在原核生物和真核生物中观察到发生响应于特定刺激的细胞运动。在这些生物体内观察到的细胞运动已被分成三类：趋化性或细胞沿向着化学品浓度增加的梯度的运动；负趋化性，其被定义为化学刺激向下梯度的运动；以及化学激活(chemokinesis)或由化学试剂引发的增加的细胞随机运动。
已经观察到在哺乳动物细胞中发生响应于被称为趋化因子的一类蛋白的趋化性和化学激活。此外，在哺乳动物细胞中已经观察到化学排斥物或驱走(fugetactic)活性。例如，一些肿瘤细胞分泌的趋化因子的浓度足以自肿瘤位点驱逐免疫细胞，由此降低免疫系统靶向和根除肿瘤的能力。转移的癌细胞可以使用类似的机制来回避免疫系统。
抗驱走性试剂(anti-fugetactic agent)已被描述为抑制肿瘤细胞的驱走活性并且允许患者的免疫系统靶向肿瘤(参见US 2008/0300165，其通过引用完整地结合于此)。然而，利用此种试剂进行的治疗可能不足以根除所有患者中的肿瘤，而是取决于肿瘤类型，肿瘤大小，转移的数量，转移的位点，患者健康等。
仍然需要靶向肿瘤以有效杀死肿瘤和/或转移的癌细胞的疗法和组合物。
发明概述
本发明涉及利用抗驱走性试剂和免疫疗法的组合治疗肿瘤。免疫疗法(免疫治疗剂)包括，但不限于，可以施用于患者的任何活的免疫细胞，和/或对靶细胞(例如，肿瘤细胞)具有特异性的抗体。优选地，免疫治疗剂是NK细胞或T细胞，或其修饰或衍生物。可以任选地施用一种或多种另外的癌症疗法，例如化疗，放疗和/或疫苗疗法。
例如，表达高水平CXCL12或白介素8的肿瘤对肿瘤抗原特异性T-细胞的排斥允许所述肿瘤细胞逃避免疫控制。本发明是基于以下发现，即用有效量的抗驱走性试剂治疗持续足以提供对趋化因子的驱走作用的削弱的时间段恢复针对肿瘤的免疫防御，并且还允许抗癌剂(例如，化疗剂，免疫治疗剂，放疗剂等)更好地接近肿瘤从而减小或根除肿瘤。不受理论限制，据信，共同施用如本文中所述的抗驱走性试剂和免疫治疗剂将在患有肿瘤的患者中产生协同反应，使得患者获得比在单独的任一疗法的情况下更好的结果。任选地，可以施用另外的抗癌疗法/试剂以进一步治疗肿瘤。抗癌剂包括，但不限于，常规癌症疗法，例如化疗，放疗和/或疫苗疗法。
虽然单独的抗驱走性试剂为癌症治疗提供有希望的结果，但据信如本文中所述的联合疗法将导致更有效的肿瘤靶向和更佳的患者结果。不受理论限制，通过非限制性实例，据信如果肿瘤的尺寸大，患者中存在多个肿瘤，患者的免疫系统被破坏等，则此种方法是尤其有益的。
多达85％的实体瘤和白血病表达的CXCL12的水平足以具有驱走作用，例如使肿瘤排斥免疫细胞。以此种水平表达CXCL12的癌症包括，但不限于，前列腺癌，肺癌，乳腺癌，胰腺癌，卵巢癌，胃癌，食管癌和白血病。
本发明的一个方面涉及用于治疗有此需要的患者中的癌症的方法，所述方法包括向患者施用抗驱走性试剂和免疫治疗剂。任选地，给所述患者施用至少一种另外的抗癌剂。
本发明的一个方面涉及用于在患有癌症的患者中增加免疫细胞向肿瘤位点的迁移的方法，所述方法包括向患者施用抗驱走性试剂和免疫治疗剂。任选地，给患者施用至少一种另外的抗癌剂。在一个实施方案中，所述方法增加免疫治疗剂向肿瘤位点的迁移。在一个实施方案中，所述方法增加患者自身免疫细胞向肿瘤位点的迁移。
本发明的一个实施方案涉及用于抑制有此需要的患者中的肿瘤细胞转移的方法，所述方法包括向患者施用抗驱走性试剂和免疫治疗剂。任选地，给所述患者施用至少一种另外的抗癌剂。
本发明的一个实施方案涉及用于局部治疗哺乳动物中的实体瘤的方法，所述方法包括向患者施用抗驱走性试剂和免疫治疗剂。任选地，给所述患者施用至少一种另外的抗癌剂。
本发明的一个实施方案涉及用于杀死癌细胞的方法，所述方法包括向患者施用抗驱走性试剂和免疫治疗剂。任选地，给所述患者施用至少一种另外的抗癌剂。
在一个优选的实施方案中，癌症、肿瘤或细胞表达的趋化因子的量足以产生驱走作用。在一个实施方案中，细胞或肿瘤分泌趋化因子，以致在肿瘤微环境中存在驱走作用。在一个实施方案中，在用抗驱走性试剂治疗前，肿瘤微环境中的趋化因子浓度大于约100nM。在一个实施方案中，趋化因子为CXCL12或IL-8。在一个优选的实施方案中，趋化因子为CXCL12。
在一个实施方案中，肿瘤是实体瘤。在一个实施方案中，肿瘤是非实体瘤。在一个实施方案中，肿瘤是白血病。
在一个实施方案中，至少一种另外的抗癌剂是化疗剂、放疗剂和/或抗癌疫苗。
不受理论限制，据信，本文所述的联合疗法将允许患者自身的免疫细胞以及免疫治疗剂靶向肿瘤。例如，在与免疫治疗剂联合的情况下，患者的免疫系统可用于靶向肿瘤或转移的肿瘤细胞。在一个实施方案中，降低肿瘤的驱走活性防止肿瘤的化学排斥作用抑制免疫治疗剂(例如，NK细胞或T细胞)的有效靶向。在一个实施方案中，患者是免疫受损的。
抗驱走性试剂可以是本领域中已知的任何此种试剂。在一个实施方案中，抗驱走性试剂是美国专利申请公布号2008/0300165(其通过引用完整地结合于此)中描述的抗驱走性试剂。在一个优选的实施方案中，抗驱走性试剂选自由以下各项组成的组；AMD3100(mozobil/plerixafor)，KRH-1636，T-20，T-22，T-140，TE-14011，T-14012，TN14003，TAK-779，AK602，SCH-351125，鞣酸，NSC 651016，沙立度胺(thalidomide)，GF 109230X，以及干扰驱走性趋化因子或驱走性趋化因子的受体的二聚化的抗体。例如，抗体可以抑制CXCL12，IL-8，CXCR3或CXCR4的二聚化。在一个实施方案中，抗驱走性试剂是干扰趋化因子与其受体结合的抗体。在一个实施方案中，抗驱走性试剂是结合CXCL12或结合CXCR4并阻断自其的信号转导的抗体或凝集素。在一个优选的实施方案中，抗驱走性试剂是AMD3100。
在一个实施方案中，免疫治疗剂是NK细胞。在一个实施方案中，NK细胞是自体的NK细胞。在一个实施方案中，NK细胞是非自体的NK细胞。在一个实施方案中，NK细胞是修饰的NK细胞。在一个优选的实施方案中，NK细胞是人NK细胞。
在一个实施方案中，免疫治疗剂是NK细胞系。在一个实施方案中，免疫治疗剂是NK-92细胞。在一个实施方案中，NK-92细胞是修饰的NK-92细胞。在一个实施方案中，修饰的NK-92细胞与对受治肿瘤具有特异性的抗体一起施用。在一个实施方案中，NK-92细胞与细胞因子(例如，IL-2)一起施用。
在一个实施方案中，免疫治疗剂是T细胞。在一个实施方案中，T细胞是自体的T细胞。在一个实施方案中，T细胞是非自体的T细胞。在一个实施方案中，T细胞是修饰的T细胞。在一个实施方案中，T细胞是T细胞细胞系。在一个优选的实施方案中，T细胞是人T细胞或人T细胞细胞系。
将抗驱走性试剂与免疫治疗剂联合施用。“联合”是指任意组合，包括顺序或同时施用。在一个优选的实施方案中，将抗驱走性试剂与免疫治疗剂分开施用。在一个实施方案中，将抗驱走性试剂与免疫治疗剂在单一组合物中施用。
在一个实施方案中，经静脉内施用免疫治疗剂。在一个实施方案中，以单一组合物施用抗驱走性试剂与免疫治疗剂。
在一个实施方案中，经静脉内、皮下、口服或腹膜内施用抗驱走性试剂。在一个优选的实施方案中，将抗驱走性试剂施用于邻近肿瘤处(例如，肿瘤附近或与肿瘤在相同的体腔内)。在一个实施方案中，将抗驱走性试剂直接施用到肿瘤中或施用到供养肿瘤的血管中。在一个实施方案中，全身施用抗驱走性试剂。在另一个实施方案中，通过微导管或植入的装置以及植入的剂型来施用抗驱走性试剂。
在一个实施方案中，在限定的时间里以连续方式施用抗驱走性试剂。在另一个实施方案中，以波动方式施用抗驱走性试剂。例如，可以在一段时间里间歇地施用抗驱走性试剂。
在一个优选的实施方案中，顺序施用抗驱走性试剂和免疫治疗剂。例如，可以施用抗驱走性试剂持续足以降低或消弱肿瘤的驱走作用(例如使得抗驱走性试剂具有抗驱走作用)的时间段；然后可以施用免疫治疗剂持续一段时间，在这段时间期间肿瘤的驱走作用降低或减弱。在一个实施方案中，抗驱走性试剂和免疫治疗剂以交替方式顺序施用，至少直到患者状态改善。患者状态改善包括，但不限于，肿瘤尺寸减小，癌症的至少一种症状减少，肿瘤和/或其转移瘤消除，患者存活增加等。
在一个实施方案中，将至少一种另外的抗癌剂与抗驱走性试剂和免疫治疗剂联合施用。抗癌剂可以任意顺序施用(与抗驱走性试剂和/或免疫治疗剂顺序或同时施用)。在一个优选的实施方案中，将抗驱走性试剂和抗癌剂顺序施用。在尤其优选的实施方案中，先施用抗驱走性试剂，之后施用抗癌剂和/或免疫治疗剂。
不受理论限制，据信，抗驱走性试剂将减小分泌趋化因子的肿瘤或癌细胞的驱走作用，从而允许另外的试剂和免疫细胞更好地接近所述肿瘤或细胞。例如，随后可以在肿瘤或细胞的驱走作用被减小的时间期间施用免疫治疗剂和/或抗癌剂。进一步预期的是，在肿瘤尺寸已经减小后施用免疫治疗剂针对肿瘤将更有效。因此，在一个优选的实施方案中，首先施用抗驱走性试剂，施用的量和时间段足以提供肿瘤的驱走作用的减小；在施用抗驱走性试剂的时间段之后，施用抗癌剂，施用的量和时间段产生针对肿瘤的治疗效果(例如，肿瘤尺寸减小，转移瘤消除或减少，肿瘤生长延迟)；在施用抗癌剂的时间段后，施用治疗有效量的免疫治疗剂。任选地，也在抗癌剂和免疫治疗剂的施用之间施用抗驱走性试剂。在一个实施方案中，将抗驱走性试剂与免疫治疗剂同时(例如，分开或同时)施用。在一个优选的实施方案中，重复抗驱走性试剂、抗癌剂和/或免疫治疗剂的顺序施用，至少到患者状态改善。在一个实施方案中，重复试剂的顺序施用直至肿瘤被根除。
在一个实施方案中，抗驱走性试剂和/或免疫治疗剂被直接施用至肿瘤位点。在一个实施方案中，通过直接注射到肿瘤中来施用抗驱走性试剂和/或免疫治疗剂。在一个实施方案中，将抗驱走性试剂和/或免疫治疗剂施用至邻近肿瘤位点处。在一个优选的实施方案中，将抗驱走性试剂和/或免疫治疗剂直接施用到与肿瘤相关的血管中(例如，经由向肿瘤中、肿瘤附近或供养肿瘤的血管中的微导管注射)。
本发明还涉及用于治疗患者中的癌症的多部件试剂盒，所述多部件试剂盒包含如本文中所述的抗驱走性试剂和免疫治疗剂。任选地，所述试剂盒包含关于抗驱走性试剂和/或免疫治疗剂的剂量用药的使用说明。在一个实施方案中，本发明涉及抗驱走性试剂和免疫治疗剂用于治疗患有癌症的患者的用途。
本发明还涉及来自表达趋化因子的肿瘤的肿瘤细胞，所述细胞已经与抗驱走性试剂和免疫治疗剂接触。在一个实施方案中，趋化因子是CXCL12。在一个实施方案中，趋化因子是IL-8。
发明详述
在阅读本说明书后，如何在各种备选实施方案和备选应用中实施本发明对于本领域技术人员将变得清楚。然而，本文中并未描述本发明的所有实施方案。要理解的是，本文中给出的实施方案仅是作为示例而非是限制性的。因此，此对各种备选实施方案的详述不应当被视为限制如下所述的本发明的范围或宽度。
在公开和描述本发明前，要理解的是，以下描述的各方面不限于具体组合物，因此制备此种组合物的方法或其用途当然可以有变化。同样要理解的是，本文中使用的术语仅是为了描述具体方面并且无意为限制性的。
定义
除非另外限定，本文中使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域普通技术人员所通常理解的相同的含义。
在本申请文件中以及在随后的权利要求中，将被提及的若干术语应当被限定为具有以下含义：
本文中使用的术语仅是用于描述具体的实施方案并且不意在限制本发明。当在本文中使用时，除非上下文明确地另外指明，单数形式″一个″、″一种″和″所述″也意在包括复数形式。
如果适当，所有数字指示，例如，pH，温度，时间，浓度，量和分子量，包括范围，是以(+)或(-)10％、1％或0.1％变化的近似值。要理解，虽然并非总是明确指出，所有数字指示之前都可以有术语“约”。还要理解的是，虽然并非总是明确指出，本文中描述的试剂仅是示例性的，并且其等效物是本领域中已知的。
“任选的”或“任选地”表示随后描述的事件或境况可能发生也可能不发生，并且说明书包括发生所述事件或境况的情况和不发生的情况。
术语“包含”或“包括”意在表示组合物和方法包括所述元素，但并不排除其他。当用于限定组合物和方法时，“基本上由……组成”应表示排除对组合具有任何实质重要性的其他元素。例如，基本上由如本文中所限定的元素组成的组合物将不排除不会实质上影响本发明的基本和新特征的其他元素。“由……组成”应表示排除多于痕量的其他成分和述及的实质方法步骤。这些转变术语中的每个所限定的实施方案都在本发明的范围内。
术语“患者”、“受试者”、“个体”等在本文中被可互换地使用，并且是指适合于本文中所述的方法的任何动物或其细胞(不论是体外还是原位)。在一个优选的实施方案中，所述患者、受试者或个体是哺乳动物。在一些实施方案中，所述哺乳动物是小鼠，大鼠，豚鼠，非人灵长类动物，狗，猫或驯养动物(例如马，牛，猪，山羊，绵羊)。在尤其优选的实施方案中，所述患者、受试者或个体是人。
术语″治疗″涵盖对受试者(如人)中的本文中所述的疾病或病症的治疗，并且包括：(i)抑制疾病或病症，即，阻止其发展；(ii)减轻疾病或病症，即，使得病症消退；(iii)减缓病症的进展；和/或(iv)抑制、减轻或减缓所述疾病或病症的一种或多种症状的进展。例如，癌症或肿瘤的治疗包括，但不限于，减小肿瘤尺寸，消除肿瘤和/或其转移瘤，抑制肿瘤的转移，消除癌症，减少或消除癌症的至少一种症状等。
术语向受试者“施用”试剂、药物或天然杀伤细胞包括向受试者引入或递送一种化合物以发挥其目的功能的任何途径。施用可以通过任何合适的途径进行，包括口服，经鼻内，经肠胃外(静脉内，肌肉内，腹膜内或皮下)，或经局部的途径。施用包括自我施用和由他人施用。
还要理解的是，所述医学疾病和病症的治疗或预防的各种形式意在表示“实质上”，其包括完全但也包括不及完全的治疗或预防，并且其中实现了一些生物学或医学相关结果。
术语“分开”施用是指通过不同途径同时或基本上同时施用至少两种活性成分。
术语“顺序”施用是指在不同时间施用至少两种活性成分，施用途径可以是相同的或不同的。更特别地，顺序使用是指在完全施用一种活性成分后再开始施用另一种或多种。因此，可能的是在数分钟、数小时或数日施用一种活性成分，之后施用另一种活性成分或另外多种活性成分。在此情况中不存在同时治疗。
术语“同时”治疗用途是指通过相同途径同时或基本上同时施用至少两种活性成分。
当在本文中使用时，术语“治疗”表示治疗和/或预防。治疗效果通过抑制、消除或根除疾病状态而获得。
术语“治疗有效量”或“有效量”是指在施用时足以产生所需效果的试剂的量。例如，抗驱走性试剂的有效量可以是足以对癌细胞或肿瘤具有抗驱走作用(例如减弱来自肿瘤或癌细胞的驱走作用)的量。又例如，有效量的NK-92细胞可以导致至少部分的肿瘤细胞发生溶胞作用。试剂的治疗有效量将根据受治的肿瘤及其严重性以及受治的患者的年龄、体重等而不同。技术人员将能够根据这些和其他因素来确定合适的剂量。所述组合物也可以与一种或多种另外的治疗性化合物联合施用。在本文所述的方法中，可以将治疗性化合物施用于具有疾病或病症的一种或多种体征或症状的受试者。
当用于描述本发明时，“天然杀伤(NK)细胞”是在不存在具体抗原刺激的情况下杀死靶细胞的免疫系统细胞，并且依据MHC种类没有限制。靶细胞可以是肿瘤细胞或带有病毒的细胞。NK细胞表征为存在CD56而不存在CD3表面标记。
术语“内源性NK细胞”用来指来源于供体(或患者)的NK细胞，其区别于NK-92细胞系。内源性NK细胞通常是其内富集有NK细胞的异质细胞群体。内源性NK细胞可用于患者的自体或同种异体治疗。
“NK-92细胞”是指永生的NK细胞系，NK-92，其最初获得自患有非霍奇金淋巴瘤的患者。对于本发明来说，并且除非另外指出，术语“NK-92”意在指最初的NK-92细胞系以及被修饰的(例如，通过引入外源基因)NK-92细胞系。NK-92细胞及其示例性的非限制性的修饰描述于美国专利号7,618,817；8,034,332；和8,313,943中(其全部通过引用结合于此)。
当在本文中使用时，“T细胞”是在细胞调节的免疫性中起作用的免疫系统细胞。T细胞在细胞表面上表达T细胞受体(TCR)。T细胞有若干亚类，各自具有独特的功能。T细胞包括辅助性T细胞，细胞毒性T细胞，记忆T细胞，抑制(调节)T细胞，天然杀伤T细胞，和γδT细胞。本文中考虑任意的T细胞。在一个优选的实施方案中，T细胞适合用于继承性细胞转移(ACT)。在一个实施方案中，T细胞是肿瘤浸润的淋巴细胞(TIL)。
术语“杀死”在涉及细胞/细胞群体时意在包括导致所述细胞/细胞群体死亡的任何类型的操作。
当在本文中使用时，″抗体″包括根据常规方法制备的多克隆抗体、单克隆抗体、单链抗体、嵌合抗体、人源化抗体和人抗体。
″细胞因子″是用于非抗体可溶性蛋白的总称，所述蛋白释放自一种细胞亚群并且在例如免疫反应的产生或调解中充当细胞间调节剂。参见Human Cytokines：Handbook for Basic&Clinical Research(Aggrawal等编，Blackwell Scientific，Boston，Mass.1991)(其通过引用完整地结合于此用于所有目的)。
″CXCR4/CXCL12拮抗剂″是指阻止CXCL12结合CXCR4或以其他方式减小CXCL12的驱走作用的化合物。
″驱走活性″是指试剂排斥(或化学排斥)具有迁移能力的真核细胞(即，能够远离排斥性刺激移动的细胞)的能力。因此，具有驱走活性的试剂是″驱走剂″。此种活性可以使用本领域中公知的多种系统中的任一种来检测(参见，例如，美国专利号5,514,555和美国专利申请公布号2008/0300165，其各自通过引用完整地结合于此)。用于本文中的用途的优选系统描述于美国专利6,448,054，其通过引用完整地结合于此。
术语“驱走作用”是指细胞(例如肿瘤细胞)分泌的趋化因子的化学排斥作用。通常，驱走作用存在于细胞周围区域，其中趋化因子的浓度足以提供驱走作用。一些趋化因子，包括白介素8和CXCL12，可以在高浓度(例如，超过约100nM)产生驱走活性，而较低的浓度不显示驱走作用并且甚至可能是化学吸引剂。
术语“抗驱走作用”是指抗驱走性试剂减弱或消除趋化因子的驱走作用的作用。
当在本文中使用时，″免疫细胞″是参与抗原的特异性识别的造血来源的细胞。免疫细胞包括抗原呈递细胞(APC)，如树突细胞或巨噬细胞，B细胞，T细胞等。
术语“免疫疗法”或“免疫治疗剂”是指来源于免疫系统的细胞和其他产物(例如抗体)。非限制性实例包括NK细胞，T细胞，NK或T细胞细胞系，其他免疫来源的细胞，和抗体(例如肿瘤特异性抗体)。
当在本文中使用时，术语“抗癌疗法”是指常规癌症治疗，包括化疗和放疗以及疫苗疗法。
抗驱走性试剂
由于肿瘤细胞分泌的趋化因子，许多肿瘤对例如免疫细胞具有驱走作用。由肿瘤细胞分泌的高浓度的趋化因子能够对细胞具有驱走(化学排斥)作用，而较低的浓度不具有此种作用或甚至导致化学吸引。例如，CXCL12(SDF-1)通过浓度依赖性和CXCR4受体介导的机制驱除T细胞。基于惊人的发现，即如本文中所述的抗驱走性试剂减小肿瘤的驱走作用，由此允许免疫细胞和其他抗癌剂更好地接近并杀死肿瘤细胞，预测了本发明。
抗驱走性试剂可以是本领域中已知的任何此种试剂，例如美国专利申请公布号2008/0300165(通过引用完整地结合于此)中描述的抗驱走性试剂。
抗驱走性试剂包括特异性地抑制趋化因子和/或趋化因子受体二聚化由此阻断对驱走性试剂的化学排斥反应的任何试剂。某些趋化因子，包括IL-8和CXCL12，在高浓度时(例如，100nM以上)也可以充当化学排斥物，其中大部分所述趋化因子以二聚体存在。趋化因子的二聚化引起细胞中的差异反应，导致趋化因子受体二聚化，此种活性被认为是一种化学排斥信号。例如，可以通过抑制趋化因子二聚体形成或趋化因子受体二聚体形成的抗驱走性试剂来实现阻断由肿瘤分泌的高浓度的趋化因子的化学排斥作用。例如，通过例如干扰二聚化结构域或配体结合而靶向并阻断趋化因子受体二聚化的抗体可以作为抗驱走性试剂。经由其他作用机制，例如减少细胞分泌的驱走性细胞因子的量，抑制二聚化，和/或抑制趋化因子与靶受体结合而发挥作用的抗驱走性试剂也包括在本发明中。如果需要，该作用可以在不抑制单体趋化因子的趋化性作用的情况下实现。
在其他实施方案中，抗驱走性试剂是CXCR4拮抗剂，CXCR3拮抗剂，CXCR4/CXCL12拮抗剂或选择性PKC抑制剂。
所述CXCR4拮抗剂可以是但不限于AMD3100，KRH-1636，T-20，T-22，T-140，TE-14011，T-14012，或TN14003，或干扰CXCR4二聚化的抗体。
所述CXCR3拮抗剂可以是但不限于TAK-779，AK602，或SCH-351125，或干扰CXCR3二聚化的抗体。
所述CXCR4/CXCL12拮抗剂可以是但不限于鞣酸，NSC 651016，或干扰CXCR4和/或CXCL12二聚化的抗体。
所述选择性PKC抑制剂可以是但不限于沙立度胺或GF 109230X。
在一个优选的实施方案中，抗驱走性试剂是AMD3100(plerixafor)。AMD3100被描述于美国专利号5,583,131(其通过引用完整地结合于此)中。
在一个实施方案中，抗驱走性试剂与允许靶向肿瘤的分子偶联。在一个实施方案中，抗驱走性试剂与对要靶向的肿瘤具有特异性的抗体偶联(例如，结合)。在一个实施方案中，全身施用与允许靶向肿瘤的分子偶联的抗驱走性试剂。
在一个实施方案中，抗驱走性试剂与增强所述试剂的抗驱走活性的另外的化合物联合施用。在一个实施方案中，所述另外的化合物是粒细胞集落刺激因子(G-CSF)。在一个实施方案中，不施用G-CSF。
免疫治疗剂
天然杀伤细胞
天然杀伤(NK)细胞是一类淋巴细胞，其典型地构成人淋巴细胞的大约10％。NK细胞提供针对肿瘤和感染的(靶)细胞的先天细胞免疫反应。NK细胞，被表征为具有CD3-/CD56+表型，展示多种激活和抑制性细胞表面受体。NK细胞抑制性受体主要与正常细胞表面上的主要组织相容性复合物I型(“MHC-I”)蛋白接合以防止NK细胞激活。MHC-I分子将细胞限定为“属于”特定的个体。认为，NK细胞仅可由这样的细胞激活：在所述细胞上，这些“自我”MHC-I分子缺失或是有缺陷的，如通常为肿瘤或病毒感染的细胞的情形。
在激活的NK细胞受体与靶细胞上的相应配体结合或连接后，NK细胞被触发从而发挥直接针对靶细胞的细胞毒性作用。所述细胞毒性作用由NK细胞分泌多种细胞因子来介导，这又刺激和募集其他免疫系统作用物针对靶标起作用。激活的NK细胞还经由分泌酶穿孔素和粒酶、刺激凋亡起始受体以及其他机制来裂解靶细胞。
NK细胞已经作为某些癌症治疗中的免疫治疗剂被评估。用于此目的的NK细胞可以是自体或非自体的(即，来自供体)。
在一个实施方案中，本文中的组合物和方法中使用的NK细胞是自体的NK细胞。在一个实施方案中，本文中的组合物和方法中使用的NK细胞是非自体的NK细胞。
在一个实施方案中，本文中的组合物和方法中使用的NK细胞是修饰的NK细胞。可以通过将基因或RNA插入到细胞中以使细胞表达野生型NK细胞不表达的一种或多种蛋白来修饰NK细胞。在一个实施方案中，NK细胞被修饰成表达嵌合抗原受体(CAR)。在一个优选的实施方案中，CAR对被所述方法或组合物靶向的癌症具有特异性。
修饰的NK细胞的非限制性实例可见于例如Glienke等2015，Advantages and applications of CAR-expressing natural killer cells，Frontiers in Pharmacol.6，article 21；PCT专利公布号WO 2013154760和WO 2014055668；其各自通过引用完整地结合于此。
N-92细胞
NK-92细胞系是在患有非霍奇金淋巴瘤的受试者的血液中发现的。NK-92细胞缺少正常NK细胞所展示的主要抑制性受体，但是保留大部分的激活受体。与NK细胞相比，NK-92细胞对显著更大范围的肿瘤和感染的细胞类型具有细胞毒性，并且通常对这些靶标显示更高水平的细胞毒性。然而，NK-92细胞不攻击正常细胞，其也不引发免疫排斥反应。此外，NK-92细胞可以容易且稳定地在连续细胞培养中培养和维持，并且因此可以在c-GMP依从质量控制下大量制备。此特征组合导致NK-92进入目前进行的用于治疗多种类型癌症的临床试验。
用于本文中所述的组合物和方法的NK-92细胞可以是野生型(即，未修饰的)NK-92细胞或修饰的NK-92细胞。可以通过将基因或RNA插入到细胞中以使细胞表达野生型NK-92细胞不表达的一种或多种蛋白来修饰NK-92细胞。在一个实施方案中，NK-92细胞被修饰成在细胞表面上表达嵌合抗原受体(CAR)。在一个优选的实施方案中，CAR对被所述方法或组合物靶向的癌症具有特异性。在一个实施方案中，NK-92细胞被修饰成在细胞表面上表达Fc受体。在一个优选的实施方案中，表达Fc受体的NK-92细胞可以调节抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)。在一个实施方案中，Fc受体是CD16。在一个实施方案中，NK-92细胞被修饰，从而表达细胞因子(例如，IL-2)。
在一个实施方案中，修饰的NK-92细胞与对受治癌症具有特异性的抗体联合施用。在一个优选的实施方案中，与抗体联合施用的修饰的NK-92细胞有能力调节ADCC。
修饰的NK-92细胞的非限制性实例被描述于例如美国专利号7,618,817和8,034,332；以及美国专利公布号2002/0068044和2008/0247990中，其各自通过引用完整地结合于此。CAR-修饰的NK-92细胞的非限制实例可见于例如Glienke等2015，Advantages and applications of CAR-expressing natural killer cells，Frontiers in Pharmacol.6，article 21；其通过引用完整地结合于此。
T细胞
T细胞是在细胞表面中具有T细胞受体的淋巴细胞。T细胞通过使身体的免疫反应适应于具体的病原体而在细胞介导的免疫性中起重要作用。T细胞，尤其是修饰的T细胞，在临床试验中已证明有希望减少或消除肿瘤。通常，此种T细胞是修饰的和/或进行继承性细胞转移(ACT)。ACT及其变体是本领域中公知的。参见，例如，美国专利号8,383,099和8,034,334(其通过引用完整地结合于此)。
通过引用完整地结合于此的美国专利申请公布号2014/0065096和2012/0321666描述了用于癌症的T细胞或NK细胞治疗的方法和组合物。T细胞通常可以使用如例如以下中所述的方法激活和扩增：美国专利号6,352,694；6,534,055；6,905,680；6,692,964；5,858,358；6,887,466；6,905,681；7,144,575；7,067,318；7,172,869；7,232,566；7,175,843；5,883,223；6,905,874；6,797,514；6,867,041；和美国专利申请公布号2006/0121005(其各自通过引用完整地结合于此)。
在一个实施方案中，用于本文中的组合物和方法的T细胞是自体T细胞(即，来源于患者)。在一个实施方案中，用于本文中的组合物和方法的T细胞是非自体(异源的；例如来自供体或细胞系)T细胞。在一个实施方案中，T细胞是来源于T细胞或癌症/转化的T细胞的细胞系。
在一个优选的实施方案中，用于本文中所述的方法和组合物的T细胞是修饰的T细胞。在一个实施方案中，T细胞被修饰成在T细胞表面上表达CAR。在一个优选的实施方案中，CAR对被所述方法或组合物所靶向的癌症具有特异性。在一个实施方案中，T细胞被修饰成表达细胞表面蛋白或细胞因子。修饰的T细胞的示例性的非限制性实例描述于美国专利号8,906,682；PCT专利公布号WO 2013154760和WO 2014055668中；其各自通过引用完整地结合于此。
在一个实施方案中，T细胞是T细胞系。示例性的T细胞系包括美国专利号5,272,082(其通过引用完整地结合于此)中描述的T-ALL细胞系。
抗体
免疫疗法还涉及利用抗肿瘤抗体的治疗。即，对特定类型的癌症(例如，目标癌细胞表达的细胞表面蛋白)具有特异性的抗体可被施用于患有癌症的患者。所述抗体可以是单克隆抗体，多克隆抗体，嵌合抗体，抗体片段，人抗体，人源化抗体或非人抗体(例如鼠，山羊，灵长类动物等)。治疗性抗体可以对任何肿瘤特异性或肿瘤相关抗原具有特异性。参见，例如Scott等，Cancer Immunity 2012，12：14(其通过引用完整地结合于此)。
在一个实施方案中，免疫治疗剂是抗癌抗体。非限制性实例包括曲妥珠单抗(trastuzumab)贝伐珠单抗(bevacizumab)西妥昔单抗(cetuximab)帕尼单抗(panitumumab)伊匹木单抗(ipilimumab)利妥昔单抗(rituximab)阿仑珠单抗(alemtuzumab)奥法木单抗(ofatumumab)吉妥珠单抗奥佐米星(gemtuzumab ozogamicin)brentuximab vedotin90Y-替伊莫单抗(90Y-ibritumomab tiuxetan)和131I-托西莫单抗(131I-tositumomab)
另外的抗体提供在表1中。
表1.抗癌抗体
化疗剂
在本发明的一个方面中，抗驱走性试剂与化疗剂联合施用。所述化疗剂可以是对一种或多种类型的癌症具有治疗效果的任何试剂。本领域中目前已知多种化疗剂。化疗药物的类型的非限制性实例包括烷基化剂，抗代谢药，抗-肿瘤抗生素，拓扑异构酶抑制剂，有丝分裂抑制剂，皮质甾醇等。
化疗药的非限制性实例包括：氮芥(nitrogen mustards)，如mechlorethamine(氮芥)，苯丁酸氮芥(chlorambucil)，环磷酰胺(cyclophosphamide)异环磷酰胺(ifosfamide)和美法仑(melphalan)；亚硝基脲类(Nitrosoureas)，如链脲霉素(streptozocin)，卡莫司汀(carmustine)(BCNU)，和洛莫司汀(lomustine)；磺酸烷基酯，如白消安(busulfan)；三嗪类，如达卡巴嗪(dacarbazine)(DTIC)和替莫唑胺(temozolomide)乙烯亚胺类，如噻替派(thiotepa)和六甲蜜胺(altretamine)(六甲基三聚氰胺)；铂药物，如顺铂(cisplatin)，卡铂(carboplatin)，和奥沙利铂(oxalaplatin)；5-氟尿嘧啶(5-FU)；6-巯嘌呤(6-MP)；卡培他滨(Capecitabine)阿糖胞苷(Cytarabine)氟尿苷(Floxuridine)；氟达拉滨(Fludarabine)；吉西他滨(Gemcitabine)羟基脲；甲氨蝶呤(Methotrexate)；培美曲塞(Pemetrexed)蒽环类，如柔红霉素(Daunorubicin)，多柔比星(Doxorubicin)表柔比星(Epirubicin)，伊达比星(Idarubicin)；放线菌素D(Actinomycin-D)；博来霉素(Bleomycin)；丝裂霉素C(Mitomycin-C)；米托蒽醌(Mitoxantrone)；托泊替康(Topotecan)；伊立替康(Irinotecan)(CPT-11)；依托泊苷(Etoposide)(VP-16)；替尼泊苷(Teniposide)；米托蒽醌；紫杉烷类：紫杉醇(paclitaxel)和多西他赛(docetaxel)埃坡霉素(Epothilones)：伊沙匹隆(ixabepilone)长春花生物碱类：长春碱(vinblastine)长春新碱(vincristine)和长春瑞滨(vinorelbine)雌莫司汀(Estramustine)泼尼松(Prednisone)；甲泼尼龙(Methylprednisolone)地塞米松(Dexamethasone)L-天冬酰胺酶；硼替佐米(bortezomib)另外的化疗剂列在例如美国专利申请公布号2008/0300165中，其通过引用完整地结合于此。
化疗药的剂量和给药方案是本领域中已知的。技术人员可以基于包括以下各项的因素容易地确定使用合适的剂量用药方案：施用的一种或多种化疗剂，治疗的癌症类型，癌症的阶段，患者的年龄和状态，患者的体型，肿瘤的位置等。
放疗剂
在本发明的一个方面中，抗驱走性试剂与放疗剂联合施用。所述放疗剂可以是对一种或多种类型的癌症具有治疗效果的任何此种试剂。本领域中目前已知多种放疗剂。放疗药的类型的非限制性实例包括X射线，伽马射线和带电粒子。在一个实施方案中，所述放疗剂通过体外机器递送(外部光束放射疗法)。在一个优选的实施方案中，所述放疗剂被置于体内肿瘤/癌细胞附近(近程方式治疗)或是全身放射疗法。
外部光束放射疗法可以通过任何手段施用。外部光束放射疗法的示例性非限制性类型包括直线加速器施用的放射疗法，3维适形放射疗法(3D-CRT)，强度调制放射疗法(IMRT)，图像导引放射疗法(IGRT)，体层治疗(tomotherapy)，立体定位性放射外科手术，光子疗法，立体定位性身体放射疗法，质子束疗法和电子束疗法。
内部放射疗法(近程放射治疗)可以通过任何技术或试剂进行。内部放射疗法的示例性非限制性类型包括可置于肿瘤附近或内部的任何放射性试剂，如镭-226(Ra-226)，钴-60(Co-60)，铯-137(Cs-137)，铯-131，铱-192(Ir-192)，金-198(Au-198)，碘-125(I-125)，钯-103，钇-90等。此种试剂可以通过种子(seeds)、针或任何其他施用途径施用，并且可以是暂时性的或永久性的。
全身放射疗法可以通过任何技术或试剂进行。全身放射疗法的示例性非限制性类型包括放射性碘，替伊莫单抗(ibritumomab tiuxetan)托西莫单抗(tositumomab)和碘I 131托西莫单抗钐-153-lexidronam氯化锶-89间碘苯甲胍(metaiodobenzylguanidine)，镥-177，钇-90，锶-89等。
在一个实施方案中，还向患者施用放射增敏剂。放射增敏剂增加放射线对癌细胞的破坏作用。
放疗剂的剂量和施用方案是本领域中公知的。熟练的临床医师可以基于包括以下各项的因素容易地确定使用合适的剂量用药方案：施用的一种或多种试剂，治疗的癌症类型，癌症的阶段，肿瘤的位置，患者的年龄和状态，患者的体型等。
抗癌疫苗
在本发明的一个方面中，将抗驱走性试剂与抗癌疫苗(也被称为癌症疫苗)联合施用。抗癌疫苗是通过刺激免疫反应以杀死癌细胞来治疗已有的癌症或防止癌症发展的疫苗。在一个优选的实施方案中，抗癌疫苗治疗已有的癌症。
所述抗癌疫苗可以是对一种或多种类型的癌症具有治疗效果的任何此种疫苗。本领域中目前已知多种抗癌疫苗。此种疫苗包括，但不限于，dasiprotimut-T，Sipuleucel-T，talimogene laherparepvec，HSPPC-96复合物(Vitespen)，L-BLP25，gp100黑素瘤疫苗，以及当施用于患者时刺激对癌细胞的免疫反应的任何其他疫苗。
癌症
可以通过本文中所述的化合物和方法治疗的癌症或肿瘤包括，但不限于：胆道癌；脑癌，包括胶质母细胞瘤(glioblastomas)和髓母细胞瘤(medulloblastomas)；乳腺癌；宫颈癌；绒毛膜癌；结肠癌；子宫内膜癌；食管癌，胃癌；血液学肿瘤，包括急性淋巴细胞性和髓性白血病；多发性骨髓瘤；AIDS相关白血病和成人T细胞白血病淋巴瘤；上皮内肿瘤，包括鲍恩病(Bowen′s disease)和佩吉特病(Paget′s disease)；肝癌(hepatocarcinoma)；肺癌；淋巴瘤，包括霍奇金病(Hodgkin′s disease)和淋巴细胞性淋巴瘤；神经母细胞瘤(neuroblastomas)；口腔癌，包括鳞状细胞癌；卵巢癌，包括起于上皮细胞、基质细胞(stromal cell)、生殖细胞和间充质细胞(mesenchymal cell)的那些；胰腺癌；前列腺癌；直肠癌；肉瘤，包括平滑肌肉瘤(leiomyosarcoma)，横纹肌肉瘤(rhabdomyosarcoma)，脂肪肉瘤(liposarcoma)，纤维肉瘤(fibrosarcoma)和骨肉瘤(osteosarcoma)；皮肤癌，包括黑素瘤，卡波西肉瘤(Kaposi′s sarcoma)，基底细胞癌和鳞状细胞癌；睾丸癌，包括生殖细胞瘤(精原细胞瘤，非精原细胞瘤[畸胎瘤，绒毛膜癌])，基质肿瘤和生殖细胞瘤；甲状腺癌，包括甲状腺腺癌和髓癌；和肾癌，包括腺癌和肾母细胞瘤(Wilms tumor)。在重要的实施方案中，逃避免疫识别的癌症或肿瘤包括胶质瘤，结肠癌，结直肠癌，淋巴细胞源性白血病，绒毛膜癌和黑素瘤。
在一个优选的实施方案中，肿瘤是实体瘤。在一个实施方案中，肿瘤是白血病。在尤其优选的实施方案中，所述肿瘤过表达CXCL12。在一个实施方案中，CXCL12的肿瘤表达可以在施用本文中所述的组合物之前进行评估。例如，将使用本文中所述的方法和/或组合物来治疗患有被确定为表达或过表达CXCL12的肿瘤的患者。
在一个实施方案中，所述肿瘤是脑肿瘤。预期的是，脑肿瘤，例如，不宜手术的脑肿瘤，可以被注射以本文中所述的组合物。在一个实施方案中，经由进入脑肿瘤内或附近的血管中的导管将抗驱走性试剂直接施用到脑肿瘤。以下描述对导管或微导管施用的进一步讨论。
剂量和给药
本文中所述的组合物以有效量施用。有效量取决于施用方式，受治的特定病症以及所需的结果。如以上所时论的，其还取决于病症的阶段，受试者的年龄和身体状况，并行疗法的性质(如果有的话)，以及医师公知的类似因素。对于治疗性应用，其是足以实现理想的医学结果的量。
本文中所述的试剂可以通过任何合适的方法施用。抗癌试剂(包括化疗剂、放疗剂和抗癌疫苗)以及免疫治疗剂的剂量，治疗方案和施用途径是本领域中已知的并且/或在熟练的临床医师的能力内，其能够基于治疗的类型、癌症的类型等确定。
通常，本发明的抗驱走性试剂的剂量为约5mg/kg体重/天至约50mg/kg/天(包括其间的所有值和范围，包括端点)。在一个实施方案中，所述剂量为每天约10mg/kg至约50mg/kg。在一个实施方案中，所述剂量为每天约10mg/kg至约40mg/kg。在一个实施方案中，所述剂量为每天约10mg/kg至约30mg/kg。在一个优选的实施方案中，所述剂量为每天约10mg/kg至约20mg/kg。在一个实施方案中，所述剂量不超过约50mg/天。
在一个实施方案中，抗驱走性试剂的剂量为约70mg/kg/周至约350mg/kg/周(包括其间的所有值和范围，包括端点)。在一个实施方案中，抗驱走性试剂的剂量为约70mg/kg/周。在一个实施方案中，抗驱走性试剂的剂量为约80mg/kg/周。在一个实施方案中，抗驱走性试剂的剂量为约90mg/kg/周。在一个实施方案中，抗驱走性试剂的剂量为约100mg/kg/周。在一个实施方案中，抗驱走性试剂的剂量为约110mg/kg/周。在一个实施方案中，抗驱走性试剂的剂量为约120mg/kg/周。在一个实施方案中，抗驱走性试剂的剂量为约130mg/kg/周。在一个实施方案中，抗驱走性试剂的剂量为约140mg/kg/周。在一个实施方案中，抗驱走性试剂的剂量为约150mg/kg/周。在一个实施方案中，抗驱走性试剂的剂量为约160mg/kg/周。在一个实施方案中，抗驱走性试剂的剂量为约170mg/kg/周。在一个实施方案中，抗驱走性试剂的剂量为约180mg/kg/周。在一个实施方案中，抗驱走性试剂的剂量为约190mg/kg/周。在一个实施方案中，抗驱走性试剂的剂量为约200mg/kg/周。在一个实施方案中，抗驱走性试剂的剂量为约210mg/kg/周。在一个实施方案中，抗驱走性试剂的剂量为约220mg/kg/周。在一个实施方案中，抗驱走性试剂的剂量为约230mg/kg/周。在一个实施方案中，抗驱走性试剂的剂量为约240mg/kg/周。在一个实施方案中，抗驱走性试剂的剂量为约250mg/kg/周。在一个实施方案中，抗驱走性试剂的剂量为约260mg/kg/周。在一个实施方案中，抗驱走性试剂的剂量为约270mg/kg/周。在一个实施方案中，抗驱走性试剂的剂量为约280mg/kg/周。在一个实施方案中，抗驱走性试剂的剂量为约290mg/kg/周。在一个实施方案中，抗驱走性试剂的剂量为约300mg/kg/周。在一个实施方案中，抗驱走性试剂的剂量为约310mg/kg/周。在一个实施方案中，抗驱走性试剂的剂量为约320mg/kg/周。在一个实施方案中，抗驱走性试剂的剂量为约330mg/kg/周。在一个实施方案中，抗驱走性试剂的剂量为约340mg/kg/周。在一个实施方案中，抗驱走性试剂的剂量为约350mg/kg/周。
在本发明的一个方面中，抗驱走性试剂与免疫治疗剂被顺序施用。即，施用抗驱走性试剂持续足以具有抗-驱走作用的时间段，随后施用免疫治疗剂。在一个实施方案中，任选地施用抗癌疗法。
在本发明的一个方面中，抗驱走性试剂的施用是波动的。在一个实施方案中，每1小时至每24小时，例如每1小时，2小时，3小时，4小时，5小时，6小时，7小时，8小时，9小时，10小时，11小时，12小时，13小时，14小时，15小时，16小时，17小时，18小时，19小时，20小时，21小时，22小时，23小时，或24小时施用一定量的抗驱走性试剂。在一个实施方案中，每1天，2天，3天，4天，5天，6天，7天，8天，9天或10天施用一定量的抗驱走性试剂。
在本发明的一个方面中，以波动的方式施用一定剂量的抗驱走性试剂，持续足以具有抗-驱走作用(例如减弱肿瘤细胞的驱走作用)的时间段。在一个实施方案中，所述时间段为约1天至约10天。例如，所述时间段可以是1天，2天，3天，4天，5天，6天，7天，8天，9天或10天。
在本发明的一个方面中，在施用抗驱走性试剂的时间段后施用免疫治疗剂。在一个实施方案中，在抗驱走性试剂减弱癌细胞/肿瘤的驱走作用的时间段期间施用免疫治疗剂。免疫治疗剂施用的时间长度和方式将取决于以下各项而变化：使用的免疫治疗剂，受治肿瘤类型，患者状态等。确定所述参数在熟练的临床医师的能力范围内。
在一个实施方案中，抗驱走性试剂和免疫治疗剂的施用是交替的。在一个优选的实施方案中，交替施用抗驱走性试剂和免疫治疗剂，直至患者状态改善。改善包括，但不限于，肿瘤和/或其转移瘤尺寸减小，肿瘤和/或其转移瘤消除，癌症消除，和/或癌症的至少一种症状减弱。
多种施用途径是可用的。通常，本发明的方法可以使用医学上可接受的任何施用形式来实施，这意指产生有效水平的活性化合物而不引起临床上不可接受的不利作用的任何形式。
施用形式包括口服、直肠、局部、鼻、皮内或肠胃外途径。术语″肠胃外″包括皮下、静脉内、肌肉内或输注。静脉内或肌肉内途径不是特别适合于长期治疗和预防。然而，其在紧急情况下可能是优选的。口服施用由于对患者以及用药时间安排的便利性而对于预防性治疗是优选的。当在某些实施方案中治疗性地使用肽时，理想的施用途径是通过肺部气溶胶剂。用于制备含有肽的气溶胶递送系统的技术是本领域技术人员公知的。通常，此种系统应当使用不显著破坏抗体的生物学性质(如互补位结合能力)的组分(参见，例如，Sciarra和Cutie，″Aerosols″，Remington′s Pharmaceutical Sciences，第18版，1990，pp 1694-1712；其通过引用结合)。本领域技术人员能够通过有限的实验容易地确定用于制备抗体或肽气溶胶的各种参数和条件。
适用于口服施用的组合物可以呈现为分开的单位，如胶囊，片剂，锭剂，其各自含有预定量的活性剂。其他组合物包括在水性液体或非水性液体中的混悬剂，如糖浆，酏剂或乳剂。
用于肠胃外施用的制剂包括无菌水溶液或非水性溶液、混悬剂和乳剂。非水性溶剂的实例有丙二醇，聚乙二醇，植物油(如橄榄油)，和可注射有机酯(如油酸乙酯)。水性载体包括水，醇/水溶液，乳剂或混悬剂，包括盐水和缓冲的介质。肠胃外赋形剂包括氯化钠溶液，林格葡萄糖(Ringer′s dextrose)，葡萄糖和氯化钠，乳酸化的林格或不挥发性的25油(lactated Ringer′s or fixed 25oils)。静脉内赋形剂包括液体和营养补充物，电解质补充物(如基于林格葡萄糖的那些)等。防腐剂和其他添加剂也可以存在，如，例如，抗微生物剂，抗氧化剂，螯合剂和惰性气体等。较低的剂量将产生自其他施用形式，如静脉内施用。在应用的初始剂量的受试者响应不充分的情况下，可以在患者耐受允许的程度下施用更高的剂量(或通过不同的更集中的递送途径而在有效性上更高的剂量)。考虑每天多个剂量，以实现化合物的合适的全身水平。
在一个实施方案中，抗驱走性试剂经肠胃外施用。在一个实施方案中，抗驱走性试剂经由进入肿瘤附近的血管中的微导管而被施用。在一个实施方案中，抗驱走性试剂经由进入肿瘤内的血管中的微导管而被施用。在一个实施方案中，抗驱走性试剂经皮下施用。在一个实施方案中，抗驱走性试剂经皮内施用。
其他递送系统可以包括定时释放、延迟释放或持续释放递送系统。此种系统可以避免重复施用抗驱走性试剂，这增加了受试者和医生的便利性。多种类型的释放递送系统是可用的并且是本领域普通技术人员已知的。其包括基于聚合物的系统如聚(丙交酯-乙交酯)，共聚草酸酯，聚已酸内酯，聚酯酰胺，聚原酸酯，聚羟基丁酸和聚酐。含有药物的前述聚合物的微胶囊描述于，例如，美国专利号5,075,109。递送系统还包括非聚合物系统，即：脂质，包括固醇如胆固醇，胆固醇酯和脂肪酸或中性脂肪如甘油单酯，甘油二酯和甘油三酯；水凝胶释放系统；sylastic系统；基于肽的系统；蜡包衣；使用常规粘合剂和赋形剂的压缩片剂；部分融合的植入物等。
在一个实施方案中，在定时释放、延迟释放或持续释放递送系统中施用抗驱走性试剂。在一个实施方案中，包含抗驱走性试剂的定时释放、延迟释放或持续释放递送系统被直接插入到肿瘤中。在一个实施方案中，包含抗驱走性试剂的定时释放、延迟释放或持续释放递送系统被植入到患者中肿瘤附近。另外的可植入制剂描述于例如美国专利申请公布号2008/0300165(其通过引用完整地结合于此)。
此外，本发明的重要的实施方案包括基于泵的硬件递送系统，其中一些适用于植入。此种可植入泵包括受控释放微芯片。一种优选的受控释放微芯片描述于Santini，J T Jr.等，Nature，1999，397：335-338，其内容通过引用清楚地结合于此。
当施用时，本发明的药物制剂以药用量并且以药用组合物施用。此种制剂可以常规地含有盐，缓冲剂，防腐剂，相容性载体，以及任选地其他治疗剂。当在药物中使用时，盐应当是药用的，但是非药用盐可以方便地用于制备其药用盐，并且并不从本发明的范围中排除。此种药理学和制药可用的盐包括，但不限于，由以下的酸制备的盐：盐酸，氢溴酸，硫酸，硝酸，磷酸，马来酸，乙酸，水杨酸，柠檬酸，甲酸，丙二酸，琥珀酸等。此外，药用盐可被制备成碱金属或碱土金属盐，如钠盐，钾盐或钙盐。
治疗方法
在本发明的一个方面中提供用于治疗有此需要的患者中的癌症的方法，所述方法是通过施用抗驱走性试剂进行。在一个优选的实施方案中，抗驱走性试剂与免疫治疗剂联合施用。
在一个方面，本发明涉及通过施用抗驱走性试剂来抑制有此需要的患者中的肿瘤转移。不受理论限制，据信本文中所述的抗驱走性试剂可以动员癌细胞离开其所在的治疗和/或免疫细胞无法接近的小生境，并且进入免疫治疗剂、抗癌剂和/或免疫细胞可靶向细胞的循环中。令人惊奇的是，此种动员不增加肿瘤转移，而是减少转移。
在一个方面，本发明涉及用于杀死表达足以产生驱走作用的量的趋化因子的癌细胞的方法，所述方法包括：
a)周期性地将所述细胞与有效量的抗驱走性试剂接触，持续足以减弱所述驱走作用的时间段；
b)将所述细胞与至少一种免疫治疗剂接触；和
c)当需要时，任选地重复a)和b)，以杀死所述细胞。
在一个方面，本发明涉及用于杀死表达足以产生驱走作用的量的趋化因子的癌细胞的方法，所述方法包括：
a)周期性地将所述细胞与有效量的抗驱走性试剂接触，持续足以抑制所述驱走作用的时间段；
b)任选地将所述细胞与抗癌剂接触；
c)将所述细胞与至少一种免疫治疗剂接触；
d)任选地将所述细胞与抗癌剂接触；和
e)当需要时，任选地重复a)和b)，以杀死所述细胞。
在一个方面，本发明涉及用于治疗哺乳动物中的肿瘤的方法，所述肿瘤表达足以产生驱走作用的量的趋化因子，所述方法包括：
a)周期性地向所述哺乳动物施用有效量的抗驱走性试剂，持续足以减弱所述驱走作用的时间段；
b)向所述哺乳动物施用至少一种免疫治疗剂；和
c)当需要时，任选地重复a)和b)，以提供所述哺乳动物状态的改善。
在一个实施方案中，在施用抗驱走性试剂的时间段之后施用免疫治疗剂。在一个实施方案中，在驱走作用被减弱的时间段期间施用免疫治疗剂。
在一个实施方案中，任选地施用抗癌剂。抗癌剂可以在抗驱走性试剂之后施用，与抗驱走性试剂一起施用，在免疫治疗剂之前施用，与免疫治疗剂一起施用，在免疫治疗剂之后施用，或以其任意组合施用。在一个优选的实施方案中，在施用抗驱走性试剂之后并且在施用免疫治疗剂之前(例如在步骤a)和b)之间)施用抗癌剂。
在一个方面，本发明涉及用于治疗哺乳动物中的肿瘤的方法，所述肿瘤表达足以产生驱走作用的量的趋化因子，所述方法包括：
a)周期性地施用有效量的抗驱走性试剂，持续足以抑制所述驱走作用的时间段；
b)任选地施用抗癌剂；
c)施用至少一种免疫治疗剂；
d)任选地施用抗癌剂；和
e)当需要时，任选地重复a)和b)，直至患者状态改善。
在一个实施方案中，趋化因子是CXCL12。在一个实施方案中，癌细胞是实体瘤细胞。在一个实施方案中，癌细胞是白血病细胞。在一个实施方案中，在完成将细胞与抗驱走性试剂接触的约3天内施用免疫治疗剂。在一个实施方案中，在完成将细胞与抗驱走性试剂接触的约1天内施用免疫治疗剂。
在一个方面，本发明涉及用于治疗哺乳动物中的实体瘤的方法，所述肿瘤表达的CXCL12的浓度足以产生驱走作用，所述方法包括向所述哺乳动物施用有效量的抗驱走性试剂，持续足以抑制所述驱走作用的时间段，之后向所述哺乳动物施用免疫治疗剂。在一个实施方案中，癌细胞是实体瘤细胞。在一个实施方案中，癌细胞是白血病细胞。在一个实施方案中，在完成施用抗驱走性试剂的约3天内施用免疫治疗剂。在一个实施方案中，在完成施用抗驱走性试剂的约1天内施用免疫治疗剂。
在一个方面，本发明涉及表达趋化因子的实体瘤细胞，所述细胞已经与抗驱走性试剂和化疗剂接触。在一个实施方案中，趋化因子是CXCL12。在一个实施方案中，癌细胞是实体瘤细胞。在一个实施方案中，癌细胞是白血病细胞。
在一个方面，本发明涉及局部治疗患者中的以足以产生驱走作用的浓度表达CXCL12的实体瘤的方法，所述方法包括：
a)鉴别供养所述肿瘤的动脉或微动脉；
b)经动脉内将导管或微导管置于所述动脉或微动脉中，邻近进入所述肿瘤的血流处，其中所述导管或微导管包含用于递送液体从其中通过的腔体和用于递送所述液体的装置；
c)周期性地通过所述导管或所述微导管将有效量的抗驱走性试剂施用到供养所述肿瘤的动脉或微动脉，从而抑制由所述肿瘤引起的所述驱走作用；和
d)随后向所述患者施用有效量的免疫治疗剂。
在一个实施方案中，任选地施用抗癌剂。抗癌剂可以在抗驱走性试剂之后施用，与抗驱走性试剂一起施用，在免疫治疗剂之前施用，与免疫治疗剂一起施用，在免疫治疗剂之后施用，或以其任意组合施用。在一个优选的实施方案中，在施用抗驱走性试剂之后并且在施用免疫治疗剂之前(例如在步骤c)和d)之间)施用抗癌剂。
在一个实施方案中，抗癌剂使用导管、微导管、外部放射源施用，或被注射或植入到肿瘤附近或肿瘤内。在一个实施方案中，所述方法还包括重复步骤a，b，c和/或d，直至患者状态改善。在一个实施方案中，抗癌剂是放疗剂，以致放疗剂导致供养所述肿瘤的至少一个血管消融。
试剂盒
本发明还涉及多部件试剂盒，所述试剂盒包括本文中所述的抗驱走性试剂和至少一种免疫治疗剂。在一个实施方案中，多部件试剂盒包括第一容器和第二容器，所述第一容器包含抗驱走性试剂，所述第二容器包含免疫治疗剂。在一个实施方案中，多部件试剂盒还包含在可读介质中的使用说明，其用于抗驱走性试剂和免疫治疗剂的剂量用药和/或施用。
当在本文中使用时，术语“可读介质”是指可由例如人或机器读取的数据表示。人可读形式的非限制性实例包括小册子、插页或其他书面形式。机器可读形式的非限制性实例包括以机器(例如，计算机，平板电脑和/或智能手机)可读形式提供(即，存储和/或传输)信息的任何机制。例如，机器可读介质包括只读存储器(ROM)；随机存取存储器(RAM)；磁盘存储介质；光存储介质；和闪速存储器设备。在一个实施方案中，机器可读介质是CD-ROM。在一个实施方案中，机器可读介质是USB驱动器。在一个实施方案中，机器可读介质是快速响应码(Quick Response Code)(QR码)或其他矩阵条形码。
实施例
以下实施例仅用于说明性目的，并且不应当被视为对所要求的发明的限制。存在多种本领域技术人员可用的备选技术和方法，其将类似地允许人们成功的实施本发明。
实施例1：
给小鼠注射来自表达高水平的CXCL12的肿瘤的肿瘤细胞(皮下注射)并允许肿瘤发展。在肿瘤已经形成后，给小鼠注射(在与肿瘤同侧的皮下)AMD3100或赋形剂，每天一次持续5天。
AMD3100的最终剂量后的一至三天，经由腹膜内注射给小鼠注射NK-92细胞或赋形剂，18小时后进行肿瘤生长测定。小鼠中的肿瘤生长被NK-92细胞治疗延迟，但是在未施用AMD3100的小鼠中在中断治疗后很快恢复。预期，在利用NK-92细胞的治疗之前利用AMD3100的治疗具有协同作用，以致共同治疗导致的肿瘤生长延迟比单独的NK-92细胞导致的更长。