盐酸调节pH值至2.0,4℃冷藏过夜,离心,取上清液,用已预处理的HPD-100大孔树脂吸附,树脂柱柱径高比为1:10,上样速度为0.5BV/h,先用2BV水洗脱,再用50%乙醇洗脱,洗脱速度1BV/h,收集乙醇洗脱液8BV,洗脱液减压浓缩,得积雪草浓缩液;

(5)取山芝麻、狗肝菜、篱栏网、玉叶金花、甘草,加入药材重量份15倍纯化水浸泡1h后,超声提取3次,超声功率为150W,时间60min,温度90℃,过滤,合并滤液,浓缩,得水提浓缩液。

(6)取马兰草、地胆草、布渣叶,加入药材重量份12倍60%乙醇,浸泡40min后,超声提取2次,超声功率为150W,时间45min,温度60℃,过滤,合并滤液,回收乙醇,得醇提浓缩液;

(7)取岗梅,用超微粉碎机粉碎成最细粉;与步骤2)、3)、4)、5)、6)所得浓缩液混合均匀,即得。

实施例2:

(1)称取以下重量份药材:山芝麻350g、葫芦茶350g、马兰草350g、积雪草350g、狗肝菜230g、篱栏网230g、玉叶金花230g、地胆草230g、金钱草230g、布渣叶230g、甘草230g、岗梅500g;

(2)取金钱草,加40%乙醇提取,乙醇用量为药材重量份的6倍,加热提取3次,提取时间分别为2h、2h、1.5h,过滤,滤液浓缩至生药浓度为0.5g/ml,得金钱草提取浓缩液,用已预处理的NKA-9型大孔树脂吸附,树脂柱柱径高比为1:9,上样速度为1BV/h,50%乙醇洗脱,洗脱速度3BV/h,收集洗脱液5BV,洗脱液减压浓缩,得金钱草浓缩液;

(3)取葫芦茶,加30%丙酮提取,丙酮用量为药材重量份的6倍,30℃提取3次,提取时间分别为5h、4h、3h,过滤,回收丙酮,滤液浓缩至生药浓度为0.5g/ml,得葫芦茶提取浓缩液,用已预处理的D101大孔树脂吸附,树脂柱柱径高比为1:8,上样速度2BV/h,20%乙醇进行洗脱,洗脱速度1BV/h,收集洗脱液4BV,洗脱液减压浓缩,得葫芦茶浓缩液;

(4)取积雪草,加60%乙醇提取,乙醇用量为药材重量份的8倍,加热提取2次,提取时间分别为3h、2h,过滤,回收乙醇,滤液浓缩至生药浓度为1.0g/ml,得积雪草提取浓缩液,加3倍水,边加边搅拌,冷藏过夜,离心,取上清液,用2mol/L的盐酸调节pH值至2.0,4℃冷藏过夜,离心,取上清液,用已预处理的HPD-100大孔树脂吸附,树脂柱柱径高比为1:8,上样速度为1.0BV/h,先用2BV水洗脱,再用40%乙醇洗脱,洗脱速度2BV/h,收集乙醇洗脱液6BV,洗脱液减压浓缩,得积雪草浓缩液;

(5)取山芝麻、狗肝菜、篱栏网、玉叶金花、甘草,加入药材重量份8倍纯化水浸泡2h后,超声提取2次,超声功率为150W,时间30min,温度80℃,过滤,合并滤液,浓缩,得水提浓缩液。

(6)取马兰草、地胆草、布渣叶,加入药材重量份10倍50%乙醇,浸泡30min后,超声提取3次,超声功率为150W,时间30min,温度70℃,过滤,合并滤液,回收乙醇,得醇提浓缩液;

(7)取岗梅,用超微粉碎机粉碎成最细粉;与步骤2)、3)、4)、5)、6)所得浓缩液混合均匀,即得。

实施例3:

(1)称取以下重量份药材:山芝麻400份、葫芦茶400份、马兰草400份、积雪草400份、狗肝菜300份、篱栏网300份、玉叶金花300份、300份、金钱草300份、布渣叶300份、甘草300份、岗梅700份;

(2)取金钱草,加60%乙醇提取,乙醇用量为药材重量份的10倍,加热提取2次,提取时间分别为2h、1.5h,过滤,滤液浓缩至生药浓度为0.5g/ml,得金钱草提取浓缩液,用已预处理的NKA-9型大孔树脂吸附,树脂柱柱径高比为1:15,上样速度为3BV/h,80%乙醇洗脱,洗脱速度2BV/h,收集洗脱液3BV,洗脱液减压浓缩,得金钱草浓缩液;

(3)取葫芦茶,加60%丙酮提取,丙酮用量为药材重量份的10倍,30℃提取1次,提取时间为4h,过滤,回收丙酮,滤液浓缩至生药浓度为0.5g/ml,得葫芦茶提取浓缩液,用已预处理的D101大孔树脂吸附,树脂柱柱径高比为1:12,上样速度4BV/h,50%乙醇进行洗脱,洗脱速度3BV/h,收集洗脱液8BV,洗脱液减压浓缩,得葫芦茶浓缩液;

(4)取积雪草,加80%乙醇提取,乙醇用量为药材重量份的12倍,加热提取4次,提取时间分别为3h、3h、2h、2h,过滤,回收乙醇,滤液浓缩至生药浓度为1.0g/ml,得积雪草提取浓缩液,加5倍水,边加边搅拌,冷藏过夜,离心,取上清液,用2mol/L的盐酸调节pH值至2.0,4℃冷藏过夜,离心,取上清液,用已预处理的HPD-100大孔树脂吸附,树脂柱柱径高比为1:12,上样速度为0.5BV/h,先用2BV水洗脱,再用60%乙醇洗脱,洗脱速度2BV/h,收集乙醇洗脱液10BV,洗脱液减压浓缩,得积雪草浓缩液;

(5)取山芝麻、狗肝菜、篱栏网、玉叶金花、甘草,加入药材重量份20倍纯化水浸泡1h后,超声提取3次,超声功率为200W,时间90min,温度100℃,过滤,合并滤液,浓缩,得水提浓缩液。

(6)取马兰草、地胆草、布渣叶,加入药材重量份20倍70%乙醇,浸泡60min后,超声提取2次,超声功率为200W,时间60min,温度80℃,过滤,合并滤液,回收乙醇,得醇提浓缩液;

(7)取岗梅,用超微粉碎机粉碎成最细粉;与步骤2)、3)、4)、5)、6)所得浓缩液混合均匀,即得。

对比例1:

参考复方金钱草清热颗粒国家食品药品监督管理局国家药品标准,标准编号为WS-5582(B-0582)-2014Z,其公开的复方金钱草清热颗粒提取及制备方法,具体如下:

以上十二味药,岗梅粉碎成细粉;其余山芝麻等十一味加水煎煮二次,每次2小时,煎液滤过,滤液合并,浓缩至相对密度为1.17-1.20(80℃),与上述细粉和适量糊精混匀,只颗粒,干燥,制成1000g,即得。

对比例2:全水提

(1)称取以下重量份药材:山芝麻350g、葫芦茶350g、马兰草350g、积雪草350g、狗肝菜230g、篱栏网230g、玉叶金花230g、地胆草230g、金钱草230g、布渣叶230g、甘草230g、岗梅500g;

(2)加入药材总重量12倍的纯化水,浸泡0.5h后,加热,提取3次,提取时间分别1.5h、1h、1h,过滤,滤液浓缩至生药浓度为1.5g/ml,得水提浓缩液。

对比例3:全醇提

(1)称取以下重量份药材:山芝麻350g、葫芦茶350g、马兰草350g、积雪草350g、狗肝菜230g、篱栏网230g、玉叶金花230g、地胆草230g、金钱草230g、布渣叶230g、甘草230g、岗梅500g;

(2)加入药材总重量12倍的60%乙醇,浸泡40min后,加热提取2次,时间分别为2h、1.5h,温度60℃,过滤,滤液回收乙醇至浓度为以生药量计1~2mg/mL,得醇提浓缩液。

风热感冒药效实验

1.实验材料

1.1药物与试剂

本发明实施例1-3、对比例1-3分别制成干膏粉(临用前用0.5%CMC-Na研磨配制成所需浓度的均匀混悬液,1g干膏粉相当于5.04g生药);抗病毒颗粒(四川光大制药有限公司,批号:150306规格:12g/袋,成人用量:72g/d);阿司匹林肠溶片(南京白敬宇制药有限责任公司,批号:141112,规格:25mg/片);氨茶碱(南京白敬宇制药有限责任公司,批号:150607,规格:100mg/片);磷酸可待因(青海制药厂有限公司,批号:141205,规格:15mg/片);云芝胞内糖肽胶囊(南京老山药业股份有限公司,批号:150603,规格:500mg/粒);磷酸组胺(上海丽珠东风生物技术有限公司,批号:140709,规格:5g/瓶);氯化乙酰胆碱(上海试剂三厂,批号:140509,规格:250g/瓶);2,4-二硝基苯酚(上海试剂三厂,批号:150805,规格:25g/瓶);羧甲基纤维素钠(CMC-NA,国药集团化学试剂有限公司,批号:140703,规格:500g/瓶)。

1.2仪器

T6紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司);8mm打孔器(江苏麾村医教仪器厂);WM-2型无油气体压缩机(天津医疗器械二厂)。

1.3试验动物

SPF小鼠,18-22g,雌雄各半,购自广西医科大学实验动物中心;豚鼠,180-200g,雌雄各半,购自广西医科大学实验动物中心;兔,体重1.8-2.2kg,雌雄各半,普通级,购自广西医科大学实验动物中心。

2.方法与结果

2.1对氨水所致小鼠咳嗽的影响

取SPF小鼠90只,按体重随机分为9组,每组10只,雌雄各半。实施例1-3、对比例1-3组给药剂量10.4g生药/kg(0.52g/ml);阳性对照组1给予可待因12mg/kg(0.6mg/ml);阳性对照组2给予抗病毒颗粒14.4g/kg(0.72g/ml);模型对照组给予等体积的0.5%CMC-Na溶液。给药容积均为0.4ml/20g。各组小鼠每日灌胃给药1次,连续5天,于末次给药后30min将小鼠置于500ml玻璃钟罩内,通过气体压缩机连接玻璃喷雾头,以400mmHg(1mmHg=133.2Pa)恒压将氨水(25%-28%氢氧化铵)均匀的喷入钟罩内,喷雾5s,观察和记录各组小鼠咳嗽潜伏期和2min内咳嗽次数。将结果进行组间t检验,结果见表1。

表1 对氨水所致小鼠咳嗽的影响(x±s,n=10)

注与模型对照组比较,**p<0.01;与抗病毒颗粒组比较△△p<0.01。

表1结果显示,阳性对照组、实施例1-3、对比例1-3对氨水所致小鼠咳嗽均有较好的治疗效果,与模型组比较潜伏期明显增长、2min内咳嗽次数明显减少,具有显著性差异(p<0.01),且实施例1-3效果优于对比例1-3。

2.2对氯化乙酰胆碱和磷酸组胺引起的豚鼠哮喘的影响

取幼年豚鼠,放入玻璃钟罩(容积约为4L)内,通过气体压缩机连接玻璃喷雾头,以400mmHg的压力喷入2%氯化乙酰胆碱和0.1%磷酸组胺等容积混合液15s,观察豚鼠的引喘潜伏期(即从喷雾开始到哮喘发作、呼吸极度困难,直至抽搐跌倒的时间)。一般观察6min,不跌倒者引喘潜伏期以360s计算。取引喘潜伏期不超过120s的豚鼠72只,按引喘潜伏期随机分为9组,每组8只,雌雄各半。实施例1-3、对比例1-3组给药剂量3.4g/kg(0.68g/ml),阳性对照组1给予氨茶碱40mg/kg(8mg/ml),阳性对照组2给予抗病毒颗粒4.8g/kg(0.96g/ml),给药容积0.5ml/100g。模型对照组给予等体积的0.5%CMC-Na溶液。各组豚鼠每日灌胃给药1次,连续5天,于末次给药后30min再次测定引喘潜伏期,将测定结果进行组间t检验,结果见表2。

表2 对氯化乙酰胆碱和磷酸组胺引起的豚鼠哮喘的影响(x±s,n=8)

注:与模型对照组比较,**p<0.01

表2结果显示,阳性对照组、实施例1-3、对比例1-3对氯化乙酰胆碱和磷酸组胺引起的豚鼠哮喘均有较好的治疗效果,与模型组比较哮喘潜伏期明显增长,具有显著性差异(**p<0.01),且实施例1-3效果优于对比例1-3。

2.3对内毒素所致家兔发热的影响

取健康家兔,每日测体温2次,连续3d,使家兔适应测体温操作。实验日每小时测1次,连续3次,以3次体温平均值作为正常体温(给药前体温),选择体温范围38.6-39.5℃,且体温变动小于0.3℃的家兔72只,体重1.8-2.2kg,按体重随机分为9组,每组8只,雌雄各半。模型对照组、阿司匹林组、抗病毒颗粒组、实施例1-3组、对比例1-3组分别灌胃给予0.5%CMC-Na、阿司匹林50mg/kg(25mg/ml)、抗病毒颗粒3.6g/kg(1.8g/ml)、实施例1-3 3.2g生药/kg(1.6g/ml)、对比例1-3 3.2g生药/kg,给药容积为2ml/kg,各组动物每日给药1次,连续灌胃5天。于末次给药后30min每兔均从耳缘静脉注射大肠埃希菌内毒素40EU/kg(0.27ml/kg,148EU/ml),于内毒素攻击后1、2、3、4及6h各测体温1次,以给药前体温平均值为基数,计算各测定时间点体温的升高值(△℃),以各测定点体温变化值作组间t检验,结果见表3。

表3 对内毒素所致家兔发热的解热作用(x±s,n=8)

注:与模型对照组比较,**p<0.01,*p<0.05

表3结果显示,实施例1-3、对比例1-3均可显著抑制耳缘静脉注射内毒素后所引起的家兔体温升高(p<0.01或p<0.05),且实施例1-3效果优于对比例1-3。

2.4对小鼠特异性体液免疫试验的影响(血清溶血素法)

2.4.1给药小鼠随机分为8组,每组10只,雌雄各半,实施例1-3、对比例1-3给药剂量为10.4g生药/kg(0.52g/ml);阳性对照组给予云芝多糖(0.8g/kg),模型对照组灌以0.5%CMC-Na。每日给药1次,连续给药7次。给药体积为0.4ml/20g。

2.4.2免疫给药3天后,小鼠腹腔注射20%小鼠羊红细胞(SRBC)0.2ml/只,免疫后第4天摘眼球取血,分离血清,稀释500倍后供测定。

2.4.3溶血反应反应管内依次加入经稀释的血清1ml,5%SRBC0.5ml,10%补体1ml,置37℃水浴中保温30min,然后移至冰浴中终止反应,1500r/min离心10min,取上清液1ml加都氏试剂3ml,摇匀放置10min,于540nm波长比色读取吸光度。

2.4.4SRBC半溶血值取5%SRBC0.25ml加都氏试剂至4ml,比色读取吸光度值,即为试验中所用SRBC半数溶血时的吸光度值。

样品管半数溶血值HC50按下式计算:

HC50=样品的吸光度值/SRBC半数溶血时的吸光度值×500

对小鼠特异性体液免疫实验的影响试验结果见表4

表4对小鼠特异性体液免疫实验的影响(x±s,n=10)

注:与模型对照组比较,**p<0.01,*p<0.05。

表4结果显示,云芝多糖组、实施例1-3、对比例1-3均可显著提高SRBS半数溶血时的吸光度值(HC50),表明其可以显著增强小鼠特异性体液免疫(p<0.01或*p<0.05),且实施例1-3效果优于对比例1-3。

2.5对二硝基氟苯(DNFB)所致小鼠迟发型变态反应的影响

2.5.1DNFB溶液的配制称取DNFB50mg,将称取的药物置一干净小瓶中,将预先配制好的丙酮麻油溶液(丙酮-麻油=1:1)倒入小瓶内,盖好并用胶布封口,混匀后,用250ul的注射器通过瓶盖取用即得到新鲜配制1%DNFB5ml。

2.5.2分组及给药取90只小鼠,按体重随机分为9组,每组10只,雌雄各半,实施例1-3、对比例1-3组给药剂量为10.4g生药/kg(0.52g/ml);阳性对照组给予云芝多糖0.8g/kg(40mg/ml);模型对照组和未致敏组(正常对照组)给予0.5%CMC-Na,给药体积为0.4ml/20g,1次/d,连续给药7次。

2.5.3致敏给药后2天,除未致敏组外,每鼠腹部去毛,范围约(3×3)cm2大小,并将1%DNFB溶液0.05ml涂抹于上。

2.5.4迟发型变态反应的产生与测定致敏后第5天,将1%的DNFB溶液10ul均匀涂抹于小鼠右耳(两面)进行攻击,未致敏组同样涂耳。攻击后24h,颈椎脱臼处死小鼠,用打孔器取下直径8mm的耳片,称重,左右耳片重量之差为肿胀度。结果见表5。

表5对DNFB诱发的小鼠迟发型变态反应的影响(x±s,n=10)

注:与模型对照组比较,**p<0.01,*p<0.05。

表5结果显示,阳性对照组、实施例1-3、对比例1-3能显著提高DNFB所致迟发型变态反应小鼠的耳廓肿胀度(p<0.01或*p<0.05),具有增强小鼠特异性细胞免疫的作用,且实施例1-3效果优于对比例1-3。

虽然,上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验,对本发明作了详尽的描述,但在本发明基础上,可以对之作一些修改或改进,这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此,在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进,均属于本发明要求保护的范围。

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