本发明涉及一种降血压微球的制备方法。
背景技术：
高血压是一种相当常见的心血管疾病，患病率在全世界范围内持续上升，在发达程度不同的国家，其死亡率也不同。而我国高血压患病人数已达亿，每年死于高血压的人数高达300万。目前，临床上常用的降血压药物有很多类型，主要包括利尿降压药、沙坦类、普利类、韩通道阻滞剂等这些降血压药物都有良好的降压效果，但存在很多副作用，如利尿降压药适用于老年单纯收缩期高血压患者，但会引起血钾过低，血胆固醇、甘油三酯升高，如果患者有高尿酸症或者通风的情况，就要避免使用利尿剂。受体阻滞剂会导致弦晕、胃肠紊乱，影响糖脂代谢，可增加糖尿病发病风险，更严重者还会导致心动过缓、诱发急性心力衰竭。化学合成的降压药物如培噪普利、卡托普利，长期服用易引起蛋白尿或者皮瘆，且不适用于孕妇，于是人们便把目光转向了天然降血压物质。而药物治疗疾病的机理是通过药物与体内病灶部位的相互作用，产生疗效。合理的用药方式和用药剂量能够提高药物的治疗效能，减少毒副作用。为了避免产生不良反应，传统的给药方式只能在保证初始血药浓度能够达到治疗效能的情况下，减少用药量。但随着药物的吸收，血药浓度降低，药物便不能继续发挥治疗作用，需再次给药，给患者带来极大的不便，而药物控释系统可以使血药浓度长时间控制在最佳治疗范围，无需频繁给药，另外，药物缓释系统可在长期维持局部有效血药浓度的同时避免全身用药，减少了用药量也避免了对身体其他正常组织的伤害。
技术实现要素：
要解决的技术问题：本发明的目的是提供一种降血压微球的制备方法，所制备的微球包封性好，能长时间释放所载成分，同时具有很好的降血压效果。
技术方案：一种降血压微球的制备方法，包括以下步骤：
(1)将400g秋刀鱼皮洗净切碎后脱脂，加入500-1000ml2％nacl溶液，搅拌6-8h，过滤，去除滤液，得处理后的秋刀鱼皮；
(2)取20g处理后的秋刀鱼皮，加入500-1000u/g木瓜蛋白酶和500-1000u/g胰蛋白酶和120-150ml水，调节ph至7.0-8.0，放入恒温水浴锅中，在温度50℃下搅拌水解3-4h；
(3)置于90℃水浴锅中10min灭酶，冷却至室温后在8000-8500r/min下离心10min，收取上清液，放入冷冻干燥机中进行冷冻干燥得酶解物a；
(4)将200g核桃仁粉碎，过60目筛，加入400-500ml95％乙醇，在转速200-300r/min下提取2-3h，将提取物进行蒸馏干燥，得核桃仁乙醇提取物；
(5)取50g紫薯，加入200-300ml水，在转速200-300r/min下提取2-3h，过滤去除滤渣；
(6)加入酶解物a、桃仁乙醇提取物、30-60mg苦瓜多糖、50-100mgγ-氨基丁酸、1-2g氯化钙和1-2ml乙酸混合，在转速1500-2000r/min下搅拌4-8min，过微孔滤膜作为喷雾相；
(7)将1-2g聚乳酸、1-2g果胶、1-2g三聚磷酸钠、0.5-1g聚氧乙烯山梨醇酐单硬脂酸酯和100-200ml蒸馏水混合，在转速500-700r/min下搅拌溶解作为凝聚相；
(8)将喷雾相喷入凝聚相中，固化5-6小时后得降血压微球悬液，洗涤干燥即得。
进一步的，所述步骤(2)中ph值为7.8。
进一步的，所述步骤(3)中离心速度为8300r/min。
进一步的，所述步骤(6)中微孔滤膜的孔径为0.22μm或0.45μm。
有益效果：本方法制备的降血压微球包封率高达47.7％，包封性好，在24h的酶解物a、桂核桃仁乙醇提取物和苦瓜多糖的释放率分别最低为50.2％、51.2％和41.7％，能长时间释放所载成分，同时自发性高血压大鼠在服用微球后其血压有明显的下降，具有很好的降血压效果。
具体实施方式
实施例1
一种降血压微球的制备方法，包括以下步骤：
(1)将400g秋刀鱼皮洗净切碎后脱脂，加入500ml2％nacl溶液，搅拌6h，过滤，去除滤液，得处理后的秋刀鱼皮；
(2)取20g处理后的秋刀鱼皮，加入500u/g木瓜蛋白酶和500u/g胰蛋白酶和120ml水，调节ph至7.0，放入恒温水浴锅中，在温度50℃下搅拌水解3h；
(3)置于90℃水浴锅中10min灭酶，冷却至室温后在8000r/min下离心10min，收取上清液，放入冷冻干燥机中进行冷冻干燥得酶解物a；
(4)将200g核桃仁粉碎，过60目筛，加入400ml95％乙醇，在转速2000r/min下提取2h，将提取物进行蒸馏干燥，得核桃仁乙醇提取物；
(5)取50g紫薯，加入200ml水，在转速200r/min下提取2h，过滤去除滤渣；
(6)加入酶解物a、桃仁乙醇提取物、30mg苦瓜多糖、50mgγ-氨基丁酸、1g氯化钙和1ml乙酸混合，在转速1500r/min下搅拌4min，过0.22μm微孔滤膜作为喷雾相；
(7)将1g聚乳酸、1g果胶、1g三聚磷酸钠、0.5g聚氧乙烯山梨醇酐单硬脂酸酯和100ml蒸馏水混合，在转速500r/min下搅拌溶解作为凝聚相；
(8)将喷雾相喷入凝聚相中，固化5小时后得降血压微球悬液，洗涤干燥即得。
实施例2
一种降血压微球的制备方法，包括以下步骤：
(1)将400g秋刀鱼皮洗净切碎后脱脂，加入700ml2％nacl溶液，搅拌7h，过滤，去除滤液，得处理后的秋刀鱼皮；
(2)取20g处理后的秋刀鱼皮，加入700u/g木瓜蛋白酶和700u/g胰蛋白酶和130ml水，调节ph至7.5，放入恒温水浴锅中，在温度50℃下搅拌水解3.5h；
(3)置于90℃水浴锅中10min灭酶，冷却至室温后在8200r/min下离心10min，收取上清液，放入冷冻干燥机中进行冷冻干燥得酶解物a；
(4)将200g核桃仁粉碎，过60目筛，加入450ml95％乙醇，在转速250r/min下提取2.5h，将提取物进行蒸馏干燥，得核桃仁乙醇提取物；
(5)取50g紫薯，加入250ml水，在转速250r/min下提取2.5h，过滤去除滤渣；
(6)加入酶解物a、桃仁乙醇提取物、40mg苦瓜多糖、60mgγ-氨基丁酸、1.5g氯化钙和1.5ml乙酸混合，在转速1700r/min下搅拌5min，过0.22μm微孔滤膜作为喷雾相；
(7)将1.5g聚乳酸、1.3g果胶、1.5g三聚磷酸钠、0.6g聚氧乙烯山梨醇酐单硬脂酸酯和150ml蒸馏水混合，在转速600r/min下搅拌溶解作为凝聚相；
(8)将喷雾相喷入凝聚相中，固化5.5小时后得降血压微球悬液，洗涤干燥即得。
实施例3
一种降血压微球的制备方法，包括以下步骤：
(1)将400g秋刀鱼皮洗净切碎后脱脂，加入800ml2％nacl溶液，搅拌7h，过滤，去除滤液，得处理后的秋刀鱼皮；
(2)取20g处理后的秋刀鱼皮，加入800u/g木瓜蛋白酶和900u/g胰蛋白酶和140ml水，调节ph至7.8，放入恒温水浴锅中，在温度50℃下搅拌水解3.5h；
(3)置于90℃水浴锅中10min灭酶，冷却至室温后在8400r/min下离心10min，收取上清液，放入冷冻干燥机中进行冷冻干燥得酶解物a；
(4)将200g核桃仁粉碎，过60目筛，加入450ml95％乙醇，在转速250r/min下提取2.5h，将提取物进行蒸馏干燥，得核桃仁乙醇提取物；
(5)取50g紫薯，加入250ml水，在转速250r/min下提取2.5h，过滤去除滤渣；
(6)加入酶解物a、桃仁乙醇提取物、50mg苦瓜多糖、90mgγ-氨基丁酸、1.5g氯化钙和1.5ml乙酸混合，在转速1900r/min下搅拌6min，过0.45μm微孔滤膜作为喷雾相；
(7)将1.5g聚乳酸、1.5g果胶、1.5g三聚磷酸钠、0.8g聚氧乙烯山梨醇酐单硬脂酸酯和180ml蒸馏水混合，在转速600r/min下搅拌溶解作为凝聚相；
(8)将喷雾相喷入凝聚相中，固化5.5小时后得降血压微球悬液，洗涤干燥即得。
实施例4
一种降血压微球的制备方法，包括以下步骤：
(1)将400g秋刀鱼皮洗净切碎后脱脂，加入1000ml2％nacl溶液，搅拌8h，过滤，去除滤液，得处理后的秋刀鱼皮；
(2)取20g处理后的秋刀鱼皮，加入1000u/g木瓜蛋白酶和1000u/g胰蛋白酶和150ml水，调节ph至8.0，放入恒温水浴锅中，在温度50℃下搅拌水解4h；
(3)置于90℃水浴锅中10min灭酶，冷却至室温后在8500r/min下离心10min，收取上清液，放入冷冻干燥机中进行冷冻干燥得酶解物a；
(4)将200g核桃仁粉碎，过60目筛，加入500ml95％乙醇，在转速300r/min下提取3h，将提取物进行蒸馏干燥，得核桃仁乙醇提取物；
(5)取50g紫薯，加入300ml水，在转速300r/min下提取3h，过滤去除滤渣；
(6)加入酶解物a、桃仁乙醇提取物、60mg苦瓜多糖、100mgγ-氨基丁酸、2g氯化钙和2ml乙酸混合，在转速2000r/min下搅拌8min，过0.45μm微孔滤膜作为喷雾相；
(7)将2g聚乳酸、2g果胶、2g三聚磷酸钠、1g聚氧乙烯山梨醇酐单硬脂酸酯和200ml蒸馏水混合，在转速700r/min下搅拌溶解作为凝聚相；
(8)将喷雾相喷入凝聚相中，固化5-6小时后得降血压微球悬液，洗涤干燥即得。
载药微球的体外释药实验是在0.01m的pbs缓冲溶液中进行的。具体的实验过程是：准确称取上述载药微球80mg，分别放入离心管中，然后向离心管中加入20ml的pbs缓冲溶液，将4×3个离心管放入水浴恒温振荡器(37℃，100r/min)中振荡。间隔一定时间后取出，离心，取上清液3ml，并向离心管中补加相同体积的pbs溶液。在释药24h后对取出的释药溶液立即进行紫外测试，得到该释药时间下药物的吸光曲线，并根据最大吸收波长处的吸光度及bsa标准曲线的数学方程，求得对应的药物浓度。
将自发性高血压大鼠(雄性，10周龄)分为实验组(喂食实施例1-4，喂食剂量为150mg/kgbw，每天一次)和空白对照组，每组10只，大鼠自由摄食、饮水，动物室内光照12h昼夜循环，并维持室温22-25℃。连续试验10天，采用尾袖法测定大鼠尾动脉收缩压，测定血压之前，将大鼠在25℃条件下保温，稳定后进行测定，每次重复测定3次，取平均值即为尾动脉血压。本方法所制备的降血压微球的部分性能指标见下表1，我们可以看到微孔滤膜孔径为0.22μm时，平均粒径在30μm左右，包封率高达47.7％，包封性好，在24h的酶解物a、桂核桃仁乙醇提取物和苦瓜多糖的释放率分别最低为51.3％、53.2％和44.1％，能长时间释放所载成分，当微孔滤膜孔径为0.45μm时，平均粒径在58μm左右，包封率最高为43.9％，包封性也较好，在24h的酶解物a、桂核桃仁乙醇提取物和苦瓜多糖的释放率分别最低为50.2％、51.2％和41.7％，因此，0.22μm微孔滤膜的微球包封性好，但是缓蚀效果没有0.45μm微孔滤膜的微球好，同时自发性高血压大鼠在服用微球后其血压有明显的下降，具有很好的降血压效果。
表1降血压微球的部分性能指标