一种用于增强记忆力的血浆提取物及其制备方法和应用与流程

技术特征：

1.一种用于增强记忆力的血浆提取物，其特征在于：所述血浆提取物包括多种蛋白质和多种小分子；

所述血浆分离物的SDS-PAGE变性胶电泳至少包括5条肉眼清晰可见的条带，所述条带的分子量为：25kD、35kD、50kD、69kD、105kD。

2.根据权利要求1所述的用于增强记忆力的血浆提取物，其特征在于：通过蛋白质谱分析，所述血浆提取物中至少含有如下57种蛋白：

优选地，所述多种小分子至少包括与所述57种蛋白中任何一种蛋白结合的小分子。

3.根据权利要求1所述的用于增强记忆力的血浆提取物，其特征在于：所述血浆来源于哺乳动物；优选地，所述血浆来源于人类。

4.一种权利要求1-3任一所述的用于增强记忆力的血浆提取物的制备方法，其特征在于：该制备方法依次包括以下步骤：血浆收集、分子量截留、SD灭活、离心分离、阴离子交换、透析、浓缩；优选地，该制备方法在血浆收集步骤和分子量截留步骤之间还包括：低温过滤步骤和低温超滤步骤。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：在所述血浆收集步骤中，利用抗凝管收集血液，再通过离心收集上清液，得到血浆；

优选地，所述离心中，离心力为500-1000g，时间为10-20分钟，离心温度为0-15℃。

6.根据权利要求4或5所述的制备方法，其特征在于：在所述低温过滤步骤中，在压力条件下将所述血浆进行过滤，得到滤液；

优选地，滤膜的孔径为不小于0.22微米，更优选所述滤膜的孔径为0.22微米和0.45微米；

优选地，所述过滤的温度为0-5℃，压力为1-20MPa。

7.根据权利要求4-6任一所述的制备方法，其特征在于：在所述低温超滤步骤中，将所述滤液通过施加压力进行膜包超滤，得到低温超滤产物；

优选地，所述膜包截留分子量为3kD-10kD；

优选地，所述超滤的温度为0-8℃，压力为1-20MPa；

优选地，所述超滤使用的缓冲液为磷酸盐缓冲液、Tris-盐酸缓冲液、HBS缓冲液中的一种；更优选地，所述Tris-盐酸缓冲液的浓度为0.2-200mM、pH值为7.0-8.8，所述磷酸缓冲液的浓度为1.0-500mM、pH值为6.0-9.2，所述HBS缓冲液的浓度为0.5-350mM、pH值为6.4-8.4；更优选地，所述缓冲液为100mM、pH值为8.0的Tris-盐酸缓冲液。

8.根据权利要求4-7任一所述的制备方法，其特征在于：在所述分子量截留步骤中，将所述血浆或所述低温超滤产物通过施加压力进行分子量截留，得到分子量截留产物；

优选地，所述分子量截留产物的分子量为大于等于10kD，更优选为大于10kD至小于等于50kD；

优选地，所述施加压力的方式为：将所述低温超滤产物置于浓缩管中进行离心；更优选地，所述浓缩管允许10-50kD的物质通过；所述离心的离心力为500-3000g，时间为10-120分钟，温度为0-15℃；

优选地，所述施加压力的方式为：将所述低温超滤产物置于浓缩杯中通过液氮进行加压；更优选地，所述浓缩杯允许10-50kD的物质通过；所述加压的压力为1-20MPa，加压时间为4-8小时。

9.根据权利要求4-8任一所述的制备方法，其特征在于：在所述SD灭活步骤中，将所述分子量截留产物用SD灭活剂重新悬浮后静置，得到灭活产物；

优选地，所述静置温度为4～28℃，时间为6～24小时；更优选为所述静置温度为20℃，时间为8小时；

优选地，所述SD灭活剂含有0.3～2％的N-丁基三磷酸盐、0.5～2％的吐温。

10.根据权利要求4-9任一所述的制备方法，其特征在于：在所述离心分离步骤中，将所述灭活产物离心后保留上清液，得到离心分离产物；优选地，所述离心中，离心力为2000-5000g，时间为10-20分钟，温度为0-6℃。

11.根据权利要求4-10任一所述的制备方法，其特征在于：在所述阴离子交换步骤中，将所述离心分离产物加入阴离子交换柱中进行步级洗脱，收集洗脱液，混合后得到阴离子交换产物；

优选地，所述步级洗脱中，先用第一次洗脱缓冲液洗脱，得到第一次洗脱液；再用第二次洗脱液洗脱，得到废液；再用第三次洗脱液洗脱，得到第三次洗脱液；合并所述第一次洗脱液和第三次洗脱液，得到阴离子交换产物；

更优选地，所述第一次洗脱液缓冲液中含有100-150mM的氯化钠，所述第二次洗脱液缓冲液含有250-300mM的氯化钠，所述第三次洗脱液缓冲液含有450-500mM的氯化钠；

进一步优选地，所述第一次洗脱缓冲液、第二次洗脱缓冲液、第三次洗脱缓冲液，均为浓度为0.2-200mM、pH值为7.0-9.2的Tris-盐酸缓冲液。

12.根据权利要求4-11任一所述的制备方法，其特征在于：在所述透析步骤中，将所述阴离子交换产物进行透析，收集透析容器中的产物得到透析产物；

优选地，所述透析使用的透析缓冲液为Tris-盐酸缓冲液、磷酸缓冲液、HBS缓冲液中的一种；更优选地，所述Tris-盐酸缓冲液的浓度为0.2-200mM、pH值为7.0-8.8，所述磷酸缓冲液的浓度为1.0-500mM、pH值为6.0-9.2，所述HBS缓冲液的浓度为0.5-350mM、pH值为6.4-8.4；进一步优选地，所述透析缓冲液为1mM、pH值为8的Tris盐酸缓冲液；

优选地，所述透析的时间为20-72h；

优选地，所述透析的体积比是1:(100-10000)。

13.根据权利要求4-12任一所述的制备方法，其特征在于：在所述浓缩步骤中，将所述透析产物进行浓缩，得到浓缩产物，即为所述血浆提取物；

优选地，所述透析产物的体积是所述浓缩产物的不小于5倍，更优选为5-100倍；

优选地，所述浓缩是采用浓缩管离心，所述浓缩管允许1.5-3.5KD的物质通过，所述离心中，离心力为1000-1500g，温度为2-8℃；

优选地，所述浓缩是采用浓缩杯加压，所述浓缩杯允许1.5-3.5KD的物质通过，所述加压的压力为1-20MPa。

14.一种药物组合物，包含权利要求1-3任一所述的血浆提取物和药学上可接受的载体。

15.根据权利要求14所述的药物组合物，其特征在于，所述药学上可接受的载体为：药学上可接受的缓冲液、蛋白质、明胶、单糖、多糖、氨基酸、螯合剂、糖醇、聚乙二醇、以及表面活性剂中的一种或多种。

16.根据权利要求15所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括如下组分：1倍体积的权利要求1-3任一所述的血浆提取物，9倍体积的8.5wt％NaCl或1.5M、pH7.0的PBS；

优选地，所述药物组合物中还包括白蛋白、葡萄糖以及谷氨酰胺；更优选地，所述白蛋白在所述药物组合物中的质量体积百分比为2％，所述葡萄糖在所述药物组合物中的质量体积百分比为1％，所述谷氨酰胺在所述药物组合物中的质量体积百分比为3％。

17.一种缓释制剂，包含权利要求1-3任一所述的血浆提取物或者权利要求4-13任一所述的药物组合物、以及药学上可接受的生物相容物质；优选地，所述缓释制剂的剂型为脂质体、微球、水凝胶、微型渗透泵或微胶囊。

18.一种试剂盒，包含权利要求1-3任一所述的血浆提取物、权利要求14-16任一所述的药物组合物，或权利要求17所述缓释制剂。

19.权利要求1-3任一所述的血浆提取物、权利要求14-16任一所述的药物组合物、权利要求17所述缓释制剂、权利要求18所述试剂盒，在预防、改善或/和治疗老年痴呆症药物中或在增强记忆力药物中的应用。