白及苷在制备肝素拮抗药物方面的应用的制作方法

本发明涉及一种中药材有效成分的用途，具体地说涉及白及苷在制备肝素拮抗药物中的新应用。

背景技术：

随着外科技术的发展，手术中肝素的应用越来越频繁，临床上主要用于血栓栓塞性疾病、心肌梗死、心血管手术、心脏导管检查、体外循环、血液透析等、尤其是在心脏外科领域使用更普遍。同时肝素的使用易引起自发性出血，表现为各种黏膜出血、关节腔积血和伤口出血等，重度过量时，还会危及患者生命，此时必须注射肝素解毒剂。

现有药物中鱼精蛋白(protamine)作为肝素唯一的解毒剂，从1937年被发现以来便在外科手术中发挥了不可替代的作用。其对肝素术后的抗凝作用的逆转是外科史上重要的里程碑，常被制成注射剂而使用于临床，但鱼精蛋白本身有不可避免的副作用和不良反应，如本品快速静脉注射可引起低血压、心动过缓、肺动脉高压、呼吸困难、短暂面部潮红及温热感；过去曾接受过鱼精蛋白或含鱼精蛋白的胰岛素(如中性鱼精蛋白胰岛素)者，易发生抗鱼精蛋白ige介导的高敏或过敏反应；男性不育症或输精管切除者中某些人易发生对鱼精蛋白高敏反应。

同时，由于鱼精蛋白是把鱼的精子的头部分破碎离出来的一种碱性蛋白，具有一定生物活性，在生产上只能从鱼的精子中提取，不能化学合成，就限制了产量。市场上经常出现短缺的现象。目前作为心脏手术的常备药物鱼精蛋白在医院经常出现紧缺状况，甚至全国缺货而又无替代品，导致许多病人不能正常进行手术，严重影响病患者的康复。

因此，开发安全、效果突出，具有极高的临床应用价值和巨大的市场需求的鱼精蛋白替代品，成为当前药物开发的当务之急。

技术实现要素：

针对以上现有技术的不足，提供白及苷在制备肝素拮抗药物方面的应用，即在制药中的新应用。

实现本发明的技术方案为：白及苷在制备肝素拮抗药物方面的应用。

优选地，所述肝素拮抗药物包含有其他药物赋形剂或载体。

优选地，所述肝素拮抗药物的药物剂型包括注射剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂、散剂、滴丸剂和缓释剂。

优选地，给药方式为口服给药或注射给药。

白及苷在制备外科手术中肝素抗凝作用的逆转药物中的应用。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：本发明的白及苷是从具有多年临床应用历史、安全有效的白及药材中分离得到一种单体化合物(militarine)，系纯天然成分，经药效验证其具有明显拮抗肝素的作用，药理作用和鱼精蛋白类似，且不会造成人体过敏等不良反应，安全、低毒，可以开发成为鱼精蛋白替代品而用于临床。

附图说明

图1为白及苷不同浓度对全身肝素化小鼠ct、bt的影响；

图2为白及苷不同时间点对全身肝素化小鼠ct的影响；

图3为白及苷不同浓度对全身肝素化pt、tt、fib、pl的影响；

图4为白及苷不同浓度对全身肝素化p-选择素、txb2，6-keto-pgf1α的影响。

具体实施方式

下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。基于本发明中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本实施例中所采用的白及苷是从植物白及中提取或者通过合成获得，其分子式为c34h46o17，化学名为双[4-(β-d-吡喃葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯。

化学结构为：

所制备的药物可含有药物赋形剂或载体，用于拮抗肝素的作用而用于临床；所述的药物可制备成适于临床使用的药物制剂，包括注射剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂、散剂、滴丸剂、缓释剂；制剂的给药形式主要包括口服给药或注射给药。

为说明本发明白及苷在制备肝素拮抗药物方面的应用取得良好的效果，下面结合具体实验对本发明所取得的效果做进一步说明。

一、白及苷不同浓度对全身肝素化小鼠ct、bt的影响，如图1所示。

通常，小鼠断尾出血时间(bt)和毛细管凝血时间(ct)实验是一种比较经典的用于止血、促凝血中药的活性筛选方法，可综合反映参与止血过程的各种因素如血管、血小板、凝血系统等的功能。其中，bt指在一定条件下血液从自然流出到自然停止所需的时间，能反映血小板的数量和质量以及毛细血管的止血功能；ct是指血液离体后，接触带阴电荷的表面时，ⅻ因子被激活，其后一系列凝血因子相继活化，最后使纤维蛋白原变成纤维蛋白而凝血的时间，其长短主要与各种凝血因子的含量和功能有关。本发明通过考察白及苷在20，40，80，160mg/kg时对正常小鼠和全身肝素化小鼠均无不良反应，说明白及苷毒性小，安全浓度较高，具有很好的安全性。通过考察白及苷对全身肝素化小鼠bt和ct的影响，发现白及苷能显著缩短全身肝素化小鼠的bt和ct值(p<0.01或0.05)，bt缩短率分别22.1％、26.3％和31.9％，ct缩短率分别为8.1％、28.7％、35.0％。结果表明白及苷可有效拮抗肝素钠的抗凝作用，对病理性出血小鼠具有明显的促凝作用。

二、白及苷不同时间点对全身肝素化小鼠ct的影响，如图2所示。

上述结果证实了白及苷具有明显拮抗肝素的作用，但是为了进一步了解白及苷起效时间及持续作用时间，我们分别考察了给药后0.5、1、3、6、12、24h后白及苷对肝素化小鼠的凝血时间(ct)的影响。结果发现从0.5h到12h时间内，肝素钠对空白组小鼠相比，ct值增加，均有统计学差异(p<0.01或0.05)，24h后，肝素钠模型组ct值与空白组相比无统计学差异，抗凝作用消失。而白及苷在0.5h到12h时间内相对于肝素钠模型组相比，ct值缩短，均有统计学差异(p<0.01或0.05)，且在0.5h时，80mg/kg的白及苷即可降低肝素钠70％的抗凝作用，并在6h和12h时拮抗作用分别达到152％和178％，24h后ct值与肝素钠模型组相比无统计学差异，与空白组小鼠相比无统计学差异(p>0.05)。该实验结果说明，当体内肝素钠还存在明显抗凝作用时，白及苷可拮抗体内肝素钠的抗凝作用，而当肝素钠的抗凝作用消失时，白及苷不会继续对小鼠产生促凝作用而引发血栓疾病。

三、白及苷不同浓度对全身肝素化小鼠aptt、pt、tt、fib、pl的影响，如图3所示。

凝血过程通常被分为三个途径，分别是内源性凝血途径、外源性凝血途径以及共同凝血途径。pt值主要反映外源性凝血途径，能检测外源性凝血途径中各种凝血因子，若外源凝血途後中因子缺乏，pt值延长，pt值若缩短，则反映药物可能增强外源凝血途後各凝血因子活性。aptt可用于测定内源性途径中凝血因子的检测，能检测除ⅶ因子外的其他血浆凝血因子，其值增加反映凝血因子、ⅸ、ⅺ、ⅻ缺乏或活性降低，若减少则暗示凝血因子活性增加或血液中可能存在促凝血物质。tt值主要反映的是凝血共同途径中纤维蛋白原转化为纤维蛋白的过程中，是否存在异常抗凝。fib值反映体内纤维蛋白原水平，fib对维持体内正常止血与凝血功能发挥重要作用，它既能促使血液凝固而止血，又可阻碍纤维蛋白溶解酶原转变成纤维蛋白溶解酶，从而阻止纤维蛋白溶解，而发挥止血作用。纤溶酶(pl)是指能专一降解纤维蛋白凝胶的蛋白水解酶，是纤溶系统中的一个重要组份，体内凝血和纤溶两系统是相互依存紧密相联的，机体一旦产生凝血反应，也几乎同时激活了纤溶系统，被激活的pl通过负反馈效应降解体内血浆纤维蛋白原，从而避免纤维蛋白的过多凝聚，但过量会破坏血液的平衡，使血液处于活血状态。实验结果证实，白及苷可使肝素化小鼠的tt值缩短，fib含量增加，降低肝素化小鼠的血浆中pl含量，对aptt、pt值无显著影响。说明白及苷可激活凝血-纤溶系统，调节体内某些凝血纤溶因子含量而拮抗肝素的抗凝作用。

四、白及苷不同浓度对全身肝素化小鼠p-选择素、txb2，6-keto-pgf1α的影响，如图4所示。

血小板是一种有质膜无细胞核，形状无规则的血细胞，是血液中的一种有形成分，它参与止血过程的许多环节，在止血过程中起重要作用。p-选择素(p-s)是最具特异的血小板活化的分子标志物，血小板在刺激物的作用下发生变形、黏附、聚集和释放反应与其颗粒膜蛋白p-s表达存在正相关。txa2和pgi2之间的动态平衡是维持正常止血功能的基础。txa2是花生四烯酸环氧化酶重要的代谢产物，txa2的生成起始于血小板膜上的磷脂，在血小板内血栓素合成酶的催化下生成，具有很强的聚集血小板与缩血管作用，产生止血作用；pgi2主要在血管内皮细胞生成，则是较强的血小板聚集抑制剂，具有抑制血小板的黏附、聚集和释放反应，抑制血小板的促凝活性等作用；由于txa2和pgi2不稳定，因此常将txa2和pgi2稳定的代谢产物txb2和6-keto-pgf1α作为判断其浓度的指标。实验结果证实，白及苷可使肝素化小鼠p-s、txb2含量增加，6-keto-pgf1α生成减少。表明白及苷也可作用于血小板系统，调节或促使血小板释放某些促凝因子，从而拮抗肝素对血液的抗凝作用。

综合上述实验结论，证实了白及苷对肝素造成的出血具有明显的拮抗作用，表现出良好的止血作用。由实验结果可知白及苷可通过激活血小板系统，激活血小板膜糖蛋白p-s的活化，促进血小板释放诱导聚集因子txb2，抑制6-keto-pgf1a的作用；激活凝血纤溶系统，缩短小鼠血浆tt值，增加血浆中fib含量，抑制pl生成，从而加速血液凝固，抑制纤维蛋白的降解，进而缩短小鼠bt、ct值而发挥拮抗肝素对血液的抗凝作用。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。