专利名称：表鬼臼脂素糖苷的磷酸和磺酸酯的制备方法
技术领域：
本发明涉及在糖上具有不同取代基的4′-脱甲基表鬼臼脂素糖苷的制备方法，它们作为抗肿瘤剂的应用和含有它们的药用组合物。
4′-脱甲基表鬼臼脂素糖苷(式Ⅰ)是由天然存在的木酚素、鬼臼脂素(Ⅱ)衍生得到的抗肿瘤剂。它们的合成方法已在美国专利3，524，844
(Keller-Juslen等)中叙述。式(Ⅰ)化合物中，已确定表鬼臼毒吡喃葡糖甙(Ⅰa)和表鬼臼毒噻吩糖苷(Ⅰb)在临床上对许多种类肿瘤是有效的，这些肿瘤包括小肺细胞、卵巢、睾丸、乳房、膀胱、脑、非淋巴细胞白血病和何杰金氏病。
美国专利4，547，567和4，716，221公开了式(Ⅲ)化合物，
式中X1和X2之一为OH，另一个为氨基、一烷基氨基或二烷基氨基。通常认为上述衍生物具有较高的水溶性。
Seligman等(CancerChemotherapyReportsPartI，1975，59233-242)报道了鬼臼脂素磷酸酯二钠盐(Ⅳ)的制备方法。但是，该磷酸酯不会被前列腺酸磷酸酯酶水解，并且与母体鬼臼脂素相比未显示毒性降低。
本发明提供了式(Ⅴ)抗肿瘤化合物，
式中R2为H，R1系选自(C1-10)烷基;(C2-10)链烯基;(C5-6)环烷基;2-呋喃基;2-噻吩基;(C6-10)芳基;(C7-14)芳烷基;和(C8-14)芳链烯基，其中每一个芳环可以是未被取代的，或者用一个或多个选自卤素、(C1-8)烷基、(C1-8)烷氧基、羟基、硝基和氨基的基团取代;或R1和R2各自为(C1-8)烷基;或者R1和R2与它们所连接的碳结合形成(C5-6)环烷基;R3和R4系选自OH、-OSO2R6、-OSO3H及其药用盐，-OP(X)(OH)2及其药用盐和-OP(X)(OR7)2基团，其中R6为氢、(C1-6)烷基、苯基、(C1-6)烷基取代的苯基或苯基(C1-6)烷基;R7为磷酸酯保护基;X为氧或硫，但必须R3和R4不全是OH;R5为H或酚保护基。
优先选用的实例是其中R4为OH，R3为上述定义的式Ⅴ化合物。
另一方面，本发明提供了式(Ⅵ)化合物及其药用盐，
式中R1、R2和R5同上定义;R8为H或其盐，或为R7。
除非另有说明，这里所用的术语有“磷酸酯”、“磷酸化作用”和有关术语，包括“硫代磷酸酯”，“硫代磷酸化作用”等等;“卤素”和“卤化物”是指氯、溴和碘;“烷基”是指直链和支链的碳链;符号“-L”表示离去基团，如氯化物，这在酯化反应中常会遇到。
起始物质4′-脱甲基表鬼臼脂素糖苷(Ⅰ)可以按美国专利3，524，844中所述的方法制备。为了有效地使糖部分的羟基衍生，首先需要保护活性的酚基。可以应用已知的方法，例如形成醚、醛缩醇或酯的方法保护式(Ⅰ)的4′-酚基。酚保护基的选择不具体地加以限制，可以是本技术领域已知的常用保护基。保护基的选择、保护酚基和脱去酚保护基的方法参见专题文献，例如“ProtectiveGroupsinOrganicChemistry”，J.F.M.Mcomie，ED.，PlenumPress，1973。合适的酚保护基的实例有(但不限于这些)叔丁基、苄基、2-四氢吡喃基、2，2，2-三氯乙氧基羰基和苄氧基羰基;优先选用苄氧基羰基。
然后，可以用文献中已知的常规方法将受保护的4′-脱甲基表鬼臼脂素糖苷(Ⅰ)糖部分的羟基转变成本发明的磷酸酯、硫酸酯或磺酸酯。该反应通常是非区位专一的，并生成2″-，3″-和2″-，3″-双衍生物的混合物，在磷酸化作用的情况下磷酸酯二聚物(式Ⅵ)也同样生成混合物。用本领域公认的技术(例如柱层析)，可将产品混合物分离成各个独立的成分。在反应结果中，反应混合物的分离不是关键性的。
磷酸化作用可以通过受保护的4′-酚(Ⅰ)和磷酰卤(P(X)(CL)3)反应完成，反应在惰性有机溶剂(例如二氯甲烷或乙腈)中，在酸受体(最好为叔胺碱，例如吡啶或二异丙基乙胺)存在下进行。生成的中间体二氯磷酸酯的混合物可在应有的位置进行水解，得到磷酸单酯;如果在碱(例如碳酸氢钠等)存在下进行水解，则得到相应磷酸单酯的盐。然后脱去4′-酚保护基，得到本发明的磷酸酯。
用式R7OH醇(其中R7是磷酸酯保护基)处理，还可以将中间体二氯磷酸酯转变成磷酸三酯。磷酸酯保护基包括(但不限于这些)用一个或多个卤原子有选择取代的(C1-5)烷基;用一个或多个选自(C1-5)烷基、卤素和硝基有选择取代的苯基;苯基(C1-5)烷基，其中苯环按以上所述有选择地取代。在惰性有机溶剂中，在酸受体存在下使4′-酚受保护的(Ⅰ)和式(R7O)2P(X)-L化合物反应，也可以得到磷酸三酯。可以有选择地脱去磷酸三酯上的R7基团，得到磷酸单酯，将该磷酸单酯与碱(例如碳酸氢钠)反应，可以容易地使其转变为药用盐。因此，磷酸三酯上的R7基团可以这样选择，以致于它可以和酚保护基同时脱去，或它可以有选择地脱去而不影响其它基团。
于室温下，使受保护的4′-酚(Ⅰ)与三氧化硫或其复合物(如三氧化硫-吡啶复合物)在惰性有机溶剂中反应，可以制得本发明的硫酸酯。应用本技术领域熟知的常用方法脱去酚基，得到产物。使硫酸酯衍生物与所需要的阳离子反应，可以容易地将硫酸酯衍生物转变成它的药用盐。
将受保护的4′-酚(Ⅰ)与式R6SO2-L化合物反应，同样可以得到本发明的磺酸酯。反应是在惰性有机溶剂中、于酸受体存在下、在室温至约-20℃下完成的。脱去酚保护基，得到最终产物。
当然，合成本发明化合物不限制于以上概述的方法和试剂，还可以包括能够在4′-脱甲基表鬼臼脂素糖苷的糖部分引入磷酸酯和磺酸酯基的其它方法。当然，反应条件将随选用的起始物质而改变，并且反应条件可以由有经验的熟练技术人员确定。
本发明的化合物可用于抑制哺乳动物(包括人)的恶性肿瘤的生长。一些化合物，尤其是磷酸酯和硫酸酯，可以看作为4′-脱甲基表鬼臼脂素糖苷的前体药物，在体内通过宿主内原的因素或外原提供的因素使它们转变成有效的母体药物。上述前体药物可以单独服用，也可以与能在体内释放有效成分的试剂(例如能使磷酸酯或硫酸酯基团裂解的酶)并用。合适的酶的实例有磷酸酯酶(例如碱性磷酸酯酶)和硫酸酯酶(例如芳基硫酸酯酶)。上述酶可以连结到肿瘤特定的抗体上，形成酶-抗体共轭物，于是在服用前体药物之前、在服用前体药物的同时或在服用前体药物之后将该酶-抗体共轭物引入到带有肿瘤的宿主中。在服用本发明的硫酸酯前体药物中，前体药物加上抗体-酶共轭物是优先选用的方式。抗体-酶共轭物、它们的制备和应用方法已分别在我们的共同未决专利申请211，301(申请日期1988年6月29日)以及它的原申请及在先主要的原申请[161，068(申请日期1988年2月26日)，081，382(申请日期1987年8月4日)]中详细地公开。上述申请做为本申请的参考文献。
评价本发明具有代表性的化合物对鼠移植的P388白血病的抗肿瘤活性。给五周龄的雌性CDF小白鼠腹膜内注射含有106淋巴白血病P388细胞。每天单次剂量经腹膜内注射受试化合物，观察动物45天。测定处理组动物与未处理的对照组动物平均存活时间(MST)之比增加的百分率，并以%T/C表示。%T/C值为125或125以上的化合物被认为是有显著的抗肿瘤作用。表Ⅰ显示体内评价的结果;表Ⅰ只给出了最大的%T/C和具有最大效果的剂量。
表Ⅰ对P388白血病的抗肿瘤作用化合物剂量(mg/kg/天)MST的%T/C表鬼臼毒吡喃葡糖甙120250ⅩⅠ120185ⅩⅡ30120ⅩⅢ30125ⅩⅦ60195ⅩⅧ30115ⅩⅨ30100ⅩⅩⅢ120175ⅩⅩⅣ60130ⅩⅩⅥ30130ⅩⅩⅦ120105ⅩⅩⅧ10105用B16黑素瘤细胞研究本发明化合物的细胞毒性。在补充胎牛血清(10%)和卡那霉素(60mcg/ml)的伊格尔基本必需培养液中使B16黑素瘤细胞生长到对数生长期。收集肿瘤细胞并移植到带有试验物质的96孔微量滴定板内，接种物数量为3.0×104细胞/ml。在5%CO2和95%空气的湿润大气压下保温72小时。用中性红使细胞染色后，于540nm处用比色法测定对上述细胞系的细胞毒作用，并记录抑制50%细胞生长的浓度(IC50)。IC50值高于100μg/ml一般认为没有细胞毒作用。
表Ⅱ在体外对B16黑素瘤的细胞毒性化合物IC50(ug/ml)
表鬼臼素吡喃葡糖甙0.21Ⅺ2.2Ⅻ20ⅩⅢ37ⅩⅦ0.07ⅩⅧ5.4ⅩⅨ30ⅩⅩⅢ0.32ⅩⅩⅣ29ⅩⅩⅥ8.0本发明提供了抑制黑素瘤肿瘤的方法，该方法包括给带有肿瘤的宿主服用抑制肿瘤有效剂量的式Ⅴ或Ⅵ抗肿瘤化合物。为此，可以通过普通的途径(例如静脉、肌内、瘤内、动脉内、淋巴内或经口)给药，但是也不仅限于这些途径。在某些情况下，药物可以与在体内能够使药物活化的抗体-酶共轭物一起服用。
另一方面，本发明还提供了包括式Ⅴ或Ⅵ化合物及药用载体的药用组合物。可以将抗肿瘤组合物制成适用于所需给药途径的制剂形式。所述组合物的实例包括用于口服的固体组合物，其制剂有例如片剂、胶囊剂、小丸剂、粉剂和颗粒剂;适用于口服的液体组合物，其制剂有例如溶液剂、悬浮剂、糖浆剂和驰剂，以及适用于非经肠道给药的制剂，例如无菌溶液剂、悬浮剂或乳剂。也可以将它们制成无菌固体组合物的形式，在应用前将该无菌固体组合物直接溶于灭菌水、生理盐水或其它无菌可注射的介质中。
给予哺乳动物宿主的最佳剂量和方式可以由熟习本技术领域的工作人员容易地确定。当然，应该懂得，使用的实际剂量将根据具体配制的组合物、应用的具体化合物、应用的方式和具体的部位、需治疗的宿主和疾病的情况而改变。要考虑到能改变药物作用的许多因素，这些因素包括年龄、体重、性别、饮食、服药时间、给药途径、排泄速度、患者的状况、药物配方、反应敏感性以及疾病的严重程度。
下述实施例只是为了详细叙述本发明，不应将其解释为对本发明范围的限制，本发明的范围由附在本申请后的权利要求书单独地限定。
实施例1a.4′-0-苄氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙(Ⅶ)的制备在30分钟内将氯甲酸苄酯(1.98ml，15mmol)加到由表鬼臼毒吡喃葡糖甙(5.88g，10mmol)、吡啶(10ml)以及二氯甲烷(100ml)组成的混合物中，温度保持在-15℃。混合物在-15℃另外搅拌1小时，依次用5%盐酸、碳酸氢钠水溶液和水洗涤，然后用无水硫酸钠干燥。蒸发溶剂得到8.05g粗产物，再经硅胶柱(5%甲醇-二氯甲烷)纯化，得6.93g(96%)的4′-0-苄氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙，为无色半固体状物。
熔点152-155℃IR νmax(液体石蜡)cm-13200-3600(OH)，1760(内酯和4′-0-苄氧基羰基)，1600(芳族的)。
1H NMR(60 MHz，CDCl3)δ 7.36(5H，s，OCO2CH2Ph)，6.81(1H，s，5-H)，6.50(1H，s，8-H)，6.25(2H，s，2′-and 6′-H)，5.94(2H，br.s，O-CH2-O)，5.23(2H，s，-OCO2CH2Ph)，4.89(1H，d，J＝4Hz，4-H)，3.66(6H，s，3′，5′-OCH3)，2.8-3.0(2H，m，2″，3″-OH，D2O交换)，1.38(3H，d，J＝5Hz，7″-CH3).
b.4′-0-苄氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙的磷酸化将三氯氧磷(280μl，3mmol)慢慢加到冷至0℃的4′-0-苄氧基羰基表臼毒吡喃葡糖甙(1.511g，2.1mmol)在无水二氯甲烷(10ml)和吡啶(10ml)的溶液中，并将混合物在0℃搅拌45分钟。然后加入苄醇(620μl，6mmol)，使反应混合物温热到室温，搅拌2小时后用二氯甲烷(50ml)稀释，用水洗涤，经硫酸钠干燥。溶剂经真空蒸发，得2.40g粗的半固体产物，其中含有三种成分(硅胶薄层层析Rf0.66，0.54，0.46)，用硅胶层析分离(1%甲醇-二氯甲烷)。合并Rf＝0.66的部分，并经真空蒸发，得到435mg(21%)4′-苄氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-磷酸二苄基酯(Ⅷ)。同样Rf＝0.54和0.46的部分分别提供352mg(21%)双(4′-苄氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-0-)磷酸苄基酯(Ⅸ)和262mg(13%)4′-苄氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″-磷酸二苄基酯(Ⅹ)。
IR νmax(液体石蜡)cm-1Ⅷ3300(宽峰)1760，1600Ⅸ3300(宽峰)1760，1600Ⅹ3350、1760、1600c.制备3″-和2″-表鬼臼毒吡喃葡糖甙磷酸二钠和双(表鬼臼毒吡喃葡糖甙基-3″-)磷酸酯钠4′-苄氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-磷酸二苄基酯(270mg)的甲醇(20ml)和乙酸乙酯(20ml)溶液中含有10%钯碳(50mg)，在1个大气压下将该溶液氢化1小时。催化剂经过滤除去，滤液在真空下浓缩，得到188mg半固体，将它与乙酸乙酯一起研磨，得到145mg(79%)表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-二氢磷酸酯，为浅棕色粉末状物。将135mg该产品溶于碳酸氢钠水溶液中(33.6mg在2ml水中)，并冷冻干燥，得到140mg表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-磷酸酯二钠(化合物Ⅺ)，为灰色粉末。纯度测定95%，高效液相色谱法(LichrosorbRP-18，70%甲醇-水)。
熔点262-263℃(分解)IR νmax(液体石蜡)cm-13377(宽峰)、1762、1615UVλmax(甲醇)nm(ε)238(肩峰)，13，000)，285(4，010)SIMS m/z713(M+H)+
根据上述方法，将97mg4′-苄氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″-磷酸二苄基酯氢化，得到70mg(约100%)表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″-磷酸酯二钠(化合物Ⅻ)，为灰色粉末状物。
纯度测定95%，高效液相色谱法。
熔点255-257℃(分解)IR νmax(KBr)cm-13460，1772、1615UVλmaxnm(ε)240(肩峰，12，600)，284(3，740)SIMS m/z713(M+H)+，735(M+Na)+。
同样地，将135mg双(4′-苄氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-)磷酸苄基酯氢化，得60mg(58%)双(表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-)磷酸酯钠(化合物ⅩⅢ)，为浅灰色粉末状物。
纯度测定95%，高效液相色谱法熔点265-266℃(分解)IR νmax(KBr)cm-13460，1772，1620。
UVλmax(甲醇)nm(ε)240(肩峰，24，600)285(7，730)SIMS m/z1262(M+H)+，1285(M+Na+1)。
实施例2a.4′-苄氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙的甲苯磺酰化于0℃将4′-二甲氨基吡啶(200mg)和甲苯磺酰氯(870mg，4.6mmol)加到4′-苄氧基羰基表鬼臼吡喃葡糖甙(实施例1步骤a的产品2.2g，3mmol)的无水吡啶(50ml)溶液中，混合物在室温下搅拌3天。再将分子筛(4
)和另外的甲苯磺酰氯(870mg，4.6mmol)加到混合物中，在室温下连续搅拌一个星期。在搅拌一星期后滤去沉淀，滤液用CH2Cl2稀释，用水、5%盐酸NaHCO3水溶液和水洗涤，经无水硫酸钠干燥，然后在真空下浓缩，得含有三种成分的粗固体(2.35g)(硅胶薄层层析Rf0.8、0.6和0.4)，用硅胶柱层析分离(2%甲醇-CH2Cl2)。将Rf0.8的部分合并，并在真空下蒸发，得602mg(19%)4′-苄氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″，3″-二甲苯磺酸酯(ⅩⅣ)，为无色粉末状物。同样，Rf0.6和Rf0.4的部分分别得到690mg(26%)4′-苄氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-甲苯磺酸酯(ⅩⅤ)和156mg(6%)4′-苄氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″-甲苯磺酸酯(ⅩⅥ)，为无色粉末状物，具有吸湿性。
4′-苄氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-甲苯磺酸酯ⅩⅤ熔点145-148℃元素分析，C44H44O17S.3H2O计算值C56.77，H5.41，S3.44实测值C56.84，H4.91，S3.904′-苄氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″-甲苯磺酸酯ⅩⅥ熔点135-139℃元素分析C44H44O17S.3H2O计算值C56.77，H5.41，S3.44实测值C56.61，H4.89，S3.704′-苄氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″，3″-二甲苯磺酸酯(ⅩⅣ)熔点149-152℃b.表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-和2″-甲苯磺酸酯和2″，3″-二甲苯磺酸酯的制备于一个大气压和10%钯碳(40mg)存在下，将4′-苄氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-甲苯磺酸酯(47mg，0.05mmol)在乙醇-丙酮(4∶1，2.5ml)中的溶液边搅拌边氢化1小时。过滤除去催化剂，滤液在真空中浓缩，得到表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-甲苯磺酸酯(化合物ⅩⅦ)(42mg，约100%)，为无色粉末状物，然后在甲醇中重结晶，得到无色的晶体。
纯度测定90%，高效液相色谱法。
熔点175-178℃IR νmax(KBr)cm-13500(宽峰)，1780，1600UVλmax(MeoH)nm(ε)245(肩峰，10，260)284(3，900)元素分析，C36H38O15S计算值C58.21，H5.16，S4.32实测值C57.80，H5.14，S4.43根据上述方法，将100mg(0.09mmol)4′-苄氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″-甲苯磺酸酯氢化，得114mg(约100%)表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″-甲苯磺酸酯(化合物ⅩⅧ)，为无色粉末状物，在甲醇中重结晶，得到具有吸湿性的结晶。
纯度测定90%，高效液相色谱法。
熔点210-212℃IR νmax(KBr)cm-13500(宽峰)，1780，1600UVλmax(MeoH)nm(ε)243(肩峰，4，560)282(1，450)元素分析，C36H38O15S.H2O计算值C56.83，H5.30，S4.21实测值C56.87，H5.37，S4.19同样，将80mg(0.08mmol)4′-苄氧基羰基表鬼臼毒吡喃糖甙2″，3″-二甲苯磺酸酯氢化，得72mg(约100%)表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″-，3″-二甲苯磺酸酯(化合物ⅩⅨ)，为无色粉末状物，在甲醇中重结晶得无色结晶。
纯度测定90%，高效液相色谱法。
熔点169-171℃IR νmax(KBr)cm-13400(宽峰)，1770、1600、UVλmax(甲醇)nm(ε)245(肩峰，11，750)
284(3，840)实施例3a.4′-苄氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙的甲磺酰化将甲磺酰氯(270μl，2.8mmol)加到4′-苄氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙(1.00g，1.4mmol)的无水吡啶(50ml)溶液中，混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物用乙酸乙酯稀释，用水、5%盐酸、碳酸氢钠水溶液和水洗涤，经硫酸钠干燥，然后过滤。滤液经真空浓缩得到粗固体(1.4g)，其中含有三种成分(硅胶薄层层析Rf0.51，0.44和0.40)，并用硅胶柱层析分离(1%甲醇-二氯甲烷)。将Rf0.51的部分合并，并在真空中蒸发，得440mg(36%)4′-苄氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″，3″-二甲磺酸酯(ⅩⅩ)。同样，Rf0.44和0.40的部分分别得到314mg(32%)4′-苄氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-甲磺酸酯(ⅩⅪ)和248mg(26%)4′-苄氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″-甲磺酸酯(ⅩⅫ)，为无色粉末状物。
4′-苄氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-甲磺酸酯(ⅩⅪ)溶点167-170℃元素分析C38H40O17S.1/2H2O计算值C56.36，H4.98，S3.96实测值C56.23，H5.06，S4.144′-苄氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″-二甲磺酸酯(ⅩⅫ)熔点159-161℃(吸湿)元素分析C38H40O17S.3H2O计算值C55.13，H5.11，S3.87实测值C55.29，H5.00，S4.004′-苄氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″，3″-二甲磺酸酯熔点226-228℃元素分析，C39H42O19S2.1/2H2O
计算值C52.76，H4.77，S7.22实测值C52.78，H4.77，S7.31b.表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-和2″-甲磺酸酯的制备在1个大气压和10%钯碳(30mg)存在下，将4′-苄氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-甲磺酸酯(60mg，0.07mmol)在乙醇-丙酮(4∶1，2.5ml)中的溶液边搅拌边氢化反应1小时。滤去催化剂后，滤液在真空下浓缩，得到表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-甲磺酸酯(化合物ⅩⅩⅢ)，为无色粉末状物。
纯度测定90%，高效液相色谱法。
熔点226-229℃IR νmax(KBr)cm-13500(宽峰)，1770，1610UVλmax(甲醇)nm(ε)740(肩峰，12，900)286(3，950)同样，将30mg(0.04mmol)4″-苄氧基羰基表臼毒吡喃葡糖甙2″-甲磺酸酯氢化，得23mg(94%)表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″-甲磺酸酯(化合物ⅩⅩⅣ)，为无色粉末状物。
纯度测定95%，高效液相色谱法熔点179-181℃IR νmax(KBr)cm-13500(宽峰)，1770，1620UVλmax(甲醇)(ε)240(肩峰12，200)285(3，950)实施例44′-苄氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙(350mg，0.5mmol)和二苯膦酰氯(322mg，1.2mmol)的混合物在室温下搅拌2天，用二氯甲烷(50ml)稀释，用水、10%盐酸和碳酸氢钠水溶液洗涤，然后用无水硫酸钠干燥。溶剂在真空下蒸发，得4′-苄氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-二苯磷酸酯，为粗的半固体状物(290mg)。该半固体(190mg)溶液在1个大气压和10%钯碳催化剂存在下边搅拌边进行氢化反应。滤去催化剂后，滤液在真空下浓缩，得到131mg粗的半固体状物，然后在硅胶柱上进行层析(1%甲醇-二氯甲烷)，得59mg(20%)表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-二苯磷酸酯(化合物ⅩⅩⅥ)。
纯度测定80%，高效液相色谱法熔点126-130℃IR νmax(液体石蜡)cm-13350，1770，1600FAB MS M/Z 820(M+)实施例53″-和2″-表鬼臼毒吡喃葡糖甙硫酸酯钠盐的制备在氩气氛下向4′-苄氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙(500mg，0.69mmol)的无水吡啶(20ml)溶液中加入三氧化硫-吡啶复合物(330mg，2.07mmol)。在室温下搅拌3小时后，另外再加入三氧化硫-吡啶复合物(250mg，1.59mmol)，在室温下搅拌15小时。混合物在真空和40℃以下浓缩，得粗制的油状物(1.2g)，用硅胶柱层析(2%甲醇-二氯甲烷)，得到2″-和3″-硫酸酯的混合物(411mg)。在1个大气压和10%钯碳(400mg)存在下，将混合物(400mg，0.49mmol)乙醇-丙酮(4∶1，15ml)中的溶液边搅拌边进行氢化。过滤除去催化剂，滤液在真空下浓缩，得370mg区位异构体的混合物，经C18-反相柱层析得到52mg(16%)3″-硫酸酯盐(ⅩⅩⅦ)，107mg(32%)2″-硫酸酯盐(ⅩⅩⅧ)，以及138mgⅩⅩⅦ和ⅩⅩⅧ的混合物。使3″-硫酸盐通过DoWex50W(Na+)树脂，以水为洗脱剂，水溶性部分经冷冻干燥，得到化合物ⅩⅩⅦ相应的钠盐，为无色粉末状物。同样，也得到ⅩⅩⅧ的钠盐，为无色粉末状物。
ⅩⅩⅦ熔点223-225℃纯度测定90%，高效液相色谱法
IR νmax(KBr)cm-13440，1770，1620UVλmax(甲醇)nm(ε)240(肩峰，11，600)284(3，670)SIMS M/Z691(M+H)+，713(M+Na)+ⅩⅩⅧ熔点246-247℃纯度测定95%，高效液相色谱法IR νmax(KBr)cm-13450，1770，1620UVλmax(甲醇)nm(ε)240(肩峰，11，200)285(3，650)SIMS M/Z691(M+H)+，713(M+Na)+实例1-5中制备的化合物其结构如下
实施例化合物 R1R5R81b Ⅸ CH3CBZ Bz1c ⅩⅢ CH3H Na-
实施例6用表鬼臼毒噻吩糖苷代替表鬼臼毒吡喃葡糖甙重复实例1-5的一般步骤，得到表鬼臼毒噻吩糖苷化合物Ⅶ-ⅩⅩⅧ的类似物(即R1是2-噻吩基)。
权利要求
1.一种制备下述通式化合物的方法，
其中R2是H，R1系选自(C1-10)烷基、(C2-10)链烯基、(C5-6)环烷基、2-呋喃基、2-噻吩基、(C6-10)芳基、(C7-14)芳烷基和(C8-14)芳链烯基，这里各个芳环可以是未被取代的，或者被一个或多个选自卤素、(C1-8)烷基、(C1-8)烷氧基、羟基、硝基和氨基取代；或者R1和R2各自为(C1-8)烷基；或者R1和R2与它们所连接的碳结合形成(C5-6)环烷基；R3和R4系选自OH、-OSO2R6、-OSO3H及其药用盐、-OP(X)(OH)2及其药用盐和-OP(X)(OR7)2，其中R6为氢、(C1-5)烷基、苯基、(C1-5)烷基取代的苯基或苯基(C1-5)烷基；R7为磷酸酯保护基；X为氧或硫；但必须R3和R4不全是OH；并且R5是氢或酚保护基；该方法包括下列步骤a.保护具有下式化合物的4′-酚基，
其中R1和R2定义同上；b.将步骤a的保护了的4′-酚基产物与选自下列的化合物反应SO3，R6SO2Cl和(R7O)P(X)Cl其中R6，R7和X的定义如上所述；c.任意地除去磷酸酯保护基R7；d.任意地除去4′-酚基保护基；e.分离异构体。
2.制备具有下述A或B式化合物的方法，
其中R8是氢或其药用盐，或为R7;R1、R2、R5和R7同权利要求1的定义;R3和R4选自OH，-OP(X)(CH)2基团及其药学上可接受的盐和-OP(X)(OR7)2，在R3和R4不全是OH基时，X和R7如权利要求1所定义;该方法包括下列步骤a.保护下式化合物的4′-酚基
其中R1和R2如权利要求1所定义;b.将步骤a得到保护了的4′-酚基化合物与POCl3反应，在原位用R7OH醇处理所生成的中间体;c.任意地除去磷酸酯保护基R7;d.任意地除去4′-酚基保护基，e.分离异构体。
全文摘要
本发明涉及在分子中糖的部分有磷酸酯取代基或磺酸酯取代基的4′-脱甲基表鬼臼脂素糖苷的制备方法，该类化合物具有抗肿瘤作用。
文档编号A61K31/7042GK1042362SQ8910753
公开日1990年5月23日 申请日期1989年10月5日 优先权日1988年10月31日
发明者大沼猛, 山崎哲路, 龟井英夫, 内藤高幸, 马克·索尔尼尔 申请人:布里斯托尔-米尔斯公司