丁酸盐在制备治疗或预防肾损伤的药物中的应用的制作方法

本发明属于生物医药技术领域，涉及丁酸盐在制备治疗或预防肾损伤的药物中的应用。

背景技术：

高血压病是心脑血管和肾脏疾病的主要危险因素。全球范围内高血压患者的数量从1980年的6亿迅速增长到了2008年的10亿。高血压病在前期症状不明显，但却是危害生命的无声杀手。据国际卫生组织统计每年高血压引起的死亡高达九百四十万，如果不作进一步控制的话，这一数量将会持续增长。目前我国有2亿高血压患者，15岁以上人群的高血压患病率在过去43年里呈快速增长趋势。高血压肾病起病隐匿，发病初期临床症状不典型，及早进行生活方式的改善和药物干预治疗可以减少肾衰竭的发生，有助于提高患者生活质量，减少医疗费用。高血压肾损伤病理常表现为肾小球缺血性改变以及肾小管萎缩和间质纤维化。持续的高血压刺激使入球小动脉压力增加，管腔扩张，失去自我调控能力，肾小球处于持续高滤过状态，出现了白蛋白尿和显性蛋白尿。而肾小球的缺血性改变导致毛细血管袢皱缩或塌陷，肾小囊内充填胶原性物质，最终肾小球硬化萎缩。

高血压的治疗除了注意改变一些生活方式外，用药物控制也不能忽视。目前，临床上主要被用于治疗高血压的一线药物包括噻嗪或噻嗪类利尿剂、血管紧张素转换酶抑制剂(acei)、血管紧张素ii受体拮抗剂(arb)、二氢吡啶类钙拮抗剂(dccb)以及非二氢吡啶钙拮抗剂(ndccb)等五类。

这些传统的降压药物对肾脏的保护作用主要是降低循环血压及肾脏囊内压，对于降低肾脏炎症，改善肾脏功能，逆转肾脏纤维化作用十分有限。其中，血管紧张素转换酶抑制剂(acei)、血管紧张素ii受体拮抗剂(arb)是早期慢性肾功能不全常用的降压药物，被证实有降低蛋白尿、改善肾脏功能的作用，但对终末期肾衰竭(未透析)和双侧肾动脉狭窄的患者以及妊娠妇女禁用。若患者已经出现肾功能不全，使用高剂量的血管紧张素转换酶抑制剂、血管紧张素ii受体拮抗剂，患者罹患高钾血症风险显著增加，需严密监测血钾和肾功能水平。另外，还有10％的患者服用血管紧张素转换酶抑制剂会出现明显干咳，降低患者服药依从性。

现有技术中，陈烨团队研究发现，慢性肾病患者的粪便及血清中的丁酸水平显著低于健康人，且5期患者的丁酸水平最低，丁酸水平与肾功能呈负相关。在慢性肾病大鼠模型中，补充丁酸可延缓慢性肾病的进展。但是，丁酸本身是强酸性的，并不适合直接用于药物的制作(wangs,lvd,jiangs,etal.quantitativereductioninshort-chainfattyacids,especiallybutyrate,contributestotheprogressionofchronickidneydisease.clinsci(lond).2019,133(17):1857-1870)。

技术实现要素：

为了克服现有技术的不足，本发明旨在用丁酸盐有效且安全地治疗肾损伤，特别是盐敏感性高血压相关肾损伤。

本发明的目的在于提供丁酸盐在制备治疗和/或预防肾损伤的药物中的应用。

本发明的另一目的在于提供一种治疗和/或预防肾损伤的药物。

本发明的上述目的通过如下技术方案予以实现：

本发明提供了丁酸盐在制备治疗和/或预防肾损伤的药物中的应用。

优选地，所述丁酸盐为丁酸钠。

优选地，所述肾损伤为盐敏感性高血压相关肾损伤。

优选地，所述肾损伤包括肾脏重量增加，肾小球病理损伤，尿微量白蛋白排出增多，肾脏胶原蛋白累积增多，肾脏纤维化程度加深，肾脏组织中促炎症因子表达增多，抗炎症因子表达减少。

本发明还提供了一种治疗和/或预防肾损伤的药物，所述药物中包括有效量的作为有效成分的丁酸盐。

优选地，所述丁酸盐在所述药物中的含量为0.1％-3％。

更优选地，所述丁酸盐在所述药物中的含量为1.5％。

优选地，所述药物还包括药学上可接受的载体和/或辅料。例如：粘合剂、稀释剂、赋形剂、填充剂、润滑剂、崩解剂、助溶剂、稳定剂、悬浮剂、吸收促进剂、表面活性剂、色素、矫味剂、防腐剂、吸附载体等。

所述辅料无生理活性，不影响药物中有效成分的疗效、含量测定和稳定性，添加的主要目的是为了方便药物的制备和临床应用。本发明所述辅料为常用的辅料，可为淀粉、糊精、乳糖、甘露醇、硬脂酸镁、硫酸钙、磷酸氢钙、碳酸钙等。

优选地，所述药物的剂型为药学上可接受的剂型。用于口服时，可制成常规的固体制剂如片剂、粉剂、粒剂、胶囊剂、口服液等；用于注射时，可制成注射用的溶液或悬浮剂等。

本发明所述药物的各种剂型可以按照药学领域的常规生产方法制备。

优选地，所述丁酸盐为丁酸钠。

优选地，所述肾损伤为盐敏感性高血压相关肾损伤。

优选地，所述肾损伤伴随肾脏重量增加，肾小球病理损伤，尿微量白蛋白排出增多，肾脏胶原蛋白累积增多，肾脏纤维化程度加深，肾脏组织中促炎症因子表达增多，抗炎症因子表达减少。

本文使用的术语“治疗”是指减轻或改善病症，即延缓或抑制病症或至少一种临床症状的发展。

本文使用的术语“预防”是指所述病症的症状出现之前向受试者施用本发明所述药物。

本发明所述受试者可以指任何动物，包括但不限于人、小鼠、大鼠、兔、狗、猫、牛、马、猪、猴等哺乳动物。

本发明所述药物可经由任何生理上可接受途径给药，给药途径例如口服、注射等。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

本发明提供了丁酸盐在制备治疗或预防肾损伤的药物中的应用。本发明人通过创造性劳动，发现丁酸盐可有效缓解醋酸脱氧皮质酮诱导的盐敏感性高血压，减轻肾脏的重量，缓解肾小球病理损伤，降低尿微量白蛋白的排出，减少肾脏胶原蛋白的累积，缓解肾脏纤维化的发展，降低肾脏组织中促炎症因子的表达，提高抗炎症因子的表达，最终起到保护肾脏的作用，而且对机体无毒副作用。因此，丁酸盐在制备治疗和/或预防肾损伤的药物，特别是在制备治疗和/或预防盐敏感性高血压相关肾损伤的药物中具有良好的临床应用前景。

附图说明

附图中，ctrl：对照组；doca/salt：醋酸脱氧皮质酮+1％nacl处理组；doca/salt+nabu：醋酸脱氧皮质酮+1％nacl+丁酸钠处理组。

图1为各组大鼠每日的血压变化，map：meanarterypressure，平均动脉压。

图2为各组大鼠的肾脏重量和体重之比。

图3为各组大鼠的经pas染色的肾脏组织切片和相应的肾小球损伤指数(glomerulardamageindex)。

图4为各组大鼠的尿液中微量白蛋白(albumin)的水平。

图5为各组大鼠肾脏组织中胶原蛋白的累积；其中，图a为各组大鼠的经天狼星红染色的肾脏组织切片和相应的阳性染色区域大小；图b为肾皮质(cortex)组织中各组大鼠的胶原蛋白colia、coliiia的表达水平；图c为肾髓质(medulla)组织中各组大鼠的胶原蛋白colia、coliiia的表达水平。

图6为各组大鼠肾脏组织中纤维蛋白α-sma的累积；其中，图a为肾皮质(cortex)组织中各组大鼠的α-sma的rna表达水平；图b为肾髓质(medulla)组织中各组大鼠的α-sma的rna表达水平；图c为肾皮质组织中各组大鼠的α-sma的蛋白表达水平；图d为肾髓质组织中各组大鼠的α-sma的蛋白表达水平。

图7为各组大鼠肾脏组织中炎症因子的表达；其中，图a为肾皮质(cortex)组织中各组大鼠的tnf-α、il-6和il-10的rna表达水平；图b为肾髓质(medulla)组织中各组大鼠的tnf-α、il-6和il-10的rna表达水平。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明作进一步的说明，但具体实施例并不对本发明作任何限定。除非特别说明，实施例中所涉及的试剂、方法均为本领域常用的试剂和方法。

实施例1丁酸钠对醋酸脱氧皮质酮诱导的sd大鼠的血压、肾脏重量、肾小球病理损伤、尿白蛋白、肾脏胶原蛋白的影响试验

1、实验方法

采用20只200-250g的雄性sd大鼠，切除右肾后随机分成三组：

(1)对照组(ctrl)：n＝6；

(2)模型组(doca/salt)：将200mg/kg醋酸脱氧皮质酮(doca)颗粒放置在大鼠两侧肩胛骨之间的皮下，自由饮用含1％nacl的饮水，n＝6；

(3)干预组(doca/salt+nabu)：将200mg/kg醋酸脱氧皮质酮颗粒放置在大鼠两侧肩胛骨之间的皮下，自由饮用含1％nacl的饮水，并通过灌胃的方式给予丁酸钠，丁酸钠的给药量为1g/kg大鼠/天，n＝8。

每日测量各组大鼠血压。在处理14天后麻醉处死动物，取肾脏称重，计算各组大鼠肾脏重量和体重之比(kw/bw)。肾脏组织经福尔马林固定后制作成石蜡切片，通过pas染色观察肾小球病理损伤。通过代谢笼收集24小时尿液，利用商业化elisa试剂盒检测尿液中微量白蛋白的量。通过天狼星红染色和westernblot蛋白印迹法检测各组大鼠肾脏组织中胶原蛋白的累积，并对westernblot的结果做灰度分析，其中β-actin(β-肌动蛋白)为内参。

2、实验结果

各组大鼠的血压变化结果如图1所示，可以看出，doca/salt可以刺激大鼠血压升高，而给予丁酸钠处理后，大鼠血压可明显降低。

各组大鼠的肾脏重量和体重之比结果如图2所示，可以看出，doca/salt可以刺激诱导肾脏重量增大，其肾脏重量相对于对照组的增加了60％。而给予丁酸钠处理后，肾脏重量明显降低。

经pas染色的各组大鼠的肾脏石蜡切片的观察结果和相应的肾小球损伤指数如图3所示，可以看出，doca/salt可导致大鼠肾小球硬化萎缩，而给予丁酸钠处理后，显著逆转了肾小球病理损伤，基本恢复到对照组水平。

各组大鼠24小时尿微量白蛋白的排泄情况如图4所示，可以看出，doca/salt显著升高了大鼠尿微量白蛋白的排泄，而给予丁酸钠处理后，基本恢复到对照组水平。

各组大鼠的肾脏胶原蛋白的累积结果如图5所示，其中，各组大鼠的经天狼星红染色的肾脏组织切片的观察结果和相应的阳性染色区域大小如图5a所示，肾皮质、肾髓质组织中各组大鼠的胶原蛋白colia、coliiia的表达水平分别如图5b、图5c所示，可以看出，doca/salt显著增加了大鼠肾髓质和肾皮质组织中胶原蛋白的累积，colia、coliiia的表达水平提高，而给予丁酸钠处理后，胶原蛋白的累积明显降低，colia、coliiia的表达水平降低，基本恢复到对照组水平。

实施例2丁酸钠对醋酸脱氧皮质酮诱导的肾脏纤维化的影响试验

1、实验方法

高血压肾损伤的发生发展过程中伴随着肾脏组织的纤维化，α-sma(α-平滑肌肌动蛋白)是与肾脏纤维化相关的标志物，通过检测α-sma在肾皮质及肾髓质组织中的rna水平和蛋白水平来验证丁酸钠对脱氧皮质酮诱导的肾脏纤维化的影响。取实施例1的大鼠肾脏的肾皮质及肾髓质组织，通过荧光半定量pcr法检测肾皮质及肾髓质中α-sma的rna表达水平，其中gapdh为内参；通过westernblot蛋白印迹法检测肾皮质及肾髓质中α-sma的蛋白表达水平，并对westernblot的结果做灰度分析，其中β-actin(β-肌动蛋白)为内参。

2、实验结果

肾皮质及肾髓质组织中α-sma的rna表达水平分别如图6a、图6b所示，可以看出，α-sma的rna表达水平在doca/salt刺激下明显上调，给予丁酸钠处理后，大鼠体内α-sma的rna表达水平明显下调，基本恢复到对照组水平。

肾皮质及肾髓质组织中α-sma的蛋白表达水平分别如图6c、图6d所示，可以看出，α-sma的蛋白表达水平在doca/salt刺激下明显上调，给予丁酸钠处理后，大鼠体内α-sma的蛋白表达水平明显下调，基本恢复到对照组水平。

实验结果表明，给予丁酸钠处理可减缓醋酸脱氧皮质酮诱导的肾脏纤维化。

实施例3丁酸钠对醋酸脱氧皮质酮诱导的肾脏组织炎症因子表达的影响试验

1、实验方法

盐敏感性高血压相关肾损伤的发生发展过程中伴随着肾脏组织中炎症的发生，tnf-α(肿瘤坏死因子-α)、il-6(白细胞介素-6)、il-10(白细胞介素-10)是与炎症相关的标志物，其中tnf-α、il-6为促炎症因子，诱导炎症的发生；而il-10是抗炎症因子，具有消除炎症的作用。取实施例1的大鼠肾脏的肾皮质及肾髓质组织，通过荧光半定量pcr法检测肾皮质及肾髓质组织中tnf-α、il-6、il-10的rna表达水平，其中gapdh为内参。

2、实验结果

肾皮质和肾髓质组织中tnf-α、il-6、il-10的rna表达水平分别如图7a、图7b所示，可以看出，tnf-α、il-6的rna表达水平在doca/salt刺激下明显上调，给予丁酸钠处理后，tnf-α、il-6的rna表达水平明显下调，基本恢复到对照组水平；而il-10的表达水平在doca/salt刺激下明显下调，给予丁酸钠处理后，il-10的rna表达水平明显上调，基本恢复到对照组水平。

实验结果表明，给予丁酸钠处理可以降低肾脏组织中促炎症因子的表达，提高抗炎症因子的表达，减缓醋酸脱氧皮质酮诱导的肾脏组织中炎症的发生。

基于上述结果，丁酸钠可有效缓解醋酸脱氧皮质酮诱导的盐敏感性高血压，减轻肾脏的重量，缓解肾小球病理损伤，降低尿微量白蛋白的排出，减少肾脏胶原蛋白的累积，缓解肾脏纤维化的发展，降低肾脏组织中促炎症因子的表达，提高抗炎症因子的表达，最终起到保护肾脏的作用。

最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。