一种熟三七及其制备方法与流程

本发明属于中药领域，具体涉及一种熟三七及其制备方法。

背景技术：

三七，别名：假人参、人参三七、田三七、山漆、三七参，拉丁学名：Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen，为五加科人参属多年生草本植物，根状茎短，肉质根圆柱形，分布于云南、广西、江西、四川等地。三七主要富含皂苷、黄酮、蛋白氨基酸及非蛋白氨基酸、多糖、蛋白、甾醇、无机物、挥发油和油脂等成分。三七的主要有效成分为三七皂苷，迄今为止，已从三七不同部位分离得到60余种单体皂苷成分，这些单体皂苷成分大多数为达玛烷的20(S)-原人参二醇型[20(S)-protopanaxadio1]和20(S)-原人参三醇型[20(S)-peotopanaxatrio1]，但未发现含有齐墩果酸型皂苷。这与同属植物人参和西洋参有着显著区别。

根据炮制方法的不同，三七饮片分生三七、熟三七。生三七经高温炮制后其固有皂苷的糖苷键发生裂解反应、侧链脱水反应以及C-20的构型改变而生成新的皂苷，即三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Rb₁ 3种单体皂苷的含量逐渐降低，新生成的人参皂苷20(S)-Rh₁、人参皂苷20(R)-Rh₁、人参皂苷Rd、人参皂苷Rk₃、人参皂苷Rh₄、人参皂苷20(S)-Rg₃、人参皂苷20(R)-Rg₃、人参皂苷Rk₁、人参皂苷Rg₅的含量逐步增加。此消彼长的程度受三七的含水量以及炮制温度、和时间相关，转化生成的低 极性皂苷的百分含量在零至100％之间变化，这造就了从生三七至完全成熟的众多不同成熟度的熟三七产品，这些成熟度不同的熟三七因为物质基础不同而具有不同的功效。三七自古就有“生消熟补”之说，生三七具有散淤止血，消肿定痛功效，主要用于咯血，吐血，便血，崩漏，外伤出血，胸腹刺疼，跌扑肿痛。熟三七长于滋补，三七经过炮制可以缓和三七的止血特性，增强三七补血、补气的疗效，具有抗炎、抗衰老、抗肿瘤，提高机体免疫的功能，成熟度越高补益作用越强。

在影响熟三七成熟度的众多因素中，三七的含水量以及炮制的温度和时间是决定熟三七成熟度的三大关键因素，直接决定着熟三七中皂苷种类和含量的变化。随着加水量增加、温度升高和时间延长，生三七中的固有皂苷如三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Rb₁将被持续裂解转化而逐渐降低，从生三七重量百分含量5％以上逐步降至接近零的极低水平，而裂解转化生成的低极性皂苷人参皂苷20(S)-Rh₁、人参皂苷20(R)-Rh₁、人参皂苷Rd、人参皂苷Rk₃、人参皂苷Rh₄、人参皂苷20(S)-Rg₃、人参皂苷20(R)-Rg₃、人参皂苷Rk₁、人参皂苷Rg₅则逐步增多，从生三七中几乎为零的极低值持续增长到熟三七重量的5％以上。由此可见不同的加水量、蒸制温度和时间组合制备的熟三七是内在质量不同的产品，精确控制蒸煮工艺的技术参数是获得具有特定低极性皂苷种类和含量的熟三七的必要条件。低极性人参皂苷Rg₃已经作为1类新药批准上市，该产品适用于肿瘤的治疗，具有显著的抑制肿瘤细胞增殖作用。而人参皂苷Rh₁、人参皂苷Rh₄，人参皂苷Rk₃，人参皂苷Rg₃，人参皂苷Rg₅，人参皂苷Rk₁等亦已 被证明具有提高人体免疫功能和抗肿瘤活性，这些低极性皂苷的种类和含量的不同决定了熟三七疗效的差异。

三七的传统炮制方法为净制、烘烤或晾晒、润切制或粉碎，制成生三七、生三七片和生三七粉。现有技术中的熟三七也是通过蒸制得到，例如中国专利CN200910113914.8公开了一种三七加工方法及其产品，其特征在于取三七的根及根茎，先加工成生三七、或润透的三七；或生三七片、润透的三七片；或三七粉；再置流通蒸汽锅内高温106～125℃、高压0.03～0.14MPa蒸制1～15小时，至内外呈棕褐色，取出，干燥，即得。采用该工艺制备的熟三七，其中三七总皂苷从基本未转化至转化完全均有可能，即在其不同工艺条件范围内炮制成的成熟度不同的熟三七，其内在质量具有本质的差异，而且从该专利的说明书附图的HPLC色谱图中根本看不到转化生成的低极性皂苷人参皂苷20(S)-Rh₁、人参皂苷20(R)-Rh₁、人参皂苷Rd、人参皂苷Rk₃、人参皂苷Rh₄、人参皂苷20(S)-Rg₃、人参皂苷20(R)-Rg₃、人参皂苷Rk₁、人参皂苷Rg₅的色谱峰。而申请号为201510023537.4的发明专利公开了一种熟三七及其制备方法和用途，该熟三七基于重量百分比，含有三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Rb₁三者的总量不得少于5.0％，其中三七皂苷R₁的含量不得少于0.4％，人参皂苷Rg₁的含量不得少于2.0％，人参皂苷Rb₁的含量不得少于1.5％；含有人参皂苷Rh₄、人参皂苷20(S)-Rg₃、人参皂苷20(R)-Rg₃三者的总量不得少于0.5％，其中人参皂苷Rh₄含量不得少于0.3％，人参皂苷20(S)-Rg₃含量不少于0.06％，人参皂苷20(R)-Rg₃含量不少于0.03％。该专利公开的是一种转化程度非常低的熟三七。中华人民共和国药典2015版一部规定生三七中三七皂苷 R₁、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Rb₁的总含量不得少于5.0％，即按照该发明专利公开的制备工艺制备的熟三七仍然符合生三七的药典标准，其中的三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Rb₁基本未转化，而转化生成的低极性皂苷含量非常低，其皂苷成分的组成比例与本专利完全不一致，说明上述专利与本专利无关。

技术实现要素：

本发明的目的之一是提供一种熟三七，尤其是提供一种消补基本平衡的具有特定皂苷组成的熟三七。

本发明的目的之一是提供一种熟三七的新炮制工艺。

本发明提供的熟三七，具有以下技术特征：即基于其重量百分比计，该熟三七含有总皂苷为6.0-12.0％，其中转化生成的9种低级性皂苷的含量之和占熟三七总皂苷的40-90％，优选50-80％。三七固有皂苷包括三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Rb₁，三者总含量小于5.0％，各单体皂苷含量依次小于0.01-0.5％、0.2-2.0％和0.3-3.0％；转化生成的九个低极性皂苷人参皂苷20(S)-Rh₁、人参皂苷20(R)-Rh₁、人参皂苷Rd、人参皂苷Rk₃、人参皂苷Rh₄、人参皂苷20(S)-Rg₃、人参皂苷20(R)-Rg₃、人参皂苷Rk₁、人参皂苷Rg₅的含量依次为0.3-1.5％、0.1-1.0％、0.05-1.0％、0.2-1.5％、0.5-3.0％、0.1-1.0％、0.05-0.5％、0.1-1.0％、0.5-3.0％。

本发明提供的熟三七的制备方法如下：

1)清洗：取三七干品，用水进行预洗，洗去附着在三七表面的泥土，加三七干品重量0.5～2倍量的饮用水浸泡至水吸干，再用饮用水对三七进行 精洗，彻底洗除三七表面的泥土和杂质，得润三七；或取三七鲜品，用饮用水彻底清洗除去三七表面的泥土和杂质，得润三七；

2)预处理：取润三七，干燥，粉碎，得生三七粉，加入生三七粉重量0.5-2倍重量的饮用水，浸润至透心，得润三七粉；或取润三七，切制成1-3毫米的片，得润三七片；

3)蒸制：取润三七、润三七片或润三七粉，平铺于料盘中，厚度为1-5厘米，置压力锅中，于116-125℃蒸制1-4小时；

4)干燥：于50-105℃干燥2-24小时，得熟三七、熟三七片或熟三七粉；

5)粉碎：粉碎，得熟三七粉；或粉碎，气流粉碎，得熟三七超细粉。

步骤1)中所述的三七干品或鲜三七原料为五加科人参属植物三七的主根、支根、根茎中的一种或几种，优选三七根茎；步骤3)中润三七、润三七片或润三七粉的蒸制条件优选为温度118-122℃，时间2-3小时；步骤4)所述的干燥方法为常压干燥或真空干燥。

本发明通过加水量、炮制温度和时间的精确控制获得了一种深度炮制的熟三七，其富含生三七中几乎不存在的具有提高免疫功能和抗肿瘤作用的低极性皂苷活性成分。

附图说明

图1为混合对照品的HPLC色谱图，其中1：三七皂苷R₁，2：人参皂苷Rg₁，3：人参皂苷Rb₁，4：人参皂苷20(S)-Rh₁，5：人参皂苷20(R)-Rh₁，6：人参皂苷Rd，7：人参皂苷Rk₃，8：人参皂苷Rh₄，9：人参皂苷 20(S)-Rg₃，10：人参皂苷20(R)-Rg₃，11：人参皂苷Rk₁，12：人参皂苷Rg₅。

图2为实施例1制备的熟三七的HPLC色谱图，其中1：三七皂苷R₁，2：人参皂苷Rg₁，3：人参皂苷Rb₁，4：人参皂苷20(S)-Rh₁，5：人参皂苷20(R)-Rh₁，6：人参皂苷Rd，7：人参皂苷Rk₃，8：人参皂苷Rh₄，9：人参皂苷20(S)-Rg₃，10：人参皂苷20(R)-Rg₃，11：人参皂苷Rk₁，12：人参皂苷Rg₅。

具体实施方式

下面结合附图给出本发明较佳实施例，以详细说明本发明的技术方案。

实施例1熟三七粉的制备

取生三七根茎(剪口)干品5kg，用饮用水清洗干净，加5kg饮用水浸泡至透心，用饮用水彻底清洗除去泥土杂质，切成1毫米的片，置压力锅中于118℃蒸制3小时，50℃减压干燥24小时，粉碎成细粉，即得熟三七粉4.56kg。HPLC法测定熟三七粉中的皂苷含量，结果三七皂苷R₁ 0.38％，人参皂苷Rg₁ 1.78％，人参皂苷Rb₁ 2.53％，人参皂苷20(S)-Rh₁0.63％，人参皂苷20(R)-Rh₁ 0.34％，人参皂苷Rd 0.56％，人参皂苷Rk₃ 0.51％，人参皂苷Rh₄ 1.58％，人参皂苷20(S)-Rg₃ 0.44％，人参皂苷20(R)-Rg₃ 0.24％，人参皂苷Rk₁0.26％，人参皂苷Rg₅ 1.11％。

实施例2熟三七片的制备

取生三七主根干品5kg，用饮用水清洗干净，加2.5kg饮用水浸泡至透心，用饮用水彻底清洗除去泥土杂质，切成3毫米的厚片，置压力锅中于温度116℃，蒸制4小时，105℃常压干燥8小时，即得熟三七片4.42kg。 HPLC法测定熟三七粉中的皂苷含量，结果三七皂苷R₁0.29％，人参皂苷Rg₁ 1.40％，人参皂苷Rb₁ 1.94％，人参皂苷20(S)-Rh₁ 0.61％，人参皂苷20(R)-Rh₁ 0.33％，人参皂苷Rd 0.46％，人参皂苷Rk₃ 0.50％，人参皂苷Rh₄ 1.57％，人参皂苷20(S)-Rg₃ 0.42％，人参皂苷20(R)-Rg₃ 0.22％，人参皂苷Rk₁ 0.25％，人参皂苷Rg₅1.16％。

实施例3熟三七的制备

取鲜三七主根5kg，清洗干净，置压力锅中于温度121℃，蒸制2小时，100℃常压干燥12小时，即得熟三七4.67kg。HPLC法测定熟三七粉中的皂苷含量，结果三七皂苷R₁0.21％，人参皂苷Rg₁ 0.78％，人参皂苷Rb₁ 2.18％，人参皂苷20(S)-Rh₁ 0.71％，人参皂苷20(R)-Rh₁ 0.12％，人参皂苷Rd 0.06％，人参皂苷Rk₃ 0.39％，人参皂苷Rh₄ 1.61％，人参皂苷20(S)-Rg₃ 0.17％，人参皂苷20(R)-Rg₃ 0.08％，人参皂苷Rk₁ 0.25％，人参皂苷Rg₅0.65％。

实施例4熟三七的制备

取生三七根茎干品4kg、支根干品1kg，用饮用水清洗干净，加7.5kg饮用水浸泡至透心，用饮用水彻底清洗除去泥土杂质，置压力锅中于125℃蒸制1小时，80℃减压干燥2小时，即得熟三七4.49kg。HPLC法测定熟三七粉中的皂苷含量，结果三七皂苷R₁ 0.47％，人参皂苷Rg₁ 1.93％，人参皂苷Rb₁ 2.84％，人参皂苷20(S)-Rh₁ 0.44％，人参皂苷20(R)-Rh₁0.23％，人参皂苷Rd 0.53％，人参皂苷Rk₃ 0.41％，人参皂苷Rh₄ 0.68％，人参皂苷 20(S)-Rg₃ 0.37％，人参皂苷20(R)-Rg₃ 0.23％，人参皂苷Rk₁ 0.19％，人参皂苷Rg₅ 0.96％。

实施例5熟三七片的制备

取生支根干品5kg，用饮用水清洗干净，加5kg饮用水浸泡至透心，用饮用水彻底清洗除去泥土杂质，切成2毫米的厚片，置压力锅中于温度120℃，蒸制2.5小时，70℃减压干燥16小时，即得熟三七片4.38kg。HPLC法测定熟三七粉中的皂苷含量，结果三七皂苷R₁0.15％，人参皂苷Rg₁ 0.55％，人参皂苷Rb₁ 1.61％，人参皂苷20(S)-Rh₁ 0.73％，人参皂苷20(R)-Rh₁ 0.41％，人参皂苷Rd 0.49％，人参皂苷Rk₃ 0.70％，人参皂苷Rh₄ 2.71％，人参皂苷20(S)-Rg₃ 0.72％，人参皂苷20(R)-Rg₃ 0.38％，人参皂苷Rk₁ 0.52％，人参皂苷Rg₅1.72％。

对比实施例1干三七制备熟三七

按照发明专利CN 200710066195.X熟三七和熟三七标准提取物和其应用实施例1的方法，取干燥的三七主根5kg，破碎为小粒，置于高压灭菌锅内120℃蒸制12小时，55℃干燥，粉碎，过120目，即得。HPLC法测定熟三七粉中的皂苷含量，结果三七皂苷R₁ 0.04％，人参皂苷Rg₁ 0.12％，人参皂苷Rb₁ 0.37％，人参皂苷20(S)-Rh₁ 0.52％，人参皂苷20(R)-Rh₁0.32％，人参皂苷Rd 0.21％，人参皂苷Rk₃ 1.28％，人参皂苷Rh₄ 2.87％，人参皂苷20(S)-Rg₃ 0.24％，人参皂苷20(R)-Rg₃ 0.12％，人参皂苷Rk₁ 0.57％，人参皂苷Rg₅ 3.54％。

对比实施例2蒸制熟三七粉的制备

按照发明专利CN201510023537.4一种熟三七的制备方法和用途实施例2b熟三七粉的制备方法，取三七药材5kg，净选，洗净，加1.75kg饮用水水润透，用纯水蒸汽在温度110℃下，蒸制3小时，干燥，粉碎成最细粉，即得。HPLC法测定熟三七粉中的皂苷含量，结果三七皂苷R₁ 0.63％，人参皂苷Rg₁ 3.27％，人参皂苷Rb₁ 3.49％，人参皂苷20(S)-Rh₁ 0.23％，人参皂苷20(R)-Rh₁ 0.10％，人参皂苷Rd 0.47％，人参皂苷Rk₃ 0.30％，人参皂苷Rh₄0.87％，人参皂苷20(S)-Rg₃ 0.21％，人参皂苷20(R)-Rg₃ 0.11％，人参皂苷Rk₁ 0.13％，人参皂苷Rg₅ 0.62％。

熟三七有效成分的定量分析方法，包括以下步骤：

1)供试品溶液的制备：

取熟三七粉0.6g，精密称定，置三角瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，置80℃水浴上保持微沸2小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

2)对照品溶液的制备：

分别精密称取三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Rb₁、人参皂苷20(S)-Rh₁、人参皂苷20(R)-Rh₁、人参皂苷Rd、人参皂苷Rk₃、人参皂苷Rh₄、人参皂苷20(S)-Rg₃、人参皂苷20(R)-Rg₃、人参皂苷Rk₁、人参皂苷Rg₅对照品，置容量瓶中，加甲醇分别制成约含各单体皂苷3-100μg/mL的对照品溶液，经0.45μm滤膜过滤，取续滤液即得；

3)色谱条件

色谱柱：Agilent Zorbax SB-C18(4.6mm×250mm，5μm)；柱温：35℃；进样量：20μL；流速：1.0mL/min；DAD检测器：检测波长：203nm；流动相：水(A)-乙腈(B)，按表1的条件进行梯度洗脱：系统适应性研究要求人参皂苷Rb1的理论塔板数不低于100000。

表1 流动相洗脱梯度

4)方法学研究

(1)标准曲线的考察：

对照品溶液20μL，依次进样，记录色谱图，以峰面积(Y)对浓度(X)绘制标准曲线，结果见表2。

表2 各皂苷标准溶液线性关系考察结果

结果表明，各标准品在进样量范围内与峰面积呈良好的线性关系。

(2)检测限、定量限考察：

以峰高约为基线噪音3倍时的进样量为检测限，以峰高约为基线噪音10倍时的进样量为定量限。结果见表3。

表3 各皂苷检测限和定量限试验数据

(3)回收率试验

精密称取熟三七粉末96.00mg 6份，分别置25mL容量瓶中，分别加入等同于样品含量的各皂苷对照品，加70％甲醇水溶液至接近刻度，室温超声40min,冷至室温后，70％甲醇水溶液定容，摇匀，经0.45μm滤膜过滤，取续滤液，进行测定，计算各皂苷的含量，计算回收率。结果见表4。

表4 各皂苷回收率考察结果

(4)精密度试验

取线性测定项下的混标、人参皂苷Rb₁标准液,依次重复测定6次，结果表明该分析方法精密度良好。结果见表5。

表5 各皂苷标准溶液精密度试验数据

(5)重复性实验

精密称取熟三七粉末96.00mg 6份，分别置25mL容量瓶中，加70％甲醇水溶液至接近刻度，室温超声提取40min,冷至室温后，70％甲醇水溶液定容，摇匀，提取液经0.45μm滤膜过滤，取续滤液，进行测定，计算熟三七粉末中各皂苷的含量，计算RSD。结果表明：该方法重复性良好。结果见表6。

表6 熟三七提取液各皂苷含量测定重复性实验数据

(6)稳定性实验

取重复性实验项下的样品(96.07mg),每个2小时测定1次，考察16小时，各皂苷的峰面积的RSD均小于3.5％，结果表明熟三七提取液中各皂苷在16小时内基本稳定，见表7。

表7 熟三七提取液各皂苷含量测定稳定性实验数据

5)含量测定

取供试品溶液20μL，依次进样，记录色谱图，根据对照品溶液的标准曲线计算供试品溶液中各种皂苷的含量。

对照品和熟三七的典型HPLC色谱图见图1对照品HPLC色谱图、图2按照实施例1制备的熟三七的HPLC色谱图。