本发明涉及纳米材料
技术领域：
，特别涉及一种阳离子脂质体纳米组合物及其制备方法和应用。
背景技术：
：脂质体是由磷脂等类脂形成的双分子层的完全封闭的多层囊泡，可包封水溶性和脂溶性两种物质，具有靶向高效、缓释可控和安全无毒的特点。它具有与生物膜相似的结构，可以透过皮肤角质层达到相应的作用部位并维持一定时间，持久的对局部组织及细胞起到营养、保护或治疗的作用，目前已成为第五代药物载体。按电荷性质，脂质体可分为阳离子脂质体、中性脂质体和阴离子脂质体。其中，阳离子脂质体具有可自然降解、无毒无免疫原胜、可重复转染等优点，一直以来都是非病毒基因载体领域的研究热点。阳离子脂质体通常是用作基因载体，与dna或rna复合，保护其不被灭活或被核酸酶降解，携带基因可转运至特定部位，并且要保证转染过程方便易行，重现性好。因此，现有文献资料报道的阳离子脂质体组合物主要强调的特点是：①与基因复合过程比较容易；②可自然降解、无毒无免疫原胜；③保护dna或rna不被灭活或被核酸酶降解；④携带的基因可转运至特定部位；⑤转运过程方便易行，转染率高，重现性好。因为用作基因载体，需要保证较高的基因转染率，现有技术中的阳离子脂质体组合物通常由细胞转染素(阳离子两亲化合物)、中性脂质、中性成分、基因等成分组成，主要应用在基因治疗等医学领域，而没有能够用于化妆品和透皮给药药品领域的阳离子脂质体组合物。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种阳离子脂质体纳米组合物及其制备方法和应用。本发明提供的阳离子脂质体纳米组合物稳定性好、载药量高、皮肤透过性和皮肤滞留性好，能够用于化妆品和透皮给药药品制备领域。本发明提供了一种阳离子脂质体纳米组合物，包括以下质量含量的组分：阳离子两亲化合物0.1～5.0％，中性脂质0.5～10.0％，助乳化剂10～50％，活性物0.1～10.0％，稳定剂0.1～2.0％，防腐剂0.01～5.0％，以及余量的水。优选的，所述阳离子脂质体纳米组合物包括以下质量含量的组分：阳离子两亲化合物0.2～4.0％，中性脂质1.0～8.0％，助乳化剂20～40％，活性物0.5～5％，稳定剂0.5～1.5％，防腐剂0.05～3.0％，以及余量的水。优选的，所述阳离子两亲化合物包括溴化铵类阳离子两亲化合物和蛋白类阳离子两亲化合物中的一种或几种。优选的，所述中性脂质包括二油酰磷脂酰乙醇胺、大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、氢化蛋黄卵磷脂和胆固醇中的一种或几种。优选的，所述助乳化剂包括多元醇类乳化剂、二元醇单醚类乳化剂和聚醚类乳化剂中的一种或几种。优选的，所述活性物包括美白类活性物、抗氧化类活性物和保湿类活性物中的一种或几种。优选的，所述稳定剂包括黄原胶、羟丙甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羧乙基纤维素、明胶、瓜尔胶、阿拉伯胶和卡波姆中的一种或几种。优选的，所述阳离子脂质体纳米组合物的粒径为30～500nm，所述阳离子脂质体纳米组合物的zeta电位为0～+60mv。本发明还提供了上述技术方案所述阳离子脂质体纳米组合物的制备方法，包括以下步骤：(1)将阳离子两亲化合物、中性脂质、助乳化剂和活性物混合，得到油相；(2)将稳定剂与水混合，得到水相；(3)所述步骤(1)得到的油相、所述步骤(2)得到的水相与防腐剂混合，得到混合溶液；(4)将所述步骤(3)得到的混合溶液进行均质处理，得到阳离子脂质体纳米组合物；所述步骤(1)和步骤(2)没有时间先后顺序。本发明还提供了上述技术方案所述阳离子脂质体纳米组合物或按照上述技术方案所述制备方法制备的阳离子脂质体纳米组合物在化妆品和透皮给药药品制备中的应用。本发明提供了一种阳离子脂质体纳米组合物，包括以下质量含量的组分：阳离子两亲化合物0.1～5.0％，中性脂质0.5～10.0％，助乳化剂10～50％，活性物0.1～10.0％，稳定剂0.1～2.0％，防腐剂0.01～5.0％，以及余量的水。本发明提供的阳离子脂质体纳米组合物中活性物含量高，实现了较大的载药量；阳离子两亲化合物带正电荷，可以形成很强的离子键，细胞亲和性良好，具有很强的细胞内渗透力，能够直达皮肤细胞内部，帮助活性物质穿过细胞膜作用于细胞内的靶物质，更好地达到生物目标；中性脂质呈中性，可包载水溶性或脂溶性的活性物，同时可以提高阳离子两亲化合物的细胞渗透功能；助乳化剂和稳定剂保持体系的长期稳定性，因此能够用于化妆品和透皮给药药品制备领域。实验结果表明，本发明提供的阳离子脂质体纳米组合物载药量大，含阿魏酸的阳离子脂质体纳米组合物中活性成分阿魏酸的浓度可达10.0％；12h累积皮肤滞留量可以达到215.9μg/cm2以上，具有优异的皮肤滞留性；成纤维细胞对活性物的摄取量可达37.8μg/ml以上，具有更高的活性物胞内传递效率；放置30天后，产品性状及粒径未发生显著性变化，稳定性好。附图说明图1为实施例2～5及对比例1、对比例2制备的样品的体外透皮试验结果；图2为实施例2、对比例1及对比例2制备的样品的细胞摄取实验结果；图3为实施例5得到的阳离子脂质体纳米组合物的透射电镜图；图4为实施例5得到的阳离子脂质体纳米组合物的粒径分布图；图5为实施例5得到的阳离子脂质体纳米组合物的zeta电位分布图。具体实施方式本发明提供了一种阳离子脂质体纳米组合物，包括以下质量含量的组分：阳离子两亲化合物0.1～5.0％，中性脂质0.5～10.0％，助乳化剂10～50％，活性物0.1～10.0％，稳定剂0.1～2.0％，防腐剂0.01～5.0％，以及余量的水。本发明提供的阳离子脂质体纳米组合物包括质量含量为0.1～5.0％的阳离子两亲化合物，优选为0.2～4.0％，更优选为0.25～3.5％。在本发明中，所述阳离子两亲化合物优选包括溴化铵类阳离子两亲化合物和蛋白类阳离子两亲化合物中的一种或多种，更优选为2～4种。在本发明中，所述溴化铵类阳离子两亲化合物优选包括双十八烷基二甲基溴化铵(ddab)、双十二烷基二甲基溴化铵(bd12)、双十烷基二甲基溴化铵(bd10)、2,3-二油酰氧丙基-1-溴化三甲胺(dotma)中的一种或多种。在本发明中，所述蛋白类阳离子两亲化合物优选包括季铵化胶原蛋白、季铵化小麦蛋白和季铵化大豆蛋白中的一种或几种。在本发明的实施例中，所述阳离子两亲化合物优选为2,3-二油酰氧丙基-1-溴化三甲胺(dotma)和季铵化小麦蛋白的混合物，或者双十八烷基二甲基溴化铵(ddab)、双十二烷基二甲基溴化铵和双十烷基二甲基溴化铵的混合物。当所述阳离子两亲化合物包括溴化铵类阳离子两亲化合物和蛋白类阳离子两亲化合物中的几种时，本发明对所述阳离子两亲化合物中各组分的比例没有特殊的限定，按照任意比例配合即可。在本发明中，所述阳离子两亲化合物带正电荷，细胞亲和性良好，具有很强的细胞内渗透力，能够直达皮肤细胞内部，帮助活性物质穿过细胞膜作用于细胞内的靶物质，更好地达到生物目标。本发明提供的阳离子脂质体纳米组合物包括质量含量为0.5～10.0％的中性脂质，优选为1.0～8.0％，更优选为3.0～5.0％。在本发明中，所述中性脂质优选包括二油酰磷脂酰乙醇胺(dope)、大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、氢化蛋黄卵磷脂和胆固醇中的一种或几种，更优选为2～5种，最优选为二油酰磷脂酰乙醇胺(dope)和氢化蛋黄卵磷脂的混合物，或者大豆卵磷脂和氢化大豆卵磷脂的混合物。当所述中性脂质包括二油酰磷脂酰乙醇胺(dope)、大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、氢化蛋黄卵磷脂和胆固醇中的几种时，本发明对所述中性脂质中各组分的比例没有特殊的限定，按任意比例配合即可。在本发明中，所述中性脂质呈中性，具有稳定的双层膜，可包载水溶性或脂溶性的活性物，同时可以提高阳离子两亲化合物的细胞渗透功能。本发明提供的阳离子脂质体纳米组合物包括质量含量为10～50％的助乳化剂，优选为20～40％，更优选为25～35％。在本发明中，所述助乳化剂优选包括多元醇类乳化剂、二元醇单醚类乳化剂和聚醚类乳化剂中的一种或几种，更优选为2～7种。在本发明中，所述多元醇类乳化剂优选包括乙氧基二甘醇、聚乙二醇、丙二醇、二丙二醇、甘油和1,3-丁二醇中的一种或多种。在本发明中，所述二元醇单醚类乳化剂优选包括二乙二醇单乙基醚和/或乙二醇单苄醚。在本发明中，所述聚醚类乳化剂优选包括丁醇聚醚-9、丁醇聚醚-12、丁醇聚醚-26、丁醇聚醚-35和ppg-26-丁醇聚醚-26中的一种或几种。在本发明的实施例中，所述助乳化剂优选为1,3-丁二醇、二乙二醇单乙基醚和甘油的混合物，或者聚乙二醇、1,2-丙二醇、1,3-丁二醇和甘油的混合物。当所述助乳化剂包括多元醇类乳化剂、二元醇单醚类乳化剂和聚醚类乳化剂中的多种时，本发明对所述助乳化剂中各组分的比例没有特殊的限定，按任意比例配合即可。在本发明中，所述助乳化剂能够促进乳化作用，使体系更加稳定。本发明提供的阳离子脂质体纳米组合物包括质量含量为0.1～10.0％的活性物，优选为0.5～5％，更优选为0.8～1.5％。在本发明中，所述活性物优选包括美白类活性物、抗氧化类活性物和保湿类活性物中的一种或几种，更优选为两种。在本发明中，所述美白类活性物优选包括阿魏酸、光甘草定和熊果酸中的一种或几种。在本发明中，所述抗氧化类活性物优选包括α-硫辛酸、辅酶q10和迷迭香酸中的一种或几种。在本发明中，所述保湿类活性物优选包括神经酰胺和/或植物鞘氨醇。在本发明的实施例中，所述活性物优选为熊果酸、α-硫辛酸、阿魏酸或迷迭香酸。在本发明中，当所述活性物包括美白类活性物、抗氧化类活性物、保湿类活性物中的几种时，本发明对所述活性物中的各组分的比例没有特殊的限定，按任意比例配合即可。本发明对所述活性物的来源没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的市售产品即可。在本发明中，所述活性物为阳离子脂质体纳米组合物体系中被包载的成分，具有功效性，本发明通过各组分将活性物进行包载保护，靶向递送到细胞内部。本发明提供的阳离子脂质体纳米组合物包括质量含量为0.1～2.0％的稳定剂，优选为0.5～1.5％，更优选为0.8～1.2％。在本发明中，所述稳定剂优选包括黄原胶、羟丙甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羧乙基纤维素、明胶、瓜尔胶、阿拉伯胶和卡波姆中的一种或几种，更优选为2～5种。在本发明的实施例中，所述稳定剂优选为明胶和羧乙基纤维素的混合物，或者阿拉伯胶和卡波姆的混合物。当所述稳定剂包括黄原胶、羟丙甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羧乙基纤维素、明胶、瓜尔胶、阿拉伯胶和卡波姆中的多种时，本发明对所述稳定剂中的各组分的比例没有特殊的限定，按照任意比例配合即可。在本发明中，所述稳定剂有增稠、稳定的作用，有助于体系的长期稳定性。本发明提供的阳离子脂质体纳米组合物包括质量含量为0.01～5.0％的防腐剂，优选为0.05～3.0％，更优选为0.1～1.0％。在本发明中，所述防腐剂优选包括苯氧乙醇、甲基异噻唑啉酮、山梨酸钾、dmdm乙内酰脲、咪唑烷基脲、乙基己基甘油、辛甘醇、1,2-戊二醇和1,2-己二醇的一种或几种，更优选为2～6种。在本发明的实施例中，所述防腐剂优选为苯氧乙醇、山梨酸钾、乙基己基甘油、辛甘醇、1,2-戊二醇和1,2-己二醇的混合物。当所述防腐剂包括苯氧乙醇、甲基异噻唑啉酮、山梨酸钾、dmdm乙内酰脲、咪唑烷基脲、乙基己基甘油、辛甘醇、1,2-戊二醇和1,2-己二醇的多种时，本发明对所述防腐剂中各组分的比例没有特殊的限定，按照任意比例配合即可。在本发明中，所述阳离子脂质体纳米组合物的粒径优选为30～500nm，更优选为120～300nm，最优选为150～250nm。在本发明中，所述阳离子脂质体纳米组合物的粒径为将阳离子脂质体纳米组合物分散在水中形成的纳米颗粒的粒径；所述纳米颗粒中包含组合物中所有组分，各组分通过相互间的物理作用形成了纳米颗粒。在本发明中，所述阳离子脂质体纳米组合物的zeta电位优选为0～+60mv，更优选为+10～+40mv，最优选为+10～+20mv。本发明提供的阳离子脂质体纳米组合物稳定性好、载药量高、皮肤透过性和皮肤滞留性好，能够用于化妆品和透皮给药药品制备领域。在本发明中，所述皮肤透过性好是指阳离子脂质体纳米组合物能过透过皮肤角质层到达皮肤深层组织；所述皮肤滞留性好是指阳离子脂质体纳米组合物到达皮肤深层组织后能够滞留在护肤靶部位，而不是直接进入血液循环被代谢掉。本发明还提供了上述技术方案所述阳离子脂质体纳米组合物的制备方法，包括以下步骤：(1)将阳离子两亲化合物、中性脂质、助乳化剂和活性物混合，得到油相；(2)将稳定剂与水混合，得到水相；(3)所述步骤(1)得到的油相、所述步骤(2)得到的水相与防腐剂混合，得到混合溶液；(4)将所述步骤(3)得到的混合溶液进行均质处理，得到阳离子脂质体纳米组合物；所述步骤(1)和步骤(2)没有时间先后顺序。本发明将阳离子两亲化合物、中性脂质、助乳化剂和活性物混合，得到油相。在本发明中，所述阳离子两亲化合物、中性脂质、助乳化剂和活性物的混合的温度优选为45～75℃，更优选为50～70℃，最优选为55～65℃。本发明对所述混合的时间没有特殊的限定，能够使各原料混合均匀即可。本发明对加热至所述混合温度的方式和速率没有具体的限定，采用本领域技术人员熟知的溶液加热的方式即可。在本发明中，所述加热优选为水浴加热，更优选使用夹层锅水浴加热。在本发明中，所述阳离子两亲化合物、中性脂质、助乳化剂和活性物的混合优选在搅拌条件下进行。本发明对所述搅拌的速率没有特殊的限定，能够使各组分充分溶解得到油相即可。本发明将稳定剂与水混合，得到水相。在本发明中，所述稳定剂与水的混合的温度优选为45～75℃，更优选为50～70℃，最优选为55～65℃。本发明对所述混合的时间没有特殊的限定，能够使各原料混合均匀即可。本发明对加热至所述混合温度的方式和速率没有具体的限定，采用本领域技术人员熟知的溶液加热的方式即可。在本发明中，所述稳定剂与水的混合优选在搅拌条件下进行。本发明对所述搅拌的速率没有特殊的限定，能够使各组分充分溶解得到水相即可。稳定剂与水的混合完成后，本发明优选将所述混合的产物进行过滤，去除未溶于水的杂质，得到水相。本发明对所述过滤的操作没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的过滤的技术方案即可。本发明优选采用滤膜进行过滤。在本发明中，所述滤膜的孔径优选为0.22～1.0μm，更优选为0.45～0.6μm。本发明对滤膜的来源没有特殊限定，采用市售滤膜即可。得到油相和水相后，本发明将所述油相、水相与防腐剂混合，得到混合溶液。在本发明中，所述油相、水相与防腐剂的混合的温度优选为45～75℃，更优选为50～70℃，最优选为55～65℃。本发明优选将所述油相与水相混合后，再与防腐剂混合，得到混合溶液。本发明优选将所述油相与水相混合，得到油水混合物。在本发明中，所述油相与水相的混合优选在搅拌条件下进行。本发明对所述搅拌的转速和时间没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的、能够使各原料混合均匀即可。在本发明中，所述搅拌的速率优选为100～800rpm，更优选为200～600rpm，最优选为300～400rpm；所述搅拌的时间优选为30～60min，更优选为40～50min。得到油水混合物后，本发明将所述油水混合物与防腐剂混合，得到混合溶液。在本发明中，所述油水混合物与防腐剂的混合优选在搅拌条件下进行。本发明对所述搅拌的转速和时间没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的、能够使各原料混合均匀即可。在本发明中，所述搅拌的速率优选为100～800rpm，更优选为200～600rpm，最优选为300～400rpm；所述搅拌的时间优选为5～20min，更优选为10～15min。得到混合溶液后，本发明将所述混合溶液进行均质处理，得到阳离子脂质体纳米组合物。在本发明中，所述均质处理优选为高压均质处理；所述均质处理的压力优选为500～1200bar，更优选为600～1000bar，最优选为700～800bar；所述均质处理的次数优选为2～6次，更优选为3～5次，最优选为4次；单次均质处理的时间优选为3～10min，更优选为5～8min，最优选为6～7min；所述均质处理的温度优选为60～85℃，更优选为65～80℃，最优选为70～75℃。在本发明中，所述均质处理使阳离子脂质体纳米组合物体系更加均匀稳定。本发明还提供了上述技术方案所述阳离子脂质体纳米组合物或按照上述技术方案所述制备方法制备的阳离子脂质体纳米组合物在化妆品和透皮给药药品制备中的应用。本发明对所述阳离子脂质体纳米组合物在化妆品和透皮给药药品制备中的应用没有特殊的限定，直接添加到化妆品和透皮给药药品中使用即可。在本发明中，所述阳离子脂质体纳米组合物中的活性物在化妆品和透皮给药药品中添加的质量含量优选为1～30％，更优选为5～20％。最优选为10～15％。在本发明中，包括所述阳离子脂质体纳米组合物的化妆品和透皮给药药品优选独立地为霜剂、水剂、乳剂、喷剂和凝胶剂中的一种。本发明提供的阳离子脂质体纳米组合物可以直接添加到化妆品或透皮给药药品中，可提高产品对细胞膜的亲附性能，增强活性物质的功效，帮助活性物质穿过细胞膜作用于细胞内的靶物质，更好的达到生物目标，能广泛的应用于化妆品或透皮给药药品中，尤其是美白、抗氧化和保湿类化妆品中。为了进一步说明本发明，下面结合实施例对本发明提供的阳离子脂质体纳米组合物及其制备方法和应用进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。实施例1:将0.1％阿魏酸、0.1％季胺化大豆蛋白、0.5％大豆卵磷脂、5.0％1,2-丙二醇、5.0％甘油，在55℃水浴条件下溶解，得到油相，备用；将1.0％羟丙甲基纤维素、1.0％卡波姆加入到86.6％的水中，于55℃水浴条件下以100rpm的转速搅拌30min，用0.45μm的微孔滤膜过滤，得到水相，备用；将水相与油相混合，于55℃水浴条件下以100rpm的转速搅拌30min，再添加0.7％苯氧乙醇，继续以100rpm的转速搅拌5min，得到阳离子脂质体混合溶液；将阳离子脂质体混合溶液在压力为500bar，温度为60℃的条件下进行均质处理6min，循环3次，得到阳离子脂质体纳米组合物。对阳离子脂质体纳米组合物的粒径进行检测，可得该阳离子脂质体纳米组合物粒径为30.1nm。对阳离子脂质体纳米组合物的zeta电位进行检测，得到该阳离子脂质体纳米组合物zeta电位为+0.1mv。实施例2:将1.0％阿魏酸、0.3％2，3-二油酰氧丙基-1-溴化三甲胺(dotma)、0.3％季胺化小麦蛋白、1.0％二油酰磷脂酰乙醇胺(dope)、0.5％氢化蛋黄卵磷脂、5.0％1,3-丁二醇、5.0％甘油、2.0％二乙二醇单乙基醚，在50℃水浴条件下溶解，得到油相，备用；将0.5％黄原胶加入到83.4％的水中，于50℃水浴条件下以300rpm的转速搅拌20min，用0.45μm的微孔滤膜过滤，得到水相，备用；将水相与油相混合，于50℃水浴条件下以300rpm的转速搅拌30min，再添加0.7％苯氧乙醇、0.3％乙基己基甘油，继续以300rpm的转速搅拌5min，得到阳离子脂质体混合溶液；将阳离子脂质体混合溶液在压力为700bar，温度85℃的条件下进行均质处理8min，循环2次，得到阳离子脂质体纳米组合物。对阳离子脂质体纳米组合物的粒径进行检测，可得该阳离子脂质体纳米组合物粒径为105.4nm。对阳离子脂质体纳米组合物的zeta电位进行检测，得到该阳离子脂质体纳米组合物zeta电位为+7.2mv。实施例3:将4.0％阿魏酸、2.0％双十八烷基二甲基溴化铵(ddab)、5.0％大豆卵磷脂、0.5％氢化大豆卵磷脂、0.1％胆固醇、2.0％丁醇聚醚-26、2.0％二乙二醇单乙基醚、5.0％1,2-丙二醇、10％1,3-丁二醇在60℃水浴条件下溶解，得到油相，备用；将0.7％阿拉伯胶、0.1％卡波姆加入到64.6％的水中，于60℃水浴条件下以500rpm的转速搅拌30min，用0.45μm的微孔滤膜过滤，得到水相，备用；将水相与油相混合，于60℃水浴条件下以500rpm的转速搅拌45min，再添加4.0％1，2-戊二醇，继续以500rpm的转速搅拌15min，得到阳离子脂质体混合溶液；将阳离子脂质体混合溶液在压力为700bar，温度70℃的条件下进行均质处理10min，循环4次，得到阳离子脂质体纳米组合物。对阳离子脂质体纳米组合物的粒径进行检测，可得该阳离子脂质体纳米组合物粒径为301.8nm。对阳离子脂质体纳米组合物的zeta电位进行检测，得到该阳离子脂质体纳米组合物zeta电位为+7.2mv。实施例4:将10.0％阿魏酸、2.0％双十八烷基二甲基溴化铵、1.5％双十二烷基二甲基溴化铵、1.5％双十烷基二甲基溴化铵、6.0％大豆卵磷脂、4.0％氢化大豆卵磷脂、5.0％聚乙二醇、10.0％1,2-丙二醇、10.0％1,3-丁二醇、25.0％甘油在75℃水浴条件下溶解，得到油相，备用；将0.1％羧甲基纤维素钠加入到19.9％的水中，于75℃水浴条件下以700rpm的转速搅拌10min，用0.45μm的微孔滤膜过滤，得到水相，备用；将水相与油相混合，于75℃水浴条件下以700rpm的转速搅拌60min，再添加5.0％辛甘醇，继续以700rpm的转速搅拌20min，得到阳离子脂质体混合溶液；将阳离子脂质体混合溶液在压力为1200bar，温度75℃的条件下进行均质处理5min，循环5次，得到阳离子脂质体纳米组合物。对阳离子脂质体纳米组合物的粒径进行检测，可得该阳离子脂质体纳米组合物粒径为398.2nm。对阳离子脂质体纳米组合物的zeta电位进行检测，得到该阳离子脂质体纳米组合物zeta电位为+59.9mv。实施例5:将2.0％阿魏酸、1.0％季胺化小麦蛋白、1.0％季胺化大豆蛋白、3.0％大豆卵磷脂、2.0％氢化大豆卵磷脂、2.0％1,2-丙二醇、10.0％1,3-丁二醇、5.0％甘油、在65℃水浴条件下溶解，得到油相，备用；将0.5％明胶、0.5％羧乙基纤维素加入到72.99％的水中，于65℃水浴条件下以350rpm的转速搅拌12min，用0.45μm的微孔滤膜过滤，得到水相，备用；将水相与油相混合，于65℃水浴条件下以350rpm的转速搅拌35min，再添加0.01％甲基异噻唑啉酮，继续以350rpm的转速搅拌5min，得到阳离子脂质体混合溶液；将阳离子脂质体混合溶液在压力为800bar，温度80℃的条件下进行均质处理3min，循环3次，得到阳离子脂质体纳米组合物。对阳离子脂质体纳米组合物的粒径进行tem检测，得到透射图如图3所示，从图3可以看出图中阳离子脂质体纳米组合物粒径约为209.9nm。对阳离子脂质体纳米组合物的粒径进行检测，得到该阳离子脂质体纳米组合物粒径分布图如图4所示。从图4可以看出，该阳离子脂质体纳米组合物粒径范围为30～500nm。对阳离子脂质体纳米组合物的zeta电位进行检测，得到该阳离子脂质体纳米组合物zeta电位分布图如图5所示，从图5可以得出，该阳离子脂质体纳米组合物zeta电位为+11.8mv。实施例6:将2.0％阿魏酸、1.0％2，3-二油酰氧丙基-1-溴化三甲胺(dotma)、1.0％季胺化小麦蛋白、1.5％蛋黄卵磷脂、3.5％氢化蛋黄卵磷脂、2.0％丁醇聚醚-35、3.0％聚乙二醇、15.0％甘油、1％二乙二醇单乙基醚，在65℃水浴条件下溶解，得到油相，备用；将0.4％卡波姆、0.6％瓜尔胶加入到68.5％的水中，于65℃水浴条件下以350rpm的转速搅拌12min，用0.45μm的微孔滤膜过滤，得到水相，备用；将水相与油相混合，于65℃水浴条件下以350rpm的转速搅拌35min，再添加0.5％咪唑烷基脲，继续以350rpm的转速搅拌5min，得到阳离子脂质体混合溶液；将阳离子脂质体混合溶液在压力为800bar，温度70℃的条件下进行均质处理8min，循环3次，得到阳离子脂质体纳米组合物。对阳离子脂质体纳米组合物的粒径进行检测，可得该阳离子脂质体纳米组合物粒径为188.4nm。对阳离子脂质体纳米组合物的zeta电位进行检测，得到该阳离子脂质体纳米组合物zeta电位为+13.2mv。实施例7:将2.0％阿魏酸、1.0％双十八烷基二甲基溴化铵(ddab)、1.0％季胺化胶原蛋白、4.0％氢化大豆卵磷脂、0.2％胆固醇、6.0％1,2-丙二醇、14％1,3-丁二醇、2％ppg-26-丁醇聚醚-26，在65℃水浴条件下溶解，得到油相，备用；将0.1％明胶、0.3％羧甲基纤维素钠加入到67.9％的水中，于65℃水浴条件下以350rpm的转速搅拌12min，用0.45μm的微孔滤膜过滤，得到水相，备用；将水相与油相混合，于65℃水浴条件下以350rpm的转速搅拌35min，再添加0.5％1,2-戊二醇、1.0％1,2-己二醇，继续以350rpm的转速搅拌5min，得到阳离子脂质体混合溶液；将阳离子脂质体混合溶液在压力为800bar，温度70℃的条件下进行均质处理8min，循环3次，得到阳离子脂质体纳米组合物。对阳离子脂质体纳米组合物的粒径进行检测，可得该阳离子脂质体纳米组合物粒径为300.1nm。对阳离子脂质体纳米组合物的zeta电位进行检测，得到该阳离子脂质体纳米组合物zeta电位为+14.1mv。实施例8将2.0％阿魏酸、1.0％双十二烷基二甲基溴化铵(bd12)、1.0％双十烷基二甲基溴化铵(bd10)、3.0％二油酰磷脂酰乙醇胺(dope)、0.5％蛋黄卵磷脂、1.0％氢化蛋黄卵磷脂、1.0％聚乙二醇、3.0％二丙二醇、4.0％1,2-丙二醇、8.0％甘油，在65℃水浴条件下溶解，得到油相，备用；将0.6％羟丙甲基纤维素加入到73.9％的水中，于65℃水浴条件下以350rpm的转速搅拌12min，用0.45μm的微孔滤膜过滤，得到水相，备用；将水相与油相混合，于65℃水浴条件下以350rpm的转速搅拌35min，再添加1.0％苯氧乙醇，继续以350rpm的转速搅拌5min，得到阳离子脂质体混合溶液；将阳离子脂质体混合溶液在压力为800bar，温度70℃的条件下进行均质处理8min，循环3次，得到阳离子脂质体纳米组合物。对阳离子脂质体纳米组合物的粒径进行检测，可得该阳离子脂质体纳米组合物粒径为254.6nm。对阳离子脂质体纳米组合物的zeta电位进行检测，得到该阳离子脂质体纳米组合物zeta电位为+12.8mv。实施例9将0.5％熊果酸、0.2％季铵化胶原蛋白、0.2％季铵化小麦蛋白、0.2％季铵化大豆蛋白、2.0％二油酰磷脂酰乙醇胺(dope)、2.0％丁醇聚醚-35、2.0％二乙二醇单乙基醚、5.0％1,2-丙二醇、8.0％1,3-丁二醇，在45℃水浴条件下溶解，得到油相，备用；将0.7％卡波姆加入到75.2％的水中，于45℃水浴条件下以600rpm的转速搅拌30min，用0.45μm的微孔滤膜过滤，得到水相，备用；将水相与油相混合，于45℃水浴条件下以600rpm的转速搅拌40min，再添加4.0％1,2-己二醇，继续以600rpm的转速搅拌8min，得到阳离子脂质体混合溶液；将阳离子脂质体混合溶液在压力为800bar，温度70℃的条件下进行均质处理8min，循环3次，得到阳离子脂质体纳米组合物。对阳离子脂质体纳米组合物的粒径进行检测，可得该阳离子脂质体纳米组合物粒径为121.2nm。对阳离子脂质体纳米组合物的zeta电位进行检测，得到该阳离子脂质体纳米组合物zeta电位为+9.4mv。实施例10将3.0％熊果酸、2.0％季铵化胶原蛋白、4.0％蛋黄卵磷脂、1.5％氢化蛋黄卵磷脂、1.0％丁醇聚醚-9、1.0％丁醇聚醚-12、2％乙氧基二甘醇、10％甘油、10％1,3-丁二醇在60℃水浴条件下溶解，得到油相，备用；将0.6％瓜尔胶加入到61.9％的水中，于60℃水浴条件下以600rpm的转速搅拌30min，用0.45μm的微孔滤膜过滤，得到水相，备用；将水相与油相混合，于60℃水浴条件下以600rpm的转速搅拌40min，再添加3.0％山梨酸钾，继续以600rpm的转速搅拌8min，得到阳离子脂质体混合溶液；将阳离子脂质体混合溶液在压力为800bar，温度70℃的条件下进行均质处理8min，循环3次，得到阳离子脂质体纳米组合物。对阳离子脂质体纳米组合物的粒径进行检测，可得该阳离子脂质体纳米组合物粒径为235.7nm。对阳离子脂质体纳米组合物的zeta电位进行检测，得到该阳离子脂质体纳米组合物zeta电位为+6.2mv。实施例11将1.0％α-硫辛酸、1.2％季铵化大豆蛋白、0.5％季铵化小麦蛋白、1.2％氢化大豆卵磷脂、0.5％氢化蛋黄卵磷脂、0.3％二油酰磷脂酰乙醇胺、1.0％丁基聚醚-26、1.0％丁基聚醚-35、12.0％1,3-丁二醇、3.0％甘油，在55℃水浴条件下溶解，得到油相，备用；将0.8％卡波姆加入到77.0％的水中，于55℃水浴条件下以700rpm的转速搅拌30min，用0.45μm的微孔滤膜过滤，得到水相，备用；将水相与油相混合，于55℃水浴条件下以700rpm的转速搅拌30min，再添加0.5％咪唑烷基脲，继续以700rpm的转速搅拌5min，得到阳离子脂质体混合溶液；将阳离子脂质体混合溶液在压力为500bar，温度70℃的条件下进行均质处理8min，循环6次，得到阳离子脂质体纳米组合物。对阳离子脂质体纳米组合物的粒径进行检测，可得该阳离子脂质体纳米组合物粒径为197.6nm。对阳离子脂质体纳米组合物的zeta电位进行检测，得到该阳离子脂质体纳米组合物zeta电位为+10.8mv。实施例12将5.0％α-硫辛酸、2.0％季铵化胶原蛋白、1.5％2，3-二油酰氧丙基-1-溴化三甲胺(dotma)、5.0％大豆卵磷脂、1.5％蛋黄卵磷脂、1.0％丁醇聚醚-35、5.0％二乙二醇单乙基醚、2％二丙二醇、3％1,2-丙二醇、20％1,3-丁二醇在55℃水浴条件下溶解，得到油相，备用；将0.4％黄原胶加入到53.1％的水中，于55℃水浴条件下以700rpm的转速搅拌30min，用0.45μm的微孔滤膜过滤，得到水相，备用；将水相与油相混合，于55℃水浴条件下以700rpm的转速搅拌30min，再添加0.5％dmdm乙内酰脲，继续以700rpm的转速搅拌5min，得到阳离子脂质体混合溶液；将阳离子脂质体混合溶液在压力为500bar，温度70℃的条件下进行均质处理8min，循环6次，得到阳离子脂质体纳米组合物。对阳离子脂质体纳米组合物的粒径进行检测，可得该阳离子脂质体纳米组合物粒径为250.4nm。对阳离子脂质体纳米组合物的zeta电位进行检测，得到该阳离子脂质体纳米组合物zeta电位为+11.2mv。实施例13将0.3％迷迭香酸、0.5％季铵化小麦蛋白、0.5％季铵化胶原蛋白、1.5％大豆卵磷脂、0.4％蛋黄卵磷脂、1.0％ppg-26-丁醇聚醚-26，3％1,2-丙二醇、10％1,3-丁二醇，在70℃水浴条件下溶解，得到油相，备用；将0.8％阿拉伯胶加入到80.8％的水中，于70℃水浴条件下以800rpm的转速搅拌30min，用0.45μm的微孔滤膜过滤，得到水相，备用；将水相与油相混合，于70℃水浴条件下以800rpm的转速搅拌50min，再添加0.5％苯氧乙醇、0.7％乙基己基甘油，继续以800rpm的转速搅拌10min，得到阳离子脂质体混合溶液；将阳离子脂质体混合溶液在压力为700bar、温度为70℃的条件下进行均质处理8min，循环3次，得到阳离子脂质体纳米组合物。对阳离子脂质体纳米组合物的粒径进行检测，可得该阳离子脂质体纳米组合物粒径为162.3nm。对阳离子脂质体纳米组合物的zeta电位进行检测，得到该阳离子脂质体纳米组合物zeta电位为+11.9mv。实施例14将2.0％迷迭香酸、2.0％季铵化大豆蛋白、0.5％双十八烷基二甲基溴化铵(ddab)、2.5％氢化大豆卵磷脂、2.5％氢化蛋黄卵磷脂、0.1％胆固醇、1.0％乙二醇单苄醚、6％1,2-丙二醇、6％1,3-丁二醇、10％甘油在70℃水浴条件下溶解，得到油相，备用；将0.2％黄原胶、0.1％羧甲基纤维素钠加入到66.1％的水中，于70℃水浴条件下以800rpm的转速搅拌30min，用0.45μm的微孔滤膜过滤，得到水相，备用；将水相与油相混合，于70℃水浴条件下以800rpm的转速搅拌50min，再添加1.0％苯氧乙醇，继续以800rpm的转速搅拌10min，得到阳离子脂质体混合溶液；将阳离子脂质体混合溶液在压力为700bar，温度70℃的条件下进行均质处理8min，循环3次，得到阳离子脂质体纳米组合物。对阳离子脂质体纳米组合物的粒径进行检测，可得该阳离子脂质体纳米组合物粒径为181.5nm。对阳离子脂质体纳米组合物的zeta电位进行检测，得到该阳离子脂质体纳米组合物zeta电位为+12.9mv。实施例15将0.5％光甘草定、0.5％辅酶q10、0.5％季铵化小麦蛋白、2.0％季铵化大豆蛋白、2.0％大豆卵磷脂、1.0％氢化大豆卵磷脂、20％1,3-丁二醇、5％二乙二醇单乙基醚、2％乙二醇单苄醚、1％ppg-26-丁醇聚醚-26在70℃水浴条件下溶解，得到油相，备用；将0.5％卡波姆加入到64％的水中，于70℃水浴条件下以800rpm的转速搅拌30min，用0.45μm的微孔滤膜过滤，得到水相，备用；将水相与油相混合，于70℃水浴条件下以800rpm的转速搅拌50min，再添加0.5％苯氧乙醇、0.5％乙基己基甘油，继续以800rpm的转速搅拌10min，得到阳离子脂质体混合溶液；将阳离子脂质体混合溶液在压力为700bar，温度70℃的条件下进行均质处理8min，循环3次，得到阳离子脂质体纳米组合物。对阳离子脂质体纳米组合物的粒径进行检测，可得该阳离子脂质体纳米组合物粒径为232.1nm。对阳离子脂质体纳米组合物的zeta电位进行检测，得到该阳离子脂质体纳米组合物zeta电位为+15.1mv。实施例16将1.0％神经酰胺、0.5％植物鞘氨醇、0.5％季铵化胶原蛋白、2％季铵化大豆蛋白、5％大豆卵磷脂、10％1,2-丙二醇、20％甘油、1％ppg-26-丁醇聚醚-26在70℃水浴条件下溶解，得到油相，备用；将0.5％卡波姆加入到55.5％的水中，于70℃水浴条件下以800rpm的转速搅拌30min，用0.45μm的微孔滤膜过滤，得到水相，备用；将水相与油相混合，于70℃水浴条件下以800rpm的转速搅拌50min，再添加2.0％1,2-戊二醇、2.0％1,2-己二醇，继续以800rpm的转速搅拌10min，得到阳离子脂质体混合溶液；将阳离子脂质体混合溶液在压力为700bar，温度70℃的条件下进行均质处理8min，循环3次，得到阳离子脂质体纳米组合物。对阳离子脂质体纳米组合物的粒径进行检测，可得该阳离子脂质体纳米组合物粒径为499.8nm。对阳离子脂质体纳米组合物的zeta电位进行检测，得到该阳离子脂质体纳米组合物zeta电位为+15.9mv。实施例17将实施例1～16得到的阳离子脂质体纳米组合物在密闭容器、室温条件下放置30天，检查样品的性状及粒径，实验结果如表1所示。表1实施例1～16阳离子脂质体纳米组合物稳定性试验结果稳定性试验结果表明：本发明提供的阳离子脂质体纳米组合物无团聚、分层、析出现象，且粒径在30～500nm之间，满足实际应用要求，样品在放置30天后也未出现团聚、分层、析出现象，粒径未发生显著性变化，仍然满足实际应用需求，尤其在活性物浓度较高的情况下仍然很稳定，未发现活性物结晶析出、泄漏等现象，因此，本发明提供的阳离子脂质体纳米组合物具有良好的稳定性。对比例1按照常规霜剂制备方法制备阿魏酸霜剂：将1.0％阿魏酸、3.0％硬脂酸、4.5％单硬脂酸甘油酯、5.0％十六十八醇、6.0％聚二甲基硅氧烷于75℃水浴中熔融，得到油相；将10.0％甘油、5.0％1,2-丙二醇、0.3％三乙醇胺和65.2％纯化水于75℃水浴中溶解，得到水相；将油相和水相搅拌混合，并乳化，冷却，即得含量为1.0％的阿魏酸霜剂。对比例2按对比例1中的配方及方法制备不含有阿魏酸的空白霜剂，与实施例5制备的阿魏酸浓度为2.0％的阳离子脂质体纳米组合物，按照质量比1:1进行复配，得到阿魏酸含量为1.0％的阳离子脂质体纳米组合物的霜剂，作为霜剂对照。实施例18以体重为160～220g雄性sd大鼠腹部皮肤为透皮试验的障碍层进行透皮试验。将完整无破损的皮肤固定于接收池和供给池之间(皮肤内层面向接收池)；扩散池参数为：有效扩散面积3.14cm2，接收池容积约7.0ml，磁力搅拌速度600rpm；在接收池内充满释放介质4.5％鲸蜡硬脂醇聚醚-20％乙醇-生理盐水，排除气泡，开启搅拌，并恒温至(37.0±0.5)℃，向皮肤表面分别均匀涂布样品1g，于1h、2h、4h、6h、8h、10h、12h吸取接收液0.35ml，并补充释放介质0.35ml，接收液使用0.22μm有机滤膜过滤，使用高效液相色谱测定经过滤的接收液中阿魏酸的浓度，计算不同时间药物累积透皮量。按以下公式计算阿魏酸单位面积累积透皮量：其中：qs为累积透皮量；s为有效扩散面积；v为接收池中生理盐水体积；ci为第1次至上次取样时接收液中药物浓度；n为第n次取样体积；cn为该次取样时接收液中药物浓度。将实施例2～5及对比例1、对比例2制备的样品按照上述方法进行透皮试验，试验结果见图1。由图1可以看出，实施例2～5样品的皮肤累积滞留量都明显高于对比例1样品的皮肤累积滞留量。实施例2～5的12h累积滞留量分别为72.3μg/cm2、134.9μg/cm2、215.9μg/cm2、98.5μg/cm2，对比例1的12h累积滞留量仅为11.2μg/cm2。本发明的阳离子脂质体纳米组合物的皮肤滞留远高于对比例1，具有优良的皮肤滞留性。对比例2为阿魏酸含量为1.0％的阳离子脂质体纳米组合物的霜剂，对比例1为阿魏酸含量为1.0％的普通霜剂。通过图1可以看出，对比例2样品的皮肤累积滞留量显著高于对比例1样品。实施例19选择实施例2、对比例1、对比例2作细胞摄取实验。样品溶液制备：分别将实施例2、对比例1、对比例2用dmem高糖培养液稀释200倍，制成阿魏酸浓度为50μg/ml的样品溶液。细胞培养：皮肤成纤维细胞以2×105cells/孔的细胞密度接种于12孔板，培养基为含10％fbs的dmem高糖培养基，孵育24h待细胞贴壁后，倒去培养基，用0.01mpbs溶液清洗3遍，分别加入已预热为37℃的含有50μg/ml阿魏酸的样品溶液3ml，置于37℃恒温孵箱中孵育4h后倾去药液，测定皮肤成纤维细胞内阿魏酸浓度。以上每个实验组以及阴性对照组均平行设置3个副孔。皮肤成纤维细胞胞内阿魏酸浓度测定方法：在结束测试皮肤成纤维细胞摄取阿魏酸后倾去培养皿内药液，用冷0.01mpbs溶液(4℃)迅速冲洗3遍，吸干平皿中液体，加入1ml0.02％edta+0.1％胰蛋白酶消化成单细胞悬液，置于离心管中，再用1ml0.01mpbs冲洗培养皿，收集冲洗液至离心管中，吹打均匀后取1ml测量皮肤成纤维细胞密度及细胞体积，剩余1ml以超声法破碎细胞后用高效液相色谱法测定其中阿魏酸浓度并计算1ml内所含阿魏酸质量。皮肤成纤维细胞悬液以血细胞计数器计数1ml内皮肤成纤维细胞数量，在leicaqwin图像分析系统上随机读取100个皮肤成纤维细胞测量直径，并计算出平均皮肤成纤维细胞单细胞体积及1ml皮肤成纤维细胞悬液内皮肤成纤维细胞的总体积。前述1ml所含阿魏酸质量除以1ml皮肤成纤维细胞悬液内皮肤成纤维细胞总体积，便可分别得出所测皮肤成纤维细胞胞内阿魏酸浓度。从图2结果可以看出，对比例1样品的胞内阿魏酸浓度很低，因为游离阿魏酸只能通过被动扩散进入细胞。而实施例2、对比例2样品的胞内阿魏酸浓度显著高于对比例1样品，这与阳离子脂质体纳米组合物可以通过内吞的方式入胞有关。由此可见，阳离子脂质体纳米组合物具有更高的阿魏酸胞内传递效率，可以增加皮肤成纤维细胞对阿魏酸的摄取量。实施例20采用日光模拟器人工光源，以2.0倍最小红斑量(2med)连续紫外线(波段290～400nm)在20名健康受试者上臂内侧诱导皮肤黑化模型。各10名受试者分别涂抹实施例6样品和对比例1样品早晚各一次，30天后比较前后黑素值。采用分光测色计(cm-2600d)仪器测试上臂内侧黑素值，通过前后数值的变化评估样品皮肤美白的功效。表2实验前后皮肤黑素值结果(n＝10)时间实施例2对比例10天213.5215.730天176.6195.9变化率(％)17.39.2从表2中的结果可以看出实施例2的黑素值的下降趋势明显优于对比例1的结果。说明本发明提供的阳离子脂质体纳米组合物可促进细胞内渗透，增强活性物的功效，使阿魏酸的美白效果更加显著。实施例21取实施例2制备的阳离子脂质体纳米组合物样品，与对比例1中的空白霜剂按照质量比1:1进行复配，得到霜剂。实施例22取实施例3制备的阳离子脂质体纳米组合物样品，与对比例1中的空白霜剂按照质量比1:1进行复配，得到霜剂。实施例23取实施例4制备的阳离子脂质体纳米组合物样品，与对比例1中的空白霜剂按照质量比1:1进行复配，得到霜剂。实施例24取实施例5制备的阳离子脂质体纳米组合物样品，与对比例1中的空白霜剂按照质量比1:1进行复配，得到霜剂。实施例25将实施例21～24制备的霜剂与空白霜剂进行皮肤刺激性试验：取健康家兔18只，体重(2.0±0.2)kg，随机分为6组，每组动物3只，于实验前24h将家兔背部皮肤两侧去毛，去毛后24h检查去毛皮肤是否受伤，受伤皮肤不宜做皮肤刺激性试验。每天涂抹使用实施例21～24得到的霜剂3次，连续涂抹7天，同时涂抹空白霜剂(不给予任何药物)进行对照，观察试验结果，将试验结果列于表3中。根据表3中的试验结果可以看出，使用实施例21～24得到的霜剂及空白霜剂涂抹于家兔皮肤后均无充血、红肿现象，说明本发明提供的阳离子脂质体纳米组合物对皮肤没有刺激性。表3实施例21～24纳米组合物及空白组皮肤刺激性观察结果“+”家兔皮肤充血、红肿；“++”表示充血、红肿现象仍在，但有增加趋势；“—”表示无充血、红肿现象。由以上实施例可以看出，本发明提供的阳离子脂质体纳米组合物载药量大，含阿魏酸的阳离子脂质体纳米组合物中活性成分阿魏酸的浓度可达10.0％；12h累积皮肤滞留量可以达到215.9μg/cm2以上，具有优异的皮肤滞留性；成纤维细胞对活性物的摄取量可达37.8μg/ml以上，具有更高的活性物胞内传递效率；放置30天后，产品性状及粒径未发生显著性变化，稳定性好。以上所述仅是本发明的优选实施方式，并非对本发明作任何形式上的限制。应当指出，对于本
技术领域：
的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。当前第1页12